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Investigation on Antibacterial Activity of Forsythia suspense Vahl in Vitro with Mueller-Hinton Agar

应用M-H琼脂进行连翘体外抗菌实验的效果观察



全 文 :应用 2‹ 琼脂进行连翘体外抗菌实验的效果观察
李仲兴 o王秀华 o赵建宏 o杨敬芳 o王 鑫
k河北医科大学 第二医院 o河北 石家庄 sxssssl
≈摘要  目的 }用两种培养基对连翘的体外抗菌活性进行评价 ∀方法 }用琼脂稀释法测定连翘对葡萄球菌的最低
抑菌浓度k Œ≤l ∀结果 }连翘水煎剂对表皮葡萄球菌的 Œ≤|s o用 2‹ 琼脂为 tΒyws o而用营养琼脂则为 tΒws o使连翘
的抑菌效果增加 ty倍 ∀结论 }中药体外抗菌实验应使用 2‹ 琼脂 o淘汰使用营养琼脂 ∀此外 o应使用多点接种仪接
种细菌 ∀
≈关键词  连翘 ~2‹ 琼脂 ~金黄色葡萄球菌 ~表皮葡萄球菌 ~抗菌作用
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukusssltu2szwu
对清热解毒中药的体外抗菌作用 o从 vs年代以
来就开始进行研究 o许多专家作了大量的抑菌实
验≈t ou  o取得了许多宝贵经验 o但中药体外抗菌实验
的方法进展较慢 o到目前为止几乎还是四 !五十年代
的方法≈v  ∀我们通过研究发现在抗菌实验方法中 o
从实验用培养基 o到实验菌株的接种方法 o均存在一
些不足之处 o为此 o我们对中药抗菌实验用的接种器
具 o培养基作了重大改进 o从而提高了中药的抑菌效
果 o为中药抗菌实验标准化和中药走向世界创造条
件 o现报告如下 ∀
1 材料与方法
111 接种器具及培养基
11111 微量多点接种仪 北京医科大学昆仑药物
发展研究所生产 ∀
11112 培养基 ≠  ∏¨¯¯ µ¨2‹¬±·²±琼脂 }美国 …⁄
公司提供k……o批号 }tssst{⁄ƒ°≤l o简称 2‹ 琼
脂 ∀ 营养琼脂 }杭州微生物试剂厂生产k批号 }
||syutl ∀
11113 连翘k Φορσψτηια συσπενσα ∂¤«¯ o由河北省药
材公司杨竹生主任中药师鉴定l 称取 xs ª连翘 o
加水适量 o煎煮 vs °¬±o将药液滤出 o再将药渣加水
适量煎煮 vs °¬±o将两次过滤药液煎煮浓缩成 uss
°¯ 煎液ktΒw oux h煎液l备用 ∀
11114 实验用菌种 从我院临床病人的血液 !尿
液 !脓汁 !痰等标本分离的菌株共 ty{株 o其中金葡
≈收稿日期  usss2sw2sx
≈基金项目  国家中医药管理局重点资助课题k|zs||l
菌 xy株 !表皮葡萄球菌 ttu株k菌种由我院边占水
副主任检验师做复核鉴定l ∀
112 方法
11211 药液稀释 排列无菌中试管 ts只 o于第 u ∗
ts管中加无菌蒸馏水 ts °¯ o取 tΒw的连翘水煎液
us °¯ o于第 t管加入 ts °¯ o第 u管加入 ts °¯ 并混
合后取出 ts °¯ o加入第 v管 o再混合后取 ts °¯ 放
入第 w管 o如此连续稀释至第 |管取出 ts °¯ 弃掉 ∀
第 ts管只有无菌蒸馏水作对照 ∀
11212 含药平板制备 用无菌操作将已溶化的无
菌 2‹ 琼脂 |ss °¯ o分装于 ts瓶 o每瓶 |s °¯ o将第
t管 ts °¯ 含 tΒw的连翘煎液放入含 |s °¯ 培养基
的瓶中 o混合后倾注 w个平板 o每个平板含 ux °¯ 含
药琼脂 o第 u管以后的平板制备同第 t管 o凝固后备
用 ∀这样第 t组的琼脂平板实际含连翘 u qx h o连翘
与培养基之比为 tΒws o第 u组为 tΒ{s o第 v组为 tΒ
tys , ,
11213 菌液制备 将金葡菌等新鲜培养物k菌落l
制成菌液 o浓度相当于 s qx麦氏比浊管 ∀
11214 用多点接种仪分别吸取各种菌液点种于含
不同药物浓度的琼脂平板上 ∀于 vx ε 培养 t{ ∗ uw
«o观察 Œ≤ o并统计出 Œ≤xs和 Œ≤|s的药物浓度
和累积抑菌百分率 ∀
113 用营养琼脂k又称肉汤琼脂l的抑菌方法与用
2‹ 琼脂方法相同 o只是将 2‹ 琼脂换成营养琼
脂 ∀
2 结果
211 抑菌效果
