全 文 ：泰山四叶参 HPLC指纹图谱研究
赵燕燕1 , 苏美英2 , 王 莉2 ,谷红霞2 ,周茂金2 *
收稿日期: 20100512
基金项目:泰安市中药现代化科技攻关项目
作者简介:赵燕燕( 1972 ) ,女,博士,副教授。Tel: ( 0535) 67176188529 Email: zhaoyanyan612@ hotmail. com
* 通讯作者 周茂金 T el: ( 0538) 2138623 Email: mjzh ou tj@ sina. com
( 1 烟台大学药学院,山东 烟台 264003; 2 山东省泰安市中心医院, 山东 泰安 271000)
摘 要:目的 建立泰山四叶参药材的指纹图谱分析方法, 为泰山地区四叶参药材质量评价和合理应用提供参考
依据。方法 采用 H PLCELSD 检测法, 对泰山四叶参药材进行测定, 色谱柱为 Ult imate AQC18 ( 250 mm 4. 6
mm, 5 m) ,流动相为甲醇0 2% 冰醋酸水梯度洗脱, 柱温 30 ! , 漂移管温度 102 ! , 载气流量为 2 5 L / min。
结果 确立 7 个共有峰为特征峰的泰山四叶参 H PLCELSD 指纹图谱, 相似度评价结果表明,除 2 批药材外, 其余
药材的相似度在 0 84 以上。结论 泰山地区的四叶参药材具有很好的相似度。本方法操作简便、快速、准确, 为
泰山四叶参的质量控制提供了依据。
关键词:泰山四叶参; 指纹图谱; H PLCELSD; 质量评价
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2083 03
泰山四叶参是桔梗科党参属植物四叶参 Codo
nop si s lanceolata Benth. et Hook. f . 的干燥根, 与
泰山何首乌、黄精、紫草共称为∀ 泰山四大名药#, 具
有补血通乳、养阴润肺和健身补气等功效[ 12]。四叶
参根的化学成分主要包括甾醇、三萜、糖和氨基酸类
化合物[ 3] 。近年来, HPLC 法以其高效、快速、准确
等优点,已被广泛应用于药材的研究中[ 46] 。泰山四
叶参采收年限一般为 3~ 4 年, 为了更好地控制四
叶参药材的质量,本实验首次应用 HPLC 法对其进
行了指纹图谱研究; 采用 ELSD 检测器进行分析,
以谷甾醇为对照品,建立了泰山地区 10批四叶参
药材的指纹图谱,为泰山道地药材四叶参的质量控
制提供科学依据。
1 材料
1 1 药材: 10批泰山地区不同产地的四叶参药材,
经烟台大学药学院生药学教研室徐本明副教授鉴
定, 均 为 桔 梗 科 党 参 属 四 叶 参 Codonop sis
lanceolata Benth. et H ook. f . 的根, 来源见表 1。
药材晾干,切片, 60 ! 烘 8 h,取出,粉碎, 过 100 目
筛,置干燥器中,备用。
表 1 四叶参药材来源
Table 1 Sources of Codonop sis Radix samples
编号 样品来源 编号 样品来源
1 泰安市祝阳乡 1 6 泰安市陶镇 1
2 泰安市祝阳乡 2 7 泰安市陶镇 2
3 泰安市山口镇 1 8 泰安市良庄镇
4 泰安市山口镇 2 9 泰安市杨家镇 1
5 泰安市羊里镇 10 泰安市杨家镇 2
1 2 仪器与试剂: 美国 Agilent 1200 高效液相色
谱仪 (在线脱气机, 四元泵, 自动进样器, 美国
Ag ilent 公司) ; Ag ilent ECM 色谱工作站 (美国
Ag ilent 公司) ; Alltech 2000ES 蒸发光散射检测器
( ELSD) ; 乙腈 (色谱纯) 购于默克公司,冰醋酸 (色
谱纯) 购于天津科密欧公司。乙醇 (分析纯) 购于
天津化学试剂一厂。超纯水 (自制)、超声波清洗器
( 100 W, 25 kHz, 上海声谱超声波设备厂) , 谷甾
醇对照品 (批号 110851200504) 购自中国药品生
物制品检定所。
2 方法与结果
2 1 对照品溶液的制备: 取 谷甾醇对照品适量,
精密称定, 加甲醇溶解并稀释成质量浓度为 1 545
mg/ mL 的溶液,即得。
2 2 供试品溶液的制备: 取药材粉末 (过 100 目
筛) 1 g, 精密称定,置 25 mL 量瓶中,加 70% 乙醇
稀释至刻度, 摇匀, 称定质量, 超声提取 2 次, 每次
30 min,取出,放冷,用 70% 乙醇补足质量,摇匀,微
孔滤膜 ( 0 45 m) 滤过,即得。
2 3 色谱条件: 色谱柱为 U lt imate AQC18 ( 250
mm 4. 6 mm , 5 m) , 流动相为甲醇 ( A )0 2%
冰醋酸溶液 ( B) ,梯度洗脱: 0~ 5 min, 5% A; 5~ 10
m in, 70% A; 17~ 30 min, 100% A; 30~ 35 min, 5%
A。进样量为 10 L, 体积流量为 1 mL/ min; 柱温
为 30 ! 。ELSD 参数:漂移管温度为 102 ! ,载气
的体积流量为 2 5 mL/ m in。
2 4 专属性试验:精密吸取供试品溶液 10 L 注
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入高效液相色谱仪, 记录 65 m in 色谱图, 发现 35
