全 文 ：RP-HPLC测定颠茄片中 3种主要成分含量
张 楠　郭新红　张振中
郑州大学药学院　郑州市　450052
　　摘要　目的　建立 1种测定颠茄片中 3种主要成分含量的方法。方法　采用反相高效液相色谱法 (RP
-HPLC)、外标法定量。 结果　线性关系:阿托品在 7. 55 ～ 37. 75μg /m l内良好 , 山莨菪碱在 2. 32 ～
20. 88μg /m l良好 ,东莨菪碱在 2. 5 ～ 12. 5μg /m l良好。平均回收率:阿托品 100. 5%( n =3, RSD=1. 3%), 东
莨菪碱 99. 3%(n=3, RSD=1. 6%),山莨菪碱 99. 9% (n =3, RSD=1. 4%)。 3种莨菪碱在此条件下能完全
分离。结论　此方法准确 、快速分析颠茄片中 3种主要成份 ,灵敏度高 , 重现性好 ,药品用量少 , 可控制颠茄片
的质量。
关键词　颠茄片　反相高效液相色谱　阿托品　山莨菪碱　东莨菪碱
中图分类号:R971+.92　　文献标识码:A　　文章编号:1672-3422(2005)19-0019-03
Determ ination of ThreeM ain Components in
Belladonna Tab lets by RP -HPLC
ZHANG Nan , GUO X inhong , ZHANG Zhenzhong
School ofPharmacy, ZhengzhouUniversity, Zhengzhou 450052, Ch ina
ABSTRACT　Objec tive　To establish ame thod for de te rm ination of scopolam ine , an isodam ine
and atropine in Belladonna table ts by RP -HPLC. Methods　 The concentrations w ere quan tified by
externa l standardme thod and RP -HPLC. Results　The ca libration curve fo r a trop ine , an isodam ine
and scopo lam ine revealed linearity over the range of 7. 55 ～ 37. 75 μg /m l , 2. 32 ～ 20. 88 μg /m l and
2. 5 ～ 12. 5 μg /m l . The average recove ries of atropine, scopo lam ine and anisodam ine we re 100. 5%
(n =3, RSD=1. 3 %) , 99. 3%(n =3, RSD=1. 6 %), 99. 9%(n =3, RSD=1. 4%) respective-
ly. Conclusion 　The method is successfu lly used to rapid assay belladonna teble tw ith accurate, sen-
sitive, reproducib le and little samp le needed.
KEY　WORDS　Belladonna teble t;RP -HPLC;A tropine;A nisodam ine;Scopo lam ine
　　颠茄片其主要成分为阿托品 (atropine)、山莨
菪碱 (an isodam ine)、东莨菪碱 (scopolam ine)等托
烷类生物碱 。中国药典 2005版一部收载有颠茄
草 ,颠茄酊 , 颠茄流浸膏 ,颠茄浸膏及颠茄片 [ 1] 。
除片剂外其余均有含量测定项 ,均为酸碱滴定法 。
颠茄片如采用同样方法 ,取样量很大 。近年来 ,随
着 HPLC的广泛应用 ,用 HPLC测定颠茄制剂含量
的报道日趋增多 ,但用 RP -HPLC测定颠茄片的
含量 ,未见文献报道。为了提高检测速度及更好
地控制颠茄片的质量 ,本研究建立了用反相高效
液相色谱法 (RP -HPLC),特点是准确快速 、进样
量少 、精密度高;能快速的把颠茄片中有效成分得
到适当的保留和相互分离 ,用外标法对颠茄片中
的主要成分 (阿托品 、山莨菪碱 、东莨菪碱 )进行定
量分析。结果如下:
1　仪器 试剂与药品
1.1　仪器　Ag ilen t 1100系列高效液相色谱系统:
全系列 Ag ilent 1100泵系统;标准自动进样器;可
变波长扫描紫外检测器。色谱柱:K romasil C18
(5μm , 4. 6mm ×250mm)天津市特纳科学仪器有
限公司生产 。 8892 - 26超声微波仪 (美国科尔帕
默公司)。 80 - 2离心沉淀器 (上海手术器械厂)。
BP2110电子分析天平(德国赛多利斯公司)。
1. 2　试剂与药品　甲醇为一级色谱纯 (天津四友
生物医学技术有限公司 ),水为娃哈哈纯净水 ,三
乙胺 (A R),四氢呋喃(A R),醋酸钠 (A R),
冰醋酸(A R)。对照品硫酸阿托品 、氢溴酸东莨
19 　 Jou rna l ofM edica l Fo rum　Vo.l 26　No. 19　O ctober 2005　
菪碱 、消旋山莨菪碱均由中国药品生物制品检定
所提供 。颠茄片 (西安利君制药股份有限公司生
产 )为市售 ,批号分别为 0110403、0208291(由于样
品非常难买只购到两个批号)。
1. 3　色谱条件　色谱柱为 K romasil C18(4. 6mm ×
250mm , 5μm);流动相甲醇 -水 (25∶75水中含
20 mmo l L -1醋酸钠 , 0. 3%三乙胺 , 0. 3%四氢呋
喃 ),用冰醋酸调 pH =5. 0;流速 1 m l /m in;柱温
50℃ ;紫外检测波长 220nm ,进样量 10μl。标准
品及样品均达到很好的分离 ,标准品及样品色谱
图见图 1、图 2。
2　方法与结果
2. 1　标准曲线的制备　精密称取标准品硫酸阿
托品 0. 00151g,标准品氢溴酸东莨菪碱 0. 00125g,
标准品消旋山莨菪碱 0. 00118 g,分别置 10 m l容
量瓶中加流动相溶解 、摇匀 、定容置至刻度 ,置冰
箱 (5 ℃)备用。再精密吸取硫酸阿托品标准液
0. 5m l 、1. 0m l 、1. 5 m l 、2. 0 m l 、2. 5 m l,氢溴酸
东莨菪碱标准液 0. 2m l、0. 4 m l 、0. 6 m l 、0. 8 m l 、
1. 0m l,消旋山莨菪碱标准液 0. 2 m l 、0. 6 m l 、
1. 0m l、1. 4 m l 、1. 8m l分别置于 10m l容量瓶中 ,
加流动相稀释至刻度 ,摇匀。按上述色谱条件分别
进样 10μl,记录峰面积 ,分别以各自的浓度对其峰
面 积 A回归 , 得回归方程分别为 :A阿托品 =
图 1　对照品色谱图
1、 2.消旋山莨菪碱　3.氢溴酸东莨菪碱　 4.硫酸阿托品
图 2　颠茄片样品色谱图
4. 8772C - 4. 1805(r =0. 999 8), A 东莨菪碱 =
4. 2575C - 0. 6834(r =0. 998 9), A 山莨菪碱 =
3. 2227C - 0. 7172(r=0. 999 9)。阿托品 、山莨菪
碱 、东莨菪碱分别在 7. 55 ～ 37. 75μg /m l、 2. 32 ～
20. 88μg /m l、2. 5 ～ 12. 5μg /m l范围内线性关系良
好。
2. 2　加样回收率试验　准确称取已知含量的颠茄
片 (批号 0208291)0. 06026、0. 06026、0. 06079 g,各
加入流动相 5 m l溶解 ,分别加入标准品阿托品 、东
莨菪碱 、山莨菪碱各 1m l, 充分振荡 5 m in,超声提
取 20 m in ,以 2000 r /m in离心 5 m in。取上清液滤
过 ,按上述色谱条件 ,分别进样 10μl,结果如表 1。
表 1　回收率测定结果 (n =3)
标准品 加入量(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
阿托品 181. 2 179. 4 99. 01 100. 5 1. 3
162. 4 164. 7 101. 42
150. 7 152. 2 101. 00
东莨菪碱 75. 0 75. 7 100. 93 99. 3 1. 6
50. 0 48. 9 97. 80
25. 0 24. 8 99. 20
山莨菪碱 69. 6 69. 2 99. 43 99. 9 1. 4
53. 2 54. 0 101. 50
41. 8 41. 3 98. 80
2. 3　精密度试验　取同一阿托品标准品溶液重复
进样 5次 ,以阿托品峰面积积分值计算 (RSD)为
0. 39%,迁移时间 RSD为 0. 06%。
2. 4　稳定性试验　按样品测定方法对颠茄片进行
5次平行试验 , 记录数据 , 结果 RSD阿托品为
2. 1%,山莨菪碱为 1. 8%,东莨菪碱为 2. 3%。
2. 5　样品测定　分别取两个批号样品 20片 ,精密
称重 ,研细 ,精密称取粉末各 0. 06035g、0. 06124g。
分别置两支离心试管中 ,各加流动相 2m l,充分振
荡 5m in,超声提取 20m in,以 2000r /m in离心 5m in。
取上清液滤过 ,按上述色谱条
件分别进样 10μl,测定两个批
号样品的含量 ,山莨菪碱含量
分别为 22. 00μg、 22. 06μg;东
莨菪碱为 21. 28μg、22. 60μg;
阿托品为 63. 56μg、64. 20μg;
两批颠茄片中每片所含总生
物碱 分别 为 103. 84μg 和
104. 86μg。
(转 22页 )
20 　医药论坛杂志　2005年 10月　第 26卷　第 19期　
核中 , PVNA阳性细胞数量 ,即 PCNA指数阳性细
胞核数 /1000个细胞 ,取均数 (–x ±s) [ 1] 。
2　结果
PCNA表达 ,在分泌期子宫内膜 、单纯性内膜
增生 、腺囊性子宫内膜增生 、腺瘤样增生包括非典
型腺瘤样增生及子宫内膜癌的上皮细胞核中 ,表
达呈明显递增趋势 ,各组比较差异有高度显著性
(P <0. 01)。增殖期 PCNA表达与子宫内膜癌
PCNA的均值差异无显著性(P >0. 05)。见表 1。
　　表 1不同时期子宫内膜 PVNA表达 [ (–x ±s , ‰]
病理诊断 n PCNA指数 t值 P值
增殖期 19 565. 22±140. 66 0. 14 >0. 05
分泌期 20 72. 00±50. 56 17. 66 <0. 01
单纯性增生 24 320. 80±71. 82 10. 46 <0. 01
腺囊性增生 27 346. 59±96. 60 8. 46 <0. 01
腺囊性增生
及非典型增生 26 463. 17±88. 86 4. 24 <0. 01
子宫内膜癌 28 570. 91±82. 08 - -
3　讨论
PCNA是一种仅在增殖细胞内合成与表达
36KD多肽 ,表达合成与细胞的增殖周期有关 , G1
期 PCNA表达在逐渐增加 , S期达到高峰 ,而 G 2 M/
期减少 [ 2] 。因此 ,它被认为在细胞增殖和 DNA合
成方面起重要作用。 PCNA与增殖周期有关 ,因而
在本研究中 ,增殖期子宫内膜阳性表达较高 ,这是
生理性增生活跃期 ,均值为 565. 22‰ ±140. 66‰。
妇产科病理中争论最大的问题是:如何鉴别非典
型增生与局限性内膜癌 [ 3] 。通常病理诊断中仅靠
细胞的分化程度 ,我们应用 PCNA对 144例子宫内
膜做了初步研究 ,结果表明 PCNA的表达:分泌期
子宫内膜 <单纯性子宫内膜增生 <腺囊性增生 <
腺瘤样增生及非典型增生 <子宫内膜癌 。说明内
膜增生与癌之间增生程度明显不同 ,差异有显著
性(P <0. 01)。 PCNA在子宫内膜增生的三个类
型中 ,阳性表达随病变进展而递增 ,因而可鉴别子
宫内膜的增生与肿瘤。
在各类型的子宫内膜增生中 ,腺瘤样增生及
非典型增生 PCNA表达计数均值最高 ,临床上对此
应密切随访 ,以确定是否切除子宫 。本研究提示:
PCNA表达计数对区别良 、恶性子宫内膜增生及辨
别癌前病变有指导意义 ,并可做为判断子宫内膜
增生生物学行为的指标 ,并有助于早期发现子宫
内膜癌。此种诊断方法简便易行 ,成本低廉 ,诊断
效果可靠 ,具有广泛应用及推广价值。
参考文献
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2　张亚历. 大肠肿瘤增殖细胞核抗原(PCNA)表达计数的
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科杂志 , 1995, 30(2):99
2005-05-28收稿
(接 20页)
3　讨论
3. 1　流动相的选择　在甲醇 -水体系中 ,拖尾现
象仍很严重 ,保留时间偏长。这可能是由于托品
烷类生物碱是在结构上含有叔胺基的碱性药物 ,
与固定相表面未被硅烷化的游离硅醇基之间发生
了离子交换或形成了氢键的缘故[ 2] 。在流动相中
加入一定量的三乙胺作为扫尾剂 ,可竞争抑制或
掩盖固定相表面的游离硅醇基活性 ,使碱性药物
易于出峰 ,且峰形较好。经多次测试结果进行选
择比较 0. 3%的三乙胺较为合适。流动相 pH值的
选择也尤为重要 ,因为既要达到离子交换目的 ,使
生物碱成阳离子 ,又要使硅胶表面的硅醇基离子
化 ,才能获得较好的分离和峰形 [ 3] 。本研究经过
多次测试选择 pH =5. 0,在此条件下颠茄片中各种
成分的分离和峰形都比较理想 。
3. 2　样品的预处理　本文在对样品预处理过程
中 ,采用了用乙醚 、乙醇提取等其他方法 ,但效果
不好 ,且平行实验误差较大 ,重现性也不好 。用乙
醚提取的样品杂质峰过大 ,严重影响了样品峰出
峰的效果 ,尤其是样品中山莨菪碱 、东莨菪碱含量
相对较低 ,对它们的含量测定就造成了困难。经
过多次选择 ,用流动相溶解 ,再经超声 、离心 ,暗处
静置 24h,取上清液虑过进样的效果最好 ,提取较完
全。超声提取的时间以 20m in提取效果最佳。
参考文献
1　国家药典委员会编. 中华人民共和国药典(2005年版一
部).北京:化学工业出版社 , 2005:655
2　梁贵键 , 钱原海 , 朱莉 , 等. HPLC对山莨菪碱制剂含量
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3　刘文英. 药物分析. 5版 , 北京:人民卫生出版社 , 2002:
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22 　医药论坛杂志　2005年 10月　第 26卷　第 19期