全 文 ：基因芯片分析补阳还五汤对局灶性
脑缺血再灌注大鼠的保护作用机制
李铁军 o邱 彦 o芮耀诚 3 o李廷昭 o张卫东
k第二军医大学 药学院 o上海 usswvvl
≈摘要  目的 }用基因芯片分析补阳还五汤k…≠‹ • ×l对脑缺血再灌注损伤大鼠的基因表达影响 o探讨其保护
作用机制 ∀方法 }以博星公司定制的包含 xtu条大鼠的 ¦⁄‘„ 基因表达谱芯片 o研究脑缺血 u «再灌注 uw «的大鼠
脑组织基因表达谱 o并观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的基因表达影响 ∀结果 }脑缺血 u «再灌注 uw «的
大鼠脑组织共筛选出差异表达基因 tw| 条 o其中 y|条基因表达上调 o{s条表达下调 ~脑缺血同时灌胃 …≠‹ • × 大鼠
脑组织共筛选出差异表达基因 vt 条 o其中 ux 条基因表达上调 oy 条表达下调 ∀结论 }补阳还五汤对大鼠局灶性脑
缺血再灌注损伤后的许多基因表达变化都有调节作用 o是其保护脑缺血再灌注损伤的机制 ∀
≈关键词  基因芯片 ~基因表达 ~脑缺血 ~补阳还五汤
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsy2sxx|2sx
补阳还五汤系清#王清任5医林改错6方 o该方由
黄芪 !当归 !芍药 !川芎 !桃仁 !红花 !地龙组成 o有补
气 !活血 !通络的功效 o是历来中医临床治疗中风病
常用方 o对中风后遗症疗效显著 ∀现代药理研究表
明 o它具有扩张血管 !增加脑血流量 !改善微循环 !降
低血液黏度 !抑制血小板聚集 !溶解血栓 !清除自由
基等多方面作用≈t  ∀¦⁄‘„ 芯片技术是近年来出现
的能够进行高通量基因表达研究的最新手段 o为中
药研究尤其是中药复方的研究提供了新的研究思路
和方法 ∀本研究采用基因芯片技术研究局灶性脑缺
血再灌注大鼠的基因变化 o并观察补阳还五汤对脑
缺血再灌注大鼠的基因影响 o从基因水平进一步探
讨药物保护脑缺血的机制 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料和试剂 补阳还五汤由本院天然药物化学
教研室李廷钊制备提供 o提取工艺 }按处方配比k黄
芪 tus ªo当归 y ªo赤芍 w qx ªo川芎 v ªo红花 v ªo桃仁
v ªo地龙 v ªl取补阳还五汤 ts 剂 o水煎kts ≅ u o每
次 t «l o合并水煎液 o浓缩至适当体积 o冰冻干燥 o得
干粉 vw{ ªk每克相当于生药 w qt ªl ∀大鼠给药剂量
相当于原生药 xs ª#®ªpt o相当于人用剂量k等效剂
≈收稿日期  ussw2su2t|
≈基金项目  上海市科技发展基金kst⁄t|stsl
≈通讯作者  3芮耀诚 oר¯ }ksutluxszwwzt oƒ¤¬}ksutluxszwwzt o∞2
°¤¬¯}µ∏¬¼¦ƒ¶°°∏q¨§∏q¦±
量l的 w倍 ∀雄性 ≥⁄大鼠购自中国科学院上海动物
中心 o体重 uss ∗ uus ª∀基因芯片 ⁄‹k• ≠≤l购自上
海博星基因芯片有限责任公司 ∀芯片包含 ¦⁄‘„ 片
断或全长基因数 }xtu o片断长度 t ®¥左右 o芯片内含
质量控制基因 o内参基因 }ts o阴性对照 }w o空白对
照 }w ∀
1 q2 大鼠脑缺血再灌注模型 将大鼠用 ts h 水合
氯醛 v °#®ªpt腹腔注射麻醉 o颈正中切口 o分离 !结
扎右侧颈总动脉近心端 !颈外动脉及其分支动脉 ∀
分离右侧颈内动脉 o沿颈内动脉向下分离翼颚动脉 o
根部结扎该分枝 o颈总动脉分叉处切口 o插入直径为
s quu °°尼龙线 o进入并沿颈内动脉入颅 o深度为 tz
∗ us °° o至大脑前动脉 o阻断大脑中动脉所有血流
来源 ∀扎紧备线 o外留 t ¦°长线头 o缝合皮肤 ∀缺血
同时灌胃给药或灌胃给溶剂对照生理盐水 ∀继续缺
血 u «后再灌注 o勿需再次麻醉和切开皮肤 o轻轻提
拉所留线头至有阻力时提示尼龙线头端已至颈总动
脉切口处 o血流再通 ∀再灌注 uw «后 o存活鼠快速断
头取鼠左右大脑 o迅速放入液氮中冻存 ∀
1 q3 • ‘„ 的抽提和探针制备 冻存样本按文献≈u 