min 后无色谱峰, 没有影响指纹图谱共有峰的色谱
峰,因此分析时间定为 40 min。
2 5 方法学考察
2 5 1 系统适用性试验:以 谷甾醇计算, 理论塔
板数为 346 020, 分离度为 8 7, 对称因子为 1 0, 所
有峰的分离度均大于 1 0,所有峰都在 35 min 内完
成检测,色谱图见图 1。
图 1 谷甾醇对照品 ( A) 与四叶参药材 (B) 的
HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatogram of sitosterol ref erence
substance ( A) and Codonop sis Radix ( B)
2 5 2 精密度试验: 取 1 号样品粉末适量, 按 2 2
项下方法制备供试品溶液,重复进样 6次,记录指纹
图谱,利用中药指纹图谱相似度评价系统 A 版软件
计算相似度,结果均大于 0 9, 各主要色谱峰相对保
留时间 RSD 均小于 0 23%, 相对峰面积比值的
RSD 均小于 1 6%。
2 5 3 重现性试验:取 1号样品粉末,按 2 2 项下
方法制备供试品溶液 6 份, 分别进样, 记录指纹图
谱,相似度计算结果均大于 0 9,各主要色谱峰相对
保留时间的 RSD 均小于 0 25%, 相对峰面积比值
的 RSD 均小于 2 0%。
2 5 4 稳定性试验:取 2 6 2项下的供试品溶液分
别于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 进样,按 2 3项下色谱
条件检测。相似度计算结果均大于 0 9, 各主要色
谱峰相对保留时间的 RSD均小于 0 5%, 相对峰面
积比值的 RSD 均小于 2 0%, 说明样品在 24 h 内
稳定。
2 5 5 共有峰的标定: 取 10 份泰山不同区域的四
叶参药材,按 2 2项下方法制备供试品溶液, 分别进
样,按 2 3项下色谱条件检测, 记录指纹图谱, 并对
图谱进行分析与比较, 结果 7 个峰为共有指纹峰
(图 2)。
2 5 6 相似度评价: 将数据导入国家药典委员会
∀中药指纹图谱相似度评价系统 ( 2004 A) 软件#,
经过自动匹配, 生成对照图谱 ( R) , 结果见图 3, 并
计算其相似度, 结果见表 2。
图 2 四叶参药材指纹图谱
Fig. 2 Fingerprints of Codonopsis Radix
S1~ S10样品 1~ 10 R对照指纹图谱
S1 S10samples 1 10 Rreference fin gerprin t
图 3 10 批不同产地药材的指纹图谱及生成的共有模式
Fig. 3 Fingerprints of 12 batches of Codonopsis Radix
and their plots of mutual modes
表 2 不同批次四叶参药材与共有模式的相似度
Table 2 Similarities among ten batches of Codonopsis Radix
samples compared with reference fingerprints
批号 相似度 批号 相似度
1 0 844 6 0 980
2 0 852 7 0 933
3 0 844 8 0 759
4 0 879 9 0 957
5 0 383 10 0 878
3 讨论
3 1 本实验通过蒸发光散射检测器联用紫外检测
器对四叶参药材的 70% 乙醇提取物进行指纹图谱
分析, 结果表明,在吸收波长 200 nm 的条件下, 紫
外检测器只有一两个很弱的信号, 因此确定用蒸发
光散射检测器进行指纹图谱分析。
3 2 色谱条件的确定: 先后选择了甲醇水、乙腈
水 (醋酸调节不同 pH 值) 作为流动相系统,结果表
明,甲醇0 2% 冰醋酸溶液系统分离度较好, 保留
时间适中。
蒸发光散射检测器的漂移管温度和载气的体积
流量是影响实验的 2个关键参数, 不同的样品需采
用不同的条件,本实验的条件是通过逐渐改变漂移
管温度和载气体积流量, 记录峰面积和信躁比的变
化情况, 选定最佳测定参数为: 漂移管温度为
102 ! ,载气体积流量为 2 5 L/ m in。
3 3 提取条件的确定: 本实验选用 30%、70%、
90% 乙醇和 30%、70%、90% 甲醇为溶剂, 采用超
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声和回流两种方法进行提取, 结果表明 70% 乙醇
和 70% 甲醇超声提取的样品峰数和组分的量较
多,且杂质峰较少。对提取时间做了进一步的筛选,
最终确定为提取 2次,每次 0 5 h。
3 4 样品差异性分析:通过对指纹图谱分析可以看
出,除泰山羊里镇和良庄镇的两批样品外,泰山周边
地区的四叶参药材的指纹图谱相似度都在 0 84 以
上,其差异性可能是由生态环境、采收时期等因素引
起的。
参考文献:
[ 1] 王德才, 李同德, 康颂建 泰山四大名药之一四叶参 [ J ] 食
品与药品, 2006, 8( 9) : 7375
[ 2] 谷红霞, 周茂金, 苏美英 四叶参化学成分和药理作用研究
进展 [ J ] 中草药, 2009, 40( 8) : 13381340
