全 文 :±¤·¤±·¶¶¤°³¯ §¨©µ²° §¬©©¨ µ¨±·ªµ²∏³¶k¦²±·µ²¯ o°²§¨¯o¤±§·«¨µ¤³¨ ∏·¬¦ªµ²∏³¶º¬·«t os qt os qst ª#pt °∏¨ l
¤·§¬©©¨ µ¨±··¬°¨º µ¨¨ ¤¶¶¤¼¨ §º¬·«±¬·µ¤·¨ µ¨§∏¦·¤¶¨ ° ·¨«²§qΡεσυλτ : ¦²±·¨±·²© °²§¨¯¬±¦µ¨¤¶¨§¤©·¨µµ¨³¨µ2
©∏¶¬²± k Π s qstl o º«¬¯¨ ¬·¬±¦µ¨¤¶¨§¶«¤µ³¯¼ ¤·y « ¤©·¨µµ¨³¨µ©∏¶¬²± ¤±§ ®¨ ³··«¨ µ¨¤©·¨µq ±¯ ¼ ¤·y « ¤©·¨µ
µ¨³¨µ©∏¶¬²± §¬§°∏¨ ¬±·«¨ ¶¨ ·«µ¨¨§²¶¨¶¬±«¬¥¬·¨ ³µ²§∏¦·¬²± k Π s qstl ¤±§®¨ ³··²·«¨ uw «¤©·¨µµ¨³¨µ©∏2
¶¬²±q Χονχλυσιον : °∏¨ ¬¨¨ µ·¶¬±«¬¥¬·¬√¨ ©¨©¨ ¦·²±¯ ¼ ¤©·¨µ ³µ²§∏¦·¬²± ¬¶ ±¨«¤±¦¨§¶«¤µ³¯¼ §∏µ¬±ª «¼³²¬¬¤r
µ¨³¨µ©∏¶¬²±¬±∏µ¼¬± ¤§²¶¨2§¨ ³¨ ±§¨ ±··µ¨±§q
[ Κεψ ωορδσ] «¼³²¬¬¤rµ¨²¬¼ª¨ ±¤·¬²±~¦¤µ§¬²°¼²¦¼·¨ ~³∏¨µ¤µ¬±~±¬·µ¬¦²¬¬§¨
≈责任编辑 方文贤
山茱萸乙醇提取液对 ⁄⁄ 大鼠骨骼肌 ×w
表达影响的实验研究
钱东生 o朱毅芳 o朱 清
k南通医学院 药理学教研室 o江苏 南通 uuysstl
≈摘要 目的 }在明确山茱萸降糖 !促进胰岛增生和增加胰岛素分泌作用的基础上 o研究山茱萸乙醇提取液对
非胰岛素依赖型糖尿病k⁄⁄ l大鼠骨骼肌 ×w ° 和蛋白表达的影响 o探讨其降糖作用的分子机制 ∀方
法 }制备 ⁄⁄ 大鼠模型 ∀将动物分为 v组 o每组 y只 }≠ 正常对照组 o ⁄⁄ 模型组 o≈ ⁄⁄ 模型 n山茱
萸乙醇提取液给药组 ∀动物每天灌胃一次 o连续给药一个月 ∀用 ²µ·«¨µ± ¥¯²·方法检测骨骼肌组织中 ×w
° 表达量 o• ¶¨·¨µ± ¥¯²·方法检测骨骼肌组织 ×w蛋白表达 ∀结果 }⁄⁄ 大鼠骨骼肌 ×w ° 表
达显著减少 o用山茱萸乙醇提取液治疗后 o×w ° 表达明显上调 ~×w蛋白的表达变化与其 ° 表
达变化一致 ∀结论 }山茱萸通过促进 ⁄⁄ 大鼠胰岛修复增生 o增加进食后胰岛素的分泌 o使骨骼肌等外周组织
×w ° 和蛋白表达增加 o发挥快速转运葡萄糖的作用 ∀
≈关键词 山茱萸 ~非胰岛素依赖型糖尿病 ~葡萄糖转运体 w
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstltu2s{x|2sw
山茱萸为山茱萸科植物山茱萸 Χορνυσ οφφιχι2
ναλισ ≥¬¨¥q¨·∏¦¦的果实 ∀我们先前研究了山茱萸
对非胰岛素依赖性糖尿病k⁄⁄ oµ型糖尿病l大
鼠的治疗作用 o结果表明 o山茱萸乙醇提取物能明显
改善 ⁄⁄ 大鼠一般情况 o降低其进食后血糖水
平 o升高血浆胰岛素水平 o促进胰岛增生≈t ∀但其降
糖作用的分子机制尚不清楚 ∀葡萄糖的跨膜转运是
糖代谢的限速步骤 o主要是通过葡萄糖转运体实现
的 o葡 萄 糖 转 运 体2w k ¯ ∏¦²¶¨ ×µ¤±¶³²µ·¨µ w o
×wl主要分布在心脏 !骨骼肌 !脂肪等外周组
织 o其功能受胰岛素调控 o对进食后葡萄糖的跨膜转
