全 文 ：从丹参中筛选血管紧张素转换酶抑制剂
高小平 3 o徐大勇 o邓义龙 o张 燕
k成都地奥制药集团 药物研究所 o四川 成都 ytsswtl
≈摘要  目的 }从丹参中筛选血管紧张素转换酶抑制剂k„≤∞Œl ∀方法 }分别提取丹参水溶性和脂溶性部分 o用
荧光检测法筛选抑制血管紧张素转换酶k„≤∞l活性的有效部位或成分 ∀结果 }丹参水溶性部分 !丹参总酚酸及丹酚
酸 …显著降低了大鼠肺组织的 „≤∞活性 o其 Œ≤xs分别为ku qwx ? s qszl oks quw ? s qsul oks qsu ? s qstl ª#pt ∀含丹参
酮 ´ oµ的菲醌类成分或脂溶性部分没有作用 ∀结论 }丹参具有 „≤∞Œ作用 o其活性成分存在水溶性部分中 o主要
为含丹酚酸 …等酚酸类物质 ∀
≈关键词  丹参 ~丹参总酚酸 ~丹酚酸 …~血管紧张素转换酶抑制剂
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsw2svx|2sw
丹参为唇形科植物丹参 Σαλϖια µιλτιορρηιζα …∏±ª¨
的干燥根及根茎 o在我国应用历史悠久 o丹参制剂在
治疗心血管疾病疗效非常显著 ∀近年来 o丹参拮抗
血管紧张素 µk„±ªµl的作用受到关注 o复方丹参注
射液能有效阻止梗阻性大鼠肾组织中的血管紧张素
转换酶k„≤∞l活性 o减少 „±ªµ的生成 o对肾脏起保
护作用≈t  ~丹酚酸 …可逆转由 „±ªµ引起的心脏成
纤维细胞的增殖和 ´ o¶型胶原基因的 °• ‘„ 表达
水平≈u  ~这些均提示丹参的药理作用与肾素2血管紧
张素系统有关 ∀
由肝脏合成和分泌的血管紧张素原在肾素的作
用下生成血管紧张素 ´k„±ª´l o后在肺循环中通过
„≤∞的作用降解为有生物活性的 „±ªµ o后者具有
强烈的缩血管作用 ∀血管紧张素转换酶抑制剂k„2
≤∞Œl通过减少 „±ªµ的生成而广泛用于高血压病的
治疗 o同时对心 !脑 !肾的保护作用以及抗动脉粥样
硬化治疗方面也显示其优越性 ∀目前 o中药拮抗血
管紧张素 µ的作用备受关注≈v2x  o作者对大量中药进
行了初步筛选 o发现丹参水溶性提取物对 „≤∞的抑
制活性最强 o为了从中筛选 „≤∞Œo作者提取了丹参
的水溶性部位或成分 o作用于血管紧张素转换酶 o并
通过荧光检测法确定了丹参的 „≤∞Œ为丹酚酸类成
分 o主要为丹酚酸 … !迷迭香酸以及丹参素等 ∀
1 材料和方法
≈收稿日期  ussv2s|2uy
≈通讯作者   3 高小平 o ר¯ }ksu{l {u|sswt{ o ƒ¤¬}ksu{l
{u|ssytx o∞2°¤¬¯}ª¬³¯ºº ƒ «²·°¤¬¯q¦²°
1 q1 材料 川产丹参药材购自四川省中药材公司 o
丹参酮 ´ !丹参酮 µ„ 以及丹参素 !丹酚酸 …等标准
品购自中国药品检定所 ∀荧光检测法使用试剂 Ο2
³«·«¤¯§¬¤¯§¨«¼§¨ o ‹¬³³∏µ¼¯2«¬¶·¬§¼¯ 2¯ ∏¨¦¬±¨ k ‹‹l购自
≥¬ª°¤公司 o其他有机试剂均为国产分析纯 ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 丹参水溶性成分和脂溶性成分的提取 称
取川产丹参 xss ªo切片后用 ux h乙醇渗漉 o渗漉液
经减压蒸馏除去乙醇 o取小部分提取物浓缩干燥 o得
水溶性部分 ≥• o剩余提取物留待制备总酚酸 ~丹参
的脂溶性部分参照文献≈y 提取 o并以丹参酮 ´ !丹
参酮 µ„为标准 o通过质谱和 ‹°≤ 确定主要含菲醌
类的成分 ∀
1 q2 q2 从丹参中提取总酚酸 ux h乙醇渗漉获得
的剩余提取物用去离子水稀释至适量 o离心后依次
上二乙烯苯型非极性和二乙烯苯2丙烯腈极性大孔
树脂柱 o用去离子水洗柱 o去除多糖 !杂质等 o再用
xs h ∗ zx h乙醇洗脱 o合并洗脱液 o减压浓缩干燥 o
得总酚酸 ≥„ o≥„以丹酚酸 …和丹参素为标准 o通过
质谱和 ‹°≤确定主要含丹酚酸类的成分 ∀
1 q2 q3 ‹°≤分离制备丹酚酸 … 用 • ¤·¨µ¶≤ uy|s
半制备 ‹°≤分离制备丹酚酸 …o色谱条件参照文献
