全 文 ：·1234· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
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北柴胡愈伤组织诱导、分化及不定芽增殖条件研究
郝建平1，徐丽霞2，杨东方2
(1．山西大学生命科学与技术学院，山西太原030006；2．山西生物应用职业技术学院中药系，山西太原030031)
摘 要：目的研究北柴胡叶片、茎段和花芽愈伤组织诱导、分化和不定芽增殖的条件，探讨快速繁殖的新途径。方
法选择优良的北柴胡类型。在附加不同种类、不同质量浓度和不同配比外源植物激素的MS培养基中，进行不同
外植体愈伤组织的诱导和分化培养以及愈伤组织再生植株的繁殖和生根培养。结果 附加2，4一D1．0mg／L、KT
0．5mg／L和6-BA0．5mg／L的MS培养基最适合于叶片、茎和花芽愈伤组织的诱导，其中以花芽愈伤组织的诱导
效果最好；在附加6一BA1．0mg／L、NAA0．03mg／L和CM15％、CH500mg／L的培养基中，愈伤组织的分化率最
高；附加6一BA1．5mg／L、NAA0．05mg／L和CH250mg／L的MS培养基为芽苗增殖的适宜培养基；附加NAA
0．5mg／L的1／2MS培养基是生根的适宜培养基。结论北柴胡的茎段和花芽外植体在适宜的激素组合中均可通
过愈伤组织途径分化出不定芽，继而得到正常生长、发育的再生植株。
关键词：北柴胡；愈伤组织诱导；愈伤组织分化；不定芽；试管苗l快速繁殖
中图分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)05—1234—05
Conditionfori ductionandifferentiationofcallusa dpropagation
ofadventitiousbudsinBupleurumchinese
HA0Jian—pin91，XULi—xia2，YANGDong—fan92
(1．SchoolofLifeScienceandTechnology，ShanxiUnivers ty，Taiyuan030006，China；2．DepartmentofChinese
MateriaMedica，ShanxiBiologicalApp icationVocationalTechnicalCol ege，Taiyuan030031，China)
Abstract：ObiectiveTostudytheconditionforinductionanddifferentiationofcallusand
propagationofadventitiousbudsinlamina，stem，andbudofBupleurumchineseandestablishanew
methodfor apidpropagation．MethodsInMSme iaaddedwithdifferentphytohormones，calliwere
inducedfromexplantsoflamina，stem，andflor lbuofB．chinese，adventitiousbudsandadventitious
rootsweredifferentiatedfromcalliofsternandfloralbud。test—tubeplantletsw reformed．ResultsMS
Mediumaddedwith2，4-D1．0mg／L，KT0．5mg／L，and6-BA0．5mg／Lwasuitableforcalliinduction
ofthelamina，stems，andfloralbuds．Inmediumaddedwith6一BA1．0mg／L，NAA0．03mg／L，CM
15％andCH500mg／L，thedifferentiationrateoffloralbudscalluswasthehighest．MSMediumadded
收稿日期：2007—11一07
基金项目：山西省科技攻关项目(051077—2)
