全 文 ：黄芪甲苷对短暂性前脑缺血模型大鼠海马神经再生的影响
王 　畅 ,张艳军 3 ,冯 　英 ,庄朋伟 ,王 　静 ,刘 　慧 ,王林林
(天津中医药大学中药学院 ,天津 　300193)
摘　要 :目的 　观察黄芪甲苷对短暂性前脑缺血大鼠海马神经干细胞增殖、分化的影响 ,探讨其促进神经发生和分
化的作用。方法 　雄性 SD 大鼠随机分为假手术组 ,模型组 ,黄芪甲苷高、低剂量组 (4、2 mg/ kg) ,每组 10 只。短
暂性前脑缺血后黄芪甲苷 ip 给药 ,模型组和假手术组 ip 给予生理盐水 ,1 次/ d ,ip BrdU 10 mg/ kg ,2 次/ d ,标记增
殖细胞。各组分别于第 7、14 天后取脑组织 ,冰冻切片 ,行 BrdU 免疫荧光染色显示海马区域增殖的细胞 ,BrdU 与
MA P22 , GFA P 等免疫荧光双标染色显示海马区域干细胞来源的成熟神经细胞和星形胶质细胞 ;取海马组织 ,Real
Time RT2PCR 法检测基本成纤维细胞生长因子 (bF GF) 、神经生长因子 (N GF) 、脑源神经营养因子 (BDN F) 、血
管内皮生长因子 (V EGF) mRNA 的表达。结果 　黄芪甲苷高、低剂量 ,作用 7 d 后 ,可增加海马 D G 和 CA1 区
BrdU 阳性细胞数量和海马 CA1 区 BrdU/ GFA P 阳性细胞数量 ;作用 14 d 后 ,可显著增加海马 D G 区 BrdU/
MA P22 双阳性细胞数量。其中 ,黄芪甲苷低剂量 (2 mg/ kg) 作用 7 d 后可显著上调 N GF mRNA 表达。结论 　黄
芪甲苷能够促进海马区神经干细胞增殖、分化 ,很可能与其上调 N GF mRNA 表达有关。
关键词 :黄芪甲苷 ; 神经再生 ; 神经干细胞 ; 增殖 ; 分化
中图分类号 :R286110 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2009) 05 0754 05
Effect of astragaloside Ⅳon neurogenesis in adult hippocampus of rats
af ter transient forebrain ischemia
WAN G Chang , ZHAN G Yan2jun , FEN G Ying , ZHUAN G Peng2wei ,
WAN G Jing , L IU Hui , WAN G Lin2lin
(College of Chinese Materia Medica , Tianjin University of Traditional Chinese Medicine , Tianjin 300193 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he influence of ast ragaloside Ⅳon proliferation and differentia2
tion of neural stem cells in adult hippocamp us after t ransient forebrain ischemia. Methods 　The SD rat s
were randomly divided into Sham group , model group , ast ragalo side Ⅳ high dosage t reat ment group
(4 mg/ kg) , and ast ragaloside Ⅳlow dosage t reatment group (2 mg/ kg) . After t ransient forebrain ische2
mia , ast ragaloside Ⅳwas ip administ ration , Sham group and model group were ip administ ration of saline
once per day. 52Bromodeoxyuridine (BrdU , 10 mg/ kg) was ip administ ration to label p roliferating cells
twice per day. The rat s were sacrificed to be breaken out brain tissues as specimens af ter which t hey were
t reated by medicine for 7 and 14 d. By immunohistochemical immunofluorescence technique , t he effect of
every group on t he immunoreactivity of BrdU , BrdU/ microt ubule2associated protein22 ( MA P22 ) and
BrdU/ glial fibrillary acidic p rotein ( GFA P) af ter t ransient forebrain ischemia were observed for p rolifera2
tion and differentiation of neural stem cells in t he adult hippocamp us. Simultaneity , Real Time polymerase
chain reaction ( Real Time2PCR) was used to detect expression of bF GF , N GF , BDN F , and V EGF mRNA
of adult hippocamp us. Results 　Ast ragaloside Ⅳ, high and low dosage t reat ment group s , could increase
t he quantity of BrdU positive cells in D G and CA1 and BrdU/ GFA P bot h positive cells in CA1 af ter admin2
ist ration 7 d , and could increase t he quantity of BrdU/ MA P22 both positive cells in D G after administ ration
14 d. Among t hem , ast ragaloside Ⅳ, low dosage t reat ment group (2 mg/ kg) , could up2regulate t he ex2
pression of N GF mRNA of adult hippocamp us af ter administ ration 7 d. Conclusion 　Astragaloside Ⅳcould
promote p roliferation and neuronal differentiation of t he neural stem cells , it may relate to up2regulation of
t he exp ression of N GF mRNA of adult hippocamp us.
