全 文 ：·1496· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10,el
序软件进行拟合。对各种模型的处理结果进行比较，
选择其中残差平方和(SUM)值最小、拟合度(r2)
最佳、AIC值最小者定为所测药物的最佳室型。结
果表明本法测定的杠柳毒苷在小体内符合二室代谢
模型，C(to)为1．39pg／mL，tl／2．为2．04min，gl／2P为
13．9min，CL为0．0314L／min，AUCo．60为30．84
mg／L·min，MRTo～60为8．20rain，VRTo~60141．0
rain2。
3讨论
3．1前处理方法的选择：本实验根据杠柳毒苷的理
化性质及极性等对血浆预处理方法进行了研究，主
要进行了液液萃取、沉淀蛋白和固相萃取3种方法
的摸索。
液液萃取法中考察了叔丁基甲醚一二氯甲烷
(2：1)、醋酸乙酯一丙酮(5z 1)、醋酸乙酯一乙醇
(15l 1、8I 1、5l 1)、醋酸乙酯一异丙醇(20l 1、10t
1、5l 1)、氯仿一异丙醇(95：5、9t 1、5l 1、1：1)、氯
仿一正丁醇(9z 1)、二氯甲烷一异丙醇(10：1、5t 1、
3 t 1)，结果回收率均不能达到要求。
沉淀蛋白法中考察了甲醇、乙腈、甲醇一乙腈
(1·1)为沉淀剂的方法。结果乙腈沉淀蛋白后，杠柳
毒苷的提取回收率仅60％。以甲醇为沉淀剂，提取
回收率虽然较高(约80％)，但干扰峰较多，不稳定。
以甲醇一乙腈(1t 1)为沉淀剂，提取回收率可达
80％，干扰较少。实验初期曾经甲醇一乙腈(1。1)沉
淀的方法作为血浆预处理方法并进行了方法学验
证，方法定量限0．1弘g／mL。小鼠尾静脉注射杠柳毒
苷中剂量(1mg／kg)后，于不同时间点采血进行测
定。结果此方法给药40min后杠柳毒苷已经低于定
量限，无法满足更低剂量的研究。
最后采用沉淀蛋白一固相萃取法，选择反相C，。
型固相萃取小柱进行实验，其上样量、洗脱溶剂用量
及成本方面都较合适，即1mL上样液，1mL40％
甲醇洗杂质、100％甲醇1mL两次洗脱杠柳毒苷和
地高辛，每次0．5mL，每处理5个样品换一个固相
萃取小柱。结果回收率符合药动学研究要求。
3．2色谱柱的选择：使用了TiahheC，。色谱柱(250
mm×4．6mm，5pm)，结果血浆中检测杠柳毒苷时
杂峰很多，回收率很低。改用窄径柱AgilentC。。(100
mm×2．1mm，3．5pm)测定，色谱图中仍然有干扰
峰。最后选用色谱柱AgilentZorbaxSB-C18柱(150
mm×4．6mm，5pm)及保护柱AgilentZorbaxC18
柱(12．5mE×4．6mm，5pm)，结果表明，血浆中检
测杠柳毒苷的最低定量限可以达到测定要求，并且
杂峰较少，符合要求。
3．3流动相比例的选择：方法建立初期，流动相采
用乙腈一水(27：73)，有杂峰干扰且峰型不好，改流
动相比例为乙腈一水(23：77)以减少样品出峰处的
干扰，但出峰时间太长。最后选择流动相为乙腈一水
(25：75)，色谱图中样品峰型较好且无干扰峰出现，
符合要求。
◆考文献：
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cruderug“Wujiapi”．Ⅶ．OnthestructureofglucosideEof
BeiwujiapiI-JJ．ChemPharmBull，1972，20(3)：469．
[2]董波，万玉．李婷．益气强心饮治疗慢性心力衰竭34倒
分析口]．中医药学刊，2004。22(6)：1132．
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[4]李玉红，高秀梅，张伯礼，等．香加皮提取物对离体心脏心功能
的影响[J]．辽宁中医学院学报，2005，7(4)1396—397．
微波提取黄芪中多糖的工艺研究
许海燕，杨义芳，黄春跃
(1-海医药工业研究院，上海200040)
摘要：目的优选提取黄芪中多糖的最佳方法和工艺参数。方法 比较微波、超声、碱水、酶法、加热回流提取黄
芪．对其中最佳的微波提取法的工艺条件分别进行了单因素和正交试验研究，以最佳工艺条件为基础进行放大实
验。结果黄芪多糖的最佳提取工艺为微波提取，控温70℃，提取3次，每次10min。该工艺条件同样适用于放大
实验，与小试试验的条件一致。结论优选的黄芪多糖微波提取法工艺稳定可行。
关键词：黄芪；多糖；微波提取；正交试验
中圈分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)10—1496一04
