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1
8
检测波长的选择:采用二极管阵列检测器对
检测波长进行考察, 记录并比较不同波长的色谱图,
根据分析物的紫外吸收特征, 发现在 240 nm 波长
处,被测物质均有较好的吸收, 故选择 240 nm 为检
测波长。
3
2
共有峰面积与总峰面积比值的计算:对各样品
的峰面积进行统计, 计算各样品指纹图谱中的 9 个
共有峰的总面积各占总峰面积的比值。结果显示所
有样品的共有峰总面积占总峰面积的比值均大于
90% ,满足指纹图谱的技术要求。
参考文献:
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制备高效液相色谱从竹根中制备苜蓿素的研究
张
锐1 ,刘建群1 ,刘丽艳2 ,徐
彭1 *
收稿日期: 20100319
基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30660220)
作者简介:张
锐( 1976  ) ,男,江西进贤人,副研究员,硕士,研究方向为中药化学成分及质量评价。
T el : ( 0791) 7118657
Email : w ork037@ sohu. com
* 通讯作者
徐
彭
T el: ( 0791) 6811604
Em ail: xp0420@ 163. com
( 1
江西中医学院,江西 南昌
330004; 2
江西省肿瘤医院,江西 南昌
330000)
摘
要:目的
研究从竹根中制备苜蓿素对照品的方法。方法
结合硅胶柱色谱、制备 H PLC 法对竹根醋酸乙酯
部位进行分离纯化,通过熔点及 UV、IR波谱学方法对其分离产物进行结构鉴定。结果
所得苜蓿素用归一化法
定量,质量分数大于 98%。结论
本法简便, 制备成本低, 所得苜蓿素可作为中药定性、定量分析使用的对照品。
关键词:竹根; 苜蓿素;对照品; 制备
中图分类号: R284
2; R286
02


文献标识码: A


文章编号: 0253 2670( 2010) 12 1985 03
Preparation of tricin from Bambusa textilis by preparative HPLC
ZHANG Rui1 , L IU Jianqun1 , L IU Liyan2 , XUE Peng1
( 1. Jiangx i Univer sity of T r aditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, China; 2. Jiangx i Tumo r H ospital,
Nanchang 330000, China)
Abstract: Objective
T o establish a separ at ion method of tricin reference substance f rom Bambusa tex
ti li s
Methods
After ex tr acted w ith ethyl acetate, the ext ract of B
tex ti l is was isolated and purified by
silica gel column chromatog raphy and preparat iv e HPLC
Tricins w ere identif ied by melt ing point , UV,
and IR spect roscopy
Results
T he content of t ricin w as over 98% by normalization method of H PLC

Conclusion
The developed method is simple w ith low er cost , by w hich t ricin can be used as reference sub
stances for the qualitat ive and quant itat ive analy ses of Chinese herbal medicine

Key words: Bambusa tex t il is Mc Clure; t ricin; reference substance; preparation


