全 文 ：保护[ 14, 15 ] ;黄芪甲苷高、低剂量作用短暂性前脑缺
血模型大鼠 14 d后可显著增加海马 DG 区 BrdU /
MAP-2 双阳性细胞数量,对 NGF mRNA 无明显影
响。提示黄芪甲苷能够增加神经干细胞来源的神经
元的数量,黄芪甲苷是在短暂性前脑缺血后短期内
上调 NGF mRNA,起到修复损伤的神经元和促进
NSCs 增殖的作用,具体的机制还需进一步研究。
参考文献:
[ 1] 张艳军, 范 祥, 胡利民, 等1 不同治则中药单体对体外培
养神经干细胞分化的影响 [ J ]1 天津中医药, 2004, 21 ( 2) :
156-1571
[ 2] Nakatomi H1 Regen erat ion of hip pocam pal pyramidal neu-
rons after i schemic brain injury by recruitm ent of endogenous
n eural progenitors [ J]1 Cel l , 2002, 110: 429-4411
[ 3] J iang W , Gu W, Br&ann st r&o m T , e t al . Cort ical n eurogenesis
in adult rat s af ter t ransient middle cerebral artery occulasion
[ J ]1 S t roke , 2001, 32( 5) : 1201-12071
[ 4] Nakatomi H , Kuriu T1 Regenerat ion of h ippocampal pyram-i
dal neu ron s af ter ischem ic brain inju ry by recruitment of en-
dogenous neu ral progenitors [ J]1 Ce l l, 2002, 23, 110: 429-
4411
[ 5] Sharp F R, Liu J, Bernabeu R1 Neurogenesis fol lowin g brain
i schemia [ J ]1 B rain Res Dev B rain Re s, 2002, 31, 134 ( 1-
2) : 23-30.
[ 6] S ato K, H ayashi T, Sasaki C , et al . Temporal and spat ial
dif f erences of PSA-NCAM expression betw een y oun g-adult
and aged rat s in normal and ischem ic brains [ J]1 B rain Re s,
2001, 922: 135-1391
[ 7] B†dard A, Gravel C, Paren t A1 Chemical characteriz at ion of
newly generated neu ron s in the st riatum of adult primates
[ J]1 Ex p Brain Res , 2006, 170( 4) : 501-5121
[ 8] Yagita Y, Kitagaw a K, Ohtsuki T , e t al . Neurogenes is b y
progen itor cell s in the is chemic adult rat hippocampus [ J ]1
S tr oke, 2001, 32: 1890- 18961
[ 9] Baydas Q, Tuzcu M1 Protect ive ef fect s of m elaton in again st
ethano-l induced react ive gliosi s in hippocampu s and cortex of
young and ag ed rat s [ J]1 Ex p-N eur ol , 2005, 194: 175- 1811
[ 10] Korzhevskii D E, Otellin V A, Grigor. ev I P, e t a l . St ruc-
tural organizat ion of ast rocytes in th e rat hippocam pus in the
post- isch emic period [ J ]1 N eurosci B ehav Phy siol , 2005,
35: 389-3921
[ 11] T oh ru K, H en rik A, Par T, et al . In t racerebral infu sion of
glial cell line-derived neu rot rophic factor promotes st riatal
neurogenesis af ter st roke in adu lt rat s [ J]1 S tr oke, 2006, 37:
2361-23671
[ 12] Seri B, Garcia-Verdugo J M , McEw en B S, et al . Ast rocytes
give rise to new neu rons in the adult mammal ian hippocampus
[ J]1 J N eur osc i , 2001, 21: 7153-71601
[ 13] Luo Y, Qin Z, H ong Z, et al . Ast ragaloside Ô protect s a-
