全 文 ：·922· 中簟蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
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t／rain
s1～S4一温莪术药材12～15号R一共有模式图
S1--$4一RhizomaCurcumae1——15R-commonpattern
图5不同采收期温莪术HPLC指纹图谱
Fig．5HPLCFingerprintofRhizomaCurcumae
fromdifferentcollectionperiods
产地的温莪术药材的HPLC指纹图谱进行相似度评
价，结果表明其指纹图谱相互间较为吻合，虽然由于
样品的个体差异，特征峰的相对量存在一定的差异，
但整体轮廓均符合共有特征。同时从药材整体色谱
图人手，选取了11个特征峰构成了温莪术的指纹图
谱，以共有模式作为温莪术的鉴别标准，能提供更全
面的质量控制信息。实验证明该方法操作性强，重现
性好，可以作为温莪术内在质量控制的评价方法，同
时也可作为莪术主成分制剂指纹图谱研究的基础。
3．2不同产地温莪术药材指纹图谱的相关系数均
大于0．90，相关性良好，表明虽然产地不同，但化学
成分却相对稳定，反应了其具有较高的遗传稳定性。
3．3不同采收期温莪术样品虽然成分的量有差异，
但其色谱概貌一致，符合温莪术药材的指纹特征。
参考文献：
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不同种源鱼腥草中甲基正壬酮变异规律研究
吴令上1，斯金平H，周 慧1，诸 燕1，蓝云龙2
(1．浙江林学院天然药物研发中心，浙江临安311300)2．丽水市林业科学研究所，浙江丽水323000)
摘要：目的揭示全国主产区鱼腥草种质资源甲基正壬酮量变异规律，为鱼腥草优良品种选育提供基础。方法
用气相色谱法测定23个种源鱼腥草中甲基正壬酮的量，并分析形态特征、地理位置、生长性状与甲基正壬酮的关
系。结果不同种源鱼腥草中甲基正壬酮存在显著差异，与纬度呈正相关，与植物形态存在一定的关系，与植株高
度和地径没有显著的相关性。结论 鱼腥草种质资源甲基正壬酮的量存在一定的变异规律，针对鱼腥草甲基正壬
酮选择新品种时，应优先考虑在纬度高、生长快的种源中选择。
关键词：鱼腥草；种源；甲基正壬酮；气相色谱法
中围分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06—0922—04
鱼腥草Houttuyniacord taThunb．具有清热
解毒、消痈排脓、利尿通淋等功能，用于肺痈吐脓、痰
热喘咳、热淋、热痢、痈肿疮毒等症[1]，是常用的大宗
药材。建立鱼腥草GAP基地是保证原料供应及成药
“安全、有效、稳定、可控”的关键，而开展鱼腥草种质
资源遗传多样性研究，选育有效成分量高且稳定的
优良品种是建立GAP基地的基础。本实验用气相色
谱法对立地条件、栽培时间、田间管理、施肥种类、施
肥时间与数量、采收与加工方法等方面均一致的23
个全国主产区鱼腥草种源药材中甲基正壬酮进行测
定，评价全国鱼腥草主产区种质资源，并研究其遗传
变异规律，为选育鱼腥草优良品种提供依据。
1材料与方法
1．1 材料
1．1．1供试样品：试验用的鱼腥草包括江西、贵州、
福建、云南、浙江、河南、湖南、广西、重庆、四川、安徽
等省23个种源，根据生长期的主要形态特征(表1)，
可将其分为两个类型(表2)；类型1主要表现为生长
收稿日期：2007．09—21
蕹喜番异：羹琴皇搿技奠翌墨只浙(20江05平c阳32人05，2硕)984 士研究生，从事药用植物遗传育种。 E—mail：shan92002012@163．eolll作者简介：吴令上(1 一 ，女，浙江平阳人，硕士研究生，从事药用植物遗传育种。 一 2@
*通讯作者斯金平E—mail：lssjp@163．com
万方数据