作者简介：郝建平(1959一)，男，山西省忻州市人，山西大学生命科学与技术学院副教授。理学硕士，硕士生导师。长期从事植物生物工程
等方面的研究和教学工作。E—mail：jphao@SXU．edu．enTel：(0351)7010599
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1235·
with6一BA1．5mg／L，NAA0．05mg／LandCH250mg／Lwasuitableforpropagationoftest—tube
plantlets，1／2MSmediumaddedwithNAA0．5mg／Lwasuitableforooting．ConclusionAgreatdeal
oftest—tubeplantletscouldbedifferentiatedandpropagatedrapi lybycalliinducedfromstemsandfloral
budsofB．chinese．Thentheregenerationplantletswi hnormalgrowthandevelopmentareobtained．
Keywords：BupleurumchineseDC．；callusinduction；callusdifferentiation；adventitiousbu ；test—
tubeplantlet；rapidp o agation
柴胡为常用中药，在许多成药制剂中广泛应用，
需求量很大。目前对于柴胡的研究主要集中于药用
成分提取分离、栽培技术、发育生物学和柴胡属内不
同种的比较与鉴定[1～43等领域。在柴胡组织培养方
面，罗玉[53观察了三岛柴胡下胚轴离体培养中的全
息现象；姚智等[83探讨了北柴胡愈伤组织生长和不
定根诱导的条件；笔者先后进行了三岛柴胡的固定
化细胞培养[7]以及北柴胡快速繁殖和种子萌发条件
的研究[8]。
《中国药典》(2005年版)收录北柴胡
BupleurumchineseDC． 和狭叶柴胡B．
scorzonerifoliumwil d．为药用柴胡的原植物。本实
验以北柴胡的幼叶、茎段和花芽为外植体，采用不同
种类、不同质量浓度的外源植物激素比较和分析北
柴胡愈伤组织诱导和不定芽分化、增殖、生根形成再
生完整植株的最佳条件及其影响因素，为柴胡的快
速繁殖探讨新的途径。
1材料与方法
1．1 材料：实验用北柴胡为种植于山西太谷、引种
于山西左权的优良类型。幼茎和叶采集于5月份，花
芽采集于8月份。
1．2方法
1．2．1培养基：表1和表2分别为愈伤组织诱导与不
定芽增殖培养基中附加的外源植物激素。表中的D代
表2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)，K代表KT(激动素)，
B代表6一BA(6一苄基腺嘌呤)，N代表NAA(萘乙酸)，
M代表CM(椰乳)，H代表CH(水解酪蛋白)。
1．2．2 叶、茎和花芽愈伤组织的诱导：取3～4cm
长的北柴胡幼叶、幼茎和花芽，用自来水冲洗以后，
75％的酒精浸泡30S，然后用0．1％HgCI。水溶液
处理8～10min，无菌水冲洗3～5次。将消毒后的
幼叶、幼茎和花芽切成0．5～1cm的切段，分别接
种于MS基本培养基(表3)上，每种培养基接10
瓶，每瓶接种5块材料。培养基中添加蔗糖3％，琼脂
0．7％，pH6．06．5。在26～28℃条件下暗培养，
30d后统计愈伤组织诱导率，并记录愈伤组织的颜
色、质地及生长状况。
表l 愈伤组织诱导培养基L(23)正交设计
Table1 L．(23)Orthogonaldesignfc lusinduction
曩2不足牙增殖培养基L，(3‘)正交设计
Table2 L·(3‘)Orthogonaldesignofadventitious
budspropagation
因 素水平～
B／(mg·L一1)N／(mg·L一1)M／(mg·L一1)H／(mg·L一1)
1 0．5 0 0 0
2 1．0 0．03 15 250
3 1．5 0．06 30 500
表3比较了2，4一D、KT和6一BA3种外源植物
