全 文 ：宜肝乐颗粒的质量标准研究
蔡崇高＊　
(浙江温岭医药药材有限公司 , 浙江 温岭　317500)
摘　要:目的　建立宜肝乐颗粒的定性 、定量鉴别方法。 方法　采用薄层色谱法对宜肝乐颗粒中鸡矢藤 、功劳木 、
虎杖进行定性鉴别;高效液相色谱法测定宜肝乐颗粒中大黄素 , Zo rbax C18色谱柱(150 mm×4.6 mm , 5 μm);流动
相:甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20);检测波长:288 nm;体积流量:1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:10 μL。在此色
谱条件下 ,理论塔板数按大黄素峰计达 3 000 以上 ,分离度为 2.0。结果　3 味药材的薄层色谱鉴别呈阳性;建立的
定量测定方法可用于宜肝乐颗粒中大黄素的测定。结论　薄层色谱法和高效液相色谱法简便 、准确 、灵敏 ,可作为
宜肝乐颗粒质量控制的有效方法。
关键词:宜肝乐颗粒;鸡矢藤;功劳木;虎杖;大黄素;薄层色谱;高效液相色谱
中图分类号:R286.02　　　文献标识码:A　　　文章编号:0253 2670(2009)05 0739 03
　　宜肝乐颗粒由鸡矢藤 、虎杖 、马鞭草 、功劳木等
药材组成 ,具有清热解毒 ,利胆退黄的功效 ,用于肝
胆湿热所致的急慢性乙型肝炎 ,对降酶 、增加肝细胞
的复活 ,减少肝纤维化作用明显 ,可以消除肝腹水 、
对慢性肝炎病症减轻有疗效。为了更好地控制本品
的质量 ,保证药物质量和疗效 , 本实验对方中鸡矢
藤 、功劳木 、虎杖进行了薄层色谱鉴别研究 ,并采用
HPLC法对本品中的大黄素进行测定 ,结果表明该
方法简便可靠 ,重现性好 ,可作为宜肝乐颗粒质量控
制的有效方法。
1　材料与仪器
宜肝乐颗粒(遵义万才药业有限责任公司);缺
鸡矢藤 、功劳木 、虎杖药材阴性对照样品(自制);鸡
矢藤(批号:121256-200402)、功劳木(批号:121461-
200501)、虎杖(批号:120980-200503)对照药材 ,大
黄素(批号:110756-200510)、大黄素甲醚(批号:
110758-200509)对照品均购自中国药品生物制品检
定所 。
硅胶 G 薄层板(青岛海洋化工厂)。甲醇为色
谱纯 ,水为重蒸馏水 ,其余试剂均为分析纯。
微量进样器(上海医用激光仪器厂), ZF —1 型
三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂), Agi-
lent1100液相色谱仪 ,浙江大学 N2000 色谱工作
站;Sar to riusBP211D电子天平(感量 0.1 mg , 0.01
mg;载量 210 g ,80 g)。
2　方法与结果
2.1　鸡矢藤的薄层色谱鉴别:取本品粉末 1 g ,加
75%乙醇20 mL ,超声处理 20 min ,滤过 ,滤液蒸干 ,
残渣加乙醇 1 mL 使溶解 ,作为供试品溶液。取缺
鸡矢藤药材阴性样品粉末 1 g 和鸡矢藤对照药材
0.5 g ,同法制成阴性对照溶液和对照药材溶液 。照
薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录 VI B)
试验 ,吸取上述 3种溶液各 10 μL ,分别点于同一以
羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上 ,以三
氯甲烷-甲醇-浓氨试液(9∶3∶0.8)为展开剂 ,展
开 ,取出 ,晾干 ,置紫外光灯(365 nm)下检视 ,见图
1。结果供试品色谱中 ,在与对照药材色谱相应的位
置上显相同颜色的荧光斑点 ,阴性对照无干扰。
1-对照药材　2-宜肝乐颗粒　3-阴性对照
1-cont rol sample　2-Yiganle Granula　3-n egative sam ple
图 1　宜肝乐颗粒中鸡矢藤的薄层色谱图
Fig.1　TLC of Herba et Radix Paederiae Scandentis
in Yiganle Granula
·739·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
＊ 收稿日期:2008-09-19　　　作者简介:蔡崇高(1958-),男 ,浙江温岭人,执业药师 ,台州市药学会常务理事 ,毕业于成都中医药大学峨嵋学院(原四川省中药学校),从事中药质量与鉴定方面的研究。
2.2　功劳木的薄层色谱鉴别:取本品粉末1 g ,加乙
醇20 mL ,超声处理 30 min ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加
乙醇 1 mL 使溶解 ,作为供试品溶液 。取缺功劳木
药材阴性样品粉末 1 g 和功劳木对照药材 0.1 g ,同
法制成阴性对照和对照药材溶液 。照薄层色谱法
(《中国药典》2005年版一部附录 Ⅵ B)试验 ,吸取上
述 3种溶液各 10 μL ,分别点于同一以羧甲基纤维
素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上 ,以正丁醇-36%