gain st is chemic brain in jury in a murine model of t ransient fo-
cal i schemia [ J ]1 N eur osci L et t , 2004, 363( 3) : 218-2231
[ 14] 徐正东, 李贯绯, BDNF, NGF 在大鼠局灶性脑缺血的表达
变化及葛根素对其影响的实验研究 [ J]1 中国实验诊断学,
2005, 9( 4) : 5781
[ 15] 范郁山, 罗 燕1 浅刺针法对脑梗塞大鼠的脑组织缺血半暗
带 NGF 表达的影响 [ J]1 针灸临床杂志, 2008, 24( 3) : 36-
391
地锦草提取物抗真菌作用及对皮肤真菌超微结构的影响
李治建1 ,古力娜 #达吾提2 ,肖 威1 ,斯拉甫#艾白2, 3*
( 11 石河子大学药学院,新疆 石河子 832000; 21 新疆维吾尔自治区维吾尔医医院, 新疆 乌鲁木齐 830049;
31 新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所, 新疆 乌鲁木齐 830049)
摘 要:目的 研究地锦草提取物体外抗真菌活性,评价其抗真菌作用, 探讨其抗真菌作用机制。方法 参照美国
临床实验室标准化委员会 ( NCCLS) 推荐的5产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案6 ( M38-A ) ,
测定地锦草提取物对 60 株临床常见皮肤癣菌的最小抑菌浓度 ( M IC) 值, 扫描电镜和透射电镜下观察其细胞表面
形态结构变化和细胞内超微结构变化。结果 地锦草提取物对红色毛癣菌的平均 MIC 为 446 Lg / mL , 对石膏样
毛癣菌的平均 MIC 为 539Lg / mL ;扫描电镜下观察地锦草提取物作用于皮肤癣菌后, 细胞表面皱缩不平, 有严重
皱褶、破裂现象; 透射电镜下可见,真菌细胞壁不完整,局部有缺损, 厚薄不均;细胞膜轮廓不清, 局部有破损 ;胞内
细胞器损伤严重,多见空泡化, 细胞内成分聚集成电子密度较高的团块。结论 地锦草提取物对真菌的生长具有
显著地抑制作用,可使其形态和超微结构发生明显的改变。
关键词:地锦草提取物; 抗真菌; 最低抑菌浓度
中图分类号: R2861 85 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2009) 05 0758 06
#758# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
* 收稿日期: 2008- 08-03 基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30760308)作者简介:李治建( 1982 ) ) ,男,河南夏邑人,硕士研究生,研究方向为药理学。E-m ail: liz hijian0220@ 126. com
* 通讯作者 斯拉甫# 艾白 T el: ( 0991) 2563702 13999193503 Fax: ( 0991) 2557730
Antifungi of Euphorbia humif usa extract and its effect on ultrastructure of dermatophytes
LI Zh-i jian1 , DAWU TI # Gulnar2 , XIA O Wei1 , AIBAI# Silafu2, 3
( 11 Co lleg e of Pha rmacy, Shihezi Univ ersity , Shihezi 832000, China; 2. Xinjiang U ighur Medicine H ospital,
U rumqi 830049, China; 3. Xinjiang Inst itute of T r aditional U ighur M edicine, U rumqi 830049, China)
Abstract: Objective By measuring the minimal inhibitory concentrat ion ( MIC) o f Euphorbia humif u-
sa ex tr act in vi tr o to exam ine its ant ifungal ef fect and obser ve the effect of E. humif usa ext ract on the u-l
t rastr ucture of dermatophytes, so as to explore the potent ial mechanism of it s ant ifungal act ion. Methods
Appling the standar d approved by the Nat ional Commit tee for Clinical Labo rato ry Standar ds ( N CCLS) :
Ref erence M ethod f or B roth D ilut ion A nt if ungal S uscep t ibi li ty T est ing of Filamentous F ungi ( M38-A)
to invest igat ing the MICs of E. humif usa ex tr act against 60 st rains o f common clinical dermatophy tes.
