全 文 ：柱体积 (BV)
图 3 　HPD400 树脂的动态解吸曲线
Fig13 　Dynamic desorption curve of HPD400 resin
回收率为 8814 % ,质量分数为 3114 % ,故确定洗脱
剂用量为 6 倍量树脂柱体积。
21415 　树脂使用次数的考察 :按照优选出来的最佳
工艺 , 准确称取相当于 50 g 干树脂的已处理
H PD400 树脂 ,湿法装柱 ,上样量为饱和点的 80 % ,
质量浓度为 012 g 生药材/ mL ,待吸附完全 ,依次用
水 ,30 %乙醇水溶液 4 倍柱体积洗脱后 ,换用 6 倍柱
体积 70 %乙醇溶液以 012 mL/ min 的流速洗脱 ,收
集洗脱液 ,为 1 个周期 ,重复试验。将各次收集的洗
脱液按 21212 项操作测定总黄酮质量浓度后减压浓
缩 ,干燥得固体样品 ,称定质量 ,计算每个周期总黄酮
回收率。结果重复使用至第 5 周期时 ,由于山蜡梅提
取物中含有大量叶绿素 ,树脂颜色变绿 ,残留在树脂
上的杂质较多 ,使吸附能力减弱 ,总黄酮收率降到了
3918 % ,已不符合产品要求 ,需要进行再生处理。
21416 　再生试验研究 :树脂柱先用 95 %乙醇洗脱
至无色后 ,再用 1 %的氢氧化钠水溶液 4 倍柱体积
洗脱 ,控制流速 1 mL/ min ,最后用大量蒸馏水洗至
p H 值为中性 ,换用 1 %盐酸水溶液 4 倍柱体积洗
脱 ,最后用大量蒸馏水洗至 p H 值为中性即可。再
生后 ,该树脂总黄酮收率仍可达到 73 %以上。经过
2 次再生后 ,树脂不可再用。
3 　讨论
　　不同类型的树脂对山蜡梅总黄酮的吸附性能均
为 (N KA29) > 中等极性树脂 ( H PD2400) > 弱极性
树脂 ( HPD2450、AB28) > 非极性树脂 ( H PD2100、
H PD2700、HP220、D101) ,显示极性树脂和中等极性
树脂对山蜡梅总黄酮具有较好的吸附解吸性能 ;但
解吸率和总黄酮质量分数却显示为弱极性树脂中等
极性树脂 ( HPD2400) > 弱极性树脂 ( HPD2450、AB2
8) > 非极性树脂 ( HPD2100、HPD2700、HP220、
D101) > 极性树脂 (N KA29) 。
　　HPD400 型大孔吸附树脂对山蜡梅总黄酮具有
良好的吸附性能 ,其工艺条件为上样液质量浓度为
012 g 生药材/ mL ,上样生药量与干树脂的质量比小
于 1168 ∶1 ;吸附 6 h 后基本饱和 ,依次用水、30 %乙
醇溶液 4 BV 洗脱后 ,换用 6 BV 70 %乙醇溶液洗
脱 ,洗脱速率为 2 mL/ min ,总黄酮收率为 8814 % ,
质量分数为 3114 % ;树脂经 2 次再生后可连续使用
10 个周期。
　　研究结果表明 HPD400 树脂具有较大的吸附
量 ,易吸附、易解吸 ,其重复使用次数等性能与其他
树脂相比也具有明显优势 ,实验中确定的总黄酮纯
化工艺可为进一步纯化总黄酮 (使质量分数达到
50 %以上)提供借鉴 ,从而为进一步开发有效部位新
药提供参考。
参考文献 :
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上海科学技术出版社 ,19991
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酮含量[J ]1江西医学院学报 ,1999 ,34 (4) :872881
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11731
罐组逆流提取荷叶生物碱的研究
黄 　鑫 ,周永传 3 ,陈德煦
(华东理工大学中药现代化工程中心 ,上海 　200237)
摘 　要 :目的 　采用罐组逆流提取技术提取荷叶中的荷叶生物碱并优化其工艺条件。方法 　采用分光光度法测定
荷叶生物碱。按 L 16 (44 )正交设计表设计试验 ,分别考察提取时间、提取温度、固液比和乙醇体积分数 4 个因素的
影响。结果 　通过极差分析得出罐组逆流提取荷叶生物碱的最佳工艺条件为 :提取时间 25 min ,提取温度 80 ℃,
·9221·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2008210214　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :黄　鑫 (1984 —) ,男 ,江苏镇江人 ,华东理工大学药学院硕士研究生 ,研究方向为中草药有效成分的提取与纯化。
Tel :015921545525 　E2mail :ashura200 @hot mail1com3 通讯作者　周永传　Tel : (021) 64253329 　E2mail : xdeng @ecust1 edu1cn
固液比 1 ∶50 ,乙醇体积分数为 70 %。结论 　可以将罐组逆流提取技术应用于荷叶提取工程。
关键词 :荷叶 ;生物碱 ;罐组逆流提取 ;正交试验
中图分类号 :R28412 ;R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0821229204
Extracting of alkaloids from Nelumbo nuci f era leaves by multi2stage countercurrent extraction
