全 文 ：中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月·1499·
表5提取时间对提取效果的影响
Table5 Effectofextractingtimesonextractra e
裹6 10min提取次数对提取效果的影响
Table6 Effectofextractingtimesinten
minutesonextractra e
效果越好。但粉碎度太高，加大后续处理如过滤
的难度，考虑到工业化生产的实际情况，本实验仅比
较了粗颗粒和20目两种粒度，提取率无明显差异。
微波穿透厚度一般为2～3cm。本实验中放大
实验的提取率和质量分数都低于小试，可能是因为
裹7放大工艺试生产
Table7 Productionwithmagnifiedtechnology
小试设备容器小，微波辐射能完全穿透，放大设备容
器较大，微波辐射只能部分穿透。可以考虑加大搅拌
强度或改变容器形状来解决此问题。
微波提取的提取率和质量分数都明显高于普通
水煎法，原因是否是因为微波提取使细胞壁破裂，有
效成分更易流出有关；微波提取是否会影响多糖结
构和连接方式进而影响药效，有待进一步研究。
感谢中国医学科学院药用植物研究所赵永华博
士对黄芪药材进行的鉴定工作。
参考文献：
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E2]王莉．刘志勇．鲁建江．等．黄芪多糖的微波提取及含量测
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蜂胶HPLC指纹图谱的研究
王小平L3，林励，潘建国2，卢占列2
(1．广州中医药大学，广东广州 510400f2．广州市宝生园有限公司，广东广州 510400；
3．陕西中医学院，陕西咸阳712046)
摘 要：目的 用高效液相色谱法建立蜂胶指纹图谱。方法 采用迪马公司Diamonsil(钻石)C，s色谱柱(250mm×
4．6mm，5pm)，甲醇一0．4％磷酸水为流动相，梯度洗脱，体积流量为1．0mL／min，检测波长为283rim，柱温为
25℃。结果10批蜂胶样品得到的指纹图谱有13个共有峰，通过与对照品的保留时间比较，4、7、12、13号峰分别
为芦丁、槲皮素、白杨素和高良姜素。方法学考察结果表明，稳定性试验、重现性试验所得指纹图谱的相似度均大于
0．95，芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素保留时间和峰面积的RSD均小于2％。结论所建立的蜂胶HPLC指纹图谱
分析方法准确、可靠，重现性好，能够用于控制蜂胶的质量和真伪的鉴别，为更好的控制蜂胶的内在质量提供了科
学依据。
关键词：蜂胶；指纹图谱；芦丁；槲皮素；白杨素I高良姜素；高效液相色谱
中圈分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)10—1499—03
蜂胶是意大利蜂ApismelliferaL．从植物芽苞 和树干处采集的树胶，混入意大利蜂上颚腺分泌物
收稿日期：2007—12-08
基金项目：广州市科技计划项目(2005Z·EOl01)
作者简介：王小平(1976一)，女，陕西宝鸡人，广州中医药大学博士研究生．主要从事中药资源开发利用及新药研究。
Tel：(020)35622208E—mail：wangxiaopin9323@126．corn
*通讯作者林励Tel：13802914007

万方数据
·1500· 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第lo期2008年lo月
和蜂蜡等形成的一种具有芳香味的胶状固形物。蜂
胶主要化学成分为黄酮类、萜烯类、酚酸类化合
物[1]。蜂胶具有抗病毒、抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、
调血脂、调节机体免疫功能等多种生物活性[2]。目前
蜂胶原料及蜂胶产品的质控标准仅存在有效部位定
量测定等指标，无法科学地评价其质量，社会上以次
充好、以假当真，屡见不鲜，已严重影响了蜂胶的出
口创汇及蜂胶产品的质量[3~5】。为更有效的控制其
内在质量，保证蜂胶质量的稳定，本实验采用HPLC
法建立了蜂胶的指纹图谱。
I仪器、试药与材料
德国DionexP680A型高效液相色谱仪
(PDA一100检测器、STH585柱温箱、P680HPLC
泵、ASI一100自动进样器)，Chromeleon色谱工作
站；8953Dietikon型电子分析天平(瑞士)；
AS2060B型超声仪。
芦丁(批号080—9705)、槲皮紊(批号081—
9003)、白杨素(批号111701—200501)、高良姜素(批
号111699—200501)对照品均由中国药品生物制品
检定所提供，流动相所用甲醇为色谱纯，其他试剂均
为分析纯，蜂胶共10批，2006年11月采自不同产
地，由广州市宝生园有限公司提供，经广州市蜂产品
研究所卢占列鉴定。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱为迪马公司Diamonsil(钻
石)C18色谱柱(250mm×4．6mm，5pm)；流动相为
甲醇(A)一0．4oA的磷酸水(B)，梯度洗脱}体积流量
为1．0mL／min；检测波长为283nm；柱温为25℃，
进样量为10弘L。
2．2溶液的制备
2．2．1对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的
芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素对照品各适量，加甲
醇使溶解，分别制成每毫升含芦丁0．268mg，槲皮
素0．1096mg，白杨素29．6Pg，高良姜素20．6Pg
的溶液。
2．2．2蜂胶供试品溶液：将蜂胶在一10℃冷冻数
天后粉碎，取蜂胶样品约1g，精密称定，置索氏提
取器中，加100mL丙酮，加热回流至提取液无色，
提取液回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至
100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2．3方法学考察
2．3．1 精密度试验：取同一供试品溶液(01号样
品)10pL，连续进样5次，测定，所得色谱图用
MATLAB相似度软件评价，结果5次进样在同一
仪器测得的色谱指纹图谱与其所得共有模式图谱的
相似度(相合系数均值)分别为0．9937、0．9952、
0．9973、0．996、0．995，满足相似度不小于
0．950。并考察色谱峰保留时间和峰面积的一致性，
芦丁、槲皮素、白杨紊、高良姜素保留时间和峰面积
的RSD均小于1．7％。
2．3．2稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在
0、2、4、10、14h进行检测，直观观察指纹图谱的全
貌无明显变化，用相似度计算，在同一仪器测得的色
谱指纹图谱与其所得共有模式图谱的相似度(相合
系数均值)分别为0．9922、0．9932、0．9886、
0．9959、0．9951，满足相似度不小于0．950。并考
察保留时间和峰面积的一致性，芦丁、槲皮素、白杨
素、高良姜素保留时间和峰面积的RSD均小于
1．6％，表明在此时间内供试品溶液的成分是稳定的。
2．3．3重现性试验：取同一批样品5份(01号样
品)，制备供试品溶液，分别注入液相色谱仪10弘L，
测定，所得色谱指纹图谱直观观察，表明指纹图谱的
全貌无明显变化，用相似度计算，在同一仪器测得的
色谱指纹图谱与其所得共有模式图谱的相似度(相
合系数均值)分别为0．9894、0．9956、0．9951、
0．9969、0．9977，均大于0．95，并考察保留时间和
峰面积的一致性，芦丁、槲皮素保留时间和峰面积的
RSD均小于1．8％。
2．4 样品测定：分别吸取上述供试品溶液各10
弘L，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。采用
MATLAB软件对各样品色谱图的原始数据文件进
行分析，以lO批样品生成的对照谱图(平均值法和
中位数法)作为对照模版，计算各色谱图的整体相似
度，结果见表1。
寰1样品来源及嗣定结果
Table1 Sourcesandresultsoftestedsamples