激素对北柴胡叶片、茎段和花芽愈伤组织诱导的影
响，按下式计算愈伤组织的诱导率，所得结果用极差
分析法进行分析。
愈伤组织诱导率=(形成愈伤组织的外植体块数／外植
体的总接种块数)×100％
1．2．3愈伤组织的分化培养：分别将叶、茎和花芽
的愈伤组织转入附加不同质量浓度6-BA、NAA、
CM和CH的MS基本培养基上进行继代培养，每
瓶接种5块材料，每种处理重复10瓶。每日光照
12h，光照强度2000lx，40d后进行统计。
1．2．4试管苗的扩大繁殖：挑选由花芽愈伤组织分
化出的长势好且生长均一的丛生芽，用手术刀切成
单芽，分别接种到添加不同浓度6-BA和NAA的
MS基本培养基上光照培养，30d后进行统计。
1．2．5试管苗的生根培养：将扩大繁殖得到的北柴胡
丛生苗切成单株，接入添加不同质量浓度NAA的1／
2MS培养基中诱导生根。在培养20d后进行统计。
2结果与分析
2．1不同激素配比对叶、茎和花芽愈伤组织诱导的
影响
2．1．1外源激素对北柴胡叶片愈伤组织诱导的作
用：在4种不同激素配比的愈伤组织诱导培养基(表
3)上，接种8d左右时，叶片外植体上、下切口处开
始膨胀上翘；接种11d左右，两侧切口处也开始膨
万方数据
·1236· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
大，颜色变浅；约30d后形成愈伤组织(图1-1、2)。
从表3可以看出，附加了植物激素的4种处理均可
诱导出愈伤组织，但不同植物激素配比对愈伤组
织的诱导率、质地、颜色和生长速度有着明显的
差异。
MS+2，4一D1．0mg／L+KT0．5mg／L-+-6一BA
0．5mg／L的组合对于叶片愈伤组织的诱导效果最
好，诱导率达到48％，而且愈伤组织生长快，呈淡黄
色疏松状。极差分析结果(表4)表明，3种因素中对
北柴胡愈伤组织诱导率影响最大的是2，4一D，而6一
BA和KT的影响作用较小。极差分析筛选的最适
培养基与观察结果相一致。
表4 3种外植体愈伤组织诱导的极差分析
Table4 Rangeanalysisoncallusinduction
ofthreedifferentexplants
水因素(叶愈伤组织诱导)因素(茎愈伤组织诱导)因素(花芽愈伤组织诱导)
平 D K B D K B D K B
188 174 160
150 164 178
38 10 18
2．1．2外源激素对北柴胡茎段愈伤组织诱导的作
用：北柴胡幼茎在不同培养基上的生长情况见表3。
幼茎在接种4～5d后切口处颜色开始变浅，8～9d
逐渐膨大，继而出现绿色和黄绿色的愈伤组织(图
l一3)。对表3中各因素的水平进行极差分析(表4)，
结果表明最优组合是D。K：B。，即2，4一D1．0mg／L+
KT0．5mg／L+6一BA0．5mg／L。直观观察适宜的
培养基组合为2，4一D1．0mg／L-+-KT0．1mg／L+
6一BA0．2mg／L，与极差分析相比二者在KT和6一
BA的使用质量浓度上表现出不同。从极差分析结果
看，对茎诱导愈伤组织影响作用最大的是2，4一D，其
次是6一BA，而KT的作用相对较小。处理1和处理3
中(表3)愈伤组织诱导率分别为88％和95％，说明
1．0mg／L的2，4～D对于愈伤组织诱导效果最好。
2．1．3外源激素对北柴胡花芽愈伤组织诱导的作
用：在接种花芽3～4d后，大部分材料切口部位颜
色开始变浅，7～8d时逐渐膨大，切口处开始出现
黄绿色薄壁细胞团，进一步形成愈伤组织(图1—4)。
从表4结果可以看出，当2，4一D为1．0mg／L时，花
芽愈伤组织诱导率较高。从表4各因子水平来看，最
优组合是D，K：B：，即2，4一D1．0mg／Lq--KT0．5
mg／L+6一BA0．5mg／L，与观察结果相同。
极差值越大，表示该因素越重要。由表4可以看
出，2，4一D的极差值为38，6一BA的极差值为18，KT
的极差值为10，因此在各激素因素中，对北柴胡花芽
愈伤组织诱导影响最大的是2，4．D。2，4一D达到2．0
mg／L时，北柴胡叶片愈伤组织的诱导率明显下降，
其适宜质量浓度为1．0mg／L。
2．2愈伤组织的分化：与叶片愈伤组织相比，茎愈