乙酸-水(7∶1∶2)的上层溶液为展开剂 ,展开 ,取
出 ,晾干 ,置紫外光灯(365 nm)下检视 ,见图 2。可
见供试品色谱中 ,在与对照药材色谱相应的位置上 ,
显相同颜色的荧光斑点 ,阴性对照无干扰。
1-对照药材　2-宜肝乐颗粒　3-阴性对照
1-control sample　2-Yiganle Granula　3-negative sample
图 2　宜肝乐颗粒中功劳木的薄层色谱图
Fig.2　TLC of Caulis Mahoniae in Yiganle Granula
2.3　虎杖的薄层色谱鉴别:取本品粉末 1 g ,置具塞
锥形瓶中 ,精密加入甲醇 25 mL ,密塞 ,称定质量 ,超
声处理 1 h ,取出 ,放冷 ,再称定质量 ,用甲醇补足减
失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,量取续滤液 10 mL ,蒸干 ,残
渣加 2.5 mol/ L 硫酸 10 mL 使溶解 ,加三氯甲烷 20
mL ,置 80 ℃水浴中加热回流 1 h ,取出 ,放冷 ,移至
分液漏斗中 ,用少量三氯甲烷洗涤容器 ,并入分液漏
斗中 ,分取三氯甲烷层 ,酸液再用三氯甲烷洗涤两
次 ,每次 10 mL ,合并三氯甲烷液 ,蒸干 ,残渣用甲醇
溶解并转移至 10 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 ,滤过 ,取续滤液 5 mL ,浓缩至 0.5 mL ,作为供
试品溶液 。取缺虎杖药材阴性样品粉末 1 g ,同法制
成阴性对照溶液。另取虎杖对照药材0.1 g ,加甲醇
10 mL ,超声处理 15 min , 滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加
2.5 mo l/L 硫酸溶液 5 mL ,加热回流 30 min ,放冷 ,
用三氯甲烷提取 2次 ,每次 5 mL ,合并三氯甲烷液 ,
浓缩至 1 mL ,作为对照药材溶液。再取大黄素和大
黄素甲醚对照品适量 ,加甲醇分别制成1 mg/mL 溶
液 ,作为对照品溶液 。照薄层色谱法(《中国药典》
2005年版一部附录 Ⅵ B)试验 ,吸取上述 5种溶液
各 10 μL ,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合
剂的硅胶G 薄层板上 ,以石油醚(30 ～ 60 ℃)-甲酸
乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂 ,展开 ,
取出 ,晾干 ,置紫外灯(365 nm)下检视 。供试品色
谱中 ,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上 ,显
相同的橙黄色荧光斑点;再置氨蒸气中熏后 ,日光下
检视 ,斑点变为红色 ,阴性均无干扰。见图 3 。
1-大黄素　2-大黄素甲醚　3-对照药材
4-宜肝乐颗粒　5-阴性对照
1-emodin　2-physcion　3-control sample　4-Yiganle Granula
5-negative sample
图 3　宜肝乐颗粒中虎杖在 365 nm(A)和日光(B)的
薄层色谱图
Fig.3　TLC of Rhizoma Polygoni Cus pidati at 365 nm(A)
and sunlight(B)in Yiganle Granula
3　大黄素的 HPLC 法测定
3.1　对照品溶液的制备:取经过五氧化二磷干燥
24 h 的大黄素对照品 , 精密称定 ,加甲醇制成 20
μg/mL的溶液 ,即得。
3.2　供试品溶液的制备:取本品精密称定 ,研细 ,取
约 1.0 g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇
25 mL ,密塞 ,称定质量 ,超声处理 1 h ,取出 ,放冷 ,
再称定质量 ,用甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,精
密量取续滤液10 mL ,蒸干 ,残渣加2.5 mol/ L 硫酸
10 mL 使溶解 ,加三氯甲烷 20 mL ,置 80 ℃水浴中
加热回流 1 h ,取出 ,放冷 ,移至分液漏斗中 ,用少量
三氯甲烷洗涤容器 ,并入分液漏斗中 ,分取三氯甲烷
层 ,酸液再用三氯甲烷洗涤 2次 ,每次 10 mL ,合并
三氯甲烷液 ,蒸干 ,残渣用甲醇溶解并转移至 10 mL
量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,
·740· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
即得 。
3.3　色谱条件与系统适应性试验:Zorbax C18色谱
柱(150 mm×4.6 mm , 5 μm);流动相:甲醇-0.1%
磷酸溶液(80∶20);检测波长:288 nm ;体积流量:
1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:10μL。在此色谱