的方法抽提总 • ‘„ ∀得到的总 • ‘„ 经过 u h琼脂糖
凝胶电泳质检合格后 o按文献≈v 的方法反转录标记
¦⁄‘„并纯化 ∀试验组样本k缺血侧脑半球l标记 ≤≠x
荧光染料 o对照组样本k非缺血侧脑半球l标记 ≤≠v ∀
1 q4 芯片杂交 将标记好的探针等量混合后在 |x
ε 水浴锅中预热 u °¬±o然后加在已经经过 |x ε 水浴
#|xx#
第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ y∏±¨ oussw
变性的芯片上 o盖上玻片 o置于杂交舱中 wu ε 杂交
ty ∗ t{ «∀杂交完毕 o去除盖玻片后依次用 u ≅ ≥≥≤ n
s qu h ≥⁄≥ os qt ≅ ≥≥≤ n s qu h ≥⁄≥ os qt h ≥≥≤ 各洗涤
ts °¬±o晾干后扫描 ∀
1 q5 扫描和数据处理 芯片用 ≥¦¤±„µµ¤¼ wsss 扫描
仪进行双波长扫描 o然后用 Š∞‘∞°Œ÷ ³µ²v qs 分析荧
光信号 ∀用芯片上的所有点进行校正 o校正后的基
因 •¤·¬²k¦¼xr¦¼vl值以 u为筛选标准 ∀大于 u或小于
s qx表明该基因表达量存在显著差异 ∀ • ‘„ 提取分
离 !探针标记与杂交 !基因芯片制作检测等试剂仪器
均由联合基因科技有限公司提供完成 ∀
2 结果
基因表达差异比较 }统计分析微矩阵扫描结果
显示 o大鼠脑缺血 u «再灌注 uw «后缺血区脑组织与
非缺血区脑组织比较有差异表达基因 tw| 条 o其中
y|条基因表达上调 o{s 条表达下调 ∀其中表达差异
的基因中主要与编码能量代谢过程相关的酶及辅酶
的基因有 ts 条 o均下调k表 tl ~与抗氧化相关的基因
有 x条kw条下调 ot 条上调l o见表 u ~与兴奋性氨基
酸毒性相关基因有 z 条kx 条下调 ou 条上调l o见表
v ~与蛋白质转录翻译相关的基因有 tz 条ktt 条下
调 oy条上调l o见表 w ~与信号转导相关的基因有 |条
kw条下调 ox条上调l o见表 x ∀另外与脑缺血再灌注
损伤有密切关系的基因有 uz 条如 ‘’ 合酶 !某些细
胞因子及其受体 !与凝血 !纤溶有关的基因 !钙通道 !
钙结合蛋白 !腺苷受体 !某些黏附分子 !金属蛋白酶 !
环氧合酶等 o见表 y ∀
补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织部
分表达差异的基因具有调节作用 ∀补阳还五汤可减
轻缺血再灌注损伤诱导的炎症反应降低如部分细胞
因子和受体 !选择素 !单核细胞趋化蛋白的基因表达
上调 o降低钙超载如 型 !× 型钙通道 o钙结合蛋白 !
¦¤¯³¤¬±t o¦¤¯³¤¬±u基因表达上调 o增强清除氧自由基
能力 o还具有降低兴奋性氨基酸毒性相关基因 !金属
蛋白酶 !环氧合酶 !凋亡相关基因及纤维蛋白原 !血
小板来源的生长因子 !凝血酶敏感素受体等与缺血
再灌注损伤机制密切相关的基因表达 ∀这些作用可
能是其治疗脑中风的多靶点分子机制 ∀
表 t 补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠主要与编码能量代谢过程相关的酶及辅酶的基因表达影响
基因录入号 模型组平均比值 给药组平均比值 解释
• ± qts|zu s quw{ s qx{w ³µ²·¨¤¶²°¤¯ „×°¤¶¨ k≥˜Štl k’≤{t{uzl
• ±qu||u s quxx s qyzz „×°¤¶¨ o‘¤n Žn ·µ¤±¶³²µ·¬±ªo¤¯³«¤t ³²¯¼³¨ ³·¬§¨ k„·³t¤tl
• ±qvy{z s quxy s qzxu ¤¯¦·¤·¨ §¨«¼§µ²ª¨ ±¤¶¨ „ k§«¤l
• ±qtzw|t s qu|w s qxww °• ‘„ ©²µ ¦¨·²2¤³¼µ¤¶¨ o³¤µ·¬¤¯
• ±qvzyy s qvst s qyts ¶∏¦¦¬±¤·¨2≤²„ ¬¯ª¤¶¨ o Š⁄°2©²µ°¬±ªo¤¯³«¤¶∏¥∏±¬·k≥∏¦¯ªtl
• ±qvzwy s qvuy s q{vy °• ‘„ ©²µ°¬·²¦«²±§µ¬¤¯ ¤§¨±¬±¨ ±∏¯ ²¨·¬§¨ ·µ¤±¶¯²¦¤·²µ
