全 文 ：中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月· 525·
羟基积雪草苷对小鼠急性肝损伤的保护作用
李洪忠1，万敬员1’，张力2，罗福玲1，章卓1，周岐新1
(1．重庆医科大学重庆市生物化学与分子药理学重点实验室，重庆400016I
2．重庆医科大学基础医学院病理生理教研室，重庆400016)
摘要：目的研究羟基积雪草苷对小鼠急性肝损伤的保护作用及其初步机制。方法建立四氯化碳(CCI．)诱导
的小鼠急性肝损伤模型，检测羟基积雪草苷(3、10、30mg／kg)对血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转
移酶(AST)以及肝组织一氧化氮(N0)的影响；Western—blotting检测肝组织中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、
环氧合酶一2(COX·2)蛋白的表达，并取部分肝组织进行H卜’染色，观察病理学改变。结果羟基积雪草苷明显降
低急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性及肝组织中NOfJ0量，抑制肝组织中iNOS、COX一2蛋白的表达，病理切
片显示羟基积雪草苷组病变程度远较模型组为轻。结论 羟基积雪草苷具有一定的肝保护作用，其机制可能与其
抗炎作用有关。
关t词：羟基积雪草苷I急性肝损伤l一氧化氮l环氧合酶2
中圈分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)10—1525—03
Protectionofmadecassosideonmicewithacuteliverinjuryanditsmechanism
LIHong—zhon91，WANJing—yuanl，ZHANGLi2，LU0Fu-lin91，ZHANGZhu01，ZHOUQi—xinl
(1．ChongqingKeyLaboratoryofBiochemistryandMolecularPh macology，ChongqingUnversityofMedicalSciences．
Chongqing400016，China，2．DepartmentofPa hophysiology，CollegeOfBasicMedicine．
ChongqingUnivesityofMedicalScieces，Chongqing400016，China)
Abstract：ObjectiveTodiscusstheprotectiveeffectandmechanismofmadecassosideonmicewith
acuteliverinjuryinducedbyCCI‘．MethodsMicemodelsofacuteliverinjurywereprovidedwith
madecassosideatdiff rentdoses(3，10，and30mg／kg)separately．Serumfunctionndexesincluding
alanineaminotransferase(ALT)andaspartateaminotransferase(AST)，andcontentsofN0inlivertissue
weremeasuredaccordingtotheinstructionoftestkits．Westernblottingwasusedfortheanalysisof
proteinxpressionof nducednitricoxidesynthase(iNOS)andcyclooxygenase2(COX一2)inlivertissue．
Somelivertissuesw redyedwithHEandhistopathologicalchangesinliverwereobservedunderlight
microscope．ResultsThelevelofALTandASTinserumandthecontentofNOinlivertissuew re
reducedsignificantlybymadecassosideinmicewithacuteliverinjury．Meanwhile，theprot inxpr ssion
ofiNOSandCOX一2inlivertissuewasalsoinhibitedbymadecassosidewithhistopathologicalchangesof
livermoreimprovedthanthatinmodelgroup．ConclusionMadecassosideiSeffectiveinameliorationof
CCl4-inducedhepatotoxicity．Theeffectmaybeduetoitsantinflammatoryactivityassociatedwithless
increaseinh paticiNOSandCOX一2proteinco tent．
Keywords：Madecassoside；acuteliverinjury；nitricoxide(NO)，cycl00xygenase一2(COX一2)
积雪草Centellaasiatica(L．)Urban为伞形科