条件下 ,理论塔板数按大黄素峰计达 3 000以上 ,分
离度为 2.0。
3.4　线性范围考察:精密吸取大黄素对照品溶液
2 、4 、6 、8 、10 μL 注入液相色谱仪 ,测定峰面积 。以
进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,得线性回归方
程:Y =3 241.794 4 X -49.981 3 , r=0.999 6 ,因
此大黄素在 0.112 8 ～ 0.564 0μg 线性关系良好。
3.5　精密度试验:精密吸取大黄素对照品溶液 10
μL ,按上述 HPLC条件 ,重复进样 6次 ,结果大黄素
峰面积的 RSD为 1.36%。
3.6　稳定性试验:精密吸取 25.68 μg/mL 大黄素
对照品溶液及供试品溶液 ,于 0 、2 、4 、8 、12 h按上述
色谱条件分别进样 10 μL , 按大黄素峰面积计算
RSD值分别为 1.03%、1.21%,表明对照品溶液和
供试品溶液均在 12 h内稳定。
3.7　重现性试验:取批号为 20070309的样品 ,制备
供试品溶液 ,按上述方法测定 ,共测定 6 份 ,结果大
黄素质量分数的平均值为 0.256 8 mg/g , RSD 为
1.85%。
3.8　回收率试验:精密称取批号为 20070309 的样
品 9 份 , 每份约 0.5 g ,精密称定 , 分别精密加入
25.68μg/mL 大黄素对照品溶液 4 、5 、6 mL ,制备
供试品溶液 ,进样测定 ,计算大黄素的质量分数 ,结
果平均回收率为 100.25%, RSD为 1.75%。
3.9　样品测定:取 3批宜肝乐颗粒样品 , 每批取样
3份 ,制备供试品溶液 ,按上述色谱条件分别进样 10
μL ,测定大黄素峰面积 ,外标法计算样品中大黄素
的质量分数 ,结果见表 1。
表 1　宜肝乐颗粒中大黄素的测定结果(n=3)
Table 1　Determination of emodin in Yiganle Granula(n=3)
批号 大黄素/(mg· g -1)
20060411 0.2603
20060312 0.2551
20060313 0.2477
4　讨论
鸡矢藤鉴别中以三氯甲烷-甲醇-甲酸(8.5 ∶
1.5∶0.5)为展开剂 ,喷以 30%硫酸乙醇溶液 ,于
105 ℃加热至斑点清晰;另外以三氯甲烷-甲醇-浓氨
试液(9∶3∶0.8)为展开剂 ,置紫外光灯(365 nm)
下检视 ,优选鉴别方法 ,结果选用展开剂三氯甲烷-
甲醇-浓氨试液(9∶3∶0.8)用于宜肝乐颗粒中鸡矢
藤的鉴别。
功劳木的鉴别试验中考察了 3 种展开剂正丁
醇-36%乙酸-水(7∶1∶2)上层溶液 、醋酸乙酯-丁
酮-甲酸-水(10∶6∶2∶3)、苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙
醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)[ 1] 。结果第一
种展开时间短 、分离能力强 、斑点集中 、显色清晰 ,第
2种展开 1 h后才获得结果 、Rf值也不理想 ,第 3种
使用样品量较大 , 50 μL 才见斑点 ,并且显色不清
晰 。因此优选正丁醇-36%乙酸-水(7∶1∶2)的上
层溶液作为展开剂鉴别宜肝乐颗粒中功劳木。
虎杖的主要化学成分有大黄素 、大黄素甲醚 、虎
杖苷等 ,本实验对宜肝乐颗粒中虎杖的鉴别选用大
黄素 、大黄素甲醚作为对照进行定性考察 ,同时增加
虎杖药材作为对照进行鉴别 。考察石油醚(30 ～ 60
℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液 、苯-醋酸
乙酯-甲酸(6∶2∶0.1)、苯-醋酸乙酯(19∶1)3 种展
开剂[ 2] 。结果第一种 Rf值适中 、斑点集中 、显色明
显;第 2种 Rf值较大 ,有边缘效应;第 3种 Rf值相
差较小 、斑点分离不明显;最后确定用石油醚(30 ～
60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液展开
系统用于宜肝乐颗粒中虎杖的鉴别。
本品处方中虎杖为主药 ,测定方法参考《中成药
标准汇编》内科肝胆分册(WS-10148(ZD-0148)-
2002),选用以大黄素为指标测定;由于药味众多 ,成
分复杂 ,HPLC易受到杂质峰干扰 ,经过多次调整流
动相组成和比例方能达到目前良好的峰形和分离效
果 ,但每次分析时间偏长(约 50 min)。该制剂中另
含生物碱 、鸡矢藤苷等成分较多 ,极易发生干扰 ,因
此在比较了多种提取方法后 ,最后采用甲醇超声提
取后三氯甲烷回流 、萃取 ,结果表明 ,该方法可提取
完全 ,减少干扰。
参考文献:
[ 1] 　曾元儿 ,卢文彪 ,钟镜金.复方黄芩片质量标准的研究[ J] .中
药新药与临床药理 , 2003 , 14(4):260-262.
[ 2] 　姚关东.护肝宁片的薄层鉴别[ J] .齐鲁药事 , 2004 , 23(8):25-
26.
·741·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月