运有重要意义 o其功能的异常是导致 µ型糖尿病主
要 原 因≈u ov ∀对 ⁄⁄ 大 鼠 骨 骼 肌 × w
≈收稿日期 usst2su2s{
° 表达变化及其与胰岛素分泌的关系本室曾有
研究报道≈w o在此基础上本实验研究了山茱萸乙醇
提取液对 ⁄⁄ 大鼠骨骼肌 ×w ° 和蛋
白表达的影响 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
1 q1 q1 药物 山茱萸用乙醇浸泡提取 o减压回收乙
醇后每克浸膏加 s qx °¯ t h ≤ ≤ 混悬备用 ∀
1 q1 q2 试剂 链脲佐菌素k¶·µ¨³·²½²·²¦¬±o≥×l o
≥¬ª°¤公司 ~限制性核酸内切酶 o华美生物工程公
司 ~随机引物标记试剂盒 o°µ²° ª¨¤公司 ~¼¥²±§2
n 尼龙膜 o ° µ¨¶«¤° 公司 ~×µ¬½²¯ o¬¥¦² 公司 ~
≈Αvu° 2§≤ ×° o北京亚辉公司 ~含葡萄糖转运体 w
k×wl¦⁄质粒 o南通医学院分子生物学研究
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第 uy卷第 tu期
usst年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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室郑震林博士惠赠 ~含 v2磷酸甘油醛脱氢酶
k°⁄l¦⁄质粒 o南通医学院生物化学教研室
刘飞博士惠赠 ~山羊抗 ×w多克隆抗体和 °
标记驴抗山羊二抗购自 ≥¤±·¤ ≤µ∏½公司 ~≥⁄≥低分
子量标准蛋白k上海丽珠东风生物技术有限公司l o
∞≤化学发光试剂盒购自上海普飞公司 o其余试剂
均为分析纯 ∀
1 q1 q3 动物 ≥⁄大鼠 o雄性 o由南通医学院实验动
物中心提供 ∀合格证 }苏动k质l|{sux o苏动k环l
|{syu ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 造模及给药 按文献≈x 制备非胰岛素依赖
型糖尿病k⁄⁄l大鼠模型 o给予出生 t天龄 ≥⁄
大鼠 t次性腹腔注射 ≥× |x °ª#®ªp t体重 oy周后
通过检测糖耐量确定是否制备成 ⁄⁄ 大鼠模
型 ∀将动物分为 v组 o每组 y只 }≠ 正常对照组 o
⁄⁄ 模型组 o≈ ⁄⁄ 模型 n山茱萸kt °¯ 混悬
液含浸膏 u ª#®ªp t体重l灌胃治疗组 ∀每天灌胃 t
次 o对照组和模型组灌胃等量 t h ≤ ≤ 液 o连续给药
t个月 ∀
1 q2 q2 标本收集 末次给药后 5 «o麻醉动物 o迅速
取大腿肌肉组织 o置于液氮中 o待提取总 及蛋
白质 ∀
1 q2 q3 总 提取及 ²µ·«¨µ± ¥¯²·印迹杂交 用
×µ¬½²¯ 试剂提取肌肉组织总 o紫外分光光度计
测定 浓度 ∀总 经甲醛变性胶电泳后 o毛
细管法转移至尼龙膜 o{s ε 固定 u «∀含 ×w
¦⁄ 质粒经扩增 !提取 !酶切 !电泳 !回收 o得到
×w ¦⁄ o随机引物标记≈Αvu° 2§≤ ×° ∀尼龙
膜于 yx ε 磷酸盐缓冲液中预杂交 !杂交k预杂交液 }
s qu °²¯#pt磷酸盐 ¥∏©©¨µk³ z qul !t °°²¯ #pt
∞⁄× ot h
≥ oz h ≥⁄≥ !tx h 甲酰胺l o洗膜后 p
zs ε 放射自显影 ∀所有样膜经洗脱探针后用
°⁄ ¦⁄探针再杂交 o作内参照以校正
