全 文 ：最高峰 ,其后开始逐渐缩小。基质组动物创面由于
动物自身的抵抗功能 ,创面也呈现愈合趋势 ,但明显
慢于各给药组动物创面的愈合速度。自 21 d 开始 ,
与基质组比较 ,复方虎杖蜂房喷雾剂对大鼠创面开
始呈现明显的促进愈合作用 ,大鼠创伤面积缩小速
度较基质组快 ,创面愈合率明显提高 ( P < 0105) 。
　　本实验测得的皮肤 Hyp 水平在烧伤后 3 d 时
最高 ,继之下降 ,14 d 之后又持续上升 ,直 35 d 未见
下降。烧伤后 3 d 时 ,已坏死表皮内的胶原分解、变
性 ,释放出大量 Hyp ,致使 Hyp 水平骤然升高 ;随
着坏死组织的溶脱 , Hyp 下降 ;14 d 之后 ,胶原代谢
活跃 ,新生胶原合成增多 , Hyp 升高 ,此上升趋势持
续至伤后 35 d ,但仍低于正常大鼠皮肤 Hyp 水平 ,
提示胶原合成仍在继续。Hyp 的动态变化与同一
时期的病理组织学切片变化相一致。
对小面积 Ⅲ度烧伤大鼠创面的治疗自 21 d 开
始 ,复方虎杖蜂房喷雾剂组的 Hyp 与基质组相比有
显著性差异 ( P < 0105) ,提示复方虎杖蜂房喷雾剂
能促进胶原合成 ,促进烧伤面愈合。这与复方虎杖
蜂房喷雾剂对治疗小面积 Ⅲ度烧伤大鼠创面的愈合
相一致。
参考文献 :
[ 1 ] 　张均田1 现代药理实验方法 [ M ]1 北京 :北京医科大学中国
协和医科大学联合出版社 , 19981
[ 2 ] 　冯志民 , 徐　蘅 , 马旺扣1 动物组织中羟脯氨酸测定方法的
建立及初步应用 [J ]1 南京铁道医学院学报 , 1999 , 18
(3) : 1681
[ 3 ] 　李文才 , 张锦生 , 李　华 , 等1 肝组织羟脯氨酸含量测定方
法的优化 [J ]1 上海医科大学学报 , 2000 , 27 (4) : 2951
广藿香醇对东莨菪碱致记忆障碍小鼠学习记忆功能的影响
黄晓舞1 ,刘睿婷2 ,吕秋军3 3
(11 解放军总医院 药材处 ,北京 　100853 ; 21 军事医学科学院放射与辐射研究所 ,北京 　100850 ;
31 杰华 (北京)生物医药研究院 ,北京 　100102)
摘　要 :目的 　研究广藿香醇对东莨菪碱所致获得性学习记忆障碍小鼠学习记忆功能的影响。方法 　采用 Morris
水迷宫检测小鼠学习记忆能力 ,广藿香醇 (80、40、20 mg/ kg) 连续预防给药 10 d ,训练前 15 min ip 给予东莨菪碱
(115 mg/ kg) 。行为学测试完成后 ,脑匀浆检测乙酰胆碱脂酶 (AchE) ,丁酰胆碱脂酶 (BuchE) 以及胆碱乙酰转移
酶 (Chat) 活性 ,免疫组化检测脑 M1受体水平。结果　与模型组相比 ,广藿香醇 (80、40 mg/ kg) 组小鼠学习记忆能
力显著增强 ,脑 AchE 活性显著下降 ,而 Chat 活性显著提高 ,脑内 M1 受体水平也显著提高。结论　广藿香醇具有促
进东莨菪碱小鼠学习记忆的作用 ,该作用可能与其抑制脑内 AchE 活性 ,提高 Chat 活性和 M1受体水平有关。
关键词 :广藿香醇 ; 东莨菪碱 ; Mortis 水迷宫 ; 乙酰胆碱脂酶 (AchE) ; 胆碱乙酰转移酶 (Chat) ;M1受体
中图分类号 :R28611 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921431203
　　广藿香 Pogostemon cabl i n (Blanco) Bent h. 是
我国常用中药 ,具有调节消化功能、胃肠平滑肌解痉
作用 ,还具有抗菌等功效 ,其主要成分是三环倍半萜
类化合物广藿香醇 (patchouli alcohol) ,研究表明广
藿香醇具有钙离子通道拮抗作用[1 ] 。在前期针对β2
淀粉样蛋白抗损伤的体外研究中 ,发现广藿香醇具
有显著的神经保护作用[2 ] 。鉴于雌激素具有多靶向
抗阿尔茨海默病 ( Alzheimer′s disease , AD) 的潜
在活性[3 ]及广藿香醇在雌激素受体β亚型 ( ERβ) 特
异性激动剂筛选实验中显示其具有强的 ERβ转录激
活活性[4 ] ,为了进一步在体内研究广藿香醇抗 AD 作
用 ,确定其药效 ,本实验有用东莨菪碱致学习记忆障
碍模型小鼠研究广藿香醇对学习记忆的改善作用。
1 　材料
111 　主要药物试剂和仪器 :广藿香醇购自中国药品
生物制品检定所 ,质量分数达 98 % 以上 ,011 % 羧
甲基纤维素钠溶成混悬态。氢溴酸东莨菪碱购自
Sigma 公 司 , 批 号 0703232。乙 酰 胆 碱 脂 酶
(Ach E) ,丁酰胆碱酯酶 (Buch E) ,胆碱乙酰转移酶
(Chat) 活力检测试剂盒购自南京建成生物研究所。
兔抗人 M1受体一抗、免疫组化试剂盒及 DBA 染色
试剂盒均购自武汉博士德公司。小鼠 Morris 水迷
·1341·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
3 收稿日期 :2009203221　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :黄晓舞 (1972 —) ,女 ,解放军总医院主管药师 ,研究方向为药品质量控制。
Tel : (010) 66937225 　E2mail : huangxw9266 @vip . sina. com
宫购自中国医学科学院 ,直径 110 m。
112 　实验动物 :昆明小鼠 ,体质量 18～22 g ,雌雄
各半 ,购自军事医学科学院实验动物中心 ,动物实验
条件合格证号为 SCXK (京) 200520013。
2 　方法
211 　动物分组、给药与造模 :小鼠按体质量均衡及
随机原则分组 ,分别为对照组、模型组、广藿香醇给
药 80、40、20 mg/ kg 组 ,每组 12 只。动物适应 1 d
后开始 ig 给药 ,对照及模型组给予溶剂 ,持续 10 d。
末次给药 1 h 后除对照外 ,其余各组给予氢溴酸东
莨菪碱造模 ,在学习训练前 15 min 小鼠 ip 1. 5 mg/
kg 氢溴酸东莨菪碱 ,给药体积 012 mL/ 10 g ,每天
给药 1 次 ,共 4 次。
212 　Morris 水迷宫试验 :实验前 1 d 先将小鼠放
入水迷宫中自由游泳 2 min 以适应环境。每天小鼠
训练 2 次 ,间隔 10 min ,每次分别从 2 个不同入水
点将小鼠面向容器壁放入水中游泳 ,若小鼠在 90 s
内不能找到水下平台 ,则将其直接置于平台上并停
留 30 s。记录小鼠入水后爬上平台所用时间 (潜伏
期) 作为检测小鼠对空间和线索学习的指标 ,共训
练 4 d。
213 　生化指标测定 :行为学测试完成后 ,各组小鼠
先摘眼球取血 ,4 ℃、3 000 r/ min 离心 10 min 得血
清 , - 20 ℃保存。处死小鼠 ,在冰块上快速分离大
脑组织 ,称质量后将一半大脑用相当于组织质量 9
倍体积的生理盐水将所取脑组织制成 10 % 组织匀
浆 ,将匀浆 4 ℃、3 500 r/ min 离心 15 min ,取上清 ,
- 20 ℃保存。参照试剂盒说明书测定血清 Buch E
活性及脑组织 Ach E、Chat 活性。
214 　脑组织 M1受体免疫组化 :小鼠另外一半大脑
先用 4 ℃生理盐水清洗两遍 ,迅速放入 4 ℃4 % 多
聚甲醛中固定 24 h 后 ,制做脑组织石蜡切片。每只
鼠做两张切片 ,免疫组化采用 SABC 法 , DAB 显
色 ,最后用苏木素进行核复染。每组取一张切片作
为阴性对照 (一抗用 PBS 代替) 。数据分析时 ,每
张切片按海马和皮层相同部位选取 5 个视野 ,结果
用 MIAS 医学图像分析管理系统 410 进行处理 ,分
析平均吸光度和积分吸光度。
215 　数据统计 :数据以 x ±s 表示 ,采用 SPSS 1310
软件进行单因素方差分析 ( One2way ANOVA )
Dunnet′s 检验两两比较。
3 　结果
311 　Morris 水迷宫试验 :结果显示 ,随着训练次数
的增加 ,各组小鼠找到平台的潜伏期逐渐缩短 ,结果
见表 1。与对照组相比 ,模型组小鼠找到平台潜伏
期显著延长。广藿香醇 (80、40 mg/ kg) 组与模型
组比较明显缩短潜伏期 ,以高剂量组效果较为显著
( P < 01001) 。
表 1 　广藿香醇对东莨菪碱致学习记忆障碍小鼠 Morris
水迷宫潜伏期的影响 ( x ±s , n = 12)
Table 1 　Effect of patchouli alcohol on latency in Morris
Water2maze test for scopolamine2induced learning
and memory impairment of mice ( x ±s , n = 12)
组别
剂量/
(mg·kg - 1 )
潜伏期/ s
第 1天 第 2天 第 3天 第 4天
对照 - 50177 ±20166 38103 ± 9112 16121 ±10132 12187 ± 5115
模型 - 87190 ±27197 3 79144 ±16179 3 71166 ±27197 3 3 3 54192 ±18184 3 3
广藿香醇 80 83173 ±18104 53171 ±16124 36110 ±13114 # # # 32163 ± 9177 # #
40 86167 ±23175 65187 ±12193 53127 ±15105 # 49115 ±12139 #
20 85114 ±19108 77101 ± 9105 65137 ±16176 57104 ±10155
　　与对照组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 　3 3 3 P < 01 001
　　与模型组比较 : # P < 0105 　# # P < 0101 　# # # P < 01 001
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001 vs cont rol group
　　# P < 01 05 　# # P < 01 01 　# # # P < 01001 vs model group
312 　生化指标测定结果 :与对照组相比 ,模型组脑
组织 Ach E 活性显著升高 ,与模型组相比 ,广藿香醇
(80、40 mg/ kg) 组 Ach E 活性显著下降。与对照组
相比 ,模型组血清 Buch E 活性显著升高 ,广藿香醇
各剂量组 Buch E 活性与模型组比较无显著差异。
与对照组相比 ,模型组脑组织 Chat 活性比对照组
显著下降 ,广藿香醇 (80、40 mg/ kg) 组脑组织 Chat
活性比模型组有显著升高。结果见表 2。
表 2 　广藿香醇对东莨菪碱致学习记忆障碍小鼠血清
BuchE 活性及脑组织 AchE 和 Chat 活性的影响
( x ±s , n = 12)
Table 2 　Effect of patchouli alcohol on BuchE activity in
serum and activities of AchE and Chat in brain
tissue in scopolamine2induced learning and
memory impairment of mice ( x ±s , n = 12)
组别
剂量/
(mg ·kg - 1 )
AchE/
(U ·mg - 1 )
BuchE/
(U ·mg - 1 )
Chat/
(U ·mg - 1 )
对照 - 0163 ±0112 6173 ±0158 327174 ±91194
模型 - 1100 ±0119 3 8186 ±0195 3 101149 ±19157 3
广藿香醇 80 0171 ±0104 # 7195 ±1131 229121 ± 4164 # # #
40 0182 ±0114 # 8113 ±0185 193177 ±15178 # #
20 0192 ±0128 8129 ±1162 114172 ±12125
　　与对照组比较 : 3 P < 0105
　　与模型组比较 : # P < 0105 　# # P < 0101 　# # # P < 01 001
　　3 P < 01 05 vs cont rol group
　　# P < 01 05 　# # P < 01 01 　# # # P < 01001 vs model group
313 　脑组织 M1受体免疫组化结果 :平均吸光度结
果显示 ,与对照组相比 ,模型组平均吸光度值显著下
降 ,说明细胞染色程度下降 ,M1受体水平降低 ,而广
·2341· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
藿香醇组平均吸光度值均比模型组有所提高 ,说明
药物可使 M1受体水平提高。积分吸光度结果亦显
示模型组比对照组显著降低 ,而广藿香醇组比模型
组显著升高 ,说明药物组阳性细胞染色水平的整体
水平升高 ,即抗原总量水平升高 ,结果见表 3。
表 3 　广藿香醇对东莨菪碱致学习记忆障碍小鼠脑 M1
受体水平的影响 ( x ±s , n = 12)
Table 3 　Effect of patchouli alcohol on M1 receptor value
in brain of scopolamine2induced learning and
memory impairment of mice ( x ±s , n = 12)
组别 剂量/ (mg ·kg - 1 ) 平均吸光度 积分吸光度
对照 - 01 21 ±0104 1 077170 ±6121 46
模型 - 01 15 ±0104 3 3 3 261124 ±1031 28 3 3 3 3
广藿香醇 80 01 18 ±0105 # # 858188 ±1651 84 # # #
40 01 17 ±0103 # 673144 ±1711 66 # # #
20 01 16 ±0102 986153 ±2011 98
　　与对照组比较 : 3 3 3 P < 01 001
　　与模型组比较 : # P < 0105 　# # P < 0101 　# # # P < 01 001
　　3 3 3 P < 01001 vs cont rol group
　　# P < 01 05 　# # P < 01 01 　# # # P < 01001 vs model group
4 　讨论
　　AD 是一种中枢神经系统原发性退行性疾病 ,
患者智力、记忆力及认知功能进行性降低 ,最终丧失
思考、说话及活动能力。由于直接对人体进行抗
AD 的研究目前尚有许多限制 ,模拟 AD 的动物痴