• ±qtv|t s qvys t qt{{ „⁄°2µ¬¥²¶¼¯¤·¬²±©¤¦·²µt k„µ©tl
• ±qy||v s qw{t t qw|| „⁄°2µ¬¥²¶¼¯¤·¬²±©¤¦·²µy k„µ©yl
• ±qtyv|v s qwt| t qszw ¤°¬±²¤¦¬§·µ¤±¶³²µ·¨µ¶¼¶·¨° „ k„ׄul
• ±qttvwt s qwyz s q{u| °• ‘„ ©²µ³µ²·¨¤¶²°¤¯ „×°¤¶¨ kפ·2¥¬±§¬±ª³µ²·¨¬±z
表 u 补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠与抗氧化相关的基因表达影响
基因录入号 模型组平均比值 给药组平均比值 解释
• ± qyux s quv{ s qwtv ª¯∏·¤·«¬²±¨ 2¶2·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ o °∏·¼³¨ u k≠¥ul kŠ¶·°ul
• ±q|tx{ s qv{w s qxty ª¯∏·¤·«¬²±¨ ¶2·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ x °• ‘„ o¦²°³¯ ·¨¨ ¦§¶
• ±qttvuv s qwt| s q{wy ª¯∏·¤·«¬²±¨ ³¨µ²¬¬§¤¶¨ t kŠ³¬tl
• ±quxtt s quuu s qxts ·«¬²µ¨§²¬¬± ³¨µ²¬¬§¤¶¨ t kק³¬tl
• ±qty|u u qstv t qutz ª¯∏·¤·«¬²±¨ ¶¼±·«¨·¤¶¨ °• ‘„ o¦²°³¯ ·¨¨ ¦§¶
表 v 补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠与兴奋性氨基酸毒性相关的基因表达影响
基因录入号 模型组平均比值 给药组平均比值 解释
• ± qvyu{ s qt|x s q{zv ª¯∏·¤°¤·¨ ²¬¤¯²¤¦¨·¤·¨·µ¤±¶¤°¬±¤¶¨ u o °¬·²¦«²±§µ¬¤¯ k¤¶³¤µ·¤·¨ ¤°¬±²·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ ul
kŠ²·ul
• ±qvwtvw s quux s q|us ª¯∏·¤°¤·¨r¤¶³¤µ·¤·¨·µ¤±¶³²µ·¨µ³µ²·¨¬±
• ± qx{t| s quw| s qyst ª¯∏·¤°¬¦2²¬¤¯²¤¦¨·¬¦·µ¤±¶¤°¬±¤¶¨ t o¶²¯∏¥¯¨k¤¶³¤µ·¤·¨ ¤°¬±²·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ o¦¼·²¶²¯¬¦l
• ±qxxtsy s qwy{ s qyst ª¯∏·¤°¤·¨ §¨«¼§µ²ª¨ ±¤¶¨ kŠ¯ ∏§tl
• ± quwys v quvv t qzs{ ª¯∏·¤°¤·¨2¦¼¶·¨¬±¨ ¬¯ª¤¶¨ o °²§¬©¬¨µ¶∏¥∏±¬·kŠ¦¯°l
• ±qttvyw s qvtx s qxyy ª¯∏·¤°¤·¨ µ¨¦¨³·²µo¬²±²·µ²³¬¦o„°„u k¤¯³«¤ul kŠµ¬¤ul
• ±qtsvyy u qxvv t qwzz ª¤°¤2¤°¬±²¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§kŠ„…„l „ µ¨¦¨³·²µoª¤°°¤t
#syx#
第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ y∏±¨ oussw
表 w 补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠与蛋白质转录翻译相关的基因表达影响
基因录入号 模型组平均比值 给药组平均比值 解释
• ± qz{{|t s qusx s qzss ·µ¤±¶¦µ¬³·¬²± ¨¯²±ª¤·¬²±©¤¦·²µ„ k≥ŒŒl ou kצ¨¤ul