苜蓿素属黄酮类化合物, 广泛存在于禾本科植
物中, 其中在竹根中的量较高。本研究所用制备苜
蓿素的原料为禾本科竹亚科箣竹属植物青皮竹
Bambusa tex ti li s Mc Clur e的干燥根。本研究前期
的药理实验表明,青皮竹的竹根具有显著的抗过敏
作用,并从抗过敏有效部位中分离鉴定了 15个化合
物[ 12] ,通过致敏豚鼠的离体肠平滑肌过敏性收缩实
验,发现苜蓿素具有显著的抗过敏活性。此外苜蓿
素还具有显著的抗癌活性[ 3]。目前市场上无苜蓿素
对照品出售,限制了对苜蓿素进一步的开发与研究。
本实验结合硅胶柱色谱分离和制备 HPLC 法对竹
根醋酸乙酯部位进行分离纯化, 制备苜蓿素对照品,
对进一步揭示竹根药效的物质基础、控制药材质量
和开发新的天然药物具有十分重要的意义。
1985 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
1
仪器与药品
美国 Waters 高效液相色谱仪( 2695 高效液相
色谱仪, 2996 DAD二极管阵列检测器, 串联A lltech
ELSD 2000 型 蒸发光散射检测器) ; 美国Agilent
1100制备型高效液相色谱仪; 美国 Labconco 公司
FREEZONE 冷冻干燥机; R  52AA 旋转蒸发仪;
XT 4  100x 显微熔点测定仪; 美国 Bruker 公司
Ver tex 70 FTIR红外光谱仪, Bruker AV  400 型
核磁共振仪。
青皮竹竹根采自江西中医学院湾里校区周围,
经江西中医学院中药鉴定教研室褚小兰教授鉴定为
禾本科箣竹属植物青皮竹 B
tex ti l is Mc Clure 的
干燥根;苜蓿素对照品(本实验室提取、精制, NMR
光谱鉴定,经归一化法测定质量分数大于 99
3% ) ;
甲醇、乙腈为色谱纯(美国 Tedia试剂公司) ,其他试
剂均为分析纯; CMCNa、薄层色谱硅胶、柱色谱硅
胶( 100~ 200目, 青岛海洋化工分厂)。
2
方法与结果
2
1
浸膏的提取: 称取竹根粗粉( 60目) 1
3 kg, 6
倍 80%乙醇浸泡过夜, 回流提取 3 次, 第 1次 3 h,
第 2次 2 h,第 3次 1 h,滤过, 合并滤液,浓缩, 浸膏
用水分散,加等量醋酸乙酯萃取 6次,减压浓缩至无
醋酸乙酯味,即得竹根浸膏( 42
2 g)。
2
2
化合物的分离
2
2
1
硅胶富集: 硅胶( 100~ 200 目) 400 g 干法
装柱,取醋酸乙酯萃取所得浸膏, 加等量硅胶拌样,
上样后柱色谱分离, 用氯仿甲醇溶剂系统以50! 1、
20! 1、15 !1、10!1、5! 1梯度洗脱, 每个梯度冲洗
5倍柱体积(约 2 L) ,收集氯仿甲醇( 15 ! 1)馏分,
每 100 mL 作为一个馏分,根据薄层色谱检查, 合并
相同的斑点部分,并用 50% 乙醇重结晶 1次, 得苜
蓿素的粗品 0
45 g。
2
2
2
苜蓿素供试品的制备:苜蓿素粗品部分通过
制备型高效液相色谱分离纯化。制备色谱条件:
Waters Symmet ryPrepTM C18色谱柱( 300 mm ∀ 7
8
mm, 7 m) ;流动相: 甲醇水( 40 ! 60) ; 柱温: 30 # ;
体积流量: 3 mL/ min; 检测波长: 349 nm ; 进样量:
100 L;色谱图见图 1。馏分收集器自动收集流出
液,收集时间为 27~ 29 min 的馏分, 冷冻干燥后得
黄色粉末约 0
3 g。
2
3
定性鉴定和定量测定
2
3
1
薄层色谱法:取适量制备所得苜蓿素供试品
点样于硅胶 G 板上, 以苜蓿素对照品溶液为对照,
分别以氯仿甲醇 ( 10 ! 1) 及石油醚醋酸乙酯
t/ min
图 1
苜蓿素粗品的制备高效液相色谱图
Fig
1
Preparative HPLC chromatogram of crude tricin
( 1 !1)为展开剂, 展开,晾干, 以 10%三氯化铝乙醇
溶液为显色剂, 105 # 加热 5 min, 紫外灯下 ( 365
nm)观察,结果在供试品色谱中,仅在与对照品色谱
相应的位置上显一个黄绿色斑点, Rf 值分别为
0
46、0
30。另将制备所得苜蓿素供试品点样于聚
酰胺薄层板上,以苜蓿素对照品溶液为对照, 90%乙
醇为展开剂,展开,晾干,以 10%三氯化铝乙醇溶液
为显色剂, 105 # 加热 5 min, 紫外灯下( 365 nm )观
察,结果在供试品色谱中,仅在与对照品色谱相应的
位置上显一个黄绿色斑点, Rf值为 0
73。
2
3
2
高效液相色谱法: 色谱条件为 Hypersil
ODS2 C18色谱柱 ( 250 mm ∀ 4
6 mm, 5 m) ; 流动
相:甲醇水( 40 ! 60) ;体积流量: 0
8 mL/ m in;进样
量: 20 L; 柱温: 30 # ; DAD 检测波长 200~ 400
nm; ELSD参数设置为漂移管温度 93
0 # , 气体体
积流量为 2
6 L/ m in; Gain: 1; Impactor : of f。不同
色谱条件下,苜蓿素供试品均为一个主峰,改变流动
相分析未见异常峰。DAD峰质量分数检查, 峰质量
分数角小于阈值角, 且均小于 1, 证明色谱峰为纯
峰。按面积归一化法计算, DA D检测 ( 349 nm )与
ELSD检测两者的质量分数均达 98%以上(图 2) ,
证明质量分数已达到对照品的要求。
t/ min
图 2
苜蓿素供试品的高效液相二极管阵列(A)
和蒸发光散射(B)色谱图
Fig
2
HPLCDAD ( A) and HPLCELSD ( B)
Chromatogram of tricin products
