全 文 ：21 9 回收率试验:采用加样回收率方法。精密称取
批号 20080317样品细粉适量,分别加入黄芪甲苷对
照品 01 420 1、01 504 0、01 588 0 mg, 制备供试品溶
液,进样,依法测定,计算回收率。结果表明,本方法
的平均回收率为 961 01% , RSD为 11 34% ( n= 9)。
21 10 样品测定: 取 3个不同批号的补血颗粒样品,
每批 6 份, 依法测定, 用回归方程计算, 得批号为
20070911、20080119、20080317 补血颗粒中黄芪甲
苷的质量分数分别为 111 62、111 86、121 07 mg/袋。
3 讨论
本品为复方中药颗粒剂, 许多成分干扰黄芪甲
苷的测定。根据实践工作发现, 薄层色谱法对薄层
条件要求比较苛刻, 重现性不理想;同时, 黄芪甲苷
无特征紫外吸收, 在紫外 203 nm 处有末端吸收,采
用 HPLC-UV 检测时, 受流动相影响大, 基线不理
想,检测灵敏度较低。本次研究中,采用的蒸发光散
射检测器为通用型质量检测器, 检测时流动相在检
测器内挥发成气体, 样品组分形成气溶胶,进入检测
器产生响应,从而获得理想的基线和检测灵敏度, 克
服了紫外末端检测的不足。
试验中曾对黄芪甲苷的提取溶剂进行考察, 表
明在 2% KOH 甲醇中略溶。在供试品溶液的制备
中,采用超声 10、20、30、40、60 min 溶解, 结果显示
超声 40 min能使黄芪甲苷完全溶出,其他色谱条件
的优化还有待进一步的探索性试验工作。
参考文献:
[ 1] 中国药典[ S]1 一部1 20051
[ 2] 吴玉强,罗 轶1 HPLC-ELSD 法测定复方扶芳藤合剂中黄
芪甲苷 [ J]1中草药, 2006, 37( 9) : 1353-13541
[ 3] 梁瑞雪,张新军,贾元印,等1 薄层扫描法测定尘肺清颗粒中
黄芪甲苷的含量[ J]1时珍国医国药, 2006, 9( 17) : 1689-16901
苁黄补肾胶囊质量标准的研究
侯 峰, 刘 芳,莫启武*
(广州美晨药业有限公司,广东 广州 510075)
摘 要: 目的 建立苁黄补肾胶囊的质量标准。方法 采用 TLC 法鉴别处方中的肉苁蓉、熟地黄、菟丝子、五味子;
用 HPLC 法测定肉苁蓉中的松果菊苷。其中 H PLC 法采用 Kromasi-l C18柱( 250 mm @ 41 6 mm, 5 Lm) ;柱温: 30 e ;流
动相为甲醇-乙腈-1%醋酸溶液( 13B 10B 77) ; 体积流量: 1 mL / min; 检测波长为 334 nm。结果 TLC 鉴别色谱特
征斑点明显; 松果菊苷在 01 48~ 11 92Lg 存在良好的线性关系, 平均回收率为 991 1% , RSD为 11 52%。结论 所建
立的 T LC 和 HPLC 法专属性强, 重复性好,可用于苁黄补肾胶囊的质量控制。
关键词: 苁黄补肾胶囊;肉苁蓉; 熟地黄;菟丝子; 五味子;松果菊苷; 薄层色谱;高效液相色谱
中图分类号: R2861 02 文献标识码: B 文章编号: 0253-2670( 2009) 08-1249-04
苁黄补肾胶囊由肉苁蓉、熟地黄、菟丝子、五味
子(酒蒸)制成,丸剂标准收载于5国家药品监督管理
局国家中成药标准汇编6内科肾系分册,具有滋补肾
阴、强筋壮骨的功效。为了提高该药质量的可控性
和检验方法的专属性, 本研究建立了熟地黄、菟丝
子、五味子的薄层色谱鉴别方法,改变了肉苁蓉鉴别
供试品溶液的制备方法。通过试验, 发现检测本品
的毛蕊花糖苷存在比较大的干扰, 所以改为测定肉
苁蓉另一活性成分松果菊苷, 并建立了 H PLC检测
方法。
1 仪器和材料
紫外点样仪(上海安亭电子仪器厂) ; SPD )
10Avp 紫外检测仪(日本岛津公司) ; P4000四元泵
(美国热电公司) ; AT - 130色谱柱恒温箱(天津市