Key words : ast ragaloside Ⅳ; neurogenesis ; neural stem cells (NSCs) ; p roliferation ; differentiation
·457· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
3 收稿日期 :2008209205　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30472177)
作者简介 :王　畅 (1984 —) ,女 ,河北省石家庄市人 ,硕士研究生 ,从事中药药理研究。
Tel : 13652136081 　E2mail : wangchang313 @163. com3 通讯作者　张艳军
　　人们通过不断实践证明了神经干细胞 ( neural
stem cells , NSCs) 的存在 ,并分离培养成功 ,对于
中枢神经系统发育成熟后不可能再生的理论提出了
挑战 ,为神经系统损伤修复和神经退行性疾病的中
枢神经功能重建带来了希望。NSCs 不仅具有自我
更新的能力 ,还具有多分化潜能 ,能分化为神经元、
星形胶质细胞、少突胶质细胞。NSCs 增殖、分化、
成熟是神经再生的 3 个阶段。动员内源性 NSCs ,
为中枢神经结构和功能的重建提供了新的策略。本
实验室前期体外实验研究表明 ,具有补气作用中药
黄芪的提取物黄芪甲苷 (黄芪苷 Ⅳ) ,可以明显提高
成熟神经元比例[1 ] ,提示黄芪有可能用于神经系统
疾病的治疗。本研究观察黄芪甲苷对短暂性前脑缺
血模型大鼠海马神经干细胞增殖、分化及基本成纤
维细胞生长因子 ( bF GF) 、神经生长因子 (N GF) 、
脑源神经营养因子 (BDN F) 、血管内皮生长因子
(V EGF) 基因表达的影响 ,探讨黄芪甲苷是否通过
促进神经再生 ,发挥神经损伤修复作用。
1 　材料
111 　动物 :雄性 SD 大鼠 ,体质量 250～300 g ,购于
北京维通利华实验动物有限公司 ,合格证号 SCXK
(京) 200720001。
112 　仪器 :射频双极电凝器、脑立体定位仪、ABI
7300 型实时定量 PCR 仪、微型动脉夹等。
113 　药品与试剂 :黄芪甲苷 (质量分数 95 %) ,购
于泰安中荟植物生化有限公司。抗体 :鼠抗β2t ubu2
lin Ⅲ (t uj) 单克隆抗体、兔抗鼠多克隆抗体 MA P22
(Santa) ;鼠抗 BrdU 单克隆抗体、兔抗鼠多克隆抗
体 GFA P、羊抗鼠2FITC、羊抗兔2FITC、羊抗兔2
TRITC (北京中杉金桥生物技术有限公司) ;羊抗
鼠2Cy3 (Sigma) ; TritonX2100、多聚甲醛、4′,6′2Di2
amidine22′2p henylindole dihydrochloride ( DA PI )
(Sigma) 。TRNzol 总 RNA 提取试剂盒 ,天根生化
科技 (北京) 有限公司 ; PrimeScript TM R T Reangent
Kit ( Perfect Real Time) Ta KaRa 批号 B K601 ;
SYBR○R Premix Ex TaqTM ( Perfect Real Time )
Ta KaRa 批号 B K5603 ;Real Time2PCR 引物由上海
生物工程技术服务有限公司合成 ,引物序列见表 1。
2 　方法
211 　大鼠前脑缺血模型复制 :参照 Nakatomi 等[ 2 ]
方法 ,稍作改进复制大鼠前脑短暂性缺血模型。
10 % 水合氯醛 ip 麻醉 (350 mg/ kg) 大鼠 ,分离出
颈总动脉 ,用棉线套扣埋于皮下 ,缝合切口。大鼠转
移到立体定位仪上 ,俯卧。头向下倾斜30°固定。
表 1 　引物序列
Table 1 　Sequences of primer
基因 引物序列
β2actin 正向 :A GA GGGAAA TCGT GC
