全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·855·
2．7．2精密度试验：取同一质量浓度的葡萄糖对照
品溶液连续测定5次，测定吸光度值，计算，结果吸
光度值的RSD为0．23％。
2．7．3重现性试验：取同一批次样品5份，制备供
试品溶液，测定，计算，结果样品中多糖质量分数的
RSD为2．3％。
2．7．4加样回收率试验：取夏枯草温敏凝胶0．5g
(含多糖约5．2mg)，精密称定，分别加入3．98、
5．01、6．04mg无水葡萄糖对照品，制备供试品溶
液，测定，计算回收率，结果平均加样回收率为
102．57％，RSD为1．79％(咒=9)。
2．8温敏凝胶中多糖的测定：分别自3批夏枯草温
敏凝胶中取约1g凝胶，置10mL塑料离心管中，精
密称定，冷冻干燥。冷冻干燥样品加醋酸乙酯2．0
mL，涡旋使完全溶解，5000r／min离心20min，弃
上清液，沉淀分别再加醋酸乙酯2．0mL，同法萃取
1次，沉淀于50℃水浴挥尽醋酸乙酯。残渣用蒸馏
水完全溶解，转移至100mL量瓶，加蒸馏水至刻
度，摇匀，即得供试品溶液。自供试品溶液中精密移
取0．2mL于具塞试管中，于483nm处测定吸光度
值，结果见表3。
表3夏枯草温敏凝胶中多糖的测定结果(万一3)
Table3 Determinationofpolysaccharidesinthermo-
sensitivegelofP．vulgaris(矗=3)
3讨论
泊洛沙姆为聚氧乙烯(PE0)和聚氧丙烯(PPO)
组成的ABA型嵌段共聚物，其高浓度水溶液具有
受热反向胶凝的性质，即冷藏温度下是自由流动的
液体而室温或体温时形成澄明的凝胶[3]。泊洛沙姆
在多糖定量测定中的干扰，可能是由于其在硫酸作
用下脱水形成的化合物可与苯酚反应生成有色化合
物，该物质与多糖经显色所得化合物颜色相近，因而
造成严重干扰。经预实验发现泊洛沙姆在室温下易
溶于醋酸乙酯，而夏枯草多糖则不溶，据此采用醋酸
乙酯为萃取溶剂对多糖及基质进行分离。但因制剂
本身为温敏凝胶，在温度达29～30℃时即可发生相
转变而成凝胶，以醋酸乙酯进行液液萃取时属于放
热过程，凝胶的胶凝阻碍了醋酸乙酯的萃取，故液液
萃取的方式并不适合温敏凝胶中基质与多糖的分
离，因此采用先将制剂进行冷冻干燥后，再用醋酸乙
酯萃取的方法分离基质与多糖，较符合温敏凝胶的
特性，多糖保留率为100．11％，是较为理想的样品
前处理方法，为以泊洛沙姆为主要基质的多糖制剂
中多糖的含量测定提供参考。
参考文献：
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zationofananti—HSVpolysaccharidefromPrunellavulgar括
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龙血竭胶囊的HPLC指绞图谱研究
高秀丽，蒋倩，张敏
(贵阳医学院药学院，贵州 贵阳 550004)
摘要：目的 用HPLC法对龙血竭胶囊指纹图谱进行研究。方法采用色谱条件：EclipseXDB—ODS柱(150mm×
4．6ram)，流动相为乙腈一水，梯度洗脱进行色谱分离；检测波长为275nm；体积流量为1．0mL／min；柱温为40℃．
以龙血素B作为参照物。结果初步建立了龙血竭胶囊的HPLC指纹图谱，并进行相似度评价。结论方法简单可
行，能够有效地控制龙血竭胶囊的内在质量。
关键词：龙血竭胶囊I指纹图谱；HPLC；相似度
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06—0855一04
血竭为传统名贵中药，有“活血之圣药”的美誉， 含多种黄酮类、皂苷类、甾醇类、萜类和其他化合物，
收稿日期：2007—09—30
作者简介：高秀丽(1965一)．女，副教授．硕士．1990年毕业于华西医科大学药学院，2001—2003年作为英国Portsmouth大学访问学者，
2003—2004年作为英国Manchester大学访向l学者．现为贵阳医学院实验室管理与设备处副处长，在药学系分析测试中心任
教．从事药物质量及其新药开发研究。药物药动学研究。Tel：(0851)6908468E—mail：xiuligao@hotmail．com
万方数据
·856· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
具有活血散瘀、消炎止痛、收敛止血、生肌敛疮、补血
益气等功效。
目前市场上，龙血竭胶囊已有多个厂家生产。龙
血竭作为一种中药，其质量控制手段主要有薄层色
谱法Ⅲ和采用高效液相色谱法对单个已知化合物
(如龙血竭B等)进行测定[2叫]。由于受到天气、气
候、产地等各种因素的影响，有效生物活性成分的量
会有较显著的差异，从而影响药物制剂的质量。为了
更好地控制龙血竭胶囊的质量，本实验采用HPLC
法建立了龙血竭胶囊的指纹图谱。
1仪器与试药
美国安捷伦1100高效液相色谱仪。龙血素B
对照品(中国药品生物制品检定所，批号111558—
200303)，龙血素A对照品(中国药品生物制品检定
所，批号111660—200301)。乙腈为色谱纯，其余试剂
均为分析纯。龙血竭胶囊样品来源于不同的厂家，均
市售购得，见表1。