呆模型对于 AD 治疗药物的筛选和发病机制的探
讨至关重要。东莨菪碱通过阻断脑内 M 受体干扰
记忆和认知功能 ,现已广泛用于动物实验中建立动
物认知功能损伤的 AD 模型 ,以验证药物的作用。
本研究利用每日 ip 115 mg/ kg 的东莨菪碱造成长
时小鼠学习记忆障碍[5 ] 。
本实验结果表明 ,广藿香醇能够在一定范围内
改善东莨菪碱模型小鼠的空间学习记忆能力 ,抑制
模型小鼠脑内 Ach E 活性而增强 Chat 活性 ,同时
显著上调 M1 受体水平。已有研究表明 ,雌激素能
够显著抑制 Ach E 活性而提高 Chat 活力[6 ] ,所以推
测广藿香醇的作用可能与其 ERβ激动剂的性质有
关。并且研究发现 ,广藿香醇在显著抑制脑 Ach E
活性的同时对血清 Buch E 并无显著抑制作用 ,这提
示其对外周的胆碱能系统影响较小 ,从而有可能减
小或避免以往低选择性胆碱酯酶抑制剂所带来的外
周胆碱样反应的副作用。然而 ,除东莨菪碱致小鼠
记忆损伤模型外 ,广藿香醇的作用需进一步在其他
AD 动物模型上进一步考察 ,如 A PP 转基因模型
等。并且 ,广藿香醇作用确切机制以及最终信号通
路尚待进一步探讨。
越来越多的实验证实雌激素及植物雌激素具有
神经保护作用 ,能够改善动物的学习记忆和认知功
能[7 ] 。本实验中所采用的广藿香醇是从传统中药广
藿香中提取得到的 ,在前期进行体外 ERβ激动剂活
性筛选时 ,发现广藿香醇具有显著的选择性 ERβ激
动活性。鉴于雌激素在多靶向影响 AD 发生发展
有着良好的潜在活性 ,以及 ERβ主要与情绪调节和
认知有关 ,而 ERα与生殖的关系更为密切的理
论[8 ] ,本研究室进行了此类化合物一系列的体内外
研究并且获得了一些有意义的结果。提示通过筛选
ERβ选择性激动剂来获得一些高效低毒的抗 AD
先导化合物有可能是一条行之有效的途径。
参考文献 :
[ 1 ] 　Ichikawa K , Kinoshita T , Sankawa U1 The screening of
Chinese crude drugs for Ca2 + antagonist activity ; identifica2
tion of active principles f rom t he aerial part of Pogostemon ca2
blin and t he f ruit s of Prunus mume [J ]1 Chem Pharm B ul l ,
1989 , 37 (2) : 34523481
[ 2 ] 　黄晓舞 , 白　林 , 徐风华 , 等1 广藿香醇对β2淀粉样蛋白神
经毒性的抑制作用 [J ]1 解放军药学学报 , 2008 , 24 ( 4) :
33823401
[ 3 ] 　Brann D W , Dhandapani K , Wakake C , et al . Neurot rophic
and neuroprotective actions of est rogen : Basic mechanisms
and clinical implications [J ]1 S teroi ds , 2007 , 72 ( 5 ) :
38124051
[ 4 ] 　陈立敏 , 吕秋军 , Satoshi I , 等1 基于报告基因的雌激素受体
β亚型激动剂细胞筛选模型的建立 [J ]1 药学学报 , 2006 ,
41 : 72127261
[ 5 ] 　Bejar C , Wang R H , Weinstock M1 Effect of rivastigmine on
scopolamine2induced memory impairment in rat s [J ]1 Eur J
Pharmacol , 1999 , 383 (3) : 23122401
[ 6 ] 　贾晓静 , 张　昱 , 张　葳 , 等1 去卵巢大鼠胆碱能神经系统
改变及雌激素保护作用机制的研究 [J ]1 中国循证医学杂志 ,
2005 , 22 (5) : 41024121
[ 7 ] 　Zheng H , Xu H , Uljon S N , et al . Modulation of A ( beta)
peptides by est rogen in mouse models [J ]1 J N eurochem ,
2002 , 80 : 19121961
[ 8 ] 　Gustaf sson J A. What pharmacologist s can learn f rom recent
advances in est rogen signaling [J ]1 T rends Pharmacol Sci ,
2003 , 24 : 47924851
·3341·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月