反向 :CGA TA GT GA T GACCT
N GF 正向 : GGACGCA GCT T TCTA TCCT GG
反向 :CCCTCT GGGACA T T GCTA TCT G
bF GF 正向 : GGAA GGGA GAAA GT T GCA T T TAAAC
反向 :CCGT TCGGCGGA GCT T
BDNF 正向 :CA GGGGCA TA GACAAAA G
反向 :CT TCCCCT T T TAA T GGTC
V EGF 正向 :ACGAA GCGCAA GAAA TCCC
反向 : T TAACTCAA GCT GCCTCGCC
在枕骨下沿背正中分离肌肉 ,找到第一颈椎后弓上
的横突孔 ,用电凝针插入 2～3 mm 灼断孔中的椎动
脉。大鼠放回饲养笼中 ,禁食过夜 ,自由饮水。缺血
24 h 后 ,清醒状态下拆开颈部缝线 ,用动脉夹夹闭
双侧颈总动脉 ,造成四血管关闭 6 min ,然后放开动
脉夹再灌注。实验过程中 ,保持肛温 (37 ±015)
℃,以大鼠出现意识消失、眼球苍白、瞳孔散大、翻正
反射消失为模型成功标志。模型不成功或出现惊厥
癫痫状态的大鼠弃除。
212 　动物分组、给药及标本采集 :雄性 SD 大鼠随
机分为假手术组 ,模型组 ,黄芪甲苷高、低剂量 (4、2
mg/ kg) 组 ,每组 10 只。除假手术组外其余各组按
211 项方法造模 ,模型成功后给药组 ip 黄芪甲苷 ,
模型组和假手术组 ip 等量生理盐水 ,1 次/ d。各组
动物 ip 给予 BrdU 10 mg/ kg ,2 次/ d ,标记增殖细
胞[3 ] 。各组分别于第 7、14 天后取脑组织 ,冰冻切
片 ,行 BrdU 免疫荧光染色显示海马区域增殖的细
胞 ,BrdU 与 MA P22 , GFA P 等免疫荧光双标染色
显示海马区域干细胞来源的成熟神经细胞和星形胶
质细胞 ,计算阳性双标阳性细胞数 ;取海马组织 ,
Real Time R T2PCR 法检测 bF GF、N GF、BDN F 和
V EGF mRNA 的表达。
213 　荧光免疫组织化学染色检测 BrdU 单标、
BrdU 和 MA P22 双标的阳性细胞数 :各组心脏灌
注 ,4 % 多聚甲醛 (011 MPB) 固定 ,分别用 10 %、
20 %、30 % 蔗糖溶液 (011 MPB) 逐级沉降 ,冰冻切
片 ,PBS 洗 ,枸橼酸 (p H 6. 0) 水浴 95 ℃热修复 5
min ,50 % 甲酰胺 ×2SSC 65 ℃孵育脑片 2 h , 2
mol/ L HCl 37 ℃孵育脑片 30 min ,011 mol/ L 硼
酸缓冲液室温中和 10 min ,胃酶消化液室温孵育 5
min ,0105 % Triton 15 min ,正常羊血清室温封闭
30 min ,小鼠抗 BrdU 单克隆抗体 (1 ∶100) 孵育脑
片 4 ℃过夜[或 BrdU 和 MA P22 ( GFA P) (各 1 ∶
100) 孵育脑片 4 ℃过 2 夜 ] ,复温 30 min ,羊抗小
·557·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
鼠二抗 C Y3 (1 ∶400) 孵育 1 h [或羊抗小鼠二抗
CY3 (1 ∶400) 和羊抗兔 FITC (1 ∶50) 孵育 1 h ] ,
50 % 甘油封片 ,镜下观察并照相。
214 　Real2Time PCR 检测目的基因 : 按试剂盒
提供的方法提取脑组织 RNA ,检测总 RNA 质量 ,将
总 RNA 合成单链 cDNA ,最后以 cDNA 进行定时定
量 PCR。Real2Time PCR 反应 :以β2actin 作为内参
照 ,取各组 RT 反应产物按试剂盒配制 PCR 反应液。
Real2Time PCR 反应 :1 ×(95 ℃、30 s) ;40 ×(95 ℃、