收稿日期：2008—01—05
作者简介：许海燕(1979一)，女．湖南省邵东县人，上海医药工业研究院中药研究室2003级硕士，研究方向为中药制荆．
Tel：(021)62479808—464E—mail：swalxh@yahoo．com．cn

万方数据
中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月·1497·
黄芪是豆科植物膜荚黄芪Astragalusrfl嬷m—
branaceus(Fisch．)Bunge或蒙古黄芪A．m。rrl—
branaceus(Fisch．)Bungevar．．mongholicus
(Bunge)Hsiao的干燥根，是重要的益气中药。黄芪
的有效成分之一黄芪多糖具有提高人体免疫功能、
抗肿瘤、抗辐射损伤、调节血糖、抗衰老等作用。常用
的提取黄芪多糖的方法为加热回流法[1]，此外还有
微波‘引、碱水[31、纤维素酶[41提取黄芪多糖的报道。
本实验考察了热回流、微波提取、碱水提取、纤维素
酶提取和超声提取黄芪多糖，并进一步对其中最优
的微波提取法进行了研究，以期为黄芪多糖的工业
化生产寻求最佳的工艺路线。
1材料和仪器
黄芪为栽培品，产于山西浑源，为蒙古黄芪A
mem．branaceus(Fisch．)Bungevar．mongholicus
(Bunge)Hsiao的干燥根。所用试荆均为国产分析纯。
NJL07—3型实验专用微波炉、NJC03—2型微
波提取设备(南京杰全)，KQ--250DE型医用数控
超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，BtiCHI
V一800旋转蒸发仪(瑞士)，UV—VIS一8500型紫外
分光光度仪(I-海天美科学仪器有限公司)，LxJ—
ILB型低速大容量多管离心机(上海安亭科学仪
器厂)。
2方法和结果
2．1黄芪多糖的测定[5】
2．1．1对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至
恒重的葡萄糖对照品50mg，加水溶解并定容至100
mL，精密吸取10mL，稀释定容至100mL，摇匀，即
得0．05mg／mL葡萄糖对照品溶液。
2．1．2标准曲线的绘制：分别精密吸取0．05mg／mL
葡萄糖对照品溶液0．00、0．50、0．80、1．10、1．40、
2．00mL置25mL具塞试管中，加水至2．00mL，
分别加40A苯酚溶液1．00mL，混匀，迅速加入硫酸
7．0mL，摇匀，于40℃水浴中保温30min，取出，置
冰水浴中5min，取出，以第一份为空白，照分光光
度法在490nm波长处测定吸光度值，绘制标准曲
线。经回归得线性方程为A=O．0585C+0．0057，
r=0．9996，结果表明葡萄糖在O～0．1mg与吸光
度呈良好的线性关系。
2．1．3黄芪多糖提取率和质量分数的测定：取黄芪
多糖粗品加水溶解，定容至250mL。精密量取5
mL，稀释定容至200mL，取续滤液按2．1．2项下方
法操作，测定吸光度值，由线性方程求得质量浓度，
按黄芪多糖提取率=药材中黄芪多糖质量／药材质
量×100％，计算黄芪多糖提取率。
精密量取黄芪多糖粗品溶液150mL，置于已干
燥至恒重的蒸发皿中60℃水浴挥干水分，置60℃
真空干燥箱中减压干燥8h，取出置干燥器中放冷
20min，称定质量，计算黄芪多糖粗品中多糖的质量
分数。
2．2不同提取方法的比较
2．2．1超声提取法：精密称取黄芪粉末(20目)10
g，加水120mL超声提取3次，每次20min。
2．2．2微波提取法：精密称取黄芪粉末(20目)10
g，加水120mL微波低火提取3次，每次20min。
2．2．3酶提取法：精密称取黄芪粉末(20目)10g，
加纤维素酶0．4g、pH4．4HAc—NaAc缓冲液60
mL，置50℃水浴中保温24h。加水60mL，调pH
6--一7，加热回流3次，每次1．5h，第2次和第3次的
加水量均为120mL。
2．2．4加热回流法：精密称取黄芪粉末(20目)
10g，加水120mL，加热回流3次，每次1．5h。
2．2．5碱水提取法：加pH9～10的Ca(oH)：水溶
液120mL，加热回流3次，每次1．5h。
2．2．6样品处理及结果：提取液滤过，滤液减压浓
缩至10mL，加95％乙醇50mL醇沉，离心，沉淀加
水150mL溶解，离心，取上清液减压浓缩至10
mL，加95％乙醇50mL醇沉，离心即得沉淀黄芪多
糖粗品，测定多糖提取率和质量分数。各自在相同的
条件下重复操作2次，结果见表1。可以看出，微波