表1龙血竭胶囊样品
Table1 Testsampleofdragon
7
Sbloodcapsula
样品 产地 样品 产地
1 云南 7 广西
2 云南 8 广西
3 云南 9 云南
4 云南 10 云南
5 云南 11 云南
6 云南
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：EclipseXDB—Czs色谱柱
(150mm×4．6mm，5肛m)、Phenomenex—C18保护柱
(3mm×4．5mm，5pm)；检测波长：275rim；体积流
量：1．0mL／min；进样体积：10／xL；柱温：40℃；流
动相：乙腈一水，梯度洗脱：0min：乙腈一水(10：90)；
25min：乙腈一水(25l 75)；40min：乙腈一水(36l
64)；60min：乙腈一水(45：55)。
2．2对照品溶液的制备：取龙血素B对照品适量，
精密称定，加甲醇溶解，制成12．008／-g／mL的龙血
素B对照品溶液。取龙血素A和B对照品适量，精密
称定，加甲醇制成26．06／-g／mL龙血素A和18．01
ftg／mL龙血素B的对照品溶液。色谱图见图1。
2．3供试品溶液的制备：取样品约0．1g，精密称
定，置25mL量瓶中，加甲醇20mL，溶解，加甲醇
稀释至刻度，摇匀，滤过，即得，色谱图见图1。
2．4 重现性试验：取同一批龙血竭胶囊内容物6
份。精密称量，制备供试品溶液，分别进样，测得结果
表明，各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积
B I
【． M．．。lkh．．—^监—。JL’
0 10 20 30 40 50 60
t／rain
1一龙血素A2一龙血素B
1一IoureirinA 2一loureirinB
圈1对照品(A)及龙血竭样品(B)高效液相色谱圈
Fig．1HPLCChromatogramofreferencesubstance
(A)anddragon
7
sbloodcapsula(B)
的RSD均小于3％，表明样品重现性良好。
2．5精密度试验：取同一供试品溶液，连续进样5
次，测得结果表明，各共有指纹峰的相对保留时间和
相对峰面积的RSD均小于3％，表明精密度良好。
2．6 稳定性试验：取同一批龙血竭胶囊粉末，精密称
量，制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、16、24h进样，测
得结果表明，各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面
积的RSD均小于3％，表明供品溶液在24h内稳定。
2．7指纹图谱的建立
2．7．1指纹图谱的测定：分别精密吸取对照品溶液
和供试品溶液各10弘L，注入高效液相色谱仪，记录
65min的色谱图。
2．7．2共有峰的确定：按照《中药注射剂指纹图谱
研究的技术要求(暂定)》规定，测定11批不相同产
地不同批次龙血竭胶囊的指纹图谱，其中18个峰为
胶囊的共有指纹峰，样品中16号峰为龙血素B的
色谱峰，其响应值较高，色谱峰较窄，峰形好。因此以
16号峰(龙血素B)作为色谱指纹图谱的参比峰。计
算各共有指纹峰相对于参比峰的相对保留时间和相
对峰面积的比值。结果见图2、3和表2、3。
14
IL．． ．烃o．恕灿竖蝴猷．．
0 lO 20 30 40 50 60
t／min
图2龙血竭胶囊的高效液相指纹圈
Fig．2HPLCfingerprintofdragon’sbloodcapsula
。．些一I II
而11
L!．：二二：二：!=二：芷：，；：‘企：．z二j8≤蚕霪释6
O 10 20 30 40 50 60 70 80 90100
t／min
图3龙血竭胶囊指纹图
Fig．3HPLCFingerprintsofdragon’Sbloodcapsula
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·857·
裹2龙血蝎胶囊指纹图谱中共有峰的相对保留时间
Table2 Relativeretentionmeofcommonpeaksinfingerprintofdragon
7
sbloodcapsula
2．7．3指纹图谱的相似度计算：指纹图谱相似度可
以评定各批次或各产地产品指纹图谱间整体相似
性，定量描述其各自化学组成的差异与波动。实验采
用中药色谱图分析和数据管理系统，对11批龙血竭
胶囊进行相似度评价，结果见表4。
3讨论
3．1 由于龙血竭所含化学成分较多且结构相近，采
用等度洗脱方式很难将其分开，故采用梯度洗脱以
实现良好分离。实验中考察了甲醇一水、乙腈一水、甲
醇一0．1％磷酸、乙腈一O．1％磷酸系统和梯度洗脱程
序。结果表明乙腈一水系统最佳，实验中所确定的梯
度程序使各色谱峰分离较好，保留时间适中。
3．2考察并比较了三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇3种
不同溶剂的样品提取方法，结果发现三氯甲烷作为
溶剂提取样品色谱峰出峰少，龙血素A和龙血素B
的峰面积减少；醋酸乙酯作为溶剂提取样品色谱峰
出峰与甲醇作为溶剂提取样品色谱峰出峰的多少差
不多，但个别峰的面积要较后者要小些。故选用甲醇
为提取溶剂。
