全 文 ：水蛭 !丹参及其复方对血瘀大鼠血管内皮
细胞保护作用的研究
李凤文 o张立石 o刘 红 o蔡永春 o潘静华 o贾晓元 o丁家欣
k中国中医研究院 基础研究所 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }研究活血化瘀中药 o保护血管内皮细胞k ∂ ∞≤l的作用 o进一步为探讨血瘀证及活血化瘀机理 o
提供新思路和途径 ∀方法 }用注射肾上腺素 o并附加冰浴的方法 o复制血管内皮损伤的血瘀模型 o检测血循环内皮
细胞k≤∞≤l数和血液流变学 o并观察灌服大鼠水蛭或丹参及其复方 x §或 ts §后的变化 ∀结果 }该血瘀模型 o具有
高度重复性的 ≤∞≤ 数增加 o与全血粘度 !纤维蛋白原和红细胞压积增加相并行 ∀服中药的各组 o≤∞≤ 数明显减少
及血液流变学的改善 ∀结论 }该血瘀模型有明显的血管内皮损伤 o水蛭 !丹参及其复方均有保护 ∂ ∞≤ 的作用 ∀
≈关键词  血瘀 ~循环内皮细胞 ~血液流变学 ~活血化瘀中药 ~保护作用
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukusstlts2szsv2sw
血管内皮细胞k∂ ∞≤l损伤 o已成为研究动脉粥
样硬化k„≥l等心脑血管疾病的新焦点 o保护 ∂ ∞≤
药物研究受到极大关注 ∀血瘀证血管内皮是否有损
伤 ‚以及活血化瘀中药对 ∂ ∞≤ 损伤保护作用的研
究 o一直报道甚少 ∀本研究从体内循环内皮细胞
k≤∞≤l入手 o观察 ≤∞≤ 与血液流变的关系 o并探讨
水蛭 !丹参及其复方对活体血瘀大鼠 ∂ ∞≤ 损伤的保
护作用 o为深入研究血瘀与活血化瘀机理 o提供新思
路和途径 o并为进一步开发保护血管内皮细胞中药 o
奠定理论基础 ∀
1 材料和方法
1 q1 动物 • ¬¶·¤大鼠 uss只 o雌雄不拘 o体重 t|s
∗ uxs ªo本院动物中心提供 ∀
1 q2 药品 水蛭k宽体金线蛭l !丹参 !活血化瘀方
´k丹参 !当归 !川芎 !水蛭l !活血化瘀方 µk丹参 !当
归 !川芎l和活血化瘀方 ¶k黄芪 !丹参 !当归 !川芎 !
水蛭l均为水煎醇提法制备浸膏 o临用前蒸馏水溶化
k本所药化室提供l o均以人剂量的 ts倍量灌服大
鼠 ∀盐酸肾上腺素注射液k„§µlk北京永康制药厂l o
每支 t °ª# °¯ p t ∀二磷酸腺苷k„⁄°l o美国 ≥¬ª°¤
公司产品 ∀
1 q3 复制血管内皮损伤的血瘀模型 参考文献
≈t  o给大鼠皮下注射 s qt h „§µo每次 s qu °¯ ow «
≈收稿日期  usss2s|2ut
≈基金项目  国家中医药管理局重点资助课题k|x…s{{l
后再次注射等量 „§µ∀第 t次注射 „§µu «后 o将大
鼠放入冰水中 x °¬±o当晚停食 ∀对照组大鼠 o皮下
注射等量生理盐水 o每天 u 次 ∀第 u 天采血检测
≤∞≤ 数及血液流变指标 ∀
1 q4 分组与给药 随机分为 y组 o每组 ts只 o分别
进行疗程 x §和 ts §的观察 ∀正常对照组和血瘀模
型组 o灌服蒸馏水每次 t °¯ o每天 u次 o连服 x §或
ts §∀水蛭组k t qwv ª#®ªp t#§p tl !丹参组ku q{y ª#
®ªp t#§p tl !活血化瘀方 ´组k{ qtw ª#®ªp t#§p tl !µ
组ky qzt ª#®ªp t#§p tl和 ¶组ktu qwu ª#®ªp t#§p tl
灌服中药 o每天 u次 o连服 x §或 ts §∀于第 w天或
第 |天k除正常对照组皮下注射生理盐水外l o各组