≈z 并略加修改 }∏±¤2≤t{色谱柱 kts °° ≅ uxs °° o
ts Λ°l o用 vs h甲醇2s qt °²¯#pt醋酸铵平衡 ~vs °¬±
内 o流动相由 vs h甲醇2s qt °²¯ #pt醋酸铵至 zs h
甲醇2s qt °²¯ #pt醋酸铵梯度洗脱 ~流速为 v °#
°¬±pt o检测波长为 u{s ±° o柱温 u{ ε ∀以丹酚酸 …
作为标准品 o并根据标准品的出峰时间收集丹酚酸
#|xv#
第 u|卷第 w期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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„³µ¬¯oussw
…o真空干燥 o得 ≥„2…样品 ∀
1 q2 q4 大鼠或家兔肺组织 „≤∞制备 „≤∞的制备
参照文献≈{ o| 并略加修改 }取家兔或大鼠肺组织 o
用 ts °°²¯ #pt磷酸钾缓冲液清洗 o切成小块后匀
浆 ~在 w ε ox sss µ#°¬±pt离心 ts °¬±o弃沉淀 o上清
用磷酸钾缓冲液低温透析过夜 o换液 w次 o每次 t ~
于 w ε 条件下 ows sss µ#°¬±pt离心 ws °¬±o收集上清
得 „≤∞酶提取物 o测定 „≤∞酶提取物的总蛋白含
量 o分装保存于 p us ε 备用 ∀
1 q2 q5 荧光法测定 „≤∞活性 采用荧光法≈{ o| 测
定 „≤∞活性 o首先配置浓度为 ts ª#pt丹参提取物
以及总酚酸和丹酚酸 …o各取 ts ˏ用 °…≥按 x或 ts
倍作系列稀释后与 ts ˏ„≤∞ kts Λª总蛋白l混合 o
vz ε 反应 vs °¬±o加入 ‹‹tus ˏovz ε 反应 tx
°¬±o加入 t °²¯#pt ‘¤’‹ ws ˏo加入 us ª#pt Ο2
³«·«¤¯§¬¤¯§¨«¼§¨ ts ˏo室温反应 ts °¬±o加入 v °²¯#
pt ‹≤¯ us ˏ终止反应 o用荧光检测仪测定荧光强
度 o激发波长 wsx ±° o发射波长 xvx ±°∀每次实验设
空白对照 o阴性对照和阳性对照 o„≤∞活性测定通过
大鼠或家兔来源的 „≤∞对底物 ‹‹水解产生的荧
光强度判定 o其准确性或敏感性通过阳性药物 ¦¤³·²2
³µ¬¯k卡托普利l确立 ∀每个样品的检测均重复 v次 o
取其平均值按下列公式计算抑制率 ∀
抑制率 € k阴性对照 p待测lrk阴性对照 p空白对照l ≅ tss h
2 结果
2 q1 血管紧张素转换酶活性测定体系的确立 血
管紧张素转换酶活性测定体系通过使用阳性药物卡
托普利而确立 o测定结果见图 t ∀卡托普利作用浓
度为 ws ±°²¯#pt时几乎完全抑制 „≤∞活性 o其 Œ≤xs
值为 us qv ±°²¯#pt o与文献≈ts 报道的结果相近 o表
明该测定系统成立且具有良好敏感性 ∀
图 t 不同浓度卡托普利对大鼠 „≤∞的抑制作用
2 q2 丹参水溶性提取物抑制血管紧张素转换酶
分别提取丹参的脂溶性部分和水溶性部分 o用荧光
检测法进行了筛选 ∀丹参水溶性部分在 s qx ª#pt
浓度即能抑制大鼠来源的 „≤∞活性 o其抑制率随浓
度增加而提高 ~而脂溶性部分或含丹参酮 ´和丹参
酮 µ„ 的菲醌类成分对 „≤∞没有作用 o即使高浓度
时也不能抑制 „≤∞k图 ul o表明具有 „≤∞Œ作用的成
分存在于水溶性部分中 ∀
图 u 不同浓度丹参水溶性和
脂溶性部分对大鼠 „≤∞的抑制作用
„ q丹参水溶性提取物 o…q丹参脂溶性部分
2 q3 丹参总酚酸抑制血管紧张素转换酶 将水溶
性提取物经大孔树脂吸附 o收集的 ≥„部分以铁氰化
钾2三氯化铁显色为酚酸类成分 o根据质谱分子量以
及 ‹°≤ 光谱图分析确定 o主要含有丹酚酸 … !丹参
素 !迷迭香酸等成分 o其中丹酚酸 …含量最高 o占总
酚酸的 vt qz h ∀图 v显示 o总酚酸 ≥„和水溶性部分
≥• 比较 o丹参总酚酸抑制 „≤∞的作用强度比 ≥• 增
加了约 ts倍 o其 Œ≤xs分别为ks quw ? s qsul和ku qwx ?
