全 文 ：3 　讨论
311 　流动相的选择 :为使色谱峰分离效果好 ,并在
较短的时间出峰 ,先后摸索流动相 ,最终采用本实验
选定的流动相进行梯度洗脱 ,峰形对称 ,出峰时间适
中 ,且分离效果好。
312 　不同产地、不同批次药材中样品的量差别较
大。首次对黄荆子药材中 VB E21 的量进行测定 ,建
立了其定量测定方法学。
参考文献 :
[ 1 ] 　湖南药物志编委会1 湖南药物志 [ M ]1 长沙 : 湖南科学技术
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[ 4 ] 　周应军1 芳基二氢萘类木脂素衍生物及其用途 [ P]1 中国专
利1 CN2005101366561 7 , 20072072041
蒺藜果中蒺藜呋甾皂苷 B的 HPLC2ELSD 法测定
解生旭1 ,徐暾海2 ,韩 　冬1 ,赵宏峰1 ,司云珊1 ,徐雅娟1 3 3
(11 吉林省中医药科学院 ,吉林 长春 　130021 ; 21 北京中医药大学 ,北京 　100102)
摘 　要 :目的 　建立反相高效液相色谱2蒸发光检测法 ( HPLC2EL SD)测定蒺藜呋甾皂苷 B 的方法。方法 　色谱柱
Vp2ODS C18柱 ,柱温 40 ℃,流动相 :乙腈2水 (26 ∶74) →(28 ∶72) →(31 ∶69) →(50 ∶50)梯度 ,体积流量 1 mL/ min ,
温度 :105 ℃,气体流量 : 310 mL/ min。结果 　该方法的线性范围为 210～1010μg , r = 01997 3 ,平均回收率为
96168 %。结论 　方法准确 ,灵敏度高 ,专属性强 ,重现性好 ,可用于蒺藜药材中该成分的定量测定。
关键词 :蒺藜 ;蒺藜呋甾皂苷 ; HPLC 法
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220309202
　　蒺藜为蒺藜科植物蒺藜 T ribul us terrest ris L1
的干燥成熟果实 ,为我国常用传统中药 ,味辛、苦 ,微
温 ,有小毒 ,归肝经。具平肝解郁 ,活血祛风 ,明目 ,
止痒之功效[1 ] 。蒺藜已被广泛应用于临床制剂中 ,
笔者用蒺藜药材开发出蒺藜果总皂苷制剂 ,蒺藜果
及其制剂尚无可质量控制的对照品。为控制药材及
其总皂苷制剂质量 ,笔者从蒺藜药材中分离提纯化
合物蒺藜呋甾皂苷 B ,并作为对照品进行了纯化及
标定 ,建立了蒺藜果测定方法。
1 　试验仪器与药品
111 　仪器 : 岛津 2010 自动高效液相色谱仪 ,
2000 ES 蒸发光散射检测器 ,N2000 工作站。
112 　试剂与样品 :蒺藜呋甾皂苷 B 实验室自制 ,由
ESI2MS、1 H2NMR、13 C2NMR、HMBC、HMQC 光谱
分析确定结构式为 262O2β2D2吡喃葡萄糖基2(25 R)2
5α2呋甾烷220 (22)2烯22α,3β,262三醇232O2β2D2吡喃
半乳糖基 (1 →2)2β2D2吡喃葡萄糖基 (1 →2)2β2D2吡
喃半乳糖苷 ,质量分数 98180 %以上 ;甲醇为色谱 纯 ,水为纯净水。蒺藜果采自吉林省洮南市、安徽省亳州市、山东省淄博市、河北省安国市等地 ,经长春中医药大学邓明鲁教授鉴定为蒺藜药材为蒺藜科植物蒺藜 T1 terrest ris L1 的干燥成熟果实。2 　方法与结果211 　色 谱 条 件 : 色 谱 柱 为 Vp2ODS 色 谱 柱(250 mm ×415 mm , 5 μm) ;流动相 :乙腈 ( A )2水(B) ,梯度洗脱 ,0～15 min (A :26 % →28 % ,体积流量 1 mL/ min) ;15～25 min (A :28 % →31 % ,体积流量 1 mL/ min) ;25～30 min (A :31 % →50 % ,体积流量 1 mL/ min) ;进样量 10μL ;检测器 :2000 ES 型蒸发光散射检测器 ;柱温 :40 ℃;检测器温度 :100 ℃;气体流量 218 mL/ min。色谱图见图 1。212 　对照品溶液制备 :精密吸取蒺藜呋甾皂苷 B对照品 516 mg ,置 10 mL 量瓶中 ,甲醇溶解至刻度。213 　供试品溶液制备 :取蒺藜果 6 g ,精密称定 ,加70 %乙醇加热回流提取 3 次 ,每次 1 h ,合并提取液 ,回收乙醇至无醇味 ,经过大孔树脂柱 (D21) ,水洗至
·903·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008206225
基金项目 :国家自然基金资助项目 (30371739)
作者简介 :解生旭 (1975 —) ,男 ,长春市人 ,学士学位 ,1997 年毕业于长春中医学院中药学专业 ,现任职于吉林省中医药科学院重点实验