Treated the sample w ith the rout ine method, the ult rast ructure of dermatophy tes w as observ ed w ith scan-
ning electr on m icroscope ( SEM ) and transmission elect ron microscope ( TEM ) . Results The mean MIC of
E. humif usa ex tr act against T richophy ton rubrum was 446 Lg/ mL; T he mean M IC of E. humif usa ex-
tract against T richophy ton mentag rophy tes was 539 Lg/ mL. Af ter exposing to E. humif usa ex t ract , cell
surface w rinkled, and fo lds and cell br eakage w ere observ ed under SEM . T he cell w all w as incomplete,
the thickness of cell w all became uneven, the density of the cell w all decreased, and the cell membrane be-
came discont inuous w ith TEM observat ion. The organelles such as m itochondria and endoplasm ic ret icu-
lum wer e deeply damaged. T he cy toplasma w as aggr egated and some high density elect ron light ar eas as
w ell as vacuoles w ere fo rmed. Conclusion E. humif usa ext ract has a st rong antifungal ef fect w hich could
obviously change the conformat ion and the ult rast ructur e of dermatophytes.
Key words: Euphorbia humif usa ext ract; ant-i fungus; minimal inhibitor y concentr at ion ( M IC)
地锦草,维吾尔名为夏塔热其尼 ( Xiahatereq-i
ni ) , 为大戟科植物地锦 Eup hor bia hum if usa
Willd. 或斑地锦 Euphor bia maculata L. 的干燥全
草,是维吾尔医常用药材, 临床主要用于治疗手癣、
体癣、足癣、花斑癣、银屑病[ 1]。为了研究地锦草提
取物的体外抗真菌作用, 笔者参照美国临床实验室
标准化委员会 ( NCCLS) 推荐的5产孢丝状真菌的
液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案6 ( M38-
A)
[ 2]
,探讨地锦草提取物的体外抗真菌活性, 并利
用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察其作用于
皮肤癣菌后对其超微结构的影响,进一步证实其抗
真菌活性,为其抗真菌作用机制的研究提供线索。
1 材料
11 1 药物:地锦草提取物, 由新疆维吾尔自治区维
吾尔医药研究所药剂室提供, 提取方法及质量控制,
参照5中华人民共和国药品标准维吾尔药分册6中百
癣夏塔热片之地锦草提取方法及质量控制 [ 3] , 用
100% DMSO 溶解制成质量浓度为 1021 4 mg / mL
的储存液, 存于 - 60 e 冰箱备用。阳性对照药特
比奈酚,诺华公司, 批号 010482,质量分数 991 9% ,
用 DMSO 溶解制成质量浓度为 16 Lg / mL 的储存
液,存于 - 60 e 冰箱备用。
11 2 菌株: 红色毛癣菌 T r ichophy ton r ubr um 20
株, 石膏样毛癣菌 T richophy ton mentagr ophy tes
40 株,质量控制菌株为近平滑念珠菌 Cand ida pa-