上样量 o最后图像分析杂交信号进行吸光度k 值l
扫描 ∀
1 q2 q4 • ¶¨·¨µ± ¥¯²·免疫印迹 取大腿肌肉组织 o
冰上剪碎 o加入裂解液k°
≥ ot h °ws os qx h ≥²§¬2
∏° §¨²¬¼¦«²¯¤·¨ os qt h ≥⁄≥ otss °ª#pt ° ≥ƒ o
tss °ª#pt ³µ²·¬±¬±ot °°²¯ #p t ¶²§¬∏° ²µ·«²2
√¤±¤§¤·¨l o冰浴中匀浆 ow ε ts sss µ# °¬±p t离心
ts °¬±∀取上清液按改良 ²¯ºµ¼法测定蛋白浓度 ∀
各组取同样量蛋白的匀浆液 o调节上样量一致 o加入
等量 u ≅电泳上样缓冲液 otss ε 煮沸 v ∗ x °¬±o然
后进行 ≥⁄≥2°∞分离蛋白 ∀按文献方法将蛋白
质电转移至硝酸纤维素膜上 o剪下 ¤µ®¨ µ条带染
色 o标出蛋白质分子量标准 ∀其余膜用含 x h脱脂
奶粉的 ×
≥封闭 ow ε 过夜 o加抗葡萄糖转运体 w蛋
白k×wl多克隆抗体ktΒxssl o室温 t «o洗膜后
加 °标记的二抗ktΒu sssl o室温轻摇 t «o洗膜
后增强化学发光法k∞≤l显像曝光 o洗片后进行扫
描 !定量 ∀
1 q2 q5 统计学处理 使用美国 ¶·¤·¤医学统计软件
进行 τ检验 ∀
2 结果
2 q1 ²µ·«¨µ± ¥¯²·检测骨骼肌 ×w ° 表
达 结果见图 t ou ∀对照组大鼠骨骼肌组织
×w ° 有高表达 o⁄⁄ 大鼠骨骼肌组织
×w ° 表达量与对照组比较明显降低 ∀
⁄⁄ 大鼠用山茱萸治疗后 o骨骼肌组织 ×w
° 表达量明显上调 ∀
2 q2 • ¶¨·¨µ± ¥¯²·检测骨骼肌 ×w 蛋白表达
结果见图 v ∀ ×w为一糖蛋白 o由 xs|个氨基酸
组成 o分子量约 wx ∗ xx ⁄∀在约 w{ ⁄ 处有
×w 蛋白条带显示 o经密度扫描 o⁄⁄ 大鼠
骨骼肌组织 ×w 蛋白表达比对照组约降低 t
倍 o山茱萸治疗后能上调 ×w蛋白表达 ∀
图 t 山茱萸乙醇提取液对 ⁄⁄ 大鼠骨骼肌
×w ° 表达影响 ²µ·«¨µ± ¥¯²·分析
¤±¨ q对照组 ¤±¨
q⁄⁄ 组 ¤±¨ ≤ q山茱萸治疗组
图 u 山茱萸乙醇提取液对 ⁄⁄
大鼠骨骼肌 ×w ° 表达影响
与对照组及山茱萸治疗组比较 3 3 π s .st ν y
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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图 v • ¶¨·¨µ± ¥¯²·分析山茱萸乙醇提取液对 ⁄⁄
大鼠骨骼肌 ×w蛋白表达影响
¤±¨ q对照组 ¤±¨
q⁄⁄ 组 ¤±¨ ≤ q山茱萸治疗组
3 讨论
×w在生理基础状态下 o主要储存在胞浆
内 o当进食后血糖水平升高 o促使胰岛素分泌增加 o
后者通过细胞内一系列信号转导过程 o最终使
×w自胞内储存部位转移到胞浆膜 o发挥快速转
运葡萄糖的作用 ∀当血中胰岛素水平下降时 o
×w又通过胞吞作用返回胞内储存部位≈v oy ∀
研究表明 o当上述 ×w的循环障碍时 o可导致胰
岛素抵抗 o这是引发 µ型糖尿病的主要原因之一≈z ∀
体内胰岛素水平的高低对 ×w 的表达有一
定的正相关性 ∀有研究表明 o在 ≥× 或四氧嘧啶诱
发的 ´型糖尿病 o组织中 ×w ° 表达减少 o
而用胰岛素治疗后 o×w ° 的表达上
升≈{ ∗ ts o我们先前的研究也证实这一点≈w ∀
本研究中 o给予新生大鼠 ≥× 造成 ⁄⁄ 大