伤组织和花芽愈伤组织具有很强的分化能力。在务
化培养基中培养30d左右，愈伤组织块上开始分化
根或芽，且分化根和芽的数量逐渐增多；培养到40d
时，已分化出芽的愈伤组织开始有根的分化，分化出
根的愈伤组织开始有芽的分化，最后发育成完整的植
株(图1—5)。而叶片愈伤组织在培养过程中大部分褐
化死亡，有少量继续分裂增殖，但始终没有分化。
从表5、6可以看出，在MS培养基中加入一定
量的6一BA、NAA和CM有利于北柴胡花芽愈伤组
织分化芽和根，而CM加入的量对北柴胡愈伤组织
的分化影响不大；在6一BA1．0mg／L+NAA0．03
mg／L+CM30％的组合中花芽的分化率最高，为
95％。茎段愈伤组织在添加1．0mg／L6一BA、15％
CM和500mg／LCH的MS培养基中的分化率最
高，为88％。极差分析的结果(表6)表明CM在北
柴胡愈伤组织分化中影响最小。
2．3丛生芽的扩大繁殖：将北柴胡试管苗切割成单
芽接入芽增殖培养基中，结果见表7。可以看出，1号
培养基中长出的丛生芽数量较少，较细弱(图l一6)；2
号培养基长出的丛生芽数量最多，且比较粗壮，长势
好(图1—7)；3号培养基中长出的丛生芽数量最少，
生长较差，有畸形苗出现(图1-8)。
2．4试管苗生根试验：随着培养时间的延长和继代
次数的增多，不定芽形成大量的丛生苗(表8)。将其
从基部分切，转入附加不同浓度NAA的1／2MS
培养基中，诱导其生根，得到完整再生植株(图1—9)。
Oo
1
3H2
4
5
9
¨坫i¨¨0札娟药“∞”M∞¨髓岛R
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1237·
衰5不同培养基对愈伤组织分化的影响
Table5 Effectofdifferentm diaoncallusdifferentiation
表6不同培养基对愈伤组织分化的影响极差分析
Table6 Rangeanalysisforeffectofdifferent
mediaoilcallusdifferentiation
1一叶片愈伤组织 2一叶片愈伤组织 3一茎段愈伤组织 4一花芽
愈伤组织 5一由愈伤组织分化的试管苗 6一不定芽芽苗扩大增
殖得到的再生植株(较细弱)7-不定芽芽苗扩大增殖得到的再
生植株(较粗壮)8-畸形苗9一生根形成完整植株
1-callusoflaminaZ—callusoflamina3-callusofstem
4-callusoffloralbud5-test—tubeplantletsfromcallus
differentiation6-regenerationpl ntsfromadventitiousbud
(slimmer)7-regenerationplantsfromadventititiousbud
(stronger)8-abnormalpl nts9-test-tubeplantlets
图1北柴胡的愈伤组织及其分化形成的试管苗
Fig．1CalliofB．chineseandtubeplantlets
oftheirmfferentiatiOn
表7不同培养基对不定芽增殖的影响
Table7 Effectofdifferentm diaon dventitiOus
budpropagation
表8不同培养基对试管苗生根的影响(万一3)
Table8 Effectofdifferentm diaonrooting
oftest—tubeplantlets(一=3)
实验结果表明，适合北柴胡生根的培养基为1／2
MS+NAA0．5mg／L。经过20d左右的生根诱导，
可由试管苗基部长出4～5条白色细长的根，每根
长4--一5cm。 ．
3讨论
3．1不同外植体愈伤组织形成的差异：实验分别选
择了北柴胡幼叶、茎段和花芽作为外植体，通过比较
发现，北柴胡花芽和茎段是比较适宜的培养材料，茎
段和花芽愈伤组织的诱导率可达88％以上，同时
出愈的时间也比叶片短，一般7d左右即可形成愈
伤组织。而北柴胡叶片培养时很容易褐化，愈伤组织
的诱导率也低于茎段和花芽。
3．2不同愈伤组织分化不定芽的差异：6-BA是影
响芽分化的关键植物激素，但取材的部位与器官的