万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月·15 1·
2．5指纹图谱的建立和辨认：对样品的供试品溶液
进行HPLC检测，得到不同批次蜂胶HPLC色谱图
(图1)。对蜂胶HPLC色谱图进行解析，确定有13
个共有峰，构建了蜂胶药材的HPLC色谱图的指纹
特征，作为蜂胶鉴别的依据(图2)。取芦丁、槲皮素、
白杨素、高良姜素对照品以及各对照品与样品溶液
的混合液各lOlL，分别进样测定，比较相应色谱峰
的保留时间和峰面积的变化，确定指纹色谱图中的
4号峰为芦丁，7号峰为槲皮紊，12号峰为白杨紊，
13号峰为高良姜素。
0 20 40 ∞ 80 l(m iZO 142
“fmin
田1 10批不同产地蜂胶HPLC色谱圈
Fig．1Fingerprintsoftenbatchesofpropolb
fromdifferenthabi it缸
指纹图谱表明，不同产地蜂胶药材中化学成分
的种类和量差异较大，说明产地对蜂胶的内在质量
有较大影响。
3讨论
本实验对供试品溶液的制备、色谱条件进行了
优化选择，对不同提取溶剂、提取方法所得指纹图谱
进行反复考察，并结合蜂胶主含成分的性质，进行实
验比较，结果选择0．4％磷酸水一甲醇为流动相，能较
12
0 13 25 38 50 63 75 88 100
t／min
圈2蜂胶HPLC色谱圈的标准图谱
Fig．2HPLCStandardizedchromatogramofpropolis
好地使样品中各色谱峰分离且出峰最多；对柱温进
行考察，优选的最佳柱温为25℃；采用二极管阵列
检测器对检测波长进行考察，记录并比较不同波长
的色谱图，结果在283nm检测波长下，色谱图中色
谱峰较多，信息丰富，故确立283nm为检测波长。
分别采用迪马公司、Waters公司和Hypersil公
司的C18(250mm×4．6mm，5／Jm)色谱柱进行试
验，均可得到基本相同的蜂胶指纹图谱。
本实验仅对10批蜂胶HPLC指纹图谱的构建
进行了初步研究，仍需收集不同产地的大量样品，进
行系统、规范化的深入研究。
参考文献：
[1]王宗伟．黄兆胜．蜂胶的药理作用[J]．国外医药·植物药分
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E．mailI cyx(孕fudan．edu．cn，cjepfdu@citiz．net．

万方数据
蜂胶HPLC指纹图谱的研究
作者： 王小平， 林励， 潘建国， 卢占列
作者单位： 王小平(广州中医药大学,广东,广州,510400;陕西中医学院,陕西,咸阳,712046)， 林励(广
州中医药大学,广东,广州,510400t)， 潘建国,卢占列(广州市宝生园有限公司,广东,广州
,510400)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(10)
被引用次数： 2次

参考文献(5条)
1.王宗伟;黄兆胜 蜂胶的药理作用 1997
2.胡福良;玄红专 蜂胶的生物学活性及毒性和过敏反应[期刊论文]-科技通报 2003(02)
3.裒泽良;刘建平;何薇莉 2003年蜂胶产、供、销状况以及2004年市场预测[期刊论文]-蜜蜂杂志 2004(05)
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蜂胶HPLC指纹图谱及质量控制[期刊论文]-中国中药杂志2005,30(18)
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1.马海乐.李倩.赵杰文.骆琳.何荣海.王振斌 蜂胶超临界CO2萃取物GC指纹图谱及聚类分析[期刊论文]-江苏大学学
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2.雷雨.庄红林.毕玉芬.戴云 蜂胶HPLC指纹图谱的2种分析方法[期刊论文]-云南民族大学学报（自然科学版）
2012(1)

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