鼠模型 o血胰岛素水平较正常低≈t ∀其骨骼肌 ° 2
表达量减少 o给予山茱萸乙醇提取液灌胃治疗
一月后 o×w ° 表达量上调 ∀ ×w蛋白
量的变化与其 ° 变化一致 ∀
我们先前的研究显示山茱萸乙醇提取液可降低
⁄⁄ 大鼠血糖水平 o使血胰岛素水平升高 o病理
切片显示胰岛修复增生 ∀也有研究报道山茱萸降糖
作用可能与其促进残余胰岛 Β细胞的分泌功能和增
加外周组织利用葡萄糖有关≈tt ∀
因此 o结合本研究结果 o我们认为 o山茱萸可促
进损坏的 ⁄⁄ 大鼠胰岛修复增生 o增加进食后
胰岛素的分泌 o后者使骨骼肌等外周葡萄糖利用的
主要组织中 ×w ° 表达增加 o进而使其蛋
白表达增加 ∀另外 o由于胰岛素分泌增加 o可促进
×w自胞内储存部位转移到胞浆膜 o发挥快速转
运葡萄糖的作用 o加速外周组织摄取利用葡萄糖 o降
低血糖水平 o对 ⁄⁄ 大鼠发挥治疗作用 ∀
≈参考文献
≈t 钱东生 o罗 琳 o何 敏 o等 q山茱萸乙醇提取液对 µ型糖尿病
大鼠的治疗效应 q南通医学院学报 ousss okwl }vvz q
≈u ¼§¨µ • o≤«¬¥¤¯¬± ∂ o¬¨µ¤·« q±·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ ¦¨«¤±¬¶°¶
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usst oxy }tzx q
≈w 钱东生 o何 敏 o罗 琳 o等 q⁄⁄ 大鼠骨骼肌组织 ×w
° 表达及其与胰岛素分泌关系的实验研究 q中国临床药
理学与治疗学 ousss okwl }vuv q
≈x 钱东生 o朱毅芳 o何 敏 o等 q非胰岛素依赖型糖尿病大鼠模
型制备的实验研究 q南通医学院学报 ousss ousktl }t{ q
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º¬·« ⁄¬¤¥¨·¨¶ ¨¯ ¬¯·∏¶q≥¦¬¨±¦¨ ot|{| ouwxkw|tvl }ys q
≈tt 蒋 渝 o尹才渊 o周世清 q山茱萸降血糖的实验研究 q中药
药理与临床 ot|{| oxktl }vy q
Εφφεχτ οφ Αλχοηολ Εξτραχτ οφ Χορνυσ οφφιχιναλισ Σιεβ .ετ Ζυχχ ον ΓΛΥΤw Εξπρεσσιον
ιν Σκελεταλ Μυσχλειν Τψπε u (νον2ινσυλιν2∆επενδεντ) ∆ιαβετιχ Μελλιτυσ Ρατσ
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε:
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⁄ °²§¨¯ ~ªµ²∏³ ¶ }⁄⁄ °²§¨¯ n ≤²µ±∏¶²©©¬¦¬±¤¯¬¶≥¬¨¥q¨·∏¦¦q׫¨ §µ∏ª º¤¶ª¬√ ±¨ ²µ¤¯ ¼¯ ·²¤±¬°¤¯¶
²±¨ ·¬°¨¤§¤¼ o∏±¬±·¨µµ∏³·¨§©²µ¤ °²±·«q ׫¨ ×w ° ¤±§¬·¶³µ²·¨¬± ¬¨³µ¨¶¶¬²± ¬± ¶®¨ ¯¨·¤¯ °∏¶¦¯¨
º µ¨¨ ²¥¶¨µ√ §¨ º¬·« ²µ·«¨µ± ¥¯²·¤±§ • ¶¨·¨µ± ¥¯²·° ·¨«²§oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q Ρεσυλτ :׫¨ ×w ° ¬¨³µ¨¶2