积雪草属植物，全草入药，性寒，味苦、辛，具有清热
利湿，解毒消肿之功效。临床多用于湿热黄疸、痈肿
疮毒、跌打损伤、传染性肝炎、皮肤病、流行性脑脊髓
膜炎等。羟基积雪草苷为三萜类化合物，是积雪草主
要活性成分之一[1]。另有研究报道，含有羟基积雪草
苷的积雪草总苷对二甲基亚硝氨诱导的大鼠慢性肝
纤维化具有良好的治疗作用[2]，这些提示羟基积雪
草苷存在着一定的肝保护作用。本实验通过CCl．诱
导小鼠急性肝损伤，观察羟基积雪草苷对急性肝损
伤的作用，并对其作用机制进行初步探讨。
1材料与方法
1．1药品与试剂：丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬
氨酸氨基转移酶(AST)、N0测定试剂盒为南京建
成生物工程研究所产品；CCl．为上海新中化学试剂
厂产品，临用前用花生油稀释；羟基积雪草苷(质量
分数95％，批号20060127)，由广西昌洲天然植物
开发有限公司提供；BCA蛋白定量试剂盒购自
收稿日期：2007-12—14
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30500463)
作者简介：李洪忠(1982一)，男．硕士研究生。Tel：(023)68485038E—maillsdtalhz3166@yahoo．C01．CB
*通讯作者 万敬员Tel(023)68485038Fax：(023)86134172E—mail：jywan@cqmu．edu．cn

万方数据
·1526· 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月
Pierce公司；诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、环氧
合酶2(COX一2)抗体，购自Abcam公司。
1．2动物：清洁级BALB／c小鼠，重庆医科大学实
验动物中心提供。
1．3实验分组及造模方法[3]：健康小鼠50只，雌雄
各半，随机分为5组：对照组，模型组，羟基积雪草苷
大、中、小剂量组(30、10、3mg／kg)，每组10只。对
照组与模型组给予等体积生理盐水，药物组ig对应
剂量药物，连续给药3d。第3天，ig1h后，除对照组
ip橄榄油5mL／kg外，其余各组ip0．5％CCI。油溶
液5mL／kg，禁食，24h后麻醉小鼠，眼球取血，离
心取血清，按照试剂盒说明书测定ALT、AST活
性。处死小鼠后取肝脏左叶10％甲醛固定，脱水、
脱钙后石蜡包埋切片，HE染色。取中叶和右叶肝组
织一80℃冰冻保存，留做Western—blotting及
NO测定，NO的测定按照试剂盒要求进行。
1．4 免疫印迹法检测肝组织中iNOS、COX一2蛋白
表达：取小鼠肝组织，称质量，研磨后裂解细胞提取
蛋白，BCA法蛋白定量。取50弘g蛋白上样，SDS—
PAGE电泳后，转移至硝酸纤维素膜上，室温下封
闭1h；加入一抗4℃冰箱封闭过夜；次日脱洗3
次，二抗孵育1h，再脱洗5次后，ECL显色，X光片
曝光，洗片。
1．5统计学处理：各组数据以z士5表示，两样本均
数比较采用t检验。
2 结果
2．1血清ALT、AST活性测定：结果见表1。模型
组ALT、AST活性明显高于对照组，而羟基积雪草
苷组可明显降低CCI。引起的ALT、AST活性升高，
且具有一定的剂量依赖性。
寰1羟基积冒草苷对小鼠急性肝损伤血清ALT和AST
活性的影响(i士s，一=10)
Table1 EffectofmadecassosideonactivityofALT
andASTinserumof icewithacuteliver
injury(j士s，矗=10)
与对照组比较：一P<0．01
与模型组比较：4P44P。P4P2．2肝组织中NO量的测定：结果见图1。模型组
NO量远高于对照组，而羟基积雪草苷30mg／kg
组 10mg／kg组可显著降低急性肝损伤产生的过量
NO(P<0．01、0．05)；3mg／kg组NO平均值低于
模型组，但无统计学意义。
2．3 羟基积雪草苷对肝组织中iNOS、COX一2蛋白
表达的影响：模型组iNOS、CoX一2蛋白表达明显高
于对照组，而羟基积雪草苷可显著降低急性肝损伤
中iNOS、COX一2蛋白的过量表达，并呈现出一定的
剂量依赖关系。见图2。
f
-一Z
窨
3
吾
Z
与对照组比较：一P<0．Ol
与模型组比较：4P。P4P图1羟基积叠草苷对急性肝损伤小鼠肝组织NO的影响
Fig．1EffectofmadecassosideonlevelofNOinliver
tissueofmicewithacuteliverinjury
B．actin
NOS
COX-2
10
8
翟s
蓍。
2
0
对照模型 3 10 30
羟基积雪草苷／(ms·k91)
对j!{【 模型 3 10 30
羟基积雩草侍／(mg·kg。)
2
与对照组比较：一p与模型组比较：4P44P。‘P4P图2羟基积冒草苷对急性肝损伤小鼠肝组织中iNOS、
COX一2蛋白表达的影响
Fig．2Effectofmadecassosideonexpressionof NOS
andCOX．2proteininlivertissueofmice
withacuteliverinjury
凝
槲l
嚣
㈣盯梦]Il●-1黼工●■■■：]L‘艮●■I¨●-厂llllJf_1¨●■■■■■■■■一jt

万方数据