HUAN G Xin , ZHOU Yong2chuan , CH EN De2xu
(Modern Engineering Center for Traditional Chinese Medicine , East China University of Science and Technology ,
Shanghai 200237 , China)
Abstract : Objective 　To optimize t he ext racting process of alkaloid f rom N el umbo nuci f era leaves by
multi2stage countercurrent ext raction1 Methods 　The spect rop hotomet ry was used to determine t he alka2
loids1 The ext racting process of alkaloid was optimized by L16 (44 ) to observe t he effect of ext raction time ,
ext raction temperat ure , solid to liquid ratio , and ethanol concent ration , respectively1 Results 　The opti2
mum ext raction parameters were ext raction time 25 min , ext raction temperation 90 ℃, solid to liquid ratio
1 ∶50 , and ethanol concent ration 70 %1 Conclusion 　The multi2stage countercurrent ext raction is used to
the ext racting process of alkaloid f rom N1 nuci f era leaves1
Key words : t he leaves of N el umbo nuci f era Gaert n1 ; alkaloids ; multi2stage countercurrent ext raction ;
ort hogonal test
　　荷叶是睡莲科植物莲 N el umbo nuci f era
Gaert n1 的叶片 ,除含有普通植物中所共有的碳水
化合物、脂质、蛋白质、鞣质等化学成分外 ,还含有荷
叶碱、亚美罂粟碱、N2去甲基荷叶碱等多种生物碱
类活性物质。荷叶不仅具有活血化瘀、降脂减肥、降
血压和防止动脉粥样硬化等功效 ,而且还具有抗有
丝分裂的作用 ,有较强的抑菌效果[1 ,2 ] 。目前对荷
叶生物碱的提取多采取单级提取法 ,即物料与溶剂
的一次平衡的间歇提取 ,由于到提取后期体系中传
质推动力不断降低直至液固两相平衡 ,因此单级提
取法的提取率较低、溶剂量大、提取时间长 ,同时极
大地增加了后续工序的处理量。罐组逆流提取
(multi2stage countercurrent ext raction)是一种增大
传质推动力、提高提取效率的提取技术[ 3 ] 。它将多
个提取单元科学组合 ,使单位时间内固液两相保持
较高的浓度差 ,从而提高提取效率。本研究采用自
制罐组逆流提取装置 ,利用其一次可以进行多罐提
取的特点提取荷叶中的荷叶生物碱 ,并通过正交试
验设计对其工艺条件进行优化。本研究建立荷叶中
生物碱的提取优化工艺 ,可为荷叶生物碱结构和生
理功能因子的研究以及荷叶保健食品、天然防腐剂
的开发提供很好的参考。
1 　仪器与材料
　　UV1900PC型紫外可见分光光度计 (亚研电子公
司) ,RE—52c 型旋转蒸发仪器 (上海予华仪器有限公
司) 。自制罐组逆流提取装置 ,其装置图见图 1。
图 1 　罐组逆流提取装置示意图
Fig11 　Device sketch of multi2stage
countercurrent extraction
　　荷叶购于雷允上中药店 ,经本校中药中心鉴定
为睡莲科植物莲 N1 nuci f era Gaert n1 的干燥叶
片 ;荷叶碱对照品购于中国药品生物制品检定所 ;乙
醇等试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
211 　罐组逆流提取工艺流程 :见图 2。当某一阶段
提取过程结束时 , (1) 有效成分被提净的单元 :进行
排渣和加料作业。(2)其他未提净的单元 :被提净单
元的上一单元的饱和溶剂通过泵二排至后道浓缩工
序 ,不饱和溶剂按有效成分的量递减的反方向进行
单元组数减 1 次的迁移 ;新鲜溶剂通过泵一加入到
物料浓度最低的单元 ,各罐不饱和溶剂按有效成分
的量递增方向进行单元组数减 1 次的迁移。上述各
项步骤完成后各单元重复下一个过程。
212 　荷叶生物碱的分光光度法测定
·0321· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
图 2 　罐组逆流提取工艺流程图
Fig12 　Flow chart of multi2stage countercurrent extraction
21 211 　对照品溶液的制备 :精密称取荷叶碱 4 mg ,