s qszl ª#pt ∀
图 v 丹参水溶性提取物与
丹参总酚酸抑制 „≤∞的作用比较
„ q丹参水溶性提取物 o…q丹参总酚酸
2 q4 丹酚酸 …抑制血管紧张素转换酶 为了进一
步证实丹参中抑制 „≤∞的有效成分 o作者用 ‹°≤
分离制备了丹酚酸 …k图 wl o其纯度约为 |z h o丹酚
酸 …与总酚酸进行了 „≤∞抑制活性比较 o当反应浓
度为 s qx ª#pt时 o抑制率分别为 |z qzx h和 {s qzs h
k图 xl ~另外 o丹酚酸 …的作用强度与总酚酸和水溶
性提取物进行了比较 o结果其Œ≤xs分别为ks qsu ?
#syv#
第 u|卷第 w期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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„³µ¬¯oussw
s qstl oks quw ? s qsul oku qwx ? s qszl ∀表明随着对
丹参有效成分的分离提纯 o„≤∞的抑制活性逐渐增
强 ∀
图 w 丹参总酚酸及分离制备的
丹酚酸 …的高效液相色谱图
„ q丹参总酚酸 o…q丹酚酸
图 x 丹参总酚酸与丹酚酸 …抑制 „≤∞的活性比较
„ q丹参总酚酸 o…q丹酚酸
3 讨论
丹参及其水溶性成分丹酚酸 …可降低钠诱导的
高血压大鼠血压 o使大鼠肾血流量 !肾小球滤过率 o
钠以及肌氨酸酐排出量显著增加 o也使大鼠肾总激
肽释放酶 !激肽释放酶活性以及前列腺素 ∞u 增加 o
因此认为 o丹酚酸 …的降压作用主要与激肽释放酶
以及前列腺素系统有关≈tt otu  ∀ Ž¤°¤·¤等≈tv 报道 o丹
酚酸 …显著降低高血压大鼠血压 o并认为其作用与
内皮依赖的血管舒张作用有关 ∀但已有研究表明 o
丹参及其有效成分对 „±ªµ具有拮抗作用 o而且 o丹
参的显著降血压作用也提示其药理作用可能与肾素
2血管紧张素系统有关 ∀作者应用血管紧张素转换
酶活性测定 o从丹参中筛选了 „≤∞抑制剂 o通过对
水溶性提取物和脂溶性提取物的筛选表明 o丹参抑
制 „≤∞的活性成分存在于水溶性提取物中 o进一步
分离其主要水溶性成分总酚酸 o确定了总酚酸的 „2
≤∞Œ作用 ∀丹酚酸 …是丹参总酚酸中含量较高的成
分 o由 ‹°≤制备分离出丹酚酸 …o再进行 „≤∞Œ活性
筛选 o结果表明丹酚酸 …是 „≤∞Œ中的活性成分之
一 o丹参总酚酸中抑制 „≤∞的其他活性成分还有待
进一步分离确定 ∀
≠²®²½¤º¤等≈tw 报道 o在治疗腺嘌呤诱导肾衰大
鼠的实验研究中 o联合使用丹酚酸 …镁盐kts °ª#
®ªptl与 „≤∞抑制剂卡托普利ku °ª#®ªptl可加强对
肾衰大鼠的治疗作用 o同时观察了两种药物对 „≤∞
活性的影响 o结果卡托普利单独使用可降低大鼠
„≤∞活性 o而丹酚酸 …镁盐对 „≤∞活性没有影响 ∀
作者通过提取家兔或大鼠肺组织的 „≤∞活性测定
表明 o丹酚酸及丹酚酸 …显著抑制 „≤∞活性 o这与
≠²®²½¤º¤等的结果不一致 o可能存在检测手段和方
法学上的差异 ∀
为了排除荧光检测方法中可能出现的干扰 o如
植物来源样品中的自发荧光物质可以导致数据的不
准确性 o作者还采用了分光光度法≈tx 进行 „≤∞Œ活
性测定 o获得了与荧光检测法一致的结果k数据略l o
表明本研究中荧光检测所获结果的准确性 ∀总之 o
本研究确认了丹参及其有效部位或成分的 „≤∞Œ作
用 o对丹参酚酸类成分的抗高血压动物药效学研究
也正在进行中 ∀
≈参考文献 
≈t  许庆友 o赵玉庸 o徐 洲 q复方丹参注射液对单侧输尿管结扎