r ap si losi s 1 株,均来自新疆医科大学真菌与真菌病
研究中心菌种保藏库。
11 3 试剂: RPM I 1640培养基 (美国 Gibco 公司) ;
三氮吗啡琳丙磺酸 ( MOPS, 美国 Sigma 公司) ; 马
铃薯葡萄糖琼脂培养基 ( PDA ) , 批号 20070825,北
京奥博星生物科技有限公司; 环氧树脂 ( Epon812、
DDSA、NMA、DMP-30) ,美国 SPI- CHEM。
11 4 仪器: FM 型生化培养箱,上海福玛实验设备有
限公司; 日本 Hitachi Hus ) 5GB 真空喷镀仪; 瑞典
LKB ) 7800 Knifemaker 制 刀 机; 德 国 Leica
Ultracut R超薄切片机;德国 Leo 1430VP 扫描电镜;
日本 Hitachi H ) 600 型透射电镜。
2 方法
21 1 最低抑菌浓度 ( MIC) 的测定: 根据 N CCLS
推荐的5产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏
感性试验方案6 ( M 38-A) [ 2] , 测定地锦草提取物对
60 株红色毛癣菌、石膏样毛癣菌的 M IC。
21 11 1 药物稀释液的制备: 将地锦草提取物储存
液、特比奈酚储存液,分别用 RPM I 1640 培养基倍
比稀释成 2倍终质量浓度。地锦草提取物的 2倍终
质量浓度由高向低依次为: 2 048、1 024、512、256、
128、64、32、16、8、4 Lg / mL;特比奈酚的 2倍终质量
浓度由高向低依次为: 160、80、40、20、10、5、21 5、
#759#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
11 25、01 625、01 312 5 mg/ mL。
21 11 2 菌接种液的制备:皮肤癣菌, 将受试的皮肤
癣菌接种于马铃薯培养基 ( PDA) 上, 26 e 培养
7~ 14 d,吸取 2 mL 无菌 01 85% NaCl 溶液, 冲洗
菌落表面的菌丝和孢子, 将含有菌丝和孢子的冲洗
液用血细胞计数板记数, 将其浓度调至 1 @ 105 ~
5 @ 105 cfu/ mL,用 RPMI 1640 培养基稀释 50倍至
2倍终浓度。念珠菌, 将受试的念珠菌接种于 PDA
上, 36 e 培养 48 h, 挑取菌落, 加入 2 mL 无菌
01 85% N aCl溶液中,用 01 5# M cFarland standard
比浊管比浊,用 RPM I 1640 液基稀释 100倍后再稀
释 20倍至 2倍终浓度。
21 11 3 接种: 将 100 LL 的2倍稀释药液, 由第 1孔
至第 10孔分别由高质量浓度到低质量浓度加入至
无菌 96孔细胞培养板中,第 11孔为生长对照孔(仅
加菌悬液 100 LL 和 RPM I 1640培养基 100 LL, 不
加药物) , 第 12 孔为空白对照孔 (真菌、药物都不
加,只加 RPM I 1640 培养基 200 LL)。将调好的菌
接种液 100 LL, 分别加入相应的微孔内, 这将使每
一梯度的抗真菌药物和菌接种液 ( 2 倍终浓度) 分
别被 1B 1稀释。
21 11 4 结果的判定:皮肤癣菌, 26 e 孵育 7~ 14 d
观察结果;念珠菌, 36 e 孵育 48 h 观察结果。读取
MIC 值时,应在不搅动的情况下与生长对照孔按下
列标准比较: 0为肉眼清晰, 1为略模糊 ( 80% 受抑
制) , 2为浊度显著减低 ( 50% 受抑制) , 3为浊度轻
度减低, 4 为浊度未减低。本试验药物取 1 (略模
糊)或 2(浊度显著减低)为判定终点。
21 11 5 质量控制:按照 NCCLS 方案, 对近平滑念
珠菌 C. p5001 进行反复测定, 其两性霉素 B 的
MIC 值为 01 5~ 41 0 Lg/ mL, 氟康唑的 MIC 值为
11 0~ 41 0 Lg / mL, 5-氟胞嘧啶的 M IC 值为 01 12~
01 5 Lg/ mL。每次试验以此菌株为对照,只有当药
物 M IC值介于其质控范围之内时,方认为试验操作
准确可靠。且只有当生长对照孔生长良好, 空白对
照无生长,其他孔随药物浓度升高,呈现真菌生长梯
度受抑制时,方证明试验成功。
21 2 最小杀真菌浓度 ( minimal fung icidal concen-
trat ion, M FC) 的测定: 按文献方法 [ 4] 取药敏实验
中肉眼判断无菌生长的培养液 (同时取对照孔) 接