恒奥科技发展有限公司) ; HN1006超声清洗机(华
南超声设备厂) ; HM 202 电子分析天平(日本 AND
公司) ; 4K15C高速冷冻离心机(德国 Sigma公司)。
硅胶 G(青岛海洋化工有限公司) ;甜菜碱(批号
894-200202)、5-羟甲基糠醛(批号 111626-200402)、
五味子乙素(批号 765-200104)、山柰酚(批号 0861-
200002)、松果菊苷(批号 111670-200502)对照品由
中国药品生物制品检定所提供; 苁黄补肾胶囊( 450
mg/粒,批号 070701、070702、070703)及缺肉苁蓉、
熟地黄、菟丝子、五味子阴性样品为广州美晨药业有
#1249#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 8 期 2009年 8月
* 收稿日期: 2008-10-25 作者简介:侯 峰( 1976 ) ) ,男,湖北安陆人,工程师,毕业于西北大学,从事中成药的研发工作。
Tel: ( 020)37662297 E- mail: smal lhome@ 1631 com
限公司提供; 乙睛为色谱纯(迪马公司) ,其余试剂为
分析纯。
2 薄层色谱鉴别
21 1 肉苁蓉的薄层色谱鉴别: 取本品内容物适量,
研细,称取粉末 01 5 g, 加水 20 mL,超声 10 m in使
溶散,离心( 4 500 r/ m in) 5 min,取上清液再真空抽
滤,滤液过强酸性阳离子交换树脂( 120 cm @ 3 cm) ,
用 20 mL 水洗柱,再用 2 mol/ L 氨水溶液 40 mL 洗
脱,收集洗脱液, 蒸干,用乙醇 2 mL 溶解, 静置, 取
上清液作为供试品溶液。另取缺肉苁蓉的阴性样品
01 3 g ,同法制成阴性供试液。取甜菜碱对照品适
量,加乙醇制成5 mg/ mL 的对照品溶液。吸取供试
品溶液和阴性供试液各10 LL,对照品溶液 5 LL,分
别点样于同一硅胶 G 薄层板上,以甲醇-冰醋酸-水
( 18B1 B4)为展开剂, 展开,取出,晾干,喷以改良碘
化铋钾试液。结果供试品色谱中, 在与对照品色谱
相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性样品色谱
无对应斑点, 见图 1。
图 1 苁黄补肾胶囊中肉苁蓉的薄层色谱图
Fig1 1 TLCChromatogram of Herba Cistanches
in Conghuang Bushen Capsula
21 2 熟地黄的薄层色谱鉴别: 取本品内容物适量,
研细,称取粉末 21 0 g, 加水 30 mL, 超声处理 10
m in,离心( 4 500 r/ m in) 5 min, 取上清液用醋酸乙
酯提取 2次, 每次 15 mL, 合并提取液, 回收醋酸乙
酯至干,残渣加乙醇 1 mL 溶解, 作为供试品溶液。
另取缺熟地黄的阴性样品11 5 g ,同法制成阴性供试
液。取 5-羟甲基糠醛对照品适量, 加乙醇制成 01 5
mg/ mL 对照品溶液。吸取供试品溶液和阴性供试
液各 10 LL,对照品溶液 5 LL,分别点样于同一硅胶
GF254薄层板上, 以石油醚( 60~ 90 e )-醋酸乙酯( 1
B 1)上层液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置于 254
nm 紫外灯下检视。结果供试品色谱中, 在与对照
品色谱相应的位置上, 显相同颜色的暗斑点,阴性样
品色谱无对应暗斑点, 见图 2。
21 3 菟丝子的薄层色谱鉴别: 取本品内容物适量,
图 2 苁黄补肾胶囊中熟地黄的薄层色谱图
Fig1 2 TLCChromatogram of Radix Rehmanniae
Preparata in Conghuang Bushen Capsula