大鼠肾内局部血管紧张素 ŒŒ的作用 q中成药 ousst ouvkyl }
wux q
≈u  童普德 o吴小江 o王小玲 q丹参酸乙对大鼠心脏成纤维细胞增
殖和胶原基因表达的影响 q中药药理与临床 oussu ot{kwl }z q
≈v  沈云辉 o陈长勋 q血管紧张素 ŒŒ的生物学效应及中药对其影
响 q中国中药杂志 oussv ou{kxl }v|w q
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高血压大鼠肾脏血管重塑的实验研究 q中国中西医结合肾病
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作用及肾素2血管紧张素的影响 q药学学报 ot||u ouzktsl }z{x q
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谱法含量测定 q药物分析杂志 oussv ouvkul }tw| q
≈{  ≤¤µ°¨¯ „ o≠¤µ²± „ q„±¬±·µ¤°²¯ ¦¨∏¯¤µ¯¼ ∏´¨ ±¦«¨ §©¯∏²µ¨¶¦¨±··µ¬³¨ ³2
·¬§¨ ¤¶¤©¯∏²µ²ª¨ ±¬¦¶∏¥¶·µ¤·¨ ²©¤±ª¬²·¨±¶¬±2Œ2¦²±√¨ µ·¬±ª ±¨½¼°¨ ¤±§
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Νεπηρον ot||u oyskwl }wys q
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¬¯·«²¶³¨µ°¤·¨ … ¬± µ¤·¶ º¬·« ¤§¨±¬±¨ 2¬±§∏¦¨§ µ¨±¤¯ ©¤¬¯∏µ¨ q Χηεµ
Πηαρµ Βυλλot||t ov|kvl }zvu q
≈tx  ≤∏¶«°¤± ⁄ • o≤«¨ ∏±ª ‹ ≥ q≥³¨¦·µ²³«²·²° ·¨µ¬¦¤¶¶¤¼ ¤±§³µ²³¨µ·¬¨¶
²©·«¨ ¤±ª¬²·¨±¶¬± ¦²±√¨ µ·¬±ª ±¨½¼°¨ ²©µ¤¥¥¬·¯∏±ªq Βιοχηεµ Πηαρµ2
χολot|zt ous }tyvz q
Σχρεενινγ οφ ανγιοτενσιν χονϖερτινγ ενζψµεινηιβιτορσ
φροµ Σαλϖια µιλτιορρηιζαε
Š„’ ÷¬¤²2³¬±ªo÷˜ ⁄¤2¼²±ªo⁄∞‘Š ≠¬2¯ ²±ªo‹„‘Š ≠¤±
(Ινστιτυτε οφ Ματερια Μεδιχα , Χηενγδυ ∆ΙΑΟ Γρουπ , Χηενγδυ ytsswt , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶¦µ¨ ±¨ ¤±ª¬²·¨±¶¬± ¦²±√ µ¨·¬±ª ±¨½¼°¨¬±«¬¥¬·²µk„≤∞Œl ©µ²° ·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ o Σαλϖια µιλτιορ2
ρηιζα q Μετηοδ : ‹¼§µ²³«¬¯¬¦¤±§ ¬¯³²³«¬¯¬¦©µ¤¦·¬²±¶²© Σ . µιλτιορρηιζα º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§o¤±§·«¨¬µ ©¨©¨¦·¬√¨¦²°³²±¨ ±·¶º µ¨¨ ¶¦µ¨ ±¨¨ §¥¼ ¤©¯∏²µ¬2