• ±quwxx s qu|z s q{uy °¬¦µ²·∏¥∏¯ 2¨¤¶¶²¦¬¤·¨§³µ²·¨¬±·¤∏k¤³·l
• ±quzys s qvuw s qz{y Œ±«¬¥¬·²µ²© ⁄‘„ ¥¬±§¬±ªv o§²°¬±¤±·±¨ ª¤·¬√¨ «¨ ¬¯¬2¯ ²²³2«¨ ¬¯¬³µ²·¨¬± kŒ§vl
• ±qvt s qvv| s qx|| ª∏¤±¬±¨ ±∏¦¯ ²¨·¬§¨2¥¬±§¬±ª³µ²·¨¬± Š2¶o¤¯³«¤¶∏¥∏±¬·o
• ±qxxtwx s qvw| t qu{v ∏¨®¤µ¼²·¬¦·µ¤±¶¯¤·¬²± ¨¯²±ª¤·¬²±©¤¦·²µu k∞¨ ©ul
• ±q|yx s qvxt s q{ws ∏¨®¤µ¼²·¬¦·µ¤±¶¯¤·¬²± ¨¯²±ª¤·¬²±©¤¦·²µt ¤¯³«¤u k∞¨ ©t¤ul
• ±qy|tu s qwuv t quvz ©²¯¤·¨ ¥¬±§¬±ª³µ²·¨¬±
• ±qttvv s qwvv s qztv µ¬¥²¶²°¤¯ ³µ²·¨¬± w k• ³¯wl
• ±quu|sx s qww{ s qzy{ µ¨³¯¬¦¤·¬²±©¤¦·²µ≤ ¶∏¥∏±¬·u k• ƒ≤ul
• ±q|t{t s qw|{ s q{s| ·µ¤±¶¯¤·¬²±¬±¬·¬¤·¬²±©¤¦·²µ Œ¨ƒ2u… ¤¯³«¤2¶∏¥∏±¬·k Œ¨ƒ2u¤l
• ±qvwvwt u qszt t qsuz µ¬¥²¶²°¤¯ ³µ²·¨¬± ≥y k•³¶yl
• ±qttvyt u qswu s q{sv ½¬±¦©¬±ª¨µ³µ²·¨¬± uyx k©³uyxl
• ±qttuzx u qtuw t qy|t ∏¨®¤µ¼²·¬¦·µ¤±¶¯¤·¬²±¬±¬·¬¤·¬²±©¤¦·²µw∞ k∞¬©w l¨
• ± qutzz u qtzt s qzuy µ¬¥²¶²°¤¯ ³µ²·¨¬± ≥tt k• ³¶ttl
• ±qxw{y| u q{wt t qwzs °• ‘„ ©²µ«±• ‘° ³µ²·¨¬±o³¤µ·¬¤¯
• ±q{yw v q{s| t qswu °• ‘„ ©²µµ¬¥²±∏¦¯ ²¨³µ²·¨¬± ƒ o¦²°³¯ ·¨¨ ¦§¶
• ±qttuvw s qwst s q{xs §¬¤³«²µ¤¶¨ k‘„⁄‹r‘„⁄°‹l k⁄¬¤wl
表 x 补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠与信号转导相关的基因表达影响
基因录入号 模型组平均比值 给药组平均比值 解释
• ± qu|zwx s qs|{ s qyvx ³«²¶³«¤·¬§¼¯ ·¨«¤±²¯¤°¬±¨ ¥¬±§¬±ª³µ²·¨¬± k°¥³l
• ±qtttxv s qvx{ s qz{v µ¤·³«²¶³«²µ¼¯¤¶¨ ®¬±¤¶¨ ¦¤·¤¯¼·¬¦¶∏¥∏±¬·°• ‘„ o¦²°³¯ ·¨¨ ≤⁄≥
• ±qt{swv s qvzt s q{zw ³µ²·¨¬±·¼µ²¶¬±¨ ³«²¶³«¤·¤¶¨ oµ¨¦¨³·²µ·¼³¨ o „ k°·³µ¤l
• ±qttvts u quwu t qxx| ³µ²·¨¬±·¼µ²¶¬±¨ ³«²¶³«¤·¤¶¨ u∞ k°×°u∞l
• ±qtszww u q{zv t qvvx µ¤·¦¤¶¨¬±2¤¯³«¤ °µ±¤
• ±qtssw{ v qu|t t qsxu ³µ²·¨¬±·¼µ²¶¬±¨ ³«²¶³«¤·¤¶¨ oµ¨¦¨³·²µ·¼³¨ o • k∞¶³l
• ±qtwwt s qwys s qzx| ª∏¤±²¶¬±¨ §¬³«²¶³«¤·¨ kŠ⁄°l §¬¶¶²¦¬¤·¬²±¬±«¬¥¬·²µkŠ§¬ul
• ±q{{yz u qsxw t qszz Š ³µ²·¨¬±2¥¬±§¬±ª³µ²·¨¬± ≤• ƒŠ k≤µ©ªl
• ±qtts|x u qyyt s q|wx ¦¤¶¨¬± ®¬±¤¶¨ ŒŒ ¥¨·¤¶∏¥∏±¬·k≤¶±®u¥l
表 y 补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠与脑缺血再灌注损伤有密切关系的基因表达影响