种于 PDA 上,继续培养。皮肤癣菌观察 14 d, 14 d
后观察其是否有真菌生长。MFC 即为无菌生长所
对应的最低药物浓度。
21 3 电镜观察
21 31 1 试验分组:生长对照组为正常红色毛癣菌和
石膏样毛癣菌扫描电镜 ( SEM ) 和透射电镜
( T EM) 观察组。试验组为不同质量浓度地锦草提
取物作用红色毛癣菌后 SEM 和 TEM 观察组; 不
同质量浓度地锦草提取物作用石膏样毛癣菌后
SEM 和 TEM 观察组。地锦草提取物的试验质量
浓度由低向高依次为 32、64、128、256 Lg/ mL。
21 31 2 扫描电镜样品制备及观察 [ 5] :将各孔菌丝挑
出,分别置于无菌的 11 5 mL 离心管中, 4 e 冰箱中
以 3% 戊二醛固定 2 h, PBS 溶液洗 3次, 每次 20
m in,再浸泡于 1% 锇酸溶液中, 4 e 下 2 h 左右;
用 30%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%、
100% 乙醇各脱水 20 min,丙酮脱水 3次, 每次 20
m in,临界点干燥,真空镀膜,扫描电镜观察。
21 31 3 透射电镜样品制备及观察[ 5] : 样品的固定、
脱水处理等步骤同扫描电镜,脱水处理后,环氧树脂
Epon812 包埋, 超薄切片, 醋酸铀和柠檬酸铅染色,
透射电镜观察。
3 结果
31 1 对红色毛癣菌、石膏样毛癣菌的 M IC 值测定
结果,见表 1。
31 2 杀菌实验结果:从对红色毛癣菌、石膏样毛癣
菌杀菌活性的结果可见,地锦草提取物作用后 6株
皮肤癣菌均生长; 特比奈酚作用后, 6株皮肤癣菌均
未生长,见表 2。
表 1 地锦草提取物对 60 株皮肤癣菌的 MIC 值
Table 1 MIC Value of E. humif usa extract
to 60 strains of dermatophytes
药物
红色毛癣菌 ( 20 株 )
MIC范围/
( Lg #mL
- 1
)
平均 MIC/
(Lg # mL
- 1
)
MIC95 /
(Lg #mL- 1 )
石膏样毛癣菌 ( 40株 )
MIC范围/
( Lg #mL
- 1
)
平均 MIC/
(Lg # mL
- 1
)
MIC95 /
(Lg #mL- 1 )
地锦草提取物 128~ 1 0 24 446 1 024 128~ 1 0 24 539 1 024
特比奈酚 01 002 5~ 01 005 01 004 6 01 00 5 01 002 5~ 01 005 01 00 4 2 01 0 05
表 2 地锦草提取物对 6 株皮肤癣菌的 MFC
Table 2 MFC of E. humif usa extract to six
strains of dermatophytes
药物
对红色毛癣菌的 MFC/ ( Lg # mL- 1 )
XYZ40002 XYZ40003 XYZ40005
对石膏样毛癣菌的 M FC/ ( Lg # mL- 1 )
XYZ60008 XYZ60009 XYZ60010
地锦草提取物 > 512 > 512 > 512 > 512 > 512 > 512
特比奈酚 01 01 01 01 01 01 01 01 01 01 01 01
31 3 对红色毛癣菌的 SEM 和 T EM 观察
31 31 1 红色毛癣菌生长对照组:未经药物处理的红
色毛癣菌菌丝 SEM 下观察, 形态规则、粗细均匀、
表面光滑饱满、有分支、生长良好。T EM 下观察,
菌丝切面的细胞壁完整、厚薄均匀、质地致密;细胞
#760# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
基质均匀,密度较大, 细胞器丰富,胞质内清晰可见
细胞核、线粒体、脂滴等(图 1)。
31 31 2 不同质量浓度地锦草提取物作用后红色毛
癣菌超微结构的变化: SEM 观察地锦草提取物以
32 Lg/ mL 质量浓度作用后, 红色毛癣菌菌丝形态
基本正常,仅有少数菌丝出现内陷;以 64 Lg/ mL 质
量浓度作用后, 菌丝粗细不均,表面粗糙、肿胀膨大、
偶有断裂;以 128 Lg/ mL 质量浓度作用后,菌丝形
图 1 正常红色毛癣菌的扫描电镜 ( A)
和透射电镜观察 ( B)
Fig. 1 SEM ( A) and TEM ( B) results
of normal T. rubrum
态明显变化,菌丝干瘪变形, 出现多处破坏和断裂;
以 256 Lg / mL 高质量浓度药物处理后, 菌丝普遍出