2
4
结构确定:分别取苜蓿素供试品与对照品分别
测定熔点、紫外光谱、红外光谱。结果苜蓿素供试品
的熔点为289~ 290 # ; UV!M eoHmax nm: 270、349; IR∀KBrmax
1986 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
cm- 1 : 3 347、2 946、2 848、1 655、1 614、1 507、1
466、1 360、1 264、1 170、1 120、836。1HNMR
( DM SO) #: 7
33( 2H , s, H2∃, H6∃) , 6
98( 1H , s,
H3) , 6
59( 1H , d, J = 2
0 Hz, H8) , 6
23( 1H , d,
J= 2
0 Hz, H6) , 3
89 ( 6H , s,OCH 3 ∀ 2) ; 13 C
NMR( DMSO ) #: 181
7( C4) , 163
8 ( C2) , 163
6
( C7) , 161
0 ( C9) , 157
3 ( C5) , 148
0 ( C3∃, C
5∃) , 139
7( C4∃) , 120
4( C1∃) , 104
1( C2∃, C6∃) ,
104
0( C10) , 103
6( C3) , 98
6( C6) , 94
2( C8) ,
56
2(OCH 3 ∀ 2)。以上数据与对照品所测得数据
相同,因此确定所制备的供试品为苜蓿素。
3
讨论
苜蓿素为多种禾本科植物的共有成分, 在竹根
量较高,性质稳定,用上述制备方法进行提取、分离、
纯化,操作方便,重现性好, 符合对照品的质量分数
要求,因而可作为对照品使用,供竹根药材及禾本科
植物的定性、定量分析;也可为从其他原料中提取苜
蓿素对照品提供工艺参考。
苜蓿素为黄酮类化合物, 为了在增大提取效率
的同时尽量减少其他组分的引入, 通过 TLC、HPLC
法对比水、不同体积分数的乙醇提取液的色谱峰, 并
对比石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取物的色谱
峰,结果用 80%乙醇提取后用醋酸乙酯萃取的选择
性较好,进而对提取时间和提取次数进行了优化,确
定了本实验的条件,使苜蓿素的制备收率提高。
提取后的样品通过硅胶柱色谱处理, 可以去除
样品中大量的杂质, 并通过 50% 乙醇溶液重结晶,
此时可以得到粗品, 质量分数可达 91%, 但仍含有
多种杂质,需进一步纯化。曾将硅胶柱色谱后得到
的苜蓿素粗品进行制备薄层色谱制备, 得到苜蓿素
结晶,但质量分数仍达不到对照品的要求。故选择
制备高效液相色谱分离纯化,既减少了样品的损耗,
又提高了制备的效率。
本研究采用 HPLC/ DAD/ ELSD串联检测制备
所得供试品的质量分数, 利用 DAD 与 ELSD 性能
上的互补,一次进样即可得到样品紫外光谱图、峰质
量分数等信息。
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HPLC法测定甘遂及其醋制品中 3种二萜类成分
张
丽, 李征军,束晓云,唐于平, 丁安伟* ,段金廒
收稿日期: 20100506
基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30672678, 30973940) ;国家教育部∋ 新世纪优秀人才支持计划( ( NCET090163) ;江苏省中医药
管理局课题( H 05075) ; 江苏高等学校优秀科技创新团队支持计划( 2009年度)
作者简介:张
丽( 1971  ) ,女,辽宁大连人,博士,主要研究方向为中药炮制与质量控制。
Email : zhangliguanxiong@ 163
com
* 通讯作者
丁安伟
Email: aw ding105@ 163
com
(南京中医药大学 江苏省方剂研究重点实验室, 江苏 南京
210046)
摘
要:目的
测定甘遂与醋甘遂饮片中 3种二萜类成分。方法
采用 H PLC 法, 分别在 235 nm 和 268 nm 测定
了甘遂和醋甘遂饮片中甘遂大戟萜酯 C、3O苯甲酰基20去氧巨大戟二萜醇和 3O( 2∃E, 4∃Z癸二烯酰基)20O
乙酰基巨大戟二萜醇。结果
甘遂大戟萜酯 C、3O苯甲酰基20去氧巨大戟二萜醇和 3O( 2∃E, 4∃Z癸二烯酰
基)20O乙酰基巨大戟二萜醇的进样量分别在 1
636~ 0
052 g ( r= 0
999 8) , 1
458~ 0
046 g ( r= 0
999 6)和
1
782~ 0
056 g ( r= 0
999 6)呈良好的线性关系,平均回收率分别为 98
96% ( RSD= 2
71% )、99
21% ( RSD=
2
88% )、96
44% ( RSD= 2
78% )。结论
该法简便、快速、准确,重现性好, 可用于甘遂与醋甘遂饮片的质量控制。
关键词:甘遂; 醋甘遂;甘遂大戟萜酯 C; 3O苯甲酰基20去氧巨大戟二萜醇; 3O( 2∃E, 4∃Z癸二烯酰基)20O乙
酰基巨大戟二萜醇
中图分类号: R286
02


文献标识码: B


文章编号: 0253 2670( 2010) 12 1987 04


甘遂为大戟科大戟属植物甘遂 Euphor bia kansui
T
N
Liou ex T
P
Wang 的干燥块根 [ 1] ,别名主
田、猫儿眼、黄甘遂、京甘遂、苦泽、甘泽、白泽、肿手
花根、重泽、鬼丑、陵泽、甘藁、陵藁、化骨丹、萱根子、
1987 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 12 期 2010 年 12月