中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·923·
初期叶绿色，茎节间较长，生长盛期叶翠绿色，叶缘
波状，茎浅红色；类型2主要表现为生长初期叶带紫
红色，茎节间较短，生长盛期叶墨绿色，叶近全缘，茎
紫红色、浅红色或绿色，其中云南省会泽县种源根据
生长盛期茎的颜色分为2个变异群体。
供试种源2006年10月统一种植于浙江省临安
市浙江林学院药材试验基地，东经118。517，北纬29。
567；海拔100m；年平均气温15．80℃，7月平均温度
℃，极端低温一13．30℃；历年平均日照时数l939
h，无霜期234d；年平均降水量18002000mm。
2007年4～7月，分别记录各个种源的形态特征，
2007年7月19～25日统一采收，并随机测定25株鱼
腥草高度与地径。
1．1．2试剂：甲基正壬酮对照品(批号：110834—
200502，中国药品生物制品检定所)，蒸馏水，醋酸乙
酯(分析纯)，无水乙醇(分析纯)。
28．10℃，1月平均温度为3．40℃，极端高温41．902鱼腥草挥发油中甲基正壬酮测定
表1 23个鱼腥草种源殛主要形态特征
Table1 GeographicSOIlrc骼of23H．cordataandtheirmajormorphoIogicaIcharacteristics
1．2．1采样及样品预处理：鱼腥草鲜草且在生长旺
季采收挥发油得率较高[2]，因此于2007年7月每个
种源随机采集鱼腥草全草若干株，每个样品分别用
蒸馏水洗净．晾干，均准确称取60g后切碎。每个样
品从采样到提取的预处理时间均控制在1h以内。
1．2．2挥发油的水蒸气蒸馏法提取：分别将切碎的
鱼腥草鲜品放入500mL的烧瓶中，按物料比1：5
加入300mL蒸馏水及沸石数块，振摇后，连接好挥
发油提取器，蒸馏提取4h，冷却30min收集挥发油，
再用醋酸乙酯定容至1mL。
1．2．3色谱条件：Agilent6890N气相色谱仪，FID
检测器；程序升温：60℃(20℃／min)一95℃(107，5
℃／rain)一100C(30℃／rain)一210℃(5’)；进样口
温度：150‘C，检测器温度：230℃，体积流量：3mL／
min；载气：N2；H2：40mL／min；空气：400mL／min；
不分流恒流进样1弘L。在此条件下，标样与样品中的
甲基正壬酮可达到良好的分离，色谱图见图1。
11．935
6 8 10 12 14 6 8 10 12 14
t／min
圈1 甲基正壬酮(A)和鱼腥草样品(B)气相色谱图
Fig．1GCChromatogramsofmethyl-ti—nonyl
ketone(A)andH．cor atasample(B)
1．2．4对照品溶液的制备：取甲基正壬酮对照品
80．06mg，用无水乙醇定容至10mL，即得8．006
万方数据
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mg／mL，为储备液。再取1mL储备液，用无水乙醇
稀释至10mL，即800．6pg／mL对照品溶液。
1．2．5供试品溶液的制备：将24个样品挥发油各
从1mL中分别取400pL，用醋酸乙酯稀释至5mL，
分别以1pL注入气相色谱仪，每个样品重复进样
2～3次。
1．2．6标准曲线及线性范围：取适量的对照品溶液
分别用醋酸乙酯配制成0．08006、0．16012、
0．8006、1．6012、2．4018、3．2024mg／mL对照品
溶液，分别以1弘L注入气相色谱仪，以质量浓度为
纵坐标，色谱峰面积为横坐标作图，得到线性回归方
程为Y=0．0014X一0．1008，r一0．9995，进样在
0．08006～3．2024mg／mL线性关系良好。
1．2．7稳定性试验：精密吸取供试品溶液1弘L，分
别在0、4、8、12、16、24h进样，其峰面积的RSD为
1．92％(咒=6)，即甲基正壬酮在24h内较稳定。
1．2．8精密度试验：取对照品溶液0．8006mg／