基因录入号 模型组平均比值 给药组平均比值 解释
• ± qvssyy u qsx{ t qu|u ¦¤¯¦¬∏° ¦«¤±±¨ ¯o·¼³¨
• ± quvy|{ u qs{z s q{vx ¦¤¯¦¬∏° ¦«¤±±¨ ¯o× ·¼³¨
• ± qyzsv | qv|u u qstu ≥tss ¦¤¯¦¬∏°2¥¬±§¬±ª³µ²·¨¬± „| k¦¤¯ªµ¤±∏¯¬± …l k≥tss¤|l
• ± qtsvx| u qszz t qstv ¶¨¯¨ ¦·¬±o ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯
• ± qvz|s u qz{v t qvwx ≤⁄vy ¤±·¬ª¨ ± k ·«µ²°¥²¶³²±§¬± µ¨¦¨³·²µl k≤§vyl
• ± qtswss u qwvt u quz{ ‘’≥ u o¬±§∏¦¬¥¯¨
• ± qtswu{ u qtzw t quuv ¤§¨±²¶¬±¨ „u¥µ¨¦¨³·²µ
• ±q|{y{ u qwtu t qy{t ¬±·¨µ¯¨ ∏®¬± tskŒ2tsl
• ± q|{y| u qytz v qy{v ¬±·¨µ¯¨ ∏®¬± t ¥¨·¤kŒ2tΒl
• ± qtzty v qxz| t q{{x ¬±·¨µ¯¨ ∏®¬± y µ¨¦¨³·²µ
• ±qtttt| x qw{z u qy{z בƒ µ¨¦¨³·²µ¶∏³¨µ©¤°¬¯¼ o ° °¨¥¨µt¤
• ± quxzxw { qsww x qzzw ·¬¶¶∏¨ ¬±«¬¥¬·²µ²© ° ·¨¤¯ ²¯³µ²·¨¬±¤¶¨ t k׬°³tl
• ± qxsw|s u q{yx t qvuu °• ‘„ ©²µ° ·¨¤¯ ²¯³µ²·¨¤¶¨r§¬¶¬±·¨ªµ¬±o³¤µ·¬¤¯
• ± qwwwsw u qwyv t qtsz ³µ²¶·¤ª¯¤±§¬±2 ±¨§²³¨µ²¬¬§¨ ¶¼±·«¤¶¨ t
• ± qwwvy| ts qvy x qszw ³µ²¶·¤ª¯¤±§¬±2 ±¨§²³¨µ²¬¬§¨ ¶¼±·«¤¶¨ u
• ± qysvz u qzsv t qvy| ¦¤¯³¤¬± t
• ± qy{uu u qsyv t qvuu ¦¤¯³¤¬± u
• ± qvsswu u qw|u t qutv ª¯¬¤¯ ¦¨¯¯¶°¬¶¶¬±ª«²°²¯²ªt kŠ¦°tl
• ± q|y{z s qvsw s q|sw °¼¨ ¬¯± ²¯¬ª²§¨±§µ²¦¼·¨ ª¯¼¦²³µ²·¨¬± k²ªl
• ± qtsw{t s qwyy s qz{| ¯¨ ¦¬·«¬±2¦«²¯ ¶¨·¨µ²¯ ¤¦¼¯·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ k¦¤·l
• ±quwxv| u qxvy t q{su ·µ¤±¶©²µ°¬±ªªµ²º·«©¤¦·²µk׊ƒl ¥¨·¤u ³µ²·¨¬±
• ± qz|xus u qxxx t q|{{ °²±²¦¼·¨ ¦«¨ °²¤·µ¤¦·µ¤±·³µ²·¨¬±k≤°2tl
• ± qysyw u qswu u qvws ∏µ¬±¤µ¼ ³¯¤¶°¬±²ª¨ ± ¤¦·¬√¤·²µo∏µ²®¬±¤¶¨ k°¯¤∏l
• ± qustz{ v quus t qwys ³¯¤¶°¬±²ª¨ ± k°¯ ªl
• ± qtzsu w qstx t quvy ©¬¥µ¬±²ª¨ ±oª¤°°¤³²¯¼³¨ ³·¬§¨ kƒªªl
• ± qvyzu s qwuz s q{|x «¨ ¤·¶«²¦®zs®⁄ ³µ²·¨¬± { k‹¶³¤{l
• ± qts||| u q|vv t qvx| ³¯¤·¨¯ ·¨2§¨µ¬√¨ §ªµ²º·«©¤¦·²µk°⁄Šƒ „ ¦«¤¬±l
#tyx#
第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ y∏±¨ oussw
3 讨论
现代研究表明脑缺血再灌注损伤的发生机制非
常复杂 o涉及多方面因素 o主要包括能量代谢异常 !