按上述k1 q3l方法 o复制血瘀模型 ∀
1 q5 血液流变学测定 终止给药后 ov h 戊巴比妥
腹腔注射 o麻醉状态下 o抽取腹主动脉血 x °¯
k含 s qx °¯ 肝素 o用已硅化的注射器l o取 t °¯ 作血
液流变学指标k余 w °¯ 作 ≤∞≤ 检测l ∀血液流变仪
k北京普利生化仪器厂 o型号为 …≠2ty• ‹∞’  ∞2
×∞• l测定 ts ¶p t otss ¶p t ouss ¶p t切变率下的全血
粘度 ∀用微量抗凝血毛细管离心法测定红细胞压积
k h l ∀用毛细管热沉淀高速离心法分离 o显微镜下
测量kts ≅ tsl o计算纤维蛋白原浓度kª#p tl ∀
1 q6 ≤∞≤ 的检测方法 基本按 ‹ ¤¯§²√ ¦¨分离 ≤∞≤
的方法≈u  o将 w °¯ 抗凝血 ov|x µ#°¬±p t离心 us °¬±o
收集 urv上清 o向 t °¯ 富含血小板的血浆内 o加入
s qt h „⁄°液 s qu °¯ o振荡 x °¬±∀v|x µ#°¬±p t再离
#vsz#
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心 us °¬±o取上清液k已除去血小板l以 u tss µ#
°¬±p t离心 us °¬±o向沉淀物内k含 ≤∞≤l加入 s q| h
‘¤≤¯s qt °¯ o再振荡k或玻璃棒搅动lt °¬±o重悬后 o
取少许悬液滴入 u块 …∏µ®¨ µ血细胞计数板内 o显微
镜下kts ≅ tsl计数板内全部 |个大方格中的 ≤∞≤
数 o同一标本计数 u次 o求其均值 o单位 ν#s q| Λ¯ p t ∀
1 q7 ≤∞≤ 形态观察及鉴定 沉淀物涂片 oŠ¬¨ °¶¤
染色 o普通显微镜观察 ∀同时涂另一片 o进行 ∞≤ 第
¬因子免疫荧光观察法 o鉴定 ≤∞≤ ∀方法 }涂片干燥
后甲醇固定 x °¬±o°…≥漂洗 v次 o干后滴加兔抗人
¬2• }„ª血清 o置于 vz ε 水浴中孵育 vs °¬±o再次
°…≥漂洗 v次 o干后滴加 ƒŒ× ≤k异硫氰酸荧光素l标
记的羊抗兔 ŒªŠ荧光抗体 o再孵育 vs °¬±o°…≥冲洗
v次 o干后滴加缓冲甘油 o置 …¬ys型 ²¯¼°³∏¶荧光显
微镜下观察 ∀阴性对照分别加入一抗或二抗 o与其
同步 ∀
2 结果
2 q1 ≤∞≤ 形态特征 ≤∞≤ 分离法除去了白细胞和
血小板等血细胞 o获得较高纯度的 ≤∞≤ ∀计数板未
着色的或 Š¬¨ °¶¤染色的 ≤∞≤ o体积大kvs ∗ xs Λ°l o
形态特异 o易于辨认 ∀ ≤∞≤ 多为扁平状及不规则多
边形 o胞浆边缘有明显皱折或卷边 o折叠状 o几乎未
见有核 ≤∞≤k图 t !图 ul ∀荧光显微镜显示 ≤∞≤ 为
黄绿色荧光 o即证实为 ∂ ∞≤ ∀
图 t 计数板下大鼠 ≤∞≤ 形态kts ≅ wsl
图 u Š¬¨ °¶¤染色显示大鼠 ≤∞≤ 形态kts ≅ wsl
2 q2 血瘀大鼠 ≤∞≤ 与血液流变学的变化 单批
或多批结果的均值 o均表明血瘀大鼠 ≤∞≤ 与血液流
变学变化的一致性 ∀血瘀模型组 ≤∞≤ 明显高于对
照组k Π s qstl o全血粘度k ts ¶p t和 uss ¶p tl !纤维
蛋白原与红细胞压积均较对照组增加 o以前两项增
加明显k Π s .sx和 Π s qstlk表 tl ∀
表 t 血瘀大鼠血液流变与 ≤∞≤ 的变化
组别 动物数
全血粘度r°°¤#¶p t
ts ¶p t uss ¶p t
纤维蛋白原
rª#p t
红细胞压积
r h
≤∞≤ 数r
ν#s q|Λ¯ p t