5 s ;60 ℃、31 s) ;1 ×(72 ℃、10 min) 。在 Real2Time
PCR 仪上检测各样本基因表达 ,根据 Ct 值 ,以假手
术组作为标准 ,计算各组基因表达为假手术组的倍
数 ,以此倍数作统计。计算公式如下 : 表达倍
数 = 2 [ (Ct 用药β2actin - Ct用药目的基因) - (Ct 假手术β2actin - Ct假手术目的基因) ]
3 　结果
311 　黄芪甲苷作用 7 d 的实验结果
31111 　对短暂性前脑缺血 7 d 后大鼠海马 BrdU
和 BrdU/ GFA P 的免疫荧光组织化学染色阳性细
胞数的影响 :荧光组织化学染色结果可见 ,在荧光显
微镜下 BrdU 阳性细胞可在细胞核内见到红色特异
性荧光染色 , GFA P 阳性细胞可在细胞胞浆内见到
绿色特异性荧光染色。与假手术组比较 ,模型组 7
d 后海马 D G 和 CA1 区 BrdU 阳性细胞数量无显
著性差异 ,在 D G 区 BrdU 和 GFA P 双阳性细胞明
显增加 ;黄芪甲苷高、低剂量均可增加海马 D G 和
CA1 区 BrdU 阳性细胞数量和海马 CA1 区 BrdU/
GFA P 阳性细胞数量。结果见表 2。
表 2 　短暂性前脑缺血 7 d 后各组大鼠海马区域 BrdU
和 BrdU/ GFAP 阳性细胞数 ( x ±s , n = 4)
Table 2 　Number of positive cells of BrdU and BrdU/
GFAP of adult hippocampus of rats 7 d
after transient forebrain ischemia
in different groups ( x ±s , n = 4)
组别
剂量/
(mg·kg - 1 )
DG区
BrdU BrdU/ GFAP
CA1 区
BrdU BrdU/ GFAP
假手术 - 5150 ±6114 0125 ±0150 3 3100 ± 2158 0
模型 - 15150 ±7105 4150 ±5169 △ 5150 ± 4143 0
黄芪甲苷 2 41150 ±9117 △3 5100 ±2145 △ 26175 ± 6140 △3 1100 ±0100
4 55150 ±7178 △3 6100 ±1141 △ 51100 ±14114 △3 5100 ±1141 △3
　　与假手术组比较 : △P < 01 05 ; 与模型组比较 : 3 P < 0105
　　△P < 01 05 vs Sham group ; 3 P < 01 05 vs model group
31112 　对短暂性前脑缺血 7 d 后大鼠海马 bF GF、
N GF、BDN F mRNA 表达的影响 :与假手术组比较 ,
模型组 bF GF mRNA 表达显著性降低 , N GF、
BDN F mRNA 表达无显著性差异。黄芪甲苷低剂
量可显著性增加 N GF mRNA 表达 ,结果见表 3。
表 3 　短暂性前脑缺血 7 d 大鼠海马 bFGF、NGF、
BDNF mRNA 表达的变化 ( x ±s , n = 5)
Table 3 　Expression of bFGF, NGF, and BDNF mRNA
in adult hippocampus of rats 7 d after ischemia
in different groups ( x ±s , n = 5)
组别 剂量/ (mg ·kg - 1 ) bF GF N GF BDNF
假手术 - 01 97 ±01 07 3 1104 ±01 31 11 05 ±0134
模型 - 01 72 ±01 08 △ 1133 ±01 20 01 80 ±0106
黄芪甲苷 2 01 71 ±01 24 3114 ±01 22 △3 01 96 ±0145
4 01 59 ±01 02 △ 1137 ±01 13 01 63 ±0107 △