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第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtu
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结果表明 o采用 2‹ 琼脂进行抑菌实验 o连翘
的抑菌效果优于营养琼脂 ∀连翘对金葡菌的
Œ≤xs o2‹ 琼脂为 tΒyws o而营养琼脂则为 tΒtys o
其 Œ≤|s o前者为 tΒtys o后者则为 tΒ{s ∀对 ttu株
表皮葡萄球菌的 Œ≤xs o2‹ 琼脂为 tΒyws o营养琼
脂则为 tΒtys o而 Œ≤|s o2‹ 琼脂为 tΒyws o营养琼
脂为 tΒws o即用 2‹ 琼脂使连翘的抑菌效果增加 u
∗ ty倍 ∀说明采用 2‹ 琼脂可提高连翘的抑菌效
果k表 tl ∀
用两种培养基观察连翘对金葡菌和表皮葡萄球
菌的累积抑菌率见图 t ou ∀
为便于观察 o随机取 tx株金葡菌 o用两种培养
基观察连翘对同一细菌的抑菌效果 o几乎使连翘对
同一菌株的抑菌活性提高两个以上稀释度 ∀表明用
2‹ 琼脂可显著提高连翘的抑菌效果k表 ul ∀
表 t 用两种培养基检测连翘对临床菌株的不同抑菌效果
菌株 菌株数 培养基 Œ≤ws Œ≤xs Œ≤{s Œ≤|s
金黄色葡萄球菌 xy 2‹ 琼脂营养琼脂
tΒtu{s
tΒvus
tΒyws
tΒtys
tΒyws
tΒ{s
tΒtys
tΒ{s
表皮葡萄球菌 ttu 2‹ 琼脂营养琼脂
tΒtu{s
tΒtys
tΒyws
tΒtys
tΒyws
tΒ{s
tΒyws
tΒws
注 }Œ≤xs为抑制 xs h菌株的药物浓度 oŒ≤|s为抑制 |s h菌株的药物浓度
图 t 用两种培养基检测连翘
对 xy株金葡菌的累积抑菌率
图 u 用两种培养基检测连翘
对 ttu株表皮葡萄球菌的累积抑菌率
表 u 连翘对两种培养基中金葡菌抑菌效果对比
2‹ 琼脂
菌株号 tΒws tΒ{s tΒys tΒvus tΒyws tΒtu{s
营养琼脂
菌株号 tΒws tΒ{s tΒys tΒvus tΒyws tΒtu{s
t p p p p p p t p p p p n n
u p p p p p n u p n n n n n
v p p p p p n v p p p n n n
w p p p p p n w p p p n n n
x p p p p p n x p p n n n n
y p p n n n n y n n n n n n
z p p n n n n z n n n n n n
{ p p n n n n { n n n n n n
| p p n n n n | p n n n n n
ts p p p p p n ts p p n n n n
tt p p p p p n tt p p n n n n
tu p p p p p n tu p p p p n n
tv p p p p p n tv p p n n n n
tw p p p p p n tw p p n n n n
tx p p p p p n tx p p n n n n
注 }n 表示细菌生长 op 表示细菌不生长k被抑制l
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第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtu
⁄¨ ¦qousss
212 关于实验用细菌悬液的接种方法 国内对中
药的体外抑菌实验均采用接种环接种 o每次只能接
种一株细菌 o且每次取菌液的量很难控制 o致使实验
菌量不一致 o使抑菌实验结果发生误差 ∀
我们随机选取经两次实验证实对连翘敏感k p l
或耐药k n l的 ts株金葡菌 o分别用多点接种仪及用
接种环接种 o结果同一细菌 !同一药物浓度的培养
基 o其结果则不一致k表 vl ∀
表 v ts株金葡菌用两种接种方法的 Œ≤
含药培养基 t u v w x y z { | ts
tΒws 接种仪 p p p p p p p p p p
接种环 p p p n p p p p p p
tΒ{s 接种仪 p p p p p p p p p p
接种环 p p p p n n p p p p
tΒtys 接种仪 p p p p p p n p p n
接种环 p p p n p p n n p n