分化密切相关。北柴胡的茎和花芽脱分化形成的愈
伤组织质地致密、颜色翠绿，是分化试管苗的适合材
料。6-BA为1．0mg／L时，北柴胡茎段愈伤组织和
花芽愈伤组织分化芽的比例最高，分别为88％和
95％。6-BA为1．5mg／L时，茎愈伤组织和花芽愈
伤组织分化芽的能力下降，说明细胞分裂素浓度过
万方数据
·1238· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
高不利于北柴胡愈伤组织的分化。而叶片诱导产生
的愈伤组织较茎段产生的愈伤组织松软且褐化严
重，不具有分化能力。
3．3试管苗的扩大繁殖：在不同的培养基中不定芽
增殖和生长状态不同。随着6一BA质量浓度的增大，
柴胡试管苗变为畸形。当培养基中添加CH的量达
到250mg／L时，北柴胡试管苗生长速度加快，苗的
高度显著增加，叶片也变的嫩绿。这可能与CH中含
有丰富的氨基酸有关[9]。
3．4试管苗的生根：实验过程中发现，在黑暗条件
下试管苗生长不良，逐渐变黄，叶片脱落，最终死亡。
而在光照条件下则生根情况较好，在1／2MS+
NAA0．5mg／L的培养基上，经过20d的培养，北
柴胡组培苗的基部长出4～5条白色、细长的根，可
用于后期的驯化移栽。
北柴胡的茎段和花芽外植体在适宜的激素组合
中均可经过愈伤组织阶段分化出不定芽，继而得到
生长健壮、根系发达的再生植株进行扩大繁殖。这一
结果为北柴胡的快速繁殖、品质改良和大面积种植
提供了又一条有效的途径。
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枸杞品质及其与土壤肥力关系的研究
张自萍1，史晓文1，曹丽华2，赵世华3
(1．西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏大学，宁夏银川 750021；
2．宁夏大学农学院，宁夏银川 750021；3．宁夏林业局，宁夏银川750021)
摘要：目的通过测定宁夏8个不同产区枸杞头茬、盛果期和秋果中总糖、多糖、甜菜碱、氨基酸、总黄酮、类胡萝
卜素的量及百粒质量，并分析总糖碱比，研究枸杞中这些指标间以及它们与土壤肥力因子间的相互关系。方法采
用HPLC和分光光度等实验方法以及聚类分析、相关性分析和方差分析等生物统计方法。结果枸杞中各指标被
归为以总糖、甜菜碱和类胡萝卜素为代表的3类，各指标受各种土壤肥力因子的作用不同。结论总糖、甜菜碱和类
胡萝卜素这3种成分及糖碱比值能较科学地评价枸杞的品质；施肥时应综合考虑各种肥力因子对枸杞成分的协同
‘作用，不宜片面考虑其单一的相关性。该研究为枸杞品质评价及合理施肥提供了依据。
关键词：枸杞’总糖碱比；聚类分析}相关性分析；土壤肥力因子
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)08—1238—05
QualitynfruitsofLyciumbarbarumanditsrelationshipwithsoilfertilityfactors
ZHANGZi—pin91，SHIXiao—wenl，CAOLi—hua2，ZHAOShi—hua3
(1．KeyLaboratoryofMinistryofEducationforProtectionandUtilizationofSpecialBiologicalResourcesinW ternChina，
NingxiaUniversity，Yinchuan750021．China；2．SchoolofAgricu ture，NingxiaUnivers ty，
Yinchuan750021，China；3．NingxiaForestryBure u，Yinchuan750021，China)
Abstract：ObjectiveTheont ntsof otalsugar，polysaecharide，aminoacid，beta e，carotenoid，
flavone．hundred—seedw ightofLyciumbarbarumfr itsfromeightdifferenthabitatsinfirststubble，