现明显变形膨胀, 且可见表层剥离, 菌丝破裂,呈黏
糊状,细胞内容物流失 (图 2)。
T EM 观察地锦草提取物以 32 Lg/ mL 质量浓
度作用后,红色毛癣菌细胞内无明显变化,仅见细胞
壁有所增厚,细胞器丰富;以 64 Lg / mL 质量浓度作
用后,细胞壁粗糙,细胞基质变淡,胞内开始空泡化,
胞内形成高电子密度的颗粒结构;以 128 Lg / mL 质
量浓度作用后, 细胞壁剥脱、破裂, 细胞膜皱缩、破
裂,细胞外表面有明显高电子致密颗粒聚集,细胞肿
胀明显,在细胞内可见较多的泡状结构,已无完整的
细胞器结构; 当以 256 Lg/ mL 质量浓度作用后, 细
胞壁缺损严重,细胞膜内陷、破裂;细胞基质溶解、变
淡、消失、空泡化, 细胞内残存多处高电子密度凝集
块 (图 3)。
31 4 对石膏样毛癣菌作用的 SEM 和 T EM 观察
31411 石膏样毛癣菌生长对照组: 未经药物处理的
石膏样毛癣菌菌丝 SEM 下观察,菌丝表面光滑饱满,
有分支,生长良好。TEM:菌丝切面的细胞壁完整,
厚薄均匀,胞质内核区清晰,细胞基质较密 (图 4)。
31 41 2 不同质量浓度地锦草提取物作用后石膏样
毛癣菌超微结构的变化: SEM 观察地锦草提取物以
32 Lg/ mL 质量浓度作用后, 石膏样毛癣菌菌丝形
态基本正常,仅有少数菌丝出现内陷; 以 64 Lg / mL
质量浓度作用后,菌丝出现变形,表面粗糙、少数菌
图 4 正常石膏样毛癣菌的扫描电镜 ( A)
和透射电镜观察 ( B)
Fig. 4 SEM ( A) and TEM ( B) results
of normal T. mentagrophy tes
#761#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
丝破裂,粗细不一;以 128 Lg/ mL 质量浓度作用后,
菌丝形态以断裂为主, 皱缩, 顶端膨大; 以 256
Lg/ mL 高质量浓度药物处理后,菌丝普遍出现明显
变形、干瘪、破裂,细胞内容物流失(图 5)。
TEM 观察地锦草提取物以 32 Lg / mL 质量浓
度作用后,石膏样毛癣菌细胞内无明显变化, 仅见局
部细胞壁有所增厚、质地疏松;以 64 Lg/ mL 质量浓
度作用后,细胞壁出现破坏, 细胞膜皱缩, 胞内出现
空泡样结构; 以 128 Lg/ mL 质量浓度作用时,细胞
壁破坏严重,细胞肿胀明显,在细胞内可见较大的空
泡状结构,有明显高电子致密颗粒聚集,细胞基质变
淡;当以 256 Lg/ mL 质量浓度作用时,细胞壁剥脱、
破裂,细胞膜大部分消失,细胞基质溶解, 消失, 空泡
化,已无完整的细胞器存在(图 6)。
4 讨论
本研究采用 NCCLS 推荐的 M38-A 方案,以特
比奈酚为阳性对照药,研究了地锦草提取物对 60 株
皮肤癣菌的体外抗真菌活性。结果,地锦草提取物对
红色毛癣菌、石膏样毛癣菌的 M IC 值范围均为
128~ 1 024 Lg/ mL, 平均 MIC 分别为 446、539 Lg/
mL。阳性对照药对 60株皮肤癣菌的 MIC 范围均在
01002 5~ 01 005 Lg/ mL,与文献报道一致[ 6] 。从地锦
草提取物对皮肤癣菌的杀菌活性结果可见, 6 株皮肤
癣菌均生长,提示地锦草提取物抗皮肤癣菌的活性,
主要是通过抑制真菌的生长而起作用。
红色毛癣菌和石膏样毛癣菌是临床常见的皮肤
癣菌, 也是浅部真菌病的主要病原菌。主要侵犯人
的皮肤、指甲(趾甲)、毛发,所致癣菌病病程持久, 难
治愈, 易复发[ 7]。本实验结果可见,从低质量浓度至
高质量浓度的地锦草提取物作用于红色毛癣菌和石
膏样毛癣菌后, 先是细胞壁和细胞膜的变化, 再出现
细胞器、细胞核损伤,直至细胞空泡化坏死。由此推
测,地锦草提取物抗真菌的药理作用是破坏真菌细
胞壁,对细胞膜也有损伤。其机制可能是通过抑制
真菌细胞膜麦角甾醇的生物合成, 引起细胞膜的损
伤。麦角甾醇是真菌细胞膜所特有的脂质,是真菌
细胞膜的重要结构组成成分,可以通过与磷脂结合,
稳定膜结构,具有调节真菌细胞膜流动性的功能,在
确保膜结构的完整性、膜结合酶的活性、细胞活力以
及物质运输等方面起着重要作用。一旦麦角甾醇缺
乏,必将引起真菌细胞膜功能异常,甚至发生细胞破
裂[ 8 ]。真菌细胞膜、细胞壁一旦受损,真菌细胞不能
维持其固有形态, 细胞内外物质交换受到阻碍, 结合
于胞膜上的各种酶不能正常发挥作用, 使真菌细胞
对营养物质的吸收降低,生物大分子的合成受阻,导
致细胞凋亡。本实验所提供的信息, 将为进一步揭