手工接种方法出现了误差 o第 w ox oy o{号菌本
来对连翘敏感k p l而呈现耐药k n l ∀因此用手工接
种细菌时 o可因细菌量过大会出现假性耐药 ∀
我们采用多点接种仪接种细菌 o每次可接种 u{
株细菌k用接种环接种每次只接种 t株细菌l ∀不仅
节省人力 o缩短接种时间 o而且由于接种仪的接种头
取菌量一致ku{个接种头均为 s qsst °¯ l o从而保证
了抑菌实验结果的一致 ∀
3 讨论
我国从三 !四十年代以来 o传统中药的体外抑菌
实验对研究我国中药的体外抗菌作用做出了巨大贡
献 ∀并证明了一大批中药对各种细菌有抗菌作
用≈{  o这对抗感染中药的研究 !开发和应用起了重要
作用 ∀随着医学科学技术的研究进展 ∀我们发现上
述传统方法有一定缺陷 o即肉汤琼脂培养基不能完
全把中药的抗菌作用显示出来 o其次是接种细菌方
法也应改进 ∀
311 关于培养基 中药抗菌实验直到近几年仍沿
用肉汤琼脂 o即营养琼脂k‘∏·µ¬¨±·¤ª¤µl≈w ∗ {  ∀近年
来我们将研究抗生素体外抗菌实验用的培养基引入
中药体外抗菌实验之中≈| ots  o即改用 2‹ 琼脂做抑
菌实验 o发现与用肉汤琼脂结果不一致 o从而我们开
始用大量菌种对两种培养基的抑菌效果进行研究 ∀
如本次研究中发现连翘对 ttu 株表皮葡萄球菌的
Œ≤ o2‹ 琼脂比营养琼脂抑菌效果提高 u ∗ ty倍 ∀
肉汤琼脂培养基为什么不能很好地显示中药的抑菌
活性 o可能是其配方中的某些成分 o会与中药抗菌物
质结合而使其失去抑菌作用 o而 2‹ 琼脂中则无这
种成分 ∀鉴于上述原因 o建议今后中药的体外抗菌
实验应淘汰使用营养琼脂 o改用 2‹ 琼脂 ∀
312 关于接种细菌方法 接种细菌时一般细菌悬
液浓度应相当于 0 qx麦氏比浊管的浊度 ∀菌悬液浓
度过高过低均会影响抑菌效果 ∀中药定量抑菌实验
大多无标准 o而且大多是手工接种≈tt ∗ tw  o建议今后
中药定量抑菌实验应逐渐标准化 ∀接种方法最好采
用多点接种仪接种细菌 o以免因接种量不同而影响
抑菌效果 ∀
总之 o为使我国中药研究和开发与世界医学接
轨 o必须使中药抗菌实验现代化 !标准化 ∀
≈参考文献 
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医学杂志 ot|wz ovvkvl }zt1
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作用比较 1 黑龙江医药 ot||z otsktl }xx1
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≈|  …¤¯²º¶o „ q ¤±∏¤¯ ²©¦¯¬±¬¦¤¯ °¬¦µ²¥¬²¯²ª¼ ox·« §¨q • ¤¶«¬±ª·²±
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第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtu
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Ινϖεστιγατιον ον Αντιβαχτεριαλ Αχτιϖιτψ οφ Φορσψτηια συσπενσε ς αηλιν ςιτρο
ωιτη Μυελλερ2Ηιντον Αγαρ
Œ «²±ª2¬¬±ªo• „‘Š ÷¬∏2«∏¤o ‹ „’ ¬¤±2«²±ªo ≠ „‘Š ¬±ª2©¤±ªo• „‘Š ÷¬±
k׫¨ ≥ ¦¨²±§ ‹²¶³¬·¤¯ ²© ‹ ¥¨¨¬ §¨¬¦¤¯ ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o≥«¬­¬¤½«∏¤±ª sxssss o‹ ¥¨¨¬o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ √¨¤¯∏¤·¨ ·«¨ ¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ¤¦·¬√¬·¼ ²© Φορσψτηια συσπενσᬱ √¬·µ² º¬·«§¬©©¨ µ¨±·
° §¨¬¤qΜετηοδ : Œ≤ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²© Φορσψτηιασυσπενσα ¤ª¤¬±¶·Σταπηψλοχοχχι º¤¶³¨µ©²µ° §¨¥¼·«¨ ¤ª¤µ§¬¯∏2