置于 10 mL 量瓶中 ,加三氯甲烷至刻度 ,摇匀。精
密吸取 1 mL 于 10 mL 量瓶中 ,加三氯甲烷至刻度 ,
摇匀 ,即得。
21212 　供试品溶液的配制 :取罐组逆流提取液 ,旋
蒸去乙醇 ,将浓缩液用 015 %HCl 调节 p H 2～3 ,用
滤纸滤过 ,用 30 mL 氯仿分 2 次萃取酸水液 ,弃去
氯仿层 ,酸水中加入 015 %NaO H 调节 p H 7 左右 ,
静置 ,用滤纸滤过 ,除去鞣质。再加 015 %NaO H 调
节 p H 9～l1 ,再用 90 mL 氯仿分 3 次萃取至水中无
生物碱为止 ,合并氯仿液 ,备用。
21213 　溴甲酚绿缓冲液的制备 :精密称取溴甲酚绿
125 mg ,用 012 mol/ L NaO H 1215 mL 溶解 ,加入
邻苯二甲酸氢钾 2150 g ,加少量水溶解 ,转移至 250 mL
量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀。
21214 　标准曲线的绘制[4 ] :分别用移液管精密吸取
110、115、210、215、310 mL 荷叶碱对照品溶液于 10
mL 量瓶中 ,加三氯甲烷至刻度 ,振摇 ,移至分液漏
斗中。精密加入溴甲酚绿缓冲液 6 mL ,摇匀 ,静置。
取澄清的三氯甲烷液在 41315 nm 处测定吸光度
( A)值。以 A 为纵坐标 ,质量浓度为横坐标 ,绘制标
准曲线 ,通过最小二乘法进行线性回归 ,得回归方程
Y = 01088 X - 01036 ( r = 01999 4) ,线性范围为 4～
12μg/ mL 。
21215 　样品测定 :精密称量供试品溶液 2 mL ,用氯
仿配成一定浓度的溶液。按标准曲线的绘制项下的
方法测定样品中的 A 值 ,计算荷叶生物碱的得率
[得率 = 荷叶生物碱的质量/ 药材质量 ×100 %]。
213 　罐组逆流提取工艺优化
21311 　因素水平的确定 :选取提取时间 (A) 、乙醇
体积分数 (B) 、固液比 (C) 和提取温度 (D) 作为考察
因素 ,每因素设计 4 个水平 ,见表 1。
21312 　正交试验结果与分析 :按照 L 16 (44 ) 正交试
验安排试验 ,测定提取液中荷叶生物碱的质量浓度 ,
结果见表 2。
表 1 　因素及水平
Table 1 　Factors and levels
水平
因　素
A/ min B/ % C D/ ℃
1 10 60 1 ∶15 50
2 15 70 1 ∶20 60
3 20 80 1 ∶30 70
4 25 90 1 ∶50 80
表 2 　L16 ( 44 )正交设计结果
Table 2 　Results of L16 ( 44 ) orthogonal test
序号 A B C D 得率/ %
1 25 60 1 ∶50 50 11 229
2 25 70 1 ∶30 60 11 068
3 25 80 1 ∶20 70 01 918
4 25 90 1 ∶15 80 11 167
5 20 60 1 ∶30 70 01 918
6 20 70 1 ∶50 80 11 335
7 20 80 1 ∶15 50 01 713
8 20 90 1 ∶20 60 01 674
9 15 60 1 ∶20 80 01 988
10 15 70 1 ∶15 70 01 675
11 15 80 1 ∶50 60 01 821
12 15 90 1 ∶30 50 01 542
13 10 60 1 ∶15 60 01 404
14 10 70 1 ∶20 50 01 444
15 10 80 1 ∶30 80 01 932
16 10 90 1 ∶50 70 01 889
K1 11096 01 862 11069 01732
K2 01910 01 881 01865 01742
K3 01734 01 864 01733 01850
K4 01667 01 819 01740 11083
R 01429 01 062 01336 01351
　　极差分析结果可以看出 ,影响荷叶生物碱提取
效果各因素的主次顺序分别为 :提取时间、提取温
度、固液比、乙醇体积分数。同时得出较优化试验组
合为 A1 D4 C1B2 ,即提取时间 25 min ,提取温度 80
℃,固液比 1 ∶50 ,乙醇体积分数 70 %。
214 　验证试验 :应用优化得到的工艺条件提取 ,并
·1321·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
重复试验 3 次 ,得率为 11435 8 % ,试验结果见表 3。
表 3 　验证试验结果
Table 3 　Results of verif ication
序号 得率/ % 序号 得率/ %
1 11 423 3 11501
2 11 384 均值 11436
3 　讨论
　　将罐组逆流提取技术应用于荷叶提取工程 ,可
以克服提取时原料与溶剂中有效成分在接近平衡时
浓度差小的不足 ,有效提高提取效率。
　　通过正交试验结果得出本装置的最佳工艺条
件 :提取时间 25 min ,提取温度 80 ℃,固液比 1 ∶
50 ,乙醇体积分数为 70 %。
参考文献 :
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毛细管气相色谱法测定辛夷挥发油软胶囊中的α2蒎烯、β2蒎烯、