提取的提取率和质量分数均明显高于其他4种方
法。此外，微波提取时间较短，比加热回流法缩短了
7～8倍，故选择微波来提取黄芪多糖。
表I提取方法的比较
Table1 Comparisonofextractingmethods
2．3微波提取条件的优化：影响微波提取多糖工艺
的因素很多，包括浸泡时间、物料粒度、加水量、提取
温度、提取时间、提取次数等。本实验首先对浸泡时
间、物料粒度和提取时间进行了单因素考察，在此基
础上采用正交试验设计选取最佳提取条件。
2．3．1浸泡时间的单因素考察：固定提取温度为
70℃，提取时间为10min，提取次数为2次，比较了

万方数据
·1498· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年lo月
浸泡4h和未浸泡的效果。结果浸泡4h时黄芪多
糖的提取率和质量分数分别为7．90％、56．69％，未
浸泡时黄芪多糖的提取率和质量分数分别为
7．62％、62．95％。与未浸泡相比，浸泡4h后提取率
无显著差异，质量分数稍有下降，故选择不浸泡。
2．3．2粒度的单因素考察：固定提取温度为70℃，
提取时间为10rain，提取次数为2次，考察粒度对
提取的影响。结果粗颗粒和20目颗粒的黄芪多糖的
提取率分别为8．41％、8．33％。可见粗颗粒和20目
颗粒提取率无显著性差异，故选择粗颗粒。
2．3．3提取时间的单因素考察：固定提取温度为
70℃，提取次数为1次，考察提取时间对提取的影
响，结果提取2、5、10min时，黄芪多糖的提取率和
质量分数分别为2．90％、56．05％；3．26％、
60．63％；3．94％、71．00％。可见提取10rain所得多
糖质量分数大大高于提取5rain和2min的，提取
率也为最高。
2．3．4正交实验设计：在单因素考察的基础上进行
正交试验考察。选择提取温度(A)、提取时间(B)、提
取次数(C)，每因素各取3个水平，见表2。选用粗颗
粒的黄芪药材进行微波提取，提取液浓缩后醇沉两
次，即得黄芪多糖。在平行操作下进行正交试验，以
多糖的提取率和质量分数为评价指标对微波提取工
艺条件进行优化，结果见表3。对结果进行统计学处
理，方差分析结果见表4。
裹2因素与水平
Table2 FactorsandIevels
以质量分数为评价指标时，各因素对提取效果
的影响程度依次为A(提取温度)>C(提取次数)>
B(提取时间)，其中A因素对提取的影响有显著性
差异，最佳工艺为A。B。C。；以提取率为评价指标时，
各因素对提取效果的影响程度同样依次为A(提取
温度)>C(提取次数)>B(提取时间)，这3种因素
对提取的影响均无显著性差异，最佳工艺为A。B。C。。
综合上述两项考察指标，B，和B。、C：和Cs差别均不
大，从节约成本来考虑，确定最佳提取工艺为
A。B。C2，即在70℃条件下提取3次，每次10min。
2．4微波提取条件的放大：在小试数据的基础上，
进行放大实验，采用NJC03—2型微波提取设备对
裹3正交试验结果
Table3 Resultoforthogonaltest
裹4方差分析
Table4 Analysisofvariance
指标方差来源离差平方和自由度均方 F值 显著性
Fo．05(Z，2)=19．0Fo．01(Z，Z)=99．0
投料量为2kg黄芪药材进行提取，考察提取时间和
提取次数的影响，结果见表5、6。以提取4次的提取
率为100％，3次即提取出97．06％，从节约成本的
角度考虑，选择提取3次，每次10rain，与小试试验
的条件一致。
3讨论
在微波萃取前加水浸泡黄芪药材，使水分子深
入细胞内部，微波辐射时细胞内外同时加热，有利于
目标成分的萃取，但同时一些杂质也容易被萃取出
来。在本实验条件下，浸泡4h使提取率从7．62％升
高到7．9％，同时质量分数从62．95％下降到
56．69％，综合考虑，选择不浸泡。
按确定的试验工艺试生产3批，每批投料量为
2kg黄芪药材，结果见表7，表明该工艺稳定可行。
从理论上说，药材的粉碎度越高，与浸出溶剂的
接触面越大，扩散面也越大，故扩散速度越快，萃取

万方数据
中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月·1499·
表5提取时间对提取效果的影响
Table5 Effectofextractingtimesonextractra e
裹6 10min提取次数对提取效果的影响
Table6 Effectofextractingtimesinten
minutesonextractra e