[ 3] 付成国, 文连奎, 董 然 轮叶党参化学成分与药理研究进
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[ 4] 王欣杨, 于治国, 高晓霞, 等 高效液相色谱法同时测定槲
寄生中 4种黄酮 [ J] 中草药, 2010, 41( 9) : 135137
[ 5] 崔 洋, 王 巧, 张兰桐, 等 河北道地药材连翘的高效液
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[ 6] 龚全炎, 吴晓琴, 夏道宇, 等 RPHPLC测定竹叶提取的中
黄酮类和酚酸类成分 [ J] 中草药, 2010, 41( 1) : 6365
HPLC法同时测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花烃、 萜品烯
林万里1 ,王振月1 ,张兰兰2 * ,黄芝娟2 ,李瑞明2 ,宋兆辉2
收稿日期: 20100320
作者简介:林万里( 1982 ) ,男,黑龙江省鸡西市人,黑龙江中医药大学中药学在读硕士,现于天津天士力集团研究院现代中药研究所做
实习研究员。T el: ( 022) 86342546 Email: lin_w an li@ 163. com
* 通讯作者 张兰兰 T el: ( 022) 86342608 Email: zhangll2@ tasly. com
( 1 黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040; 2 天津天士力集团研究院, 天津 300410)
摘 要:目的 建立 H PLC 法同时测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花烃和 萜品烯的方法。方法 采用 Agilent
SBC18柱 ( 250 mm 4 6 mm, 5m) ; 流动相为乙腈水 ( 60%40) ;体积流量为 1 0 mL / min; 检测波长为 224 nm;
柱温为 30 ! 。结果 驱蛔素、对伞花烃、 萜品烯的线性范围分别为 2 02~ 40 4 mg / mL ( r= 0 999 4)、0 525~
10 5 mg / mL ( r= 0 999 8)、0 376 ~ 7 52 mg/ mL ( r = 0 999 7) ; 加样回收率分别为 98 60% ( RSD= 2 06% )、
102 51% ( RSD= 2 70% )、96 92% ( RSD= 2 32% )。结论 本方法简单、快速、灵敏、准确、重现性好, 适用于同时
测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花烃、 萜品烯的量。
关键词:驱蛔素; 对伞花烃; 萜品烯; 土荆芥; 高效液相色谱
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2085 03
土荆芥为藜科植物土荆芥 Chenopodium am
brosioides L. 带有果穗的全草, 具有祛风、杀虫、通
经止痛的功效, 用于皮肤风湿痹痛、痛经、闭经、皮肤
湿疹和蛇虫咬伤 [ 1]。据文献报道,驱蛔素、对伞花烃
和 萜品烯是土荆芥挥发油的主要成分, 且具有一
定的代表性,但是对这 3种成分同时进行定量测定
的方法一直未见报道。挥发油类成分一般选用气相
色谱法进行分析,但气相色谱采用毛细管柱, 由于分
流等因素影响其测定的稳定性 [ 24] ,本实验建立了用
HPLC 法同时测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花
烃、 萜品烯的方法, 为土荆芥挥发油质量标准的制
定打下基础。
1 仪器与材料
美国 Ag ilent 1100高效液相色谱仪 (配有紫外
检测器、二元泵、自动进样器、柱温箱)。
驱蛔素对照品 (自制, 质量分数为 90 0% ) , 对
伞花烃对照品 ( St . Louis, USA, 质量分数为
99 0% ) , 萜品烯对照品 ( 自制, 质量分数为
92 37% ) ,二纯水 (自制) ,乙腈 ( M erck 公司) 为色
谱纯,其他试剂为分析纯。
土荆芥经黑龙江中医药大学药学院中药资源与
开发 教 研 室 王 振 月 教 授 鉴 定 为 土 荆 芥
Chenopodium ambr osioides L. , 其挥发油由陕西天
士力植物药业有限责任公司提供。
2 方法与结果
2 1 色谱条件: 色谱柱 Ag ilent SBC18 ( 250 mm
4. 6 mm, 5 m) ;流动相为乙腈水 ( 60 % 40) ;体积
流量 1 0 mL/ m in; 检测波长为 224 nm; 柱温为
30 ! 。色谱图见图 1。
2 2 溶液的制备
2 2 1 对照品溶液的制备: 精密称取驱蛔素对照
品、对伞花烃对照品、 萜品稀对照品适量,用无水
乙醇溶解, 制成含驱蛔素 40 mg / mL、对伞花烃 10
mg/ mL、 萜品烯 7 mg / mL 的溶液,即得。
∃2085∃中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月