室 ,主要从事中药化学的基础研究和新药研发。　Tel : (0431) 86816848 　E2mail :jshx222 @1261com3 通讯作者　徐雅娟　Tel : (0431) 86816848 　Fax : (0431) 85910067 　E2mail :xyj6492 @shhu1com
t/ min3 2蒺藜呋甾皂苷 B3 2t ribuloside B
图 1 　蒺藜呋甾皂苷 B对照品( A)和蒺藜果( B)的 HPLC
色谱图
Fig11 　HPLC Chromatograms of tribuloside B reference
substance ( A) and T1 ter rest ris fruit ( B)
无色 ,再用 70 %乙醇洗至无色 ,回收乙醇 ,减压干
燥 ,加 50 mL 水溶解 ,正丁醇等体积萃取 4 次 ,合并
萃取液 ,蒸干 ,加甲醇溶解至 2 mL 量瓶中并稀释至
刻度 ,摇匀 ,滤过 ,即得。
214 　标准曲线的制备 :分别精密称取蒺藜呋甾皂苷
B 对照品 1100 mg 置 1 mL 量瓶中 ,甲醇定容至刻
度 ,摇匀 ,滤过 ,作为对照品溶液。分别精密吸取对
照品溶液 2、4、6、8、10μL ,进样 ,依法测定。以峰面
积为纵坐标 ,进样量为横坐标 ,进行线性回归 ,其回
归方程为 lgA = 51189 000 69 + 11528 113 30 lg M ,
r = 01 997 3 ,表明蒺藜呋甾皂苷 B 在 210～1010μg
与色谱峰的峰面积积分值呈良好的线性关系 ,由于
其不过原点 ,因此采用外标两点法测定。
215 　精密度试验 :按上述色谱条件 ,精密吸取供试
品溶液 10μL ,连续进样 5 次分别测定蒺藜呋甾皂
苷 B 的峰面积 ,RSD 为 1167 %( n = 5) 。
216 　重现性试验 :精密称取蒺藜果 5 份 ,分别按供
试品溶液制备方法制备 ,按上述色谱条件测定峰面
积并计算蒺藜呋甾皂苷 B 的质量分数 ,结果表明
RSD 为 0178 %。
217 　稳定性试验 :按上述色谱条件 ,精密吸取供试
品溶 液 10μL , 每 隔 2 h 测 定 一 次 , 结 果 RSD
为 0153 % , 表明供试品溶液放置 8 h 测定蒺藜呋甾
皂苷 B 的质量分数稳定不变。
218 　回收率试验 :采用加样回收法。精密称取含蒺
藜呋甾皂苷B 1122 %蒺藜 011 g 置 5 mL 量瓶中 ,加
入一定量的蒺藜呋甾皂苷 B 对照品 ,再按定量测定
项下方法测定其中的蒺藜皂苷的量 ,并计算回收率 ,
结果平均回收率为 96168 % ,RSD 为 1122 %。
219 　样品定量测定 :取不同产地蒺藜果药材 ,制备
供试品溶液 ,测定其蒺藜呋甾皂苷 B 的量 ,结果见
表 1。
表 1 　样品测定结果( n = 4)
Table 1 　Determination of samples ( n = 4)
药材产地 采集时间 蒺藜呋甾皂苷质量分数/ (mg ·g - 1)
吉林洮南市　 2007204 01 25
安徽省亳州市 2007208 01 21
山东省淄博市 2007208 01 20
河北省安国市 2007208 01 20
3 　讨论
从蒺藜果中分离得到并鉴定了蒺藜呋甾皂苷 B
结构 ,纯化蒺藜呋甾皂苷 B 质量分数达到 98 %以
上。考察了蒺藜果中蒺藜呋甾皂苷 B 的定量测定
方法 ,选用甲醇回流提取法、索式提取法、超声提取
法[2 ] 提取样品 ,证明甲醇回流提取并采用大孔吸附
树脂 ,醇洗脱的方法 ,所含杂质少 ,蒺藜呋甾皂苷 B
的量高。蒺藜呋甾皂苷 B 无紫外吸收 ,末端吸收亦
不明显 ,因此采用蒸发光散射检测器 ,建立了 RP2
HPL C 测定蒺藜呋甾皂苷 B 量的方法。本方法测
定蒺藜呋甾皂苷 ,有效成分峰与其相邻峰分离效果
好 ,而其他成分不互相干扰。本方法简便 ,准确 ,重
现性好 ,可用于该药材中蒺藜呋甾皂苷 B 的定量
测定。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典 [ S]1 一部1 20001
[ 2 ] 　李树珍 , 刘 　泓 1 蒺藜不同提取工艺的研究 [J ]1 中草药 ,
1994 , 25 (9) : 46224631
重　要　启　事
《中草药》杂志自进入“中国期刊方阵”双奖期刊及荣获第二届国家期刊奖和第三届国家
期刊奖提名奖以后 ,承蒙广大读者和作者的厚爱 ,稿源大增 ,为了缩短出版周期 ,增加报道信
息量 ,提高印刷质量 ,本刊自 2009 年第 1 期开始由原 160 页扩版至 168 页 ,由现 70 g 双胶印
刷改为 80 g 铜板印刷。鉴于 2009 年 1 期开始页码增加 ,印刷纸张成本增加 ,从 2009 年第 1
期开始《中草药》杂志每册定价由 19180 元调至 25100 元。
《中草药》杂志编辑部
·013· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月