　　与假手术组比较 : △P < 01 05 ; 　与模型组比较 : 3 P < 01 05
　　△P < 01 05 vs Sham group ; 　3 P < 0105 vs model group
312 　黄芪甲苷作用 14 d 后实验结果
31211 　对短暂性前脑缺血 14 d 后大鼠海马 BrdU/
MA P22 和 BrdU/ GFA P 免疫荧光化学染色阳性细
胞数的影响 :荧光组织化学染色结果可见 ,在荧光显
微镜下 BrdU 阳性细胞可在细胞核内见到红色特异
性荧光染色 ,MA P22 阳性细胞可在细胞胞浆内见到
绿色特异性荧光染色。
与假手术组比较 ,模型组 14 d 大鼠海马 D G 和
CA1 区 BrdU/ MA P22 和 BrdU/ GFA P 双阳性细胞
数均无明显差异。黄芪甲苷高、低剂量可显著增加
海马 D G 区 BrdU/ MA P22 双阳性细胞数量。结果
见表 4。
表 4 　短暂性前脑缺血 14 d 后各组大鼠海马区域 BrdU 和
BrdU/ GFAP 阳性细胞数 ( x ±s , n = 4)
Table 4 　Number of positive cells of BrdU and BrdU/
GFAP of adult hippocampus of rats 14 d
after transient forebrain ischemia
in different groups ( x ±s , n = 4)
组别
剂量/
(mg·kg - 1 )
DG区
BrdU/ MAP22 BrdU/ GFAP CA1 区BrdU/ MAP22 BrdU/ GFAP
假手术 - 11100 ±2194 2125 ±1126 3100 ± 0182 1125 ±0150
模型 - 23100 ±3116 3100 ±1163 6150 ± 5192 0150 ±0158
黄芪甲苷 2 34125 ±5161 △3 4100 ±1141 7125 ± 2187 0150 ±1100
4 35125 ±2122 △3 6150 ±2152 26125 ±12138 △ 5150 ±6140
　　与假手术组比较 : △P < 01 05 ; 与模型组比较 : 3 P < 0105
　　△P < 01 05 vs Sham group ; 3 P < 01 05 vs model group
31212 　对短暂性前脑缺血 14 d 后各组海马
V EGF、N GF、BDN F mRNA 表达的影响 :各组间
V EGF、N GF、BDN F mRNA 的表达均无明显差异 ,
结果见表 5。
4 　讨论
　　成年海马是学习和记忆的重要中枢 ,而且对缺
血等损伤极其敏感 ,一旦海马等结构受到缺血等不
可逆性损伤 ,随之出现痴呆症状。尽管海马是公认
的具有神经再生活性的区域 ,但通常只有齿状回颗
·657· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
表 5 　短暂性前脑缺血 7 d 各组大鼠海马 VEGF、NGF、
BDNF mRNA 表达的变化 ( x ±s , n = 5)
Table 5 　Expression of VEGF, NGF, and BDNF mRNA
in adult hippocampus of rats 7 d after ischemia
in different groups ( x ±s , n = 5)
组别 剂量/ (mg ·kg - 1 ) V EGF N GF BDN F
假手术 - 01 95 ±0118 1101 ±01 20 0183 ±01 08
模型 - 01 92 ±0158 0180 ±01 34 0186 ±01 37
黄芪甲苷 2 01 88 ±0120 0174 ±01 36 0175 ±01 19
4 01 90 ±0148 0154 ±01 14 △ 1106 ±01 40
　　与假手术组比较 : △P < 01 05