研细,称取粉末 21 0 g, 加无水乙醇10 mL,超声处理
15 min, 滤过,滤液浓缩至干,加无水乙醇 1 mL 溶
解残渣,作为供试品溶液。另取缺菟丝子的阴性样
品11 9 g, 同法制成阴性供试液。取山柰酚对照品适
量,加乙醇制成 01 2 mg/ mL 对照品溶液。吸取供试
品溶液和阴性供试液各 10 LL, 对照品溶液 5 LL, 分
别点样于同一硅胶 G 薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯-
甲醇( 5 B 5 B 3)为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以
3%三氯化铝乙醇溶液, 置于 365 nm 紫外灯下检
视。结果供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位
置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性样品色谱无对应
斑点,见图 3。
图 3 苁黄补肾胶囊中菟丝子的薄层色谱图
Fig1 3 TLC Chromatogram of Semen Cuscutae
in Conghuang Bushen Capsula
21 4 五味子的薄层色谱鉴别:取本品内容物适量,
研细,称取粉末 101 0 g ,加入氯仿 20 mL, 加热回流
30 min, 滤过, 滤液浓缩至约 1 mL, 作为供试品溶
液。另取缺五味子的阴性样品 201 0 g, 同法制成阴
性供试液。取五味子乙素对照品适量, 加乙醇制成
01 4 mg / mL 对照品溶液。吸取供试品溶液、阴性供
试液和对照品溶液各 10 LL, 分别点样于同一硅胶
GF254薄层板上, 以石油醚-甲酸乙酯-甲酸 ( 15 B
5B1)上层液为展开剂, 展开, 取出,晾干, 置于 254
nm 紫外灯下检视。结果供试品色谱中, 在与对照
品色谱相应的位置上,显相同颜色的暗斑点, 阴性样
#1250# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 8 期 2009年 8月
品色谱无对应暗斑点, 见图 4。
图 4 苁黄补肾胶囊中五味子的薄层色谱图
Fig1 4 TLC Chromatogram of Fructus Schisandrae
Chinensis in Conghuang Bushen Capsula
3 松果菊苷的 HPLC法测定
31 1 色谱条件: Kromasi-l C18 柱 ( 250 mm @ 41 6
mm, 5 Lm) ;柱温: 30 e ; 流动相为甲醇-乙腈-1%醋
酸溶液( 13B 10B 77) ; 体积流量: 1 mL/ min; 检测波
长为 334 nm。理论塔板数按松果菊苷峰计算应不
低于 4 000。
31 2 对照品溶液制备:精密称取松果菊苷对照品适
量,置棕色瓶中,加流动相配成01 16 mg/ mL 的对照
品溶液。
31 3 供试品溶液的制备: 取本品内容物, 研细, 取
01 5 g, 精密称定, 置50 mL 棕色量瓶中,精密加流动
相 20 mL,密塞,摇匀,称定质量,浸泡01 5 h,超声处
理 40 m in, 取出, 放冷, 再称定质量, 加流动相补足
减失的质量, 摇匀, 离心, 取上清液, 用 01 45 Lm 微
滤膜滤过,滤液置棕色瓶中,即得。取缺肉苁蓉的阴
性样品 01 3 g ,同法制成阴性供试品溶液。
31 4 线性关系考察:精密吸取01 16 mg/ mL 松果菊
苷对照品溶液 3、5、7、10、12 LL 分别注入液相色谱
仪,测定峰面积值。以峰面积为横坐标,进样质量为
纵坐标,计算得回归方程W = 71 971 49 @ 10- 10 A -