¶¬²±¬± ¶®¨ ¯¨·¤¯ °∏¶¦¯¨ º¤¶§¨¦µ¨¤¶¨§µ¨ °¤µ®¤¥¯¼¬± ⁄⁄ µ¤·¶k Π s qst o¦²°³¤µ¨§·²¦²±·µ²¯ ªµ²∏³l q ¦¯²2
«²¯ ¬¨·µ¤¦·²© ≤²µ±∏¶²©©¬¦¬±¤¯¬¶≥¬¨¥q¨·∏¦¦¬±¦µ¨¤¶¨§ ×w ° ¬¨³µ¨¶¶¬²±¬± ⁄⁄ µ¤·¶k° s qstl o
¦²°³¤µ¨§·² ⁄⁄ °²§¨¯ªµ²∏³l q׫¨ µ¨¶∏¯·²© ×w ³µ²·¨¬± ¬¨³µ¨¶¶¬²± º¤¶¶¬°¬¯¤µ·² ×w ° ¬¨2
³µ¨¶¶¬²±qΧονχλυσιον :׫¬¶ ¬¨³¨µ¬° ±¨·§¨ °²±¶·µ¤·¨§·«¤·¤¯¦²«²¯ ¬¨·µ¤¦·²© ≤²µ±∏¶²©©¬¦¬±¤¯¬¶≥¬¨¥q¨·∏¦¦¦¤±
¬±¦µ¨¤¶¨ ×w ° ¤±§¬·¶³µ²·¨¬± ¬¨³µ¨¶¶¬²±¬± ⁄⁄ µ¤·¶·«µ²∏ª«³µ²°²·¬±ª³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²©¬¶¯ ·¨¤±§
¬±¦µ¨¤¶¬±ª³²¶·³µ¤±§¬¤¯ ¶¨¦µ¨·¬²± ²©¬±¶∏¯¬± ¤±§·«¨ µ¨©²µ¨ ¤¦¦¨¯¨ µ¤·¨ ª¯∏¦²¶¨ ·µ¤±¶³²µ·q
[ Κεψ ωορδσ] Χορνυσ οφφιχιναλισ ≥¬¨¥q¨·∏¦¦ ~±²±2¬±¶∏¯¬±2§¨ ³¨ ±§¨ ±¦¨ §¬¤¥¨·¨¶°¨¯ ¬¯·∏¶k⁄⁄ l ~ª¯∏2
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≈责任编辑 方文贤
静滴川芎嗪注射液引起过敏性反应 t例
朱雪梅
k北京邮电大学医院 o北京 tss{zyl
患者女 oyv岁 o因左侧肢体麻木 u月 o以椎基底
动脉供血不足入院 ∀
患者有颈椎病 !脑动脉硬化病史 o无药物过敏
史 ∀
患者入院后查体 }一般状况好 o皮肤粘膜未见异
常改变 o神经系统亦无阳性体征 ∀辅助检查 }血 !尿 !
血糖等生化检查正常 ∀颈部 ≤ × 示 }颈椎病 !椎基底
动脉供血不足 ∀治疗 }x h葡萄糖注射液 xss °¯ n川
芎嗪注射液 tus °ªk无锡市第七制药厂 生产批
号 }||svswtlt次r日静脉滴注 ∀第 u天滴注后 { «
出现下肢大片荨麻疹 o压之褪色 o呈暗红色 o皮肤瘙
≈收稿日期 usst2s{2s{
痒 ∀停药后 o予地塞米松 x °ªn ux h葡萄糖液 us
°¯ 静注治疗 ot «后症状消失 ∀后改用维脑路通 s q
y ªn x h葡萄糖液 xss °¯ 静脉滴注 o未再出现皮肤
过敏反应 ∀
治疗期间患者未服用其它药物 o亦未食特殊食
品 o无药敏史及皮肤病史 ∀
川芎嗪是从川芎中提取的四甲基吡嗪 o据报道
川芎对急性 !慢性脑血管的治疗有效率为 |s h ∀它
有明显改善脑微循环障碍作用 o可增加血流量 !血流
速度 !抗凝血 !溶血栓等作用 o是目前防治缺血性脑
血管病较理想的药物 ∀临床上除了皮疹外 o还可见
头晕 !头疼 !直立性低血压等不良反应 o故应用时应
仔细观察 o及时发现 o妥善处理 o以减轻病人痛苦 ∀
≈责任编辑 古云霞
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第 uy卷第 tu期
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