　　△P < 01 05 vs Sham group
粒细胞一种神经细胞能够持续发生 ,而占海马神经
细胞总数 92 %～95 % 的锥体细胞在正常成年脑中
一般认为不能被置换 ,但缺血性损伤可以刺激其再
生。Nakatomi 使用的大鼠短暂性前脑缺血模型即
四血管阻断法模型是目前国际上研究迟发性神经再
生机制普遍采用的模型之一。研究表明 ,短暂性前
脑缺血可以特异性引起海马 CA1 区锥体细胞变性 ,
在大鼠前脑短暂性缺血模型 ,短暂性脑缺血即可导
致该区 CA1 区锥体细胞的迟发性死亡 ( delayed
neuronal deat h , DND) ,即脑缺血再灌 2～3 d 后在
光镜下才见到 CA1 区锥体细胞的死亡。但随后即
可引起内源性的神经干细胞增殖并分化成功能性锥
体细胞 ,尽管数量较少[2 ] 。通过研究神经干细胞增
殖并分化的机制 ,并寻找在 DND 发生后能够促进
海马区功能性神经再生的有效途径 ,以治疗中风恢
复期、中风后遗症、血管性痴呆是脑缺血研究领域急
待解决的重要问题之一。
缺血性脑血管病的大鼠实验模型制备方法有多
种 ,除了 Nakatomi 使用的四血管阻断法和线栓法
外大多数为不可再通模型 ,线栓法是目前比较公认
的局灶性脑缺血模型。造模动物均存在缺血侧尾壳
核及背外侧皮层梗塞。线栓法尤其适用于基底节缺
血再灌注的病理生理机制的研究和观察。而本实验
目的是研究神经干细胞的增殖、分化 ,重点研究中药
单体对海马 CA1 区影响机制 ,因此本实验选用大鼠
前脑短暂性缺血模型 ,其中四动脉阻断法模型手术
简单 ,缺血过程容易掌握 ,效果确实 ,可在清醒状态
下进行缺血再灌注 ,符合临床的发病特征 ,并且能够
保证较高的成模率 ,可根据实验的需要通过夹闭双
侧颈总动脉时间的长短控制脑缺血的程度 ,并能进
行再灌流 ,也是研究脑缺血再灌注损伤比较常用的
动物模型之一。
大量实验研究发现大鼠全脑缺血 5～10 min 再
灌注后第 2～4 天海马区域大量神经元死亡 ,到第 7
天只有少量神经元存活下来 ,而此时 NSCs 达到增
殖高峰 ,第 11 天左右开始降低 ,第 28 天时下降到接
近正常的水平[4 ,5 ] 。目前多数学者认为脑损伤后各
类细胞释放的细胞因子可通过细胞受体刺激其分裂
增殖 ,同时又能使增殖的细胞产生和释放细胞因子 ,
这些因子反过来通过邻近、自身或者胞内效应又提
高它们的增殖[6 ] 。神经再生过程需要经过 NSCs 增
殖、分化、成熟 3 个阶段 ,最终形成功能性神经元。
因此本实验设计为两个阶段 :在大鼠全脑缺血再灌
第 7 天后检测大鼠海马 NSCs 增殖 ,第 14 天后检测
大鼠海马 NSCs 分化。
神经元标志物微管相关蛋白 ( microt ubule2
associated protein22 , MA P22) 是组成神经元细胞
骨架的重要组成成分[7 ] 。免疫组化检测 MA P22 其
抗体表达于神经元的轴突和胞体。采用荧光免疫组
化的方法同时检测 BrdU/ MA P22 双阳性细胞 ,其
细胞双阳性代表干细胞来源的增殖成熟神经元[8 ] 。
本实验结果显示 ,大鼠短暂性前脑缺血在第 14 天后
检测海马区 BrdU/ MA P22 双阳性细胞数量 ,模型
组均多于假手术组 ,但无统计学差异。
胶质纤维酸性蛋白 ( glial fibrillary acidic p ro2
tein , GFA P) 是脑内成熟星形细胞的主要中间丝蛋
白 ,是星形胶质细胞的一种标志蛋白 ,在星形细胞中
有丰富的、唯一的表达[9 ] 。脑损伤后脑组织星形胶
质细胞功能异常活跃 ,可通过分泌生长因子、细胞因
子、识别分子等修复损伤的神经元 ,促进轴突再生及
诱导再生神经元的迁移 ,从而恢复神经系统正常功
能[10 ] 。星形胶质细胞还能释放某些神经营养因子 ,
作为神经元生长的调节信号 ,调节控制神经元构筑
及神经元的可塑性 ,促进中枢和周围神经轴索的生
长和存活[11 ,12 ] 。采用荧光免疫组化的方法同时检