中草1lsChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月· 527·
2．4病理学检查结果：对照组小鼠光镜下肝小叶结
构完整，肝细胞索排列整整齐，以中央静脉为中心呈
放射状排列，肝细胞核大而圆，位于肝细胞中央。模
型组小鼠肝小叶失去正常结构，肝细胞普遍变性坏
对照
死，浑浊肿胀，胞浆疏松，并可见大量炎性细胞浸润。
羟基积雪草苷组肝细胞仍有部分变性坏死，且有少
量中性粒细胞浸润，但病变程度远比模型组轻。结果
见图3。
模型 羟基积雪草苷00mEkg‘1)
图3羟基积葺草苷对CCI．损伤小鼠肝组织病理形态改变的影响
Fig．3Effectofmadecassosideonhepatich stopathoIogicaIchangesofmicewithliverInjuryinducedbyCCI·
3讨论
CCI。导致的急性肝损伤是经典模型之一，被广
泛用于肝炎药物的研发。CCI。导致肝损伤引起脂质
过氧化而导致细胞膜、细胞器损伤，并引起ALT、
AST溢出至血液，使血清中ALT与AST活性升
高[．]。本实验显示羟基积雪草苷明显抑制CCl．引起
的ALT、AST活性升高，减轻了肝损伤的程度，对
肝组织起到了较好的保护作用。
NO在调节血管及炎症反应等生理进程中起着
重要作用，在很多炎症及自身免疫性疾病中都存在
过量表达[5]。在急性肝损伤中过量表达的NO可通
过抑制肝细胞线粒体的呼吸、蛋白质的合成、干扰细
胞代谢等途径损伤肝组织。NO的合成依赖NO合
成酶家族，其中iNOS在炎症及自身防御体系中起着
关键的调节作用，其不断表达直接导致NO的过量
产生，从而参与炎症进程[6汀]。本实验表明羟基积雪草
苷明显抑制肝组织中iNOS表达，减少N0生成。
COX一2在炎症过程中起着重要作用，可被内毒
素、有丝分裂原、细胞因子等诱导表达。在CCl．所致
急性肝损伤中，炎症反应被激活，包括COX一2在内
的各种炎症因子大量生成，导致肝细胞进一步坏死，
加重了肝损伤程度。而且有报道，COX一2选择性抑
制剂可明显减轻CCI。引起的肝损伤，这也为肝损伤
的治疗提供了新的思路[8]。本实验中羟基积雪草苷
能明显抑制肝组织中COX一2的表达，这也可能是
其肝保护作用的主要机制之一。．
积雪草在我国长江以南地区广泛生长，研究其
有效成分的药理作用将对我国传统中药的开发和利
用提供一定的理论依据。
参考文献：
[1-1张蕾磊，王海生，姚庆强．等．积雪草化学成分研究[J]．中
草药，2005，36(12)：1761—1763．
[2]明志君．刘世增，曹莉，等．积雪草总苷抗DMN诱导大鼠
肝纤维化的作用[J]．中国中西医结合杂志，2004，24z 731—
734．
[3]RaoPS，MangipudyRS，MehendaleHM．Tissueinjury
andrepairasparallelandopposingresponsestoCCl4
hepatotoxicity：anoveldose—responseEJ]．Toxicology，
1997，118：181—193．
[4]LeeTY，MaiLM，WangGJ，eta1．Protectivemechanism
ofsalviamiltiorrhizaoncarbontetrachloride—inducedacute
hepatotoxicityinrats[J]．dPharmacolSd，2003，91：202—
210．
[5]ClancyRM，AminAR。AbramsonSB．Theroleofnitric
oxideininflammationandmmunityEJ]．ArthritisR^“m．
1998，41z 1 4卜1151．
[6]ZhuW，FungPC．Therolesplayedbycrucialfreeradicals
likelipidfreeradicals．nitricoxide．ande zymesNOSand
NADPHinCClrinducedacuteliverinjuryofmiceFJ]．Free
RadicBiolMed．2000．29：870-880．
[7]AI—ShabanahOA，AlamK，NagiMN．eta1．Protective
effectofaminoguanidine。anitricoxidesynthaseinhibitor，
againstcarbontetrachlorideinducedhepatotoxicityinmice
[J]．厶厅Sci，2000，66：265—270．
[8]BegayCK．JayGandolfiA．Lateadministrationofcox一2
inhibitorsminimizehepaticne rosisinchloroforminduced
liverinjury[J]．Toxicology。2003，185l 79—87．

万方数据
羟基积雪草苷对小鼠急性肝损伤的保护作用
作者： 李洪忠， 万敬员， 张力， 罗福玲， 章卓， 周岐新， LI Hong-zhong， WAN Jing-yuan
， ZHANG Li， LUO Fu-ling， ZHANG Zhuo， ZHOU Qi-xin
作者单位： 李洪忠,万敬员,罗福玲,章卓,周岐新,LI Hong-zhong,WAN Jing-yuan,LUO Fu-ling,ZHANG
Zