全 文 ：表 2 　13 批款冬花药材相似度计算结果
Table 2 　Results of similarity of 13 batches of Flos Fa r f a rae samples
编号 产　地 来　源 相似度 编号 产　地 来　源 相似度
1 甘肃 购买于同仁堂药店 0195 8 山西灵丘 (野生 2) 采集于山西灵丘种植基地 01 95
2 河北蔚县 购买于荣华大药房 0198 9 山西灵丘 (种植 1) 采集于山西灵丘种植基地 01 98
3 河南 万民大药房 0194 10 山西 购买于太原长城大药房 01 97
4 河南 山西华阳药业有限公司 0198 11 山西 黄河药店 01 99
5 河南 购买于太原长城大药房 0198 12 山西 万民大药房 01 97
6 河南 购买于太原万民大药房 0196 13 山西灵丘 (种植 2) 采集于山西灵丘种植基地 01 95
7 山西灵丘 (野生 1) 采集于山西灵丘种植基地 0197
21216 　PL S2DA 分析 :对 13 批药材指纹数据乾地
PL S2DA 分析 ,所得结果见图 5。由图 5 可知 ,各产
地药材分散较明显 ,其中 7 批山西产药材与 4 批河
南产药材聚集较集中 ,甘肃产药材与河南产药材聚
集在一起 ,说明这两个产地之间无明显差异 ,河北药
材与其他几产地有差异。从整体上看 ,不同产地药
材之间有一定的差异性。
图 5 　13 批药材 PLS2DA 分析结果
Fig. 5 　PLS2DA Analysis of 13 batches of samples
3 　结论与讨论
311 　所建立的 H PL C 同时测定款冬花中槲皮素和
山柰素方法简便、准确、重现性好 ,可用于款冬花药
材中黄酮醇苷类成分的质量控制 ;通过对不同主产
区不同品种款冬花药材指纹图谱研究 ,得到了对照
指纹图谱 ,该图谱可代表款冬花的特性成分 ,作为款
冬花药材鉴别依据。
312 　13 批药材的指纹图谱用中药色谱指纹图谱相
似度评价软件分析 ,结果显示相似度均大于 018 ,说
明各产地款冬花其所含化学成分无明显差异 ;而
PL S2DA 分析结果显示 ,不同产地分组较好 ,药材之
间有一定的差别。
313 　不同产地款冬花药材槲皮素和山柰素质量分
数比较 ,本研究收集了 4 个主产区的款冬花药材 ,由
表 1 的数据可知 ,山西所产的药材槲皮素和山柰素
的量都最高 ,而甘肃所产的药材槲皮素和山柰素的
量最低。
314 　不同生长方式款冬花药材槲皮素和山柰素量
的比较 ,本研究收集了山西灵丘种植和野生两种不
同生长方式的药材 ,由表 1 可知 ,两种药材中槲皮素
和山柰素的量无明显差异 ,所以生长方式不是款冬
花中槲皮素和山柰素量的主要影响因素。
315 　炮制与不炮制款冬花药材槲皮素和山柰素量
比较 ,从甘肃蜜炙与生品所得结果可以看出 ,蜜炙品
中槲皮素的量降低 ,只有生品的 70 % ,山柰素的量
基本不变 ,可知蜜炙对款冬花药材槲皮素影响较大。
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太子参 HPLC 指纹图谱研究
易智彪1 ,2 ,薄雯映1 ,许冬瑾1 ,赖小平2 3
(11 康美药业股份有限公司 ,广东 普宁 　515300 ; 21 广州中医药大学中药学院 ,广东 广州 　510405)
摘 　要 :目的 　建立太子参 HPLC 指纹图谱共有模式 ,并进行方法学考察。方法 　采用 HPLC 分析方法 ,色谱柱
为 Kromasil C18柱 ;流动相 :乙腈2水梯度洗脱 ;时间为 70 min。体积流量 : 110 mL/ min ;柱温 : 25 ℃;检测波长 :
·8031· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2008211215　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :易智彪 (1979 —) ,男 ,博士后 ,研究方向为系统生物学及中药质量控制。Tel : (0663) 3883713 　E2mail : zhibiaoyi @163. com
203 nm ;进样体积 :10μL 。结果 　标示出 21 个共有峰 ,构成太子参指纹图谱。结论 　该方法准确可靠 ,所得指纹
图谱共有模式可作为太子参药材质量控制的依据。
关键词 :太子参 ; HPLC ; 指纹图谱
中图分类号 :R28217 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0821308203
　　太子参是《中国药典》收载的常用中药之一 ,系
石竹科植物孩儿参 Pseu dostel l ari a heterop hy l l a
(Miq. ) Pax ex Pax et Hoff m. 的干燥块根[1 ] 。其
性平 ,味微苦、甘 ;归脾、肺经[2 ] 。具有“益气健脾、生
津润肺”之功效[3 ] 。其中多糖是其活性成分之一[4 ] 。
临床常用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱、气阴不
足、自汗口渴、肝燥干咳等症状 ,民间常作为强壮滋
补品[5 ] 。现代药理研究认为 ,太子参有抗疲劳、抗应
激、增强免疫 ,有延长寿命、镇咳及抗菌抗病毒等作
用[ 6 ] 。本实验通过采用高效液相色谱法研究不同产
区太子参药材的指纹图谱 ,获得其共有模式 ,为太子
参的质量控制提供依据。
1 　仪器与试药
　　Agilent 1100 高效液相色谱仪 ,包括二元泵 ,在
线脱气机 ,自动进样器 ,柱温箱 ,DAD 检测器。北京
塞多利斯天平有限公司 Sartorius BS 400S2WEI 万
分之一天平 ;MJ —600 超声波发生器 (江苏无锡市
美洁超声清洗设备有限公司) 。乙腈 (美国 Fisher
公司 ,色谱纯) ,甲醇、正丁醇均为分析纯 (广州化学
试剂厂) 、乙醇 (天津大茂化学试剂厂 ,AR) ,超纯水。
HPLC 所用试剂均经过 0145μm 微孔滤膜滤过。
太子参药材分别收集于浙江、福建等地 ,共 10
批。太子参对照药材购于中国药品生物制品检定
所。样品来源见表 1。
表 1 　太子参样品来源
Table 1 　Origins of Radix Pseudostella ria
编号 样品来源 采集时间 编号 样品来源 采集时间
s1 浙江缙云 2005212225 s6 福建宁德柘荣县山乡 2005206230
s2 浙江金华东阳 2005206225 s7 安徽郎溪县 2005211216
s3 浙江泰顺 2005212208 s8 安徽宣城黄渡乡 2005212201
s4 浙江苍南 2005206229 s9 江苏溧阳 2005211230
s5 福建柘荣县太子参市场 2005206229 s10 贵州施秉县牛大厂镇 2005203209
2 　方法与结果
211 　H PL C 条件 :色谱柱为 Kromasil C18 柱 (250
mm ×4. 6 mm , 5μm) ;流动相 :乙腈 (A)2水 (B) 梯
度洗脱 ,0～10 min :A 25 % ;10～15 min :A 25 %～
40 % ;15～20 min : A 40 %～80 % ; 20～30 min : A
80 %～85 % ; 30～40 min : A 85 % ; 40～60 min : A
85 %～100 % ; 60～70 min : A 100 %。记录时间为
70 min。体积流量 :110 mL/ min ;柱温 :25 ℃;检测
波长 :203 nm ;进样体积 :10μL 。
212 　供试品溶液的制备 :称取太子参粉末 5 g (粗
粉) ,加醋酸乙酯 30 mL ,300 W 超声提取 40 min ,
放冷 ,滤过 ,滤渣加醋酸乙酯 30 mL 分次洗涤 ,合并
滤液及洗液 , 60 ℃蒸至近干 ,加 013 g 聚酰胺
(60～80 目) 拌匀 ,加置 1 g 聚酰胺柱 (115 cm ×
20 cm)上 ,分别用 50 mL 水、50 mL 30 % 乙醇 ,50
mL 80 % 乙醇洗脱 ,收集 80 % 乙醇洗脱液 ,蒸干 ,
甲醇溶解并定容于 2 mL 量瓶中。临用前过 0145
μm 微孔滤膜 ,作为供试品溶液。
213 　方法学考察
21311 　精密度试验 :取 S10 供试品溶液 ,连续进样
6 次 ,分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积
进行考察。结果表明 ,各共有峰的相对保留时间
RSD 小于 015 % ;相对峰面积 RSD 小于 510 % ,符
合指纹图谱分析要求。
21312 　稳定性试验 :取 S10 供试品溶液 ,分别于 0、
2、4、6 h 进样分析 ,考察共有峰的相对保留时间和
相对峰面积。结果表明 ,各共有峰相对保留时间
RSD 小于 015 % ,相对峰面积 RSD 小于 510 % ,表
明供试品溶液在 6 h 内基本稳定。
21313 　重现性试验 :取 S10 供试品药材粉末 5 份 ,按
已确定指纹图谱方法制备供试品溶液 ,分别对共有峰
的相对保留时间和相对峰面积进行考察。结果表明 ,
各共有峰相对保留时间 RSD 小于 015 % ,相对峰面
积 RSD 小于 510 % ,符合指纹图谱分析要求。
214 　指纹图谱建立及相似度分析 :取不同产地的太
子参药材 ,按 212 项下方法制备供试品溶液 ,各取
20μL 分别进样 ,按 211 的色谱条件进行 H PL C 分
析 ,建立指纹图谱。以峰 15 为内参比峰标示出太
子参的 HPL C 指纹图谱中 20 个共有峰作为构成指
纹图谱稳定的特征峰 ,同时将所得到的色谱图数据
导入指纹图谱评价系统 ,进行色谱峰匹配 ,建立太子
参指纹图谱共有模式 ,并计算相似度。
按上述色谱条件分别将 10 批供试品进样分析 ,
记录色谱图 (图 1) 。在指纹图谱软件中 ,经过保留
时间校正后建立共有模式 ,由匹配结果可知 ,有 35
个峰为 10 批样品共有 ,去除峰面积 < 50 的共有峰 ,
以 20 个峰作为太子参药材的特征峰 ,其总峰面积占
所有峰总峰面积的 92 %～97 %。将共有特征峰编
为 1～20 ,相似度分析结果见表 2。各共有峰在不同
·9031·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
产地中丰度差异较大 ,其中峰 1 的峰面积占总峰面
积 10 %～20 % ,因此限制其峰面积的比值与指纹图
谱峰面积的比值差值变化应在 ±30 % 以内 ,其余
峰面积均小于 10 % ,其比值范围不作要求。经统计
共有峰面积占总峰面积百分比为 92 %～97 % ,非共
有峰面积与总峰面积的百分比为 3 %～8 %。符合
指纹图谱研究的非共有峰占总峰面积百分比 < 10 %
的技术要求。
　　将 10 批药材图谱数据导入中药色谱指纹图谱
相似度评价系统软件 ,自动匹配后生成对照图谱 ,以
此作为太子参药材的对照指纹图谱 ,进行相似度评
价 ,其计算结果见表 2 ,生成的共有模式对照指纹图
谱见图 2。10 批样品的相似度计算结果均大于
019 ,说明各产地的药材有较好的一致性。
图 1 　10 批太子参药材指纹图谱
Fig. 1 Fingerprints of ten batches of Radix Pseudostella ria
表 2 　相似度分析结果
Table 2 　Comparison of similarity in sample
样品号 相似度 样品号 相似度
1 01 992 6 01978
2 01 992 7 01990
3 01 974 8 01967
4 01 989 9 01992
5 01 981 10 01984
图 2 　太子参共有模式
Fig. 2 　Mutual mode of Radix Pseudostell a ria
in HPLC f ingerprints
3 　讨论
311 　波长的选择 :采用全波长对太子参样品进行测
定 ,并采集其三维色谱图 ,通过综合考虑该三维色谱
图在所有波长下出峰的多少 ,和各成分的分离情况以
及各色谱峰的丰度 ,最后选定检测波长为 203 nm。
312 　流动相的确定 :选择了 3 种流动相系统及其
不同流动相比例进行比较 ,包括甲醇2水、乙腈2水以
及乙腈2011 % 磷酸。结果表明 ,各种流动相中以乙
腈2水系统为最佳 ,其图谱上各个色谱峰的分离度较
好 ,保留时间适中 ,因此选此流动相系统作为太子参
H PL C 指纹图谱检测的流动相。
313 　色谱柱的考察 :选择了 3 种不同填料、规格及
厂家的色谱柱进行比较 ,包括 Dikma Kromasil C18
( 250 mm ×4. 6 mm , 5 μm ) 、Thermo ODS
(250 mm ×4. 6 mm , 5 μm) 以及 Agilent Zorbax
SB (250 mm ×4. 6 mm , 5μm) 。结果表明 ,各种色
谱柱中以 Dikma Kromasil C18 为最佳 ,所得色谱图
峰数目较多 ,峰面积较大 ,分离度良好 ,因此选此色
谱柱作为太子参 HPL C 指纹图谱检测的色谱柱。
314 　提取溶剂的考察 :选择了 4 种溶剂超声提取
进行比较 ,包括甲醇、石油醚、醋酸乙酯以及正丁醇。
结果表明 ,甲醇和正丁醇提取样品峰面积较小且杂
质较多 ,而醋酸乙酯提取样品峰面积比石油醚提取
样品大而且杂质少 ,因此选醋酸乙酯为提取溶剂。
315 　与对照药材的比对 :根据所得的共有模式 ,将
太子参对照药材色谱图与共有模式进行相似度计
算 ,以检查共有模式是否正确。经过同样的谱图处
理后 ,计算了其与共有模式的相似度。结果显示 ,两
者之间的相似度为 01990 ,说明该共有模式可用于
太子参药材的检测。
4 　结论
　　对不同产地太子参的 H PL C 指纹图谱进行比
较分析 ,各产地太子参的 HPL C 图谱中均有此 20
个共有峰 ,各峰的相对保留时间比较一致 ,并且这
20 个峰占总峰面积的 90 % 以上 ,故规定不同产地
的太子参均应检出这 20 个共有峰。经中药色谱指
纹图谱相似度评价软件处理结果表明 ,10 批太子参
的相似度为 019 以上。同时 ,所获得的指纹图谱共
有模式与太子参对照药材相似度为 01990。因此 ,
此方法所得指纹图谱可用于太子参药材的检测。
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