mL，在所建立的测定条件下，连续测定5次，结果甲
基正壬酮的峰面积RSD为1．15％，符合要求。
1．2．9重现性试验：精密称取同一批样品，按供试
品溶液制备方法分别制备6份供试品溶液，在所建
立的测定条件下进行测定，结果RSD为1．99％。
1．2．10加样回收率试验：取同一样品适量，以甲基
正壬酮的量计算以1：0．8、1：l、1：1．2的3种质量
浓度分别精密吸取对照品溶液，并定容至1mL，在
所建立的测定条件下进样，加样回收得到的平均回
收率为99．33％，RSD为1．39％(，l=9)。
2结果与分析
2．1不同种源鱼腥草中甲基正壬酮的量差异：结果
见表2。
通过24个鱼腥草样品气相色谱分析中甲基正
壬酮量的测定，结果表明不同种源鱼腥草中甲基正
壬酮的量存在显著差异，最高的浙江嘉善种源量达
到0．3003mg／g，最低的福建沙县种源为0．0148
nag／g，两者相差20．29倍，种源间甲基正壬酮的量
达到极显著差异，方差分析结果见表3。
2．2不同种源鱼腥草中甲基正壬酮量与地理位置
的关系
对23个鱼腥草样品中甲基正壬酮的量与种源
经纬度进行相关分析，结果甲基正壬酮的量与种源
纬度呈正相关，相关系数ro．，。(22)=0．3452
正壬酮量高的浙江嘉善和河南正阳种源均来自高纬
表2不同种源鱼腥草的类型、甲基正壬酮的■
及檀株高度与地径
Table2 Methyl-n—nonylketonecontents，types，
heights．anddiametersof日．cordata
fromdifferentprovenances
甲基正壬酮／
编号 种源 类型植株高度植株地径(mg．g一1)／“ ／cm
(n：2)
1 江西永丰 1 23．80 0．29 o．1237
2 贵州贵阳 1 25．00 0．29 0·1527
3 福建沙县 2 23．20 0．31 0．0148
4 云南会泽 2 15．30 0．28 0．1801
5 云南会泽 2 18．60 0．37 0·1550
6 贵州安顺 2 20．10 0．29 0·2263
7 浙江莲都 1 28．80 0．29 o．1246
8 河南正阳 2 17．30 0．23 0·2568
9 浙江庆元 1 23．10 0．32 0．2046
lO 湖南长沙 1 28．60 0．28 0．2128
11 广西柳州 2 23．00 0．36 0．1373
12 重庆开县 2 16．20 0．25 0·1919
13 浙江嘉善 1 18．10 0．29 0．3003
14 四JII西昌 2 8．10 0．20 0．0993
15 浙江开化 2 9．20 0．27 0．110
16 安徽绩溪 2 11．30 0．24 0．1217
17 浙江永康 I 21．30 0．31 0．2068
18 浙江泰顺 1 23．10 0．26 0．1843
19 浙江嵊州 l 19．60 0．25 0．1584
20 浙江长兴 1 20．70 0．20 0．1734
21 浙江松阳 1 25．00 0．32 0．2065
22 浙江缙云 1 22．40 0．30 0．1687
23 浙江云和 l 21．50 0．23 0．2044
24 浙江青田 1 23．20 0．34 0．1603
种源均值 20．30 0．28 0．1698
表3不同种源鱼腥草甲基正壬酮■方差分析
Table3 Analysisofvarianceofm thyl--n·-
nonylketonecontenti H·cordata
fromdifferentprovenances
Fo．05(23．27)一1．9396，Fo01(23，27)=2·5697
度地区，四川西昌种源甲基正壬酮量低其纬度也低。
选择甲基正壬酮量高的鱼腥草新品种可在纬度较高
的地区进行，以提高选择效率。
2．3 鱼腥草甲基正壬酮的量与植物形态特征的关
系：从表2可见，不同类型鱼腥草中甲基正壬酮量存
在一定的差异，类型1鱼腥草中甲基正壬酮的量均值
为0．1844mg／g，类型2鱼腥草中甲基正壬酮的量均
值为0．1491 mg／g，类型1的量均值大于类型2。
2．4不同种源鱼腥草中甲基正壬酮的量与生长性
状的关系：对23个种源鱼腥草植株高度、地径调查
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·925·
统计结果，植株高度平均值分别为20．30cm，变幅分 幅为0．20～o．37cm，不同种源间鱼腥草的植株高
别为8．10--一28．8cm；植株地径平均值为0．28cm，变 度、地径差异显著(表4)。
裹4不同种源鱼腥草檀株高度、地径方差分析
Table4 Analysisofvarianceofh ightsandiametersofH．cordatafromdifferentprovenances
Fo05(23，576)一1．5481，，001(23，576)=1·8429
为考察鱼腥草甲基正壬酮量与鱼腥草生长性状
是否相关，笔者对不同种源鱼腥草甲基正壬酮的量
与相应的植株高度和地径均值进行相关分析，结果
鱼腥草中甲基正壬酮的量与植株高度和植株地径没
有显著的相关性。研究结果表明选育优质与高产的
鱼腥草新品种将成为可能。
3结论与讨论
本研究结果表明，不同种源鱼腥草中甲基正壬
酮的量存在显著差异，并存在一定遗传变异规律。与
纬度呈正相关，随着纬度的增加甲基正壬酮的量呈
增加的趋势，浙江嘉善种源鱼腥草中甲基正壬酮的
量最高；与植物形态存在一定的关系，生长初期叶绿
色，生长盛期叶翠绿色，叶缘波状，茎节间较长类型
的鱼腥草中甲基正壬酮的量较高；与植株的高度与
地径没有显著的相关性。因此，在针对鱼腥草有效成
分甲基正壬酮选择新品种时，应优先考虑在纬度高、
生长快的种源中选择。
比较前人对鱼腥草种质的质量研究，本实验得
到的甲基正壬酮的量明显高于阮桂平等[33的试验结
果，主要原因可能是样品采收时间、加工等的差异。
与周日宝等[41对鱼腥草不同品系质量的比较研究结
果相比，本实验中不同种源鱼腥草甲基正壬酮的量
变幅更大，主要原因可能是样品来源区域上的差异，
本研究的鱼腥草种源基本包括了全国主产区，经度
102～3～120～9E，纬度24。3’～32。77N，较为完全地代
表鱼腥草遗传多样性，而周日宝等[41试验材料的种
质仅来源于宁远县；吴卫等口]的试验材料均来自四
川省，其中3个野生居群分别来自邛崃、雅安严桥和
雅安望渔，2个栽培居群分别来自眉山和芦山，样品
来源地理区域小且环境等因素的干扰多，一定程度
影响种质资源评价的效果。本实验采集栽培立地条
件、栽培时间、田间管理、施肥种类、施肥时间与数
量、采收与加工方法等方面均完全一致的23个鱼腥
草种源药材，与已有的研究比较，采样方法更为科
学，尽可能消除除种质资源外其他因素的干扰，结果
更为可靠；在鱼腥草全分布区收集种质资源，研究结
果基本代表了我国鱼腥草种质现状。
鱼腥草甲基正壬酮的量与地理分布、形态特征
存在相关性，表明不同种质鱼腥草甲基正壬酮的量
具有明显的遗传性。但中药的疗效是多成分协同作
用的结果，进一步开展种质对鱼腥草主要次生代谢
产物(涵盖大多数活性成分)的影响，分子标记为依
据的遗传基础研究，以及分子标记、形态标记与主要
次生代谢产物相关关系的研究，对于进一步挖掘基
因资源，揭示鱼腥草质量、产量变异规律，控制鱼腥
草药材质量具有重要的理论价值与应用价值。
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万方数据
不同种源鱼腥草中甲基正壬酮变异规律研究
作者： 吴令上， 斯金平， 周慧， 诸燕， 蓝云龙
作者单位： 吴令上,斯金平,周慧,诸燕(浙江林学院天然药物研发中心,浙江,临安,311300)， 蓝云龙(丽
水市林业科学研究所,浙江,丽水,323000)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
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