测 BrdU + / GFA P + 细胞 ,其双阳性细胞代表干细胞
来源增殖的胶质细胞。
前期研究发现 ,黄芪甲苷对大鼠缺血再灌注的
损伤有保护作用[ 13 ] 。本实验结果发现 :黄芪甲苷
高、低剂量作用短暂性前脑缺血模型大鼠 7 d 后可
增加海马 D G 和 CA1 区 BrdU 阳性细胞数量和海
马 CA1 区 BrdU/ GFA P 阳性细胞数量 ,黄芪甲苷
低剂量可显著性增加 N GF mRNA 表达。提示黄芪
甲苷能够促进神经干细胞增殖 ,诱导其向胶质细胞
分化。其机制可能是通过促进胶质细胞生长并使其
分泌 N GF 生长因子等 ,N GF 能够修复损伤的神经
元和促进 NSCs 分化成神经元 ,对新生神经元进行
·757·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
保护[ 14 ,15 ] ;黄芪甲苷高、低剂量作用短暂性前脑缺
血模型大鼠 14 d 后可显著增加海马 D G 区 BrdU/
MA P22 双阳性细胞数量 ,对 N GF mRNA 无明显影
响。提示黄芪甲苷能够增加神经干细胞来源的神经
元的数量 ,黄芪甲苷是在短暂性前脑缺血后短期内
上调 N GF mRNA ,起到修复损伤的神经元和促进
NSCs 增殖的作用 ,具体的机制还需进一步研究。
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地锦草提取物抗真菌作用及对皮肤真菌超微结构的影响
李治建1 ,古力娜 ·达吾提2 ,肖 　威1 ,斯拉甫 ·艾白2 ,3 3
(11 石河子大学药学院 ,新疆 石河子 　832000 ; 21 新疆维吾尔自治区维吾尔医医院 ,新疆 乌鲁木齐 　830049 ;
31 新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所 ,新疆 乌鲁木齐 　830049)
摘 　要 :目的 　研究地锦草提取物体外抗真菌活性 ,评价其抗真菌作用 ,探讨其抗真菌作用机制。方法 　参照美国
临床实验室标准化委员会 (NCCL S) 推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M382A) ,
测定地锦草提取物对 60 株临床常见皮肤癣菌的最小抑菌浓度 (MIC) 值 ,扫描电镜和透射电镜下观察其细胞表面
形态结构变化和细胞内超微结构变化。结果 　地锦草提取物对红色毛癣菌的平均 MIC 为 446μg/ mL ,对石膏样
毛癣菌的平均 MIC 为 539μg/ mL ;扫描电镜下观察地锦草提取物作用于皮肤癣菌后 ,细胞表面皱缩不平 ,有严重
皱褶、破裂现象 ;透射电镜下可见 ,真菌细胞壁不完整 ,局部有缺损 ,厚薄不均 ;细胞膜轮廓不清 ,局部有破损 ;胞内
细胞器损伤严重 ,多见空泡化 ,细胞内成分聚集成电子密度较高的团块。结论 　地锦草提取物对真菌的生长具有
显著地抑制作用 ,可使其形态和超微结构发生明显的改变。
关键词 :地锦草提取物 ; 抗真菌 ; 最低抑菌浓度
中图分类号 :R286185 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2009) 05 0758 06
·857· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
3 收稿日期 :2008208203　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30760308)
作者简介 :李治建 (1982 —) ,男 ,河南夏邑人 ,硕士研究生 ,研究方向为药理学。E2mail : lizhijian0220 @126. com3 通讯作者　斯拉甫·艾白　Tel : (0991) 2563702 　13999193503 　Fax : (0991) 2557730