对照组 vz y qux ? t qux u q|{ ? s qvy u qs| ? s q{w vw qvs ? v qyz x qw ? v qu
kvul
血瘀组 vw { qs{ ? t q|ytl v qww ? s qwsul v qyw ? t qwxul vx qx{ ? v qx | qy ? x qtul
kvsl
注 }≠ ξ ? σ 括号内为动物数 tl Π s .sx u) Π s qst
2 q3 活血化瘀中药对血瘀大鼠 ≤∞≤ 和血液流变学
的影响 疗程 x §o血瘀组大鼠 ≤∞≤≈ktu qu ? y q|l#
s q| Λ¯ p t 比对照组≈ky qv ? x qsl#s q| Λ¯ p t 明显增多
k Π s qsxl ∀水蛭组≈kv q| ? t qyl#s q|Λ¯ p t oΠ 
s qst  !丹参组≈ky qy ? v qvl#s q| Λ¯ p t oΠ s qsx  !活
血方 ´组≈ky qv ? v qtl#s q| Λ¯ p t oΠ s qsx 和活血
方 µ组≈kz qy ? z qzl s q|#Λ¯ p t oЁ s qsx 的 ≤∞≤ o均
比血瘀组减少 ∀疗程 ts §o血瘀组≈k{ qt ? v q{l#s q|
Λ¯ p t 比对照组≈ky qv ? u q{l#s q| Λ¯ p t ≤∞≤ 增加 o丹
参组≈kv qw ? t qvl#s q| Λ¯ p t oΠ s qst  !活血方 ´组
≈kx qv ? u qyl#s q| Λ¯ p t oΠ  s qsxl  !活血方 µ组
≈kx qx ? u qul#s q| Λ¯ p t oΠ  s qsx 和活血方 ¶组
≈kw q| ? t qtl#s q| Λ¯ p t oΠ s qst  o均较血瘀组 ≤∞≤
明显减少k图 v owl ∀血液流变学改善与 ≤∞≤ 减少不
完全一致 ∀仅水蛭与活血方 ´组的红细胞压积降低
kx §l o活血方 µ和 ¶组纤维蛋白原降低k ts §l o其
余变化不大 ∀
#wsz#
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∂ ²¯ quy o‘²qts
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图 v 对照与血瘀组大鼠 ≤∞≤ 的分布图
图 w 用药 x §和 ts §各组 ≤∞≤ 分布图
3 讨论
用单味水蛭或丹参及其复方 o对活体血瘀大鼠
∂ ∞≤保护作用的研究 o尤其从 ≤∞≤ 入手 o尚未见报
道 ∀长期以来 o∂ ∞≤ 损伤与恢复的研究 o多采用体外
培养实验 ∀其要求条件高 o与整体要求有距离 o也限
制了实验结果的推广和临床应用 ∀ t|zv 年 o
‹ ¤¯§²√ ¦¨等建立了 ≤∞≤ 分离方法 o并能定量检测其
数量变化 ∀ ≤∞≤ 是指生理或病理情况下 o凡是从血
循环中获得的 ∂ ∞≤ ∀生理情况下 o是新陈代谢衰老
脱落的 ∞≤ o维持在基础水平≈≤∞≤ o人为kt qv ? s q|l
#s q| Λ¯ p t o大鼠为kt qwt ? s qxxl #s q| Λ¯ p t  ∀当病
理或疾病情况下 o∂ ∞≤ 受到机械 !化学或免疫等因
素损伤时 o∂ ∞≤ 结构和功能发生改变 o ≤∞≤ 增多 ∀
而给予某些药物时 o≤∞≤ 由增加表现为不增加或明
显减少 ∀因此 o现代研究认为 o≤∞≤ 是活体内唯一可
以直接而特异地反映血管损伤的最显著的标志
物≈v  ∀研究表明 o≤∞≤ 对不同降压药物反应性 !外周
血管性疾病 k°∂ ⁄l 疗效标准的评价 o以及在判断心
绞痛发作的警报方面等 o均占有重要地位 ∀而且