兴奋性氨基酸毒性 !氧化损伤 !钙超载 !炎症反应等 ∀
补阳还五汤是中医在临床上治疗脑缺血恢复期的药
物 o疗效显著 ∀国内对其临床应用 !疗效进行了详细
观察研究 o但对其作用机制 o尤其是分子机制研究报
道较少 ∀中药作用方式普遍具有多成分 !多环节 !多
靶点的特性 o本实验利用基因芯片技术的高通量特
点 o采用基因芯片分析补阳还五汤治疗脑缺血的分
子作用机制 ∀
本实验采用微矩阵基因芯片 ⁄‹k• ≠≤l是由上
海博星基因芯片有限责任公司定制 o芯片包含 xtu
条¦⁄‘„片断或全长基因数 o片断长度 t ®¥左右 ∀
统计分析微矩阵扫描结果显示 o大鼠脑缺血 u «再灌
注 uw «后缺血区脑组织与非缺血区比较有差异表达
基因 tw| 条 o其中 y| 条基因表达增加 o{s 条表达降
低 ∀这些表达差异基因中包括编码能量代谢相关的
一些酶及辅酶的基因表达下调 o如蛋白酶体 „×° 酶
k³µ²·¨¤¶²°¤¯ „×°¤¶¨l ~乳酸脱氢酶 „ k¯ ¤¦·¤·¨ §¨«¼§µ²2
ª¨ ±¤¶¨ „l ~三磷酸腺苷酶k„×°¤¶¨l ~琥珀酸辅酶 „ 连
接酶k¶∏¦¦¬±¤·¨2≤²„ ¬¯ª¤¶¨l o线粒体腺嘌呤核苷酸易
位子 ~ „⁄°核糖基化因子 t oy ~氨基酸转运系统 „
等 ∀补阳还五汤对这些基因有上调作用 o有利于能
量代谢的恢复 ∀与刘志龙等≈w 的研究结果一致 o补
阳还五汤可防止脑缺血2再灌注 w{ «后三磷酸腺苷
酶活性的降低 ∀
脑缺血再灌注损伤后 o编码线粒体谷氨酸草酰
乙酸氨基转移酶 t ou kª¯∏·¤°¤·¨ ²¬¤¯²¤¦¨·¤·¨·µ¤±¶¤°¬2
±¤¶¨ t oul o谷氨酸脱氢酶kª¯∏·¤°¤·¨ §¨«¼§µ²ª¨ ±¤¶¨l !谷
氨酸r天冬氨酸转运蛋白的基因下调 o使谷氨酸代谢
减少 o谷氨酸增加 o产生兴奋性毒性 o造成脑损伤 ∀
补阳还五汤有对抗脑缺血2再灌注后谷氨酸升高的
作用 o本实验结果与赖真的报道一致≈x  ∀补阳还五
汤可对抗脑缺血2再灌注后谷胱苷肽2 Σ2转移酶kª¯∏2
·¤·«¬²±¨ 2 Σ2·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ l !谷胱苷肽过氧化物酶 kª¯∏2
·¤·«¬²±¨ ³¨µ²¬¬§¤¶¨ l的基因下调 o这两个酶具有解毒
作用 o能清除自由基≈y  o因此可能与补阳还五汤减轻
自由基损伤有关≈z  ∀本实验结果还显示脑缺血2再
灌注损伤后 o下述基因表达上调 ∀ ≠ 炎症相关基因
包括部分细胞因子及其受体如 Œ2t ¥¨·¤oŒ2ts oŒ2y
受体 !בƒ 受体超家族 !选择素k¶¨¯¨ ¦·¬±l !单核细胞
趋化蛋白k≤°2tl等 ~ 钙超载相关基因如 型 !×
型钙通道 o≥tss 钙结合蛋白k≥tss¤|l o¦¤¯³¤¬± t o¦¤¯2
³¤¬± u ~≈ 凋亡相关基因如程序化细胞死亡 ts≈³µ²2
ªµ¤°°¨ §¦¨¯¯ §¨¤·«ts k°§¦§tsl  ~…与凝血 !纤溶相关
的物质如尿激酶 ~纤溶酶原 !纤维蛋白原 !°⁄Šƒ „ !凝
血酶敏感素受体k·«µ²°¥²¶³²±§¬± µ¨¦¨³·²µl ~  其他 }
‘’≥ u !腺苷受体 !前列腺素合酶 t ou k³µ²¶·¤ª¯¤±§¬±2
±¨§²³¨µ²¬¬§¨ ¶¼±·«¤¶¨ t oul !金属蛋白酶 k °¨ ·¤¯ ²¯³µ²2
·¨¤¶¨l !金属蛋白酶组织抑制物 !卵磷脂2胆固醇酰基
转移酶 ∀补阳还五汤具有不同程度调节上述基因变
化作用 ∀脑缺血再灌注损伤后与信号转导相关基因
也发生变化 o如磷酸化酶激酶催化亚单位 !酪氨酸磷
酸酶蛋白 „ 型受体 !Š2蛋白结合蛋白 !酪氨酸磷酸
酶 !酪蛋白激酶 ŒŒ ¥¨·¤亚单位等 ∀与蛋白转录翻译
相关的基因如转录延长因子 „ !微管相关蛋白 !真核
翻译延长因子 t ¤¯³«¤u k∞¨ ©t¤ul !真核翻译延长因子
u k∞¨ ©ul !细胞周期蛋白 !翻译起始因子 u¤ru¥k Œ¨ƒ2
u¤lr Œ¨ƒ2u…~核糖体蛋白质 ≥y o≥tt等 ∀补阳还五汤
对部分上述基因也有调节作用 o但具体机制和意义
需要进一步研究和证实 ∀
补阳还五汤是通过多途径 !多靶点实现对脑缺