柠檬烯和 1 ,82桉叶素
曾蔚欣1 ,2 ,王 　弘1 ,孙路路2 ,赵冠勋1 ,陈世忠1 3
(11 北京大学医学部药学院 , 北京 　100191 ; 21 北京世纪坛医院 药剂科 , 北京 　100038)
摘 　要 :目的 　建立测定辛夷挥发油软胶囊中α2蒎烯、β2蒎烯、柠檬烯和 1 ,82桉叶素的测定方法。方法 　采用毛细
管气相色谱法测定。BP25 毛细管柱 (30 m ×0125 mm ,0122μm ) ;进样器温度 180 ℃; FID 检测器温度 200 ℃;柱温
采用程序升温 ;分流比 1 ∶30 ;苯乙酮为内标。结果 　α2蒎烯在 01054～21505μg 线性关系良好 ,平均加样回收率为
9816 % ,RSD 为 0172 % ( n = 9) ;β2蒎烯在 01070～31204μg 线性关系良好 ,平均加样回收率为 9910 % , RSD 为
0165 %( n = 9) ;柠檬烯在 01068～31190μg 线性关系良好 ,平均加样回收率为 10111 % ,RSD 为 0156 %( n = 9) ;1 ,82
桉叶素在 01301～101205μg 线性关系良好 ,平均加样回收率为 9916 % ,RSD 为 1124 % ( n = 9) 。结论 　该方法简
便、准确、重现性好 ,可作为辛夷挥发油软胶囊的质量控制方法。
关键词 :辛夷挥发油软胶囊 ;α2蒎烯 ;β2蒎烯 ;柠檬烯 ;1 ,82桉叶素 ;毛细管气相色谱法
中图分类号 :R28411 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0821232204
Determination ofα2pinene ,β2pinene , l imonen , and 1 , 82cineole in Flos Ma gnoliae
volatile oil soft capsula by capillary gas chromatography
ZEN G Wei2xin1 ,2 , WAN G Hong1 , SUN L u2lu2 , ZHAO Guan2xun1 , CH EN Shi2zhong1
(11 School of Pharmaceutical Science , Peking University Health Science Center , Beijing 100191 , China ;
21 Department of Pharmacy , Peking Millennium Monument Hospital , Beijing 100038 , China)
Abstract : Objective 　To develop a met hod for determination ofα2pinene ,β2pinene , limonen , and 1 , 82
cineole in Flos M agnol i ae volatile oil sof t cap sula1 Methods 　The content s ofα2pinene ,β2pinene , limonen ,
and 1 , 82cineole were determined at t he same time by capillary gas chromatograp hy with sequential increase
of temperat ure p rogramming1 Capillary column BP25 (30 m × 0125 mm , 0122μm) was used , injector
temperature 180 ℃, flame ionization detector ( FID) temperat ure 200 ℃, split ratio 1 ∶30 , acetop henone
as internal standard1 Results 　A good linear relationship ofα2pinene was at a range of 01054 —21505μg ,
the average recovery was 9816 % , and RSD was 0172 % ( n = 9) ; A good linear relationship ofβ2pinene
was at a range of 01070 —31204μg , t he average recovery was 9910 % , and RSD was 0165 % ( n = 9) ; A
·2321· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2008211204　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家“973”项目 (2006CB504707)
作者简介 :曾蔚欣 (1972 —) ,女 ,湖南省益阳市人 ,主管药师 ,硕士 ,北京世纪坛医院药剂科工作 ,主要从事药品检验及中药与天然药物研
发工作。Tel : (010) 63926353 　E2mail :cindy zwx @sina1com3 通讯作者　陈世忠　Tel : (010) 82802723 　E2mail :chenshizhong66 @1631com