≤∞≤ 在探讨疾病病理学机理 o阐明药物作用原理以
及寻找保护血管内皮药物等方面发挥了积极作
用≈w  ∀
本研究采用注射肾上腺素加冰浴的方法 o复制
大鼠/血瘀模型0 ∀多批实验证实 o模型大鼠全血粘
度 !纤维蛋白原和红细胞压积均比对照组增加 o显示
血液粘 !凝 !浓变化 o表明该血瘀模型成立 ∀同时观
察到 ≤∞≤ 特有的形态及第 ¬因子免疫荧光呈阳性 o
均证明获得的 ≤∞≤ 为 ∂ ∞≤ o并且始终伴有 ≤∞≤ 增
加 o证实该血瘀大鼠存在明显的血管损伤 o亦可称为
/血管内皮损伤的血瘀模型0 ∀ ∂ ∞≤ 损伤机理可能与
注射 „§µ有直接关系 o• ¬¯¯¬¤° …等报道 o受心理压
力的猴 o诱发交感神经活动增强的同时 o有 ∂ ∞≤ 损
伤的变化≈x  ∀因此该研究的血瘀模型 o≤∞≤ 增多 o主
要为 „§µ致 ∂ ∞≤ 损伤的结果 ∀外周血管阻力加大 o
可损伤 ∂ ∞≤≈y  ∀冰浴使其血管阻力增加 o因此是
≤∞≤增多的强化因素 ∀该血瘀大鼠 ≤∞≤ 增多与血
液流变学变化相平行 o是否为除外微循环障碍和血
液流变学改变 o血瘀证的又一新特征 ‚本实验得到
证实 o但仍有待深入研究 ∀
本研究观察了水蛭 !丹参及其复方对其血瘀大
鼠 ∂ ∞≤ 的保护作用 ∀结果表明 o喂服 x §或 ts §中
药 o均使血瘀大鼠 ≤∞≤ 由明显增多转为明显减少 o
证实了水蛭 o丹参及其复方具有稳定血管壁 o减轻
∂ ∞≤ 损伤 o而达到保护 ∂ ∞≤ 的作用 ∀其疗效程度 o
单味水蛭和丹参优于复方 ´和 µ ∀水蛭保护 ∂ ∞≤
的作用起效早于丹参 ∀v个复方起效晚 o其 ts §的
效果优于 x §∀v个复方之间疗效基本一致 ∀本实验
水蛭和丹参保护 ∂ ∞≤ 的活体效果 o与我们以往体
内 !外实验结果一致≈z o{  o这更进一步显示了水蛭 !丹
参及其复方保护 ∂ ∞≤ 的可靠性和客观性 ∀对其血
液流变学的改善 o不甚满意 ∀提示这些活血化瘀中
药 o可能通过保护 ∂ ∞≤ 而改善血瘀 o比改善血液流
变更为可靠 ∀保护 ∂ ∞≤ o就可减轻其损伤 o增强血管
的运动功能和 ∞≤ 稳定性 o以及降低血管通透性 o从
而达到活血化瘀作用 ∀本研究为血瘀证与活血化瘀
#xsz#
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机理研究 o可能提供了新思路 o并为保护血管内皮中
药的开发研究 o奠定了理论基础 ∀
≈参考文献 
≈t  陈 奇 q中药药理实验方法 q北京 }人民卫生出版社 ot||w qtu{ o
tu| q
≈u  ‹ ¤¯§²√ ¦¨o°¤√¨¯ • ²¶¶°¤±±q≤¬µ¦∏¯¤·¬±ª ∞±§²·«¨ ¬¯¤¯ ≤¨¯ ¶¯Œ¶²¯¤·2
§¨ ײª¨·«¨µº¬·« °¯ ¤·¨¯ ·¨¶¤±§·«¨ ∞¬³¨µ¬° ±¨·¤¯  ²§¬©¬¦¤·¬²± ²©
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≈w  杨映波 o王正国 q循环内皮细胞研究进展 q生理科学进展 o
t||v ouwktl }zs q
≈x  • ¬¯¯¬¤° … ≥·µ¤º±o Š²µ¤± …²±§­¨µ¶o¤¼ • Ž¤³¯¤± o ·¨¤¯ q∞±2
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®¨ ¼¶q≤¬µ¦∏¯ • ¶¨ot||t oy{kxl }tuzs q
≈y  祝之明 o杨成明 o宋元群 o等 q高血压病患者血液中血管内皮细