31 314 3 @ 10- 5 , r= 01 999 96。结果表明松果菊苷在
01 48~ 11 92 Lg 有良好的线性关系。
31 5 阴性对照试验: 精密吸取松果菊苷对照品溶
液、供试液和供试品溶液各 5 LL, 注入液相色谱仪,
结果在松果菊苷保留时间位置上阴性供试品溶液色
谱没有明显干扰。见图 5。
31 6 精密度试验:精密吸取 01 16 mg / mL 松果菊苷
对照品溶液 5 LL 注入液相色谱仪,重复 6次,记录
峰面积,结果其 RSD为 11 03%。
31 7 稳定性试验:分别于 0、2、4、6、8 h精密吸取苁
黄补肾胶囊供试品溶液各 5 LL 注入液相色谱仪,记
录松果菊苷峰面积, 计算, 结果其 RSD 为 11 41%,
t / min
a-松果菊苷
a-echin acoside
图 5 苁黄补肾胶囊( A)、松果菊苷对照品(B)和阴性
样品( C)的 HPLC色谱图
Fig1 5 HPLC Chromatograms of Conghuang Bushen
Capsula ( A) , echinacoside reference
substance (B) , and negative sample ( C)
表明供试品溶液在 8 h内稳定。
31 8 重现性试验:对批号 070701样品取样 6份, 制
备供试品溶液, 测定, 记录松果菊苷的质量分数, 计
算得其 RSD为 11 01%。
31 9 回收率试验: 取同一批(批号 070701, 含松果
菊苷 91 2 mg/ g )样品,按照 01 4、01 25、01 1 g 分别精
密称定 3份,共 9份, 分别精密加入 11 10 mg / mL 松
果菊苷对照品溶液 3、2、1 mL,制备供试品溶液, 测
定, 计算, 结果平均回收率为 991 1%, RSD 为
11 52%。
31 10 样品测定:按照上述方法对 3批供试品进行
测定,按外标法计算,结果见表 1。
表 1 苁黄补肾胶囊中松果菊苷的测定结果(n= 3)
Table 1 Determination of echinacoside in Conghuang
Bushen Capsula (n= 3)
批号 松果菊苷/ ( m g #粒- 1) RSD/ %
070701 41 14 01 87
070702 41 28 01 68
070703 31 96 01 74
4 讨论
甜菜碱的提取如果用原剂型标准中的方法, 供
试品色谱中的斑点与对照品的斑点位置对应不上,
总是差一段距离, 具体原因有待进一步的研究。采
用过强酸性阳离子树脂的提取法后,两者斑点位置
能很好的对应。
松果菊苷和毛蕊花糖苷均为肉苁蓉中活性成
分,原剂型标准检测毛蕊花糖苷,但是相同方法检测
#1251#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 8 期 2009年 8月
本品中毛蕊花糖苷时发现有比较大的干扰。试验了
甲醇-乙腈-1%乙酸( 13 B 10 B 77, 11B 9B 80, 15 B
10 B75)、甲醇-01 1%甲酸( 28 B72, 35B 65)流动相,
以及 Kromasi-l C18 ( 250 mm @ 41 6 mm, 5 Lm)和 U-l
t imate-C18 ( 250 mm @ 41 6 mm , 5 Lm)色谱柱, 结果
均不能使干扰峰与毛蕊花糖苷的峰分开。而检测松
果菊苷时没有发现明显干扰峰。所以选择松果菊苷
作为测定成分。
松果菊苷对照品试过用甲醇溶解, 注入色谱仪
后,在其色谱峰前会有一个大包峰且峰面积与进样量
不呈线性。改用流动相溶解后,一切正常。松果菊苷
和毛蕊花糖苷同为苯乙醇苷类化合物,有文献报道毛
蕊花糖苷在甲醇中不稳定而在微酸性溶液中能保持
稳定[ 1]。试验结果表明,松果菊苷也有相同性质。
有文献报道检测松果菊苷用波长 330 nm[ 2] , 但