血2再灌注损伤的保护作用的 o包括对抗脑缺血2再灌
注后能量变化 !降低兴奋性氨基酸毒性 !氧化损伤和
钙超载 o减轻炎症反应等 ∀
≈参考文献 
≈t  王 敏 o邓常青 q补阳还五汤抗脑缺血作用的研究概况与展
望 q湖南中医学院学报 ousss ouskwl }zt q
≈u  ≤«²°¦½¼±¶®¬° o ≥¤¦¦«¬‘q ≥¬±ª¯ 2¨¶·¨³ ° ·¨«²§²© • ‘„ ¬¶²¯¤·¬²± ¥¼
¤¦¬§ ª∏¤±¬§¬±¬∏° ·«¬²¦¤±¤·¨2³«¨ ±²¯2¦«¯²µ²©²µ° ¬¨·µ¤¦·¬²±q Αναλ
Βιοχηεµ ,t|{z otyu }txy q
≈v  ≥¦«¨ ±¤  o≥«¤¯²± ⁄o ⁄¤√¬¶ • • o ετ αλ. ±∏¤±·¬·¤·¬√¨ °²±¬·²µ¬±ª²©
ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ³¤·¨µ±¶º¬·«¤¦²°³¯ °¨¨ ±·¤µ¼ ⁄‘„ °¬¦µ²¤µµ¤¼q Σχι2
ενχε , t||x owz }twxt q
≈w  刘志龙 o宋含平 o邓常青 o等 q补阳还五汤对沙土鼠脑缺血损伤
能量代谢的影响 q中国中西医结合急救杂志 ousst o{ktl }vy q
≈x  赖 真 o王沙燕 o耿小茵 o等 q补阳还五汤和黄芪对沙土鼠脑缺血
再灌注后脑组织兴奋性氨基酸的作用 q北京中医药大学学报 o
ussu ouxkvl }vv q
≈y  •¤¬±¤¯§ ≥¦«°¬§·2Ž¤¶·±¨ µo …¤²·²±ª «¤±ªo ∏§°¬¯¤ …¨ ¤¯¼¨ √ oετ αλ.
⁄‘„ °¬¦µ²¤µµ¤¼ ¤±¤¯¼¶¬¶²©¦²µ·¬¦¤¯ ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± §∏µ¬±ª ¤¨µ¯¼ µ¨¦¬µ2
¦∏¯¤·¬²± ¤©·¨µ©²¦¤¯ ¥µ¤¬± ¬¶¦«¨ °¬¤¬± µ¤·q Μολεχυλαρ Βραιν Ρεσεαρχη ,
ussu ots{ }{t q
≈z  刘志龙 o邓常青 o葛金文 o等 q补阳还五汤和益气活血方抗脑缺
血再灌注损伤机理的比较研究 q中药药理与临床 ot||x ottkyl }
tw q
#uyx#
第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ y∏±¨ oussw
∆ΝΑ µιχροαρραψ αναλψσισ οφ προτεχτιϖε µεχηανισµ οφ
Βυψανγ Ηυανωυ δεχοχτιον ον φοχαλ χερεβραλισχηεµια/ ρεπερφυσιον ιν ρατσ
Œ ׬¨2­∏±o ±Œ˜ ≠¤±o • ˜Œ ≠¤²2¦«¨ ±ªoŒ ׬±ª2½«¤²o‹„‘Š • ¬¨2§²±ª
k≤²¯¯¨ ª¨ ²©°«¤µ°¤¦¼o≥ ¦¨²∏§ ¬¯¬·¤µ¼  §¨¬¦¤¯ ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ ≥«¤±ª«¤¬usswvv o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¤±¤¯¼¶¨ ·«¨ ©¨©¨¦·¶²©…∏¼¤±ª ‹∏¤±º∏§¨¦²¦·¬²±k…≠‹ • ×l ²± §¬©©¨µ¨±·¬¤¯ ¼¯ ¬¨³µ¨¶¶¨§ª¨ ±¨ ¶§∏µ¬±ª¦¨µ¨¥µ¤¯
¬¶¦«¨ °¬¤rµ¨³¨µ©∏¶¬²±¬±µ¤·¶º¬·« ⁄‘„ °¬¦µ²¤µµ¤¼q Μετηοδ : ¦⁄‘„ °¬¦µ²¤µµ¤¼ ¦«¬³¶¦²±·¤¬±¬±ªxtu ¦⁄‘„¶º µ¨¨ °¤§¨ ¥¼ …¬²¶·¤µŠ¨ ±¨ ¦«¬³
Œ±¦q≥³µ¤ª∏¨2⁄¤º¯ ¼¨ µ¤·¶º µ¨¨ ¶∏¥­¨¦·¨§·²u«²© °¬§§¯¨¦¨µ¨¥µ¤¯ ¤µ·¨µ¼ ²¦¦¯∏¶¬²± k≤„’l º¬·«¤±©¬¯¤° ±¨·q≥¤¯¬±¨ ²µ…≠‹ • × º¤¶ª¬√ ±¨ ³²