示地锦草的抗真菌作用机制奠定基础。
参考文献:
[ 1] 维吾尔药材标准(上册) [ S]1 19931
[ 2] Nat ional Commit tee for Clinical Laboratory Stan dards1 Ref-
er ence Me thod f or Br oth Dilut ion A nti f ung al S uscep t ibi li t y
T est ing of F ilamentou s Fung i ; A p pr ov ed S tandard ( M38-
A ) [ M ]1 Penn sylvania: CLSI, 20021
#762# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
[ 3] 中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册 [ S]1 19991
[ 4] 邓淑文, 哈木拉提1 百癣夏塔热体外抗真菌活性研究 [ J]1
中药药理与临床, 2006, 22( 3、4) : 166-1691
[ 5] 王端礼, 李若瑜, 王爱平, 等1 医学真菌学-实验室检验指南
[ M ]1 北京:人民卫生出版社, 20041
[ 6] 古力娜# 达吾提, 尤丽吐孜, 艾则孜 # 亚森, 等 1 维药地锦
草软膏的体外抗真菌及其对豚鼠皮肤真菌感染的治疗作用研
究 [ J]1 中药药理与临床, 2007, 23( 5) : 178-1801
[ 7] Santos D A, Barros M E, Hamdan J S1 E stabl ishing a meth-
od of in oculum preparat ion for suscept ibilit y test ing of
T richoph yton rubrum and T richophy ton mentag rop hytes
[ J]1 Clin Microbiol , 2006, 44( 1) : 98-1011
[ 8] Maertens J A1 His tor y of the development of azole deriva-
t ives [ J]1 Clin Microbiol I nf ec t , 2004, 10( su ppl 1) : 1- 101
复方瑞康欣胶囊对吗啡依赖戒断大鼠焦虑行为及海马突触素表达的影响
何继锋1 ,钱 刚1 ,罗素元1* ,吴明松1 , 凌 锌2 ,李晓东3
( 11 遵义医学院 细胞生物学与遗传学教研室, 贵州 遵义 563003; 21 遵义医学院 中心实验室, 贵州 遵义 563003;
31 珠海瑞桦戒毒康复中心, 广东 珠海 519047)
摘 要:目的 观察复方瑞康欣对吗啡依赖戒断大鼠焦虑行为的影响,并探讨其作用机制。方法 健康雄性 SD 大
鼠,剂量递增法 sc 吗啡 10 d, 确认吗啡依赖模型建立成功后, 在吗啡自然戒断的 1~ 3 d, 复方瑞康欣 100、200、300
mg/ kg 和丁螺环酮 15 mg/ kg ig 治疗 ( 2次/ d) ,于末次吗啡注射后 72 h, 高架十字迷宫实验评价大鼠的焦虑水平,
免疫组化检测各组大鼠海马突触素的表达。结果 与生理盐水 ( NS) 治疗组比较,复方瑞康欣 200、300 mg / kg 和
丁螺环酮治疗能明显增加大鼠进入开臂次数和时间的比例 ( P < 01 01、01 05) , 同时海马突触素的表达显著降低
( P< 01 01)。结论 复方瑞康欣对吗啡依赖大鼠戒断后的焦虑治疗效果明显; 逆转焦虑大鼠海马增高的突触素/突
触,可能是复方瑞康欣临床治疗吗啡戒断后焦虑的机制之一。
关键词:复方瑞康欣; 吗啡戒断; 焦虑; 突触素; 海马
中图分类号: R2861 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2009) 05 0763 05
Effects of Compound Ruikangxin Capsula on anxiety-like behavior and relative expression
of hippocampal synaptophysin in morphine-withdrawal rats
HE J-i feng 1 , QIAN Gang1 , LU O Su-yuan1 , WU M ing-song1 , L IN G Xin2 , L I Xiao-dong 3
