全 文 ：赤丹胶囊的HPLC指纹图谱研究
徐英宏, 姜清华,菅凌燕,李玉灵*
(中国医科大学附属盛京医院 药剂科 ,辽宁 沈阳 110004)
摘 要:目的 建立了赤丹胶囊制剂的 HPLC 指纹图谱, 用于控制赤丹胶囊的质量。方法 采用 H PLC 法。色谱
柱为 Zorbax Ex tend-C18柱( 250 mm @ 41 6 mm, 5 Lm) ; 流动相为甲醇-水(磷酸调 pH 31 0) , 梯度洗脱; 体积流量为
1 mL / min; 检测波长为 254 nm;柱温为 20 e ;进样量为10LL。中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范(版
本 2004A ) 计算。结果 该制剂 10批的指纹图谱相似度都达到 01 90 以上,制剂生产工艺稳定可行。结论 本法
可作为赤丹胶囊质量控制方法。
关键词:赤丹胶囊; 指纹图谱;高效液相色谱
中图分类号: R2861 02 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2009) 07-1069-02
赤丹丸是医院制剂,由赤芍、丹参、黄芩、茯苓、
三棱组成,具有清热解毒、活血化瘀的功效, 用于治
疗妇女慢性盆腔炎、附件炎,临床应用 30余年证明,
疗效确切。赤丹胶囊是在研究赤丹丸的基础上, 经
过提取加工制成。赤丹胶囊成分复杂, 其药效并不
仅仅取决于其中某几个有效成分,而且由于药材的
品种、产地、采集时间、加工方法等诸多因素都会影
响中药质量的稳定性和一致性[ 1, 2] 。所以为了更好
地控制制剂质量,本研究对赤丹胶囊的指纹图谱进
行了研究,达到全面控制其质量的目的。
1 仪器与试药
Agilent 1100 液相色谱仪(含 Agilent 1100 系
列四元泵、VWD检测器、Agilent Chemstation色谱
工作站)。
丹参、赤芍、黄芩、茯苓和三棱购自北京京兴中
药饮片厂,符合5中国药典62005年版一部规定; 赤
芍胶囊由中国医科大学附属盛京医院中药制剂室提
供。丹参素钠 (批号 110855 )、丹参酮 Ò A ( 批号
0736-200118)、芍药苷(批号 110736-200630)、黄芩
苷 ( 批号 715-200010 )、黄芩 素 ( 批号 111595-
200604)、原儿茶酸(批号 809-200102)、咖啡酸 (批
号 110885-200102 )、丹 酚 酸 B ( 批 号 110857-
200203) 对照品均由中国药品生物制品检定所提
供;山柰酚 ( Sigma 公司) ; 汉黄芩素、汉黄芩苷(沈
阳药科大学)。甲醇、乙腈为色谱纯,水为自制重蒸
水,其他均为分析纯。
2 方法与结果
21 1 色谱条件: 色谱柱为 Zorbax Ex tend-C18柱
( 250 mm @ 41 6 mm , 5 Lm) ;流动相为甲醇-水(磷酸
调 pH 31 0) ,梯度洗脱[ 3, 4] , 0~ 20 min, 30B 70, 20~
25 min, 36 B 64, 25~ 40 min, 38 B 62, 40~ 60 min,
40 B60, 60~ 90 min, 50B 50, 90 min以后, 70 B 30;
体积流量为 1 mL/ m in;检测波长为 254 nm;柱温为
20 e ;进样量为 10 LL。
21 2 溶液的制备
21 21 1 供试品溶液的制备:取本品 10粒,倒出内容
物,精密称取约 01 75 g, 置于锥形瓶中, 加入甲醇约
30 mL, 超声处理 30 min, 放冷, 4 500 r/ min离心 15
m in,挥干甲醇, 加入 10 mL 水溶解, 分别用 10 mL
正丁醇萃取 3次, 弃去水层, 合并正丁醇层,挥干正
丁醇,置 50 mL 量瓶中, 加入甲醇至刻度, 摇匀, 过
01 45 Lm微孔滤膜, 取续滤液作为供试品溶液。
21 21 2 阴性样品溶液的制备: 除赤丹胶囊提取物
外,按处方比例称取各辅料, 按赤丹胶囊的制备工
艺制成 10粒,作为阴性样品溶液。
21 3 记录时间的确定:取供试品溶液 10 LL 注入液
相色谱仪,记录 150 m in 的色谱图,结果 130 min 后
不再出峰,故记录色谱时间定为 130 min。
21 4 方法学考察 [ 5]
21 41 1 精密度试验:取同一份供试品溶液, 按上述
优选的色谱条件连续进样 6次,每次 10 LL, 记录色
谱图, 经中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作
规范(版本 2004A ) 计算, 6 张图谱之间的相似度均
为 11 0,说明测定方法的精密度很好。
21 41 2 重现性试验: 取 1 号样品 50 粒, 倒出内容
物,研细,混匀, 取 5 份,每份精密称取约 01 75 g ,置