3．3 采用高效液相色谱仪的二极管增列阵列检测
万方数据
·858· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
寰4龙血竭胶囊脂纹图谱相似度结果
Table4 Similarityoffingerprintin11batches
ofdragon’sbloodcapsula
相关系数法 夹角余弦法
1
0．805709
0．964931
0。97634Z
0．966056
0．913095
O．815265
0．974253
0．973588
0．974253
O．941763
1
0．891744
0．977059
0．983728
0．976398
0．945001
0．89363
0．982941
0．982831
0．982941
0．957053
器对样品的吸收波长进行分析。结果表明，低波长处
基线漂移严重，而高波长处各组分的响应很小，在
275nm检测波长下，基线较稳定，色谱峰较多，信息
丰富，故选择275nm为最终检测波长。
3．4实验中采用了Diamonsil—C18色谱柱(250mm×
4．6mm，5pro)和EclipseXDB—C18色谱柱(150mm×
4．6mm，5肛m)，结果显示这两种柱子在色谱条件下
都能够将龙血竭胶囊各组分峰较好地分开，但前者
需分析时间较后者长。EclipseXDB—C。。色谱柱(150
mrn×4．6ram)能在1h内完成分析，达到较理想的
效果。
3．5 从实验中不同厂家和不同批次的龙血竭胶囊
指纹图谱中可以看出，11批龙血竭胶囊指纹图谱中
主要色谱峰的整体图貌基本一致。同时相似度评价
结果表明，不同生产厂家、同一生产厂的不同批次
间，个别批次仍然存在较大的差异(如样品2和样品
7)。因此，为保证龙血竭胶囊产品质量的稳定和一致
性，应固定药材原料的来源、保证药材原料质量的稳
定和一致性。
参考文献：
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大黄中游离蒽醌的提取工艺优化研究
马容，狄留庆。，许惠琴
(南京中医药大学中医药研究院，江苏南京210029)
大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheumpalmatum
L．、唐古特大黄R．tanguticumMaxi ．exBalf．或
药用大黄尺．officinaleBaill．的干燥根及根茎。大
黄具有清热解毒、活血通瘀、泻热通肠等多种功能。
大黄主要产地是甘肃、青海，是我国最常用的中药之
一，药用范围十分广泛。大黄的主要有效成分是大黄
游离蒽醌类物质(包括芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、
大黄酚和大黄素甲醚等)以及它们与糖苷生成的结
合型蒽醌[1]。随着对其研究的不断深入，其主要药用
部位基本明确，而如何最大限度地保留其有效组分，
除去无效成分，已成为大黄制剂研究的重点。文献曾
报道大孔吸附树脂对大黄总蒽醌具有较强的富集作
用[2]，但对总游离蒽醌的提取纯化方法报道不多。本
实验将大黄中的结合型蒽醌水解转化成游离蒽醌，
然后对总游离蒽醌进行提取。实验采用正交试验法，
以大黄提取物中总游离蒽醌的收率为考察指标，考
察了酸水解及乙醇提取的工艺条件，优选出大黄游
离蒽醌的最佳提取工艺，获得纯度较高的有效部位。
1仪器与试药
Agilentll00高效液相色谱仪(安捷伦科技有限
公司)；Buchi旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司)；DZF一
6050型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；
BP211D型电子分析天平(德国Sartorius公司)；石
英亚沸高纯水蒸馏器(江苏省金坛市荣华仪器制造
有限公司)。
1，8一二羟基蒽醌对照品(德国，批号为
D108103—5G，质量分数为96％)，甲醇等试剂均为
分析纯。酒大黄药材购自安徽丰原铜陵中药饮片有
限公司，经南京中医药大学中药鉴定学教研室吴德
康教授鉴定为蓼科植物掌叶大黄R．palmatumL．
收稿日期：2007—09—25
作者简介：马容(1983一)．女，江苏海安人，南京中医药大学2005级硕士研究生，从事中药药剂学的研究。E—mail：hamr@163．corn
*通讯作者狄留庆Tel：(025)86798226E—mail：diliuqin9928@163．corn
号一1
2
3
4
5
6
7
8
9
o
1
批一
●●
万方数据
龙血竭胶囊的HPLC指绞图谱研究
作者： 高秀丽， 蒋倩， 张敏
作者单位： 贵阳医学院药学院,贵州,贵阳,550004
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(6)

参考文献(4条)
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HPLC测定龙血竭中新化合物剑叶龙血素C含量[期刊论文]-武警医学院学报2008,17(5)


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