( 11 Depa rtment of Cell Biolo gy and Genetics, Zunyi Medical College, Zuny i 563003, China; 2. Cent ral Labor ator y, Zuny i
Medical Co llege, Zunyi 563003, China; 3. Isolation and H ealing Inst itute of Ruihua, Zhuhai 519047, China)
Abstract: Objective To observ e ef fect of Compound Ruikangx in Capsula ( CRC ) on anxiety- like
symptoms of morphine-w ithdraw al rats and investig ate its mechanism. Methods The elev at ing do ses w ere
applied to validating anx iety- like behav io r in SD male rats w ith sc morphine for 10 d. T reatments w ith ig
administ ration of CRC ( 100, 200, and 300 mg/ kg ) and buspirone ( 15 mg/ kg) w ere perfo rmed during 1 )
3 d morphine w ithdr aw al ( tw ice every day ) . The plus elev ated maze w as applied to validat ing anxiety- like
symptom in rats. T he expr ession levels of synaptophy sin w ere detected on hippocampus in g roups by im-
munohistochemit ry 72 h af ter sc mo rphine. Results As compar ed w ith the control group, animals treated
w ith CRC ( 200 and 300 mg/ kg) and buspirone had higher rat io of ent ry into open arm ( P< 01 01) , as w ell
as t ime o f remaining in open arm ( P< 01 05) . At that , low er level of synaptophysin w as measured on hip-
pocampus f rom tho se rats ( P< 01 01) . Conclusion CRC would play an important r ole in rehabilitat ing the
anx iety- like behav io r in morphine-w ithdr aw al rats. Reversal o f synaptophysin on hippocampus of anx ious
rats could be contributed to exploring the mechanism.
Key words: Compound Ruikangx in Capsula ( CRC) ; mo rphine w ithdraw al; anxiety ; synaptophy sin;
hippocampus
#763#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
* 收稿日期: 2008- 12-03 基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30860373) ; 教育部科学技术重点项目 ( 206136) ;贵州省教委重点项目 (黔教科 2005109)作者简介:何继锋( 1974 ) ) ,男,河南省商丘市人,在读硕士研究生,执业药师,主要从事阿片类药物依赖研究工作。
T el : 15085114306 E- mail : h jf1125@ 126. com
* 通讯作者 罗素元 T el: 13984276456 E-m ail: sw x 100@ 163. com