是经试验发现, 其最大吸收波长在 334 nm。并且使
用 334 nm检测本品时,并没有发现明显干扰峰。
参考文献:
[ 1] 陈发奎1 常用中草药有效成分含量测定 [ M ]1 北京: 人民卫生
出版社, 19971
[ 2] 中国药典[ S]1 一部1 20051
RP-HPLC法测定散风止痛丸中欧前胡素
王 蔚*
(广州中一药业有限公司,广东 广州 510130)
摘 要: 目的 建立散风止痛丸中欧前胡素的 HPLC 测定方法。方法 色谱柱为 Agilent Zo rbax SB C18柱
( 150 mm @ 41 6 mm, 5Lm) ;流动相为乙腈-水 ( 52B 48) ; 检测波长为 250 nm; 体积流量为 11 0 mL / min; 柱温为室
温; 进样量为 10LL。结果 欧前胡素在 11 648~ 261 368 Lg / mL 与其峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为
981 1% , RSD 为 11 6% ( n= 6)。结论 该方法灵敏、准确、快速、专属性强, 可用于散风止痛丸中欧前胡素的测定。
关键词: 散风止痛丸;欧前胡素; 高效液相色谱
中图分类号: R2861 02 文献标识码: B 文章编号: 0253-2670( 2009) 08-1252-02
散风止痛丸由制白附子、白芷、白术、茯苓、益母
草、甘草等组成,具有祛湿通窍、活血消肿之功效,用
于头痛、疮疡肿痛等。白芷为散风止痛丸中主药之
一,其主要成分为香豆素类。故本实验以欧前胡素
作为质量标准评价指标,建立散风止痛丸中欧前胡
素的高效液相色谱测定方法。
1 仪器与试药
Ag ilent1100系列高效液相色谱仪 ( DA D检测
器,自动进样器) , 华南超声波清洗器(功率 250 W,
频率 45 Hz)。
欧前胡素对照品(批号 110826-200511, 中国药
品生物制品检定所) , 乙腈 ( M erck, 色谱纯) ; 甲醇、
丙酮等均为分析纯; 纯化水。散风止痛丸由本公司
提供。
2 方法与结果
21 1 检测波长的选择:用DAD检测器检测得到欧前
胡素光谱图,在约 220、250、300 nm 处有吸收。如选
择 220 nm,因波长较短,干扰较大;如选择 300 nm,则
响应值较小,故选择 250 nm 为测定波长。
21 2 流动相的选择: 参照5中国药典62005 年版一
部白芷项下测定方法中所用流动相时, 欧前胡素的
色谱峰有杂质峰干扰。经过对流动相比例的比较,
确定以乙腈-水( 52 B 48)为流动相。结果供试品溶
液中欧前胡素峰可以达到基线分离,峰形对称,保留
时间适中( 81 676 min) , 分离度大于 11 5,理论板数
为 13 531。
21 3 色谱条件 [ 1, 2] : 色谱柱为 Ag ilent Zorbax SB
C18柱( 150 mm @ 41 6 mm, 5 Lm) ;流动相为乙腈-水
( 52 B 48) ; 检测波长为 250 nm; 体积流量为 11 0
mL/ min;柱温为室温; 进样量为 10 LL。理论板数
按欧前胡素峰计算应不低于 3 000。色谱图见图 1。
21 4 峰质量分数的检查:分别精密吸取欧前胡素对
照品溶液和供试品溶液各 10 LL,测定, 并用二极管
阵列检测器( DAD)在 220~ 400 nm 波长扫描,检查
峰的质量分数。结果供试品溶液中被测峰的质量分
数因子比阈值 9701 000大,表明该峰为纯物质峰。
#1252# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 8 期 2009年 8月
* 收稿日期: 2009-02-31 作者简介:王 蔚 E-mail: f zfw 03@ yahoo1 com1 cn