效果越好。但粉碎度太高，加大后续处理如过滤
的难度，考虑到工业化生产的实际情况，本实验仅比
较了粗颗粒和20目两种粒度，提取率无明显差异。
微波穿透厚度一般为2～3cm。本实验中放大
实验的提取率和质量分数都低于小试，可能是因为
裹7放大工艺试生产
Table7 Productionwithmagnifiedtechnology
小试设备容器小，微波辐射能完全穿透，放大设备容
器较大，微波辐射只能部分穿透。可以考虑加大搅拌
强度或改变容器形状来解决此问题。
微波提取的提取率和质量分数都明显高于普通
水煎法，原因是否是因为微波提取使细胞壁破裂，有
效成分更易流出有关；微波提取是否会影响多糖结
构和连接方式进而影响药效，有待进一步研究。
感谢中国医学科学院药用植物研究所赵永华博
士对黄芪药材进行的鉴定工作。
参考文献：
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草药，2005．36(12)：1804—1807．
Es]中国药典Es]．一部．2005．
蜂胶HPLC指纹图谱的研究
王小平L3，林励，潘建国2，卢占列2
(1．广州中医药大学，广东广州 510400f2．广州市宝生园有限公司，广东广州 510400；
3．陕西中医学院，陕西咸阳712046)
摘 要：目的 用高效液相色谱法建立蜂胶指纹图谱。方法 采用迪马公司Diamonsil(钻石)C，s色谱柱(250mm×
4．6mm，5pm)，甲醇一0．4％磷酸水为流动相，梯度洗脱，体积流量为1．0mL／min，检测波长为283rim，柱温为
25℃。结果10批蜂胶样品得到的指纹图谱有13个共有峰，通过与对照品的保留时间比较，4、7、12、13号峰分别
为芦丁、槲皮素、白杨素和高良姜素。方法学考察结果表明，稳定性试验、重现性试验所得指纹图谱的相似度均大于
0．95，芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素保留时间和峰面积的RSD均小于2％。结论所建立的蜂胶HPLC指纹图谱
分析方法准确、可靠，重现性好，能够用于控制蜂胶的质量和真伪的鉴别，为更好的控制蜂胶的内在质量提供了科
学依据。
关键词：蜂胶；指纹图谱；芦丁；槲皮素；白杨素I高良姜素；高效液相色谱
中圈分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)10—1499—03
蜂胶是意大利蜂ApismelliferaL．从植物芽苞 和树干处采集的树胶，混入意大利蜂上颚腺分泌物
收稿日期：2007—12-08
基金项目：广州市科技计划项目(2005Z·EOl01)
作者简介：王小平(1976一)，女，陕西宝鸡人，广州中医药大学博士研究生．主要从事中药资源开发利用及新药研究。
Tel：(020)35622208E—mail：wangxiaopin9323@126．corn
*通讯作者林励Tel：13802914007

万方数据
微波提取黄芪中多糖的工艺研究
作者： 许海燕， 杨义芳， 黄春跃
作者单位： 上海医药工业研究院,上海,200040
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(10)
被引用次数： 5次

参考文献(5条)
1.倪艳;苏强 黄芪多糖水煎提取工艺的优化试验研究 1998(05)
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3.李红民;黄仁泉;王亚洲 提高黄芪多糖提取收率的工艺研究[期刊论文]-西北大学学报(自然科学版) 2000(06)
4.闫巧娟;韩鲁佳;江正强 纤维素酶法提取黄花多糖[期刊论文]-中草药 2005(12)
5.中国药典(一部) 2005

引证文献(5条)
1.王再幸.赵景辉.赵伟刚.李荣峰.陈立志.赵明忠.郭崇民.张慧丽.潘扬 高压脉冲电场快速提取黄芪多糖工艺的研
究[期刊论文]-特产研究 2009(2)
2.哈斯额尔顿.那音台.春光.杨宝喜.王青虎 蒙药小白蒿多糖含量测定[期刊论文]-中国中医药咨讯 2010(1)
3.向丽.周铁军.叶迎春.王光西 青果多酚超声波醇提工艺条件的研究[期刊论文]-安徽农业科学 2012(2)
4.董玲玲.黄鑫.齐阳光.冯海 酶解—微波法提取黄芪多糖的工艺研究[期刊论文]-浙江工业大学学报 2011(5)
5.刘明言.王帮臣 用于中药提取的新技术进展[期刊论文]-中草药 2010(2)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200810018.aspx