·¬²± ° ·¨«²§qΡεσυλτ : Œ≤|s ²© §¨¦²¦·¬²± ²© Φορσψτηια συσπενσα ¤ª¤¬±¶·Σταπηψλοχοχχυσ επιδερµιδισ¬± 2‹ ¤ª¤µ
º¤¶tΒyws o¥∏·¬± ±∏·µ¬¨±·¤ª¤µtΒws o·«¨ ¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ¤¦·¬√¬·¼ º¬·« 2‹ ¤ª¤µ¥¨¬±ªty ©²¯§«¬ª«¨µ·«¤± ±∏·µ¬2
±¨·¤ª¤µqΧονχλυσιον :׫¨ 2‹ ¤ª¤µ¶«²∏¯§¥¨ µ¨¦²°° ±¨§¨ §·²µ¨³¯¤¦¨ ±∏·µ¬¨±·¤ª¤µ¤¶° §¨¬∏°¬±·«¨ ¤±·¬¥¤¦·¨2
µ¬¤¯ ¬¨³¨µ¬° ±¨·²© ×µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ o¤±§¬·¬¶¥¨··¨µ·²∏¶¨ °∏¯·¬³²¬±·¬±²¦∏¯¤·¬±ª§¨ √¬¦¨ ¬±·«¨ ¶¨±¶¬2
·¬√¬·¼ ·¨¶·q
[ Κεψ ωορδσ] Φορσψτηιασυσπενσα~ 2‹ ¤ª¤µ~ Σταπηψλοχοχχυσαρυευσ; Σ . επιδερµιδισ;¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ¤¦·¬√2
¬·¼
≈责任编辑 古云霞 
静滴脉络宁注射剂
致严重不良反应 u例
杨 曼
k内蒙古自治区医院 o
内蒙古 呼和浩特 stsstzl
例 t }患者男 oyx岁 o主因头痛 x年近日加重 o以
脑动脉硬化入院 ∀
患者有糖尿病史 !动脉硬化史 o无药物过敏史 ∀
患者入院后给予脉络宁注射剂k南京金陵制药
厂 o生产批号 ||swt|ulus °¯ 加 x h 葡萄糖注射液
uxs °¯ 静脉滴注 ∀当液体滴入约 t °¬±o患者即感全
身麻木 !头胀痛 !胸闷 !气短 !心慌 ∀急查 }…° tsry
®°¤o心率 tss次r°¬±o心电图与入院前无变化 ∀考
虑为药物过敏 ∀处理 }立即停止输注脉络宁注射液 o
给予吸氧 o并同时静脉推注氟美松 ts °ª加 xs h葡
萄糖注射液 us °¯ ∀vs °¬±后上述症状消失 ∀第 u
天停用脉络宁注射液 o改用其他药物输注 o未出现任
何不适反应 ∀
例 u }患者男 oyu 岁 o因患冠心病 o心绞痛收入
院 ∀患者有冠心病史 !心绞痛史 o既往无药物过敏
史 ∀入院后给予滴信痛片ts °ªr次 o一日v次 o舌
≈收稿日期  usss2s{2ts
下含服 o静滴低分子右旋糖酐 !尿激酶胞 u呤胆碱一
个疗程后 o改用脉络宁注射剂k南京金陵制药厂 o生
产批号 |{tttvulus °¯ 加 x h葡萄糖注射液 uxs °¯
缓慢静脉滴注治疗 ∀患者于用该脉络宁注射剂静脉
滴注的第 t天 o静脉滴注该药液约 x °¬±后突然出
现寒颤 !气短 !心慌 !胸闷 !面色青紫 ∀急查体 }× vz
ε o…° | qvrx qv ®°¤o心率 tsy次r°¬±o心电图示窦
速改变 o≥×2× 波无明显变化 o急性憋喘貌 o呼吸急
促 o双肺呼吸音粗 o其余正常 ∀考虑为脉络宁注射液
静滴致过敏性休克 ∀处理情况 }立即停止输入脉络
宁注射剂 o给予吸氧 o氟美松 ts °ª加 xs h葡萄糖
us °¯ 静脉推注并同时给予升压药静脉滴注 ot «后
因抢救无效而死亡 ∀
讨论 }脉络宁注射液是由中药玄参 !牛膝等药物
经化学提取后制成的复方注射剂 o药理作用有扩张
血管 !改善微循环 o增加血流量及抗凝血 !溶血栓等
作用 ∀用于治疗血栓闭塞性脉管炎 !脑血栓形成的
后遗症 !多发性大动脉炎 !四肢急性动脉栓塞症 !糖
尿病坏疽 !静脉血栓形成的血栓性静脉炎等 ∀不良
反应虽少见 o但有些反应症状较严重 o若不及时给予
停药治疗 o将给患者造成极大的痛苦 ∀
此病例告诉我们 o中药复方制剂在静滴时引起
的过敏反应是存在的 o有的反应甚至后果严重 o故应
在治疗中密切观察患者反应 o及时发现并给予妥善
处理 ∀
≈责任编辑 古云霞 
#xwz#
第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtu
⁄¨ ¦qousss