¤©·¨µ²±¶¨·²©¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤¤±§¥µ¤¬±¶º µ¨¨ µ¨°²√ §¨¤©·¨µuw «²©µ¨¦¬µ¦∏¯¤·¬²±©²µ°• ‘„¶¬¶²¯¤·¬²±q„ §¬©©¨µ¨±·¬¤¯ ° ¤¨¶∏µ° ±¨·²© °• ‘„¶
©µ²° ³²¶·2¬¶¦«¨ °¬¦¤±§…≠‹ • × ·µ¨¤·¨§¤±¬°¤¯¶º¤¶³¨µ©²µ° §¨º¬·« °¬¦µ²¤µµ¤¼q Ρεσυλτ : ˜³2¤±§§²º±2µ¨ª∏¯¤·¨§ª¨ ±¨ ¶º µ¨¨ y| ¤±§{s ¬±¬¶2
¦«¨ °¬¦ªµ²∏³q˜³2¤±§§²º±2µ¨ª∏¯¤·¨§ª¨ ±¨ ¶º µ¨¨ ux ¤±§y¬± …≠‹ • × ·µ¨¤·¨§ªµ²∏³qΧονχλυσιον : …≠‹ • × µ¨ª∏¯¤·¨¶·«¨ §¬©©¨µ¨±·¬¤¯ ¬¨³µ¨¶2
¶¬²± ª¨ ±¨ ¶¤©·¨µ©²¦¤¯ ¥µ¤¬±¬¶¦«¨ °¬¤rµ¨³¨µ©∏¶¬²±¬±µ¤·¶o§∏¨ ·²¬·¶° ¦¨«¤±¬¶° ²©³µ²·¨¦·¬±ª¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤rµ¨³¨µ©∏¶¬²±¬±­∏µ¼q
[ Κεψ ωορδσ] °¬¦µ²¤µµ¤¼~ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ~¥µ¤¬±¬¶¦«¨ °¬¤~…∏¼¤±ª ‹∏¤±º∏§¨¦²¦·¬²±
≈责任编辑 方文贤 
黄药子抗肿瘤活性组分筛选及作用分析
喻泽兰u o刘欣荣t o ¬¦«¤¨¯ ¦≤∏¯¯ ²¦«t o高 锦t 3
kt q中国科学院 生物物理研究所 生命科学应用研究与发展中心 o北京 tsstst ~
u q湘南学院 基础医学课部 药理教研室 o湖南 郴州 wuvsssl
≈摘要  目的 }分析中药薯蓣科植物黄药子可能的抗肿瘤组分及其作用机制 ∀方法 }将黄药子依次用石油醚 !
乙醇 !水系统地提取 o采用 ‹ ³¨„肿瘤细胞株在小鼠进行体内筛选和研究 o观察不同组分对肿瘤腹水生长及肿瘤细
胞的各种变化 o分析各组分抗肿瘤作用及特征 ∀结果 }石油醚提取物抑制肿瘤腹水生长作用强于乙醇提取物 o而水
提取物有一定的促生长作用 ∀石油醚提取物能显著延长小鼠存活期 o低降肿瘤腹水生成量和肿瘤细胞存活率 o用
药后肿瘤细胞再次传代 o肿瘤腹水的形成时间显著延长 ∀结论 }黄药子石油醚提取物具有显著的抗肿瘤活性 o且抗
肿瘤作用与直接的细胞作用有关 ∀
≈关键词  黄药子 ~提取 ~‹ ³¨„ ~腹水模型 ~形态观察
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsy2sxyv2sx
中药黄药子 ∆ιοσχορεα βυλβιφερα q是薯蓣科植物
黄独的根块 o性味苦平 o具有凉血 o降火 o消瘿 o解毒 o
化痰散结的功效 ∀传统中医药运用黄药子治疗肿瘤
类疾病历史悠久 o应用广泛≈t2w  ∀中医典籍5千金月
令6中记述 o单味药黄药子浸酒治疗颈部肿瘤 ~现代
5中药大辞典6记述 o黄药子对甲状腺肿瘤 !食道癌 !
胃癌等均具有抗癌作用 ∀但黄药子抗肿瘤活性部位
的筛选和相关实验研究报道较少≈x oy  ∀本研究组在
≈收稿日期  ussv2ts2t{
≈通讯作者  3高锦 oר¯ }kstslyw{xwxs| o∞2°¤¬¯}­ª¤²ƒ ¶∏±x q¬¥³q
¤¦q¦±
利用中药配伍金石类药物抗肿瘤的工作中 o曾研究
了单味中药黄药子潜在的抗肿瘤价值≈z  ∀作者采用
荷瘤小鼠 ‹ ³¨„腹水模型 o系统观察黄独石油醚 !乙
醇和水不同极性溶剂提取物组分的抗肿瘤作用 o并
进一步分析活性组分的抗肿瘤作用特点 o旨在阐明
中药黄药子抗肿瘤作用特征及其可能机制 ∀
1 材料和方法
1 q1 药品与 ‹ ³¨„ 细胞株 黄药子为市售中药饮
片 o购自海淀药品批发部 ∀经中国中医研究院中药
研究所生药室何希荣主管药师鉴定 o所购中药饮片
为薯蓣科植物黄独 ∆ . βυλβιφχρα q的根块 o为传统中
药黄药子的正品 ∀实验用 ‹ ³¨„肿瘤细胞株由北京
#vyx#
第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ y∏±¨ oussw