胞的变化及其临床意义 q中华心血管病杂志 o t||t ot|kwl }
utz q
≈z  李凤文 q血管内皮细胞损伤模型的复制及其在血瘀与活血化瘀
研究中的应用 q北京实验动物科学与管理 ot||w ottkvl }v| q
≈{  李凤文 o刘晓颖 o张立石 o等 q水蛭及其复方对实验性动脉硬化
家兔内皮素基因表达的影响 q中医杂志 ot||| owsktl }xs q
Στυδψ οφ Προτεχτιϖε Εφφεχτ οφ Λεεχη , Ραδιξ Σαλϖιαε Μιλτιορρηιζαε ανδ ιτσ
Χοµ ποσιτε Ρεχιπε ον ς ασχυλαρ Ενδοτηελιαλ Χελλσιν Ρατσ ωιτη Βλοοδ Στασισ Σψνδροµε
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·«¨ ¦«¤±ª¨ ²©·«¨ ¤¥²√¨¬±§¨ ¬¨ ¶¤©·¨µ·«¨ µ¤·¶«¤√¨·¤®¨ ± ¨ ¦¨«!• ¤§¬¬¶¤¯√¬¤¨ °¬¯·µ²µµ«¬½¤¨ k• ≥  l ¤±§¬·¶¦²°2
³²¶¬·¨ µ¨¦¬³¨ ©²µx §¤¼¶²µts §¤¼¶qΡεσυλτ :Œ·¦²∏¯§¬±¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ±∏°¥¨µ²© ≤∞≤ ¤¦¦²°³¤±¬¨§¥¼ º«²¯¨¥¯²²§√¬¶2
¦²¶¬·¼ o©¬¥µ¬±²ª¨ ± ¤±§«¨ °¤·²¦µ¬·¬±µ¤·¶º¬·« ¥¯²²§¶·¤¶¬¶q…∏·©²µªµ²∏³¶·¤®¬±ª ≤«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ o·«¨ ±∏°¥¨µ
²© ≤∞≤ º¤¶§¨¦µ¨¤¶¨§§¬¶·¬±¦·¬√¨¯¼ ¤±§¥¯²²§µ«¨ ²¯²ª¼ º¤¶¬°³µ²√ §¨qΧονχλυσιον :׫¨ µ¤·º¬·«¥¯²²§¶·¤¶¬¶¶¼±2
§µ²°¨¶∏©©¨ µ¨§©µ²° ²¥√¬²∏¶¬±­∏µ¼ ²© ∂ ∞≤ q ׫¨ ¨ ¦¨«o• ≥  ¤±§¬·¶¦²°³²¶¬·¨µ¨¦¬³¨ ¦²∏¯§³µ²·¨¦·∂ ∞≤ q
[ Κεψ ωορδσ] ¥¯²²§¶·¤¶¬¶~¦¬µ¦∏¯¤·¬±ª ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯¶~µ«¨ ²¯²ª¼ ~¦«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ ²© °…≤ • …≥ ~³µ²·¨¦·¬√¨
©¨©¨ ¦·
≈责任编辑 方文贤 
本刊声明
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经刊用 o本刊即拥有其在上述及所有媒介再次发表的权利 o作者如不同意可作声明 ∀作者著作权使用费与本
刊稿酬将在我刊刊用后一次性给付 o并赠样刊 t本 o单行页若干份 ∀
本刊自 t||x年 t月 t日开始对来稿收取处理费k每篇 tsss字以下 vs元 otsss字以上 xs元l o请作者在
寄发稿件的同时将处理费通过邮局寄汇本刊k请勿在稿件中夹带现金l ∀汇单上请注明论文题目及第一作者
姓名 ∀收款地址 }北京东直门内北新仓 t{号中国中药杂志 o邮编 tsszss ∀
本刊对 t||x年 t月以后的来稿k已收处理费者l恢复退稿制度 ∀
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