prosperoustime，andutumnweredeterminedandtheratiosftotalsugartobetainewereanalyzed，in
ordertoclassifytheseindexes，andinvestigatetherelationshipwiththesollfertilityfactors．Methods
收稿日期：200712—10
基金项目：国家科技专项(国科发财字[2006q9号，国家科技支撑计划子课题(2006BAT06A15～11)
作者简介：张自萍(1970一)，女(汉J。宁夏青铜峡人，博士，副教授，主要从事天然产物方面的分析研究。
Tel：1370950078L( 951)2062813(O)(0951)2062803(Fax)E—mail：zipingzhang@163．co“
万方数据
北柴胡愈伤组织诱导、分化及不定芽增殖条件研究
作者： 郝建平， 徐丽霞， 杨东方
作者单位： 郝建平(山西大学生命科学与技术学院,山西,太原,030006)， 徐丽霞,杨东方(山西生物应用
职业技术学院中药系,山西,太原,030031)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
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宁夏大学学报（自然科学版）2005,26(3)
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ping 珍稀濒危植物掌叶木愈伤组织诱导与褐化抑制研究[期刊论文]-湖北农业科学2010,49(12)
3. 张彦艳.王照兰.刘国栋.胡卉芳.杜建材.赵丽丽.ZHANG Yan-yan.WANG Zhao-lan.LIU Guo-dong.HU Hui-fang.
DU Jian-cai.ZHAO Li-li 扁蓿豆愈伤组织诱导和分化条件的研究[期刊论文]-中国草地学报2009,31(4)
4. 杨模华.张冬林.李志辉.黄振.张留恩.柴建民.杨黎 马尾松嫩茎愈伤组织诱导与增殖[期刊论文]-华中农业大学
学报2009,28(5)
5. 张金林.石明辉.许瑞.李唯.王锁民.Zhang Jinlin.Shi Minghui.Xu Rui.Li Wei.Wang Suomin 提高春小麦幼胚
离体培养中愈伤组织诱导及分化效率的研究[期刊论文]-中国农学通报2007,23(4)
6. 金晓玲.何平 大叶榉愈伤组织诱导与继代培养的影响因素[期刊论文]-中南林学院学报2003,23(1)
7. 曹彬.孙占育.张德仓 大叶黄杨幼茎愈伤组织诱导的研究初报[期刊论文]-中国农学通报2008,24(8)
8. 钱海丰.薛庆中 激素对高羊茅愈伤组织诱导及其分化的影响[期刊论文]-中国草地2002,24(1)
引证文献(8条)
1.隋春.战晴晴.魏建和.陈怀琼.杨成民.郑亭亭 北柴胡皂苷生物合成途径关键酶IPPI的全长cDNA克隆及其序列分析
[期刊论文]-中草药 2010(7)
2.郝建平.王丽荣.徐笑飞.秦雪梅.张丽增.赵玉臣 北柴胡移栽试管植株与种子植株中皂苷的动态分析[期刊论文]-
中草药 2010(9)
3.李博.郝贵茹.常琦.李晨龙.王丽荣.郝建平 北柴胡移植试管植株与种子植株植物学性状分析[期刊论文]-中草药
2009(10)
4.徐丽霞 北柴胡幼根、子叶和下胚轴组织培养研究[期刊论文]-山西农业科学 2012(11)
5.张家菁.于元杰 伞形科药用植物组织培养的研究进展[期刊论文]-特产研究 2011(1)
6.杨光义.叶方.杜士明.陈科力.张文明 北柴胡研究概述[期刊论文]-中国药师 2011(10)
7.石云平.赵志国.唐凤鸾.付传明.黄宁珍 白芨愈伤组织诱导、增殖与分化研究[期刊论文]-中草药 2013(3)
8.杨东方.郝建平 北柴胡愈伤组织及不定根诱导研究[期刊论文]-山西大学学报（自然科学版） 2012(1)
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