#1069#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
* 收稿日期: 2008- 11-07 基金项目:辽宁省科学技术基金资助项目( 20042189)作者简介:徐英宏( 1961 ) ) ,女,山东莱阳人,副教授, 1984年毕业于沈阳药学院药学专业,主持一项并参与多项省级课题研究项目, 完成论文 50余篇,主要研究方向为医院制剂研发。T el : ( 024) 83946764 E- mail : xu yh@ s-j hospital1 org. cn
于锥形瓶中,制备供试品溶液,各取 10 LL 注入液相
色谱仪,记录 130 m in 色谱图,经中药色谱指纹图谱
相似度评价系统的操作规范(版本 2004A ) 计算,
图谱之间的相似度均为 11 0。
21 41 3 稳定性试验:取同一供试品溶液, 分别于 0、
3、6、9、12、18 、24、36 h 测定,测定结果经中药色谱
指纹图谱相似度评价系统的操作规范(版本 2004A)
计算,相似度均为 11 0, RSD为 01 12%, 说明本品在
36 h 内是稳定的。
21 5 指纹图谱的建立与相似度分析: 取 10批样品
按上述制备方法制备及色谱条件进样, 测定每批次
的色谱图,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统
研究版( 2004A )进行评价,以 S1为参照图谱, 利用
中位数法进行多点校正生成对照图谱 R, 确定了 24
个共有峰, 见图 1。10 批制剂的相似度均达到
01 903以上, 见图 2。从以上相似度评价结果看, 符
合国家药典委的要求, 说明该制剂各批次相似度良
好,制备方法稳定。
t / min
图 1 赤丹胶囊的指纹图谱色谱图
Fig1 1 Fingerprint chromatogram of Chidan Capsula
21 6 药材与制剂指纹图谱相关性研究:分别制备处
方中 5味药材的供试品溶液及其相应的阴性溶液,
取各药材供试品溶液, 按上述色谱条件依次进行检
测,各药材供试品峰与制剂指纹图谱峰一一对照, 可
知共有峰中 1、2、6号峰来源于处方中赤芍; 2、4、7、
10、24号峰来源于方中丹参; 11、15、18、20号峰来源
于方中黄芩。利用对照品鉴定共有峰, 结果共有峰
中的 2号峰为咖啡酸, 4号峰为原儿茶酸, 6号峰为
芍药苷, 7号峰为丹参素钠, 10 号峰为丹酚酸 B, 11
号峰为黄芩苷, 15号峰为黄芩素, 18号峰为汉黄芩
t/ min
图 2 赤丹胶囊指纹图谱相似度评价结果
Fig1 2 Fingerprint similarity of Chidan Capsula
素, 19号峰为山柰酚, 20 号峰为汉黄芩苷, 24号峰
为丹参酮 Ò A。
3 讨论
根据赤丹胶囊中各主要成分的吸收波长,本实
验分别比较了 242、254、270、280 nm 波长下的色谱
图,发现 242 nm 下虽然极性较大的峰相应值较高,
但基线漂移严重, 而 270 nm 和 254 nm 各峰分离度
都较好,峰数较多且基线漂移低,考虑 254 nm 下各
峰响应值较高,因此选择检测波长为 254 nm。
比较了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-水(乙酸调 pH
值)、甲醇-四氢呋喃-水、甲醇-水(磷酸调 pH 值)等
不同体系。依据药材的流动相体系,最后选择甲醇-
水(磷酸调 pH 31 0)体系,效果最好。
通过药材与制剂指纹图谱相关性研究表明, 制
剂指纹图谱中的色谱峰多为赤芍、黄芩和丹参的。
参考文献:
[ 1] 晏永新,钟 铁,张小娟,等1 山银花不同产地加工品的 HPL C
指纹图谱研究[ J]1 中草药, 2007, 38( 11) : 1643- 16451
[ 2] 罗晓芳,莫必琪,叶颖雅,等1 混合均一化法对复方丹参提取物
质量控制的研究[ J]1 中草药, 2007, 38( 12) : 1817- 18191
[ 3] 杨广德, 贺浪冲, 李永茂1 丹参有效部位指纹图谱定性和有
效成分定量分析方法研究 [ J]1 药物分析杂志, 2003, 23( 6 ) :
409-4131
[ 4] 中药注射剂色谱指纹图谱研究操作规程指南 ( 试行) [ S ]1
20011
[ 5] Niu F, Niu Z Q, Xie G B, et al1 Developm ent of an H PL C
f ingerprint for qualit y con tr ol of R adix Semiaqui le giae [ J ]1
Chr omatogr aph ia, 2006, 64( 9/ 10) : 593-5971
#1070# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月