° ·¨µ¬¦¤¶¶¤¼©²µ¬±«¬¥¬·¬²± ²©¤±ª¬²·¨±¶¬± ¦²±√ µ¨·¬±ª ±¨½¼°¨k„≤∞l q Ρεσυλτ : • ¤·¨µ2¶²¯∏¥¯¨©µ¤¦·¬²±¶o·²·¤¯ ¶¤¯√¬¤±²¯¬¦¤¦¬§¶¤±§¶¤¯√¬¤±²¯¬¦
¤¦¬§… °¤µ®¨ §¯¼ §¨¦µ¨¤¶¨§ „≤∞ ¤¦·¬√¬·¼ ²©µ¤¥¥¬·¯∏±ª·¬¶¶∏¨ q׫¨¬µŒ≤xs √¤¯∏¨ º µ¨¨k u qwx ? s qszl oks quw ? s qsu l oks qsu ? s qstl ª#pt
µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q¬³²³«¬¯¬¦¦²°³²±¨ ±·¶²µ³«¨ ±¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ ¶¬±¦¯∏§¬±ª·¤±¶«¬±²±¨ ´¤±§ µ ¶«²º §¨±²¦«¤±ª¨¶²±·«¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²©„≤∞qΧονχλυ2
σιον : Σ . µιλτιορρηιζᬱ«¬¥¬·¶¤±ª¬²·¨±¶¬± ¦²±√ µ¨·¬±ª ±¨½¼°¨¤±§¬·¶¤¦·¬√¨¦²°³²±¨ ±·¶¤µ¨ ¬± ¤´ ∏¨²∏¶ ¬¨·µ¤¦·o¬± º«¬¦«·«¨ °¤¬± º µ¨¨ ¶¤¯2
√¬¤±²¯¬¦¤¦¬§¶¬±¦¯∏§¬±ª¶¤¯√¬¤±²¯¬¦¤¦¬§¶…q
[ Κεψ ωορδσ] Σαλϖια µιλτιορρηιζα~·²·¤¯ ¶¤¯√¬¤±²¯¬¦¤¦¬§¶~¶¤¯√¬¤±²¯¬¦¤¦¬§…~¤±ª¬²·¨±¶¬± ¦²±√ µ¨·¬±ª ±¨½¼°¨¬±«¬¥¬·²µ
≈责任编辑 方文贤 
芪龙胶囊对急性应激血瘀大鼠血液流变学的影响
吴 彦 3 o孙建宁
k北京中医药大学 药理系 o北京 tsstsul
≈摘要  目的 }研究芪龙胶囊对急性应激血瘀大鼠血液流变学的改善作用 ∀方法 }急性应激血瘀大鼠模型采用在
两次皮下注射肾上腺素 t °ª#®ªp t之间将大鼠置于冰水中 x °¬°的方法建立 ∀利用此模型观察芪龙胶囊对模型大鼠
全血黏度 !全血还原黏度 !血浆黏度 !红细胞压积 !红细胞变形性 !红细胞聚集性等血液流变学指标的作用 ∀结果 }芪龙
胶囊 s qy os qv os qtx ª#®ªp t均能明显降低高 !中 !低切变率下全血黏度 o降低中 !低切变率下全血还原黏度和红细胞压
积 o降低红细胞聚集性 o并能够显著升高红细胞变形性k与模型组比较 Π s qsx oΠ s qstl ∀芪龙胶囊 s qy os qv ª#®ªp t
还可降低模型大鼠血浆黏度k Π s qsx oΠ s qstl ∀结论 }芪龙胶囊可明显改善急性应激血瘀大鼠多项血液流变学指
标 ∀
≈关键词  芪龙胶囊 ~急性应激血瘀 ~血液流变学 ~大鼠
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsw2svyu2sw
≈收稿日期  ussv2sx2tu
≈通讯作者  3吴彦 oר¯ }kstslywzttt||2ys{w
芪龙胶囊是在益气活血法治疗中风病气虚血瘀
证的理论基础上 o参照古方补阳还五汤的组成而化
裁精简的临床经验方 ∀本方由黄芪 !地龙 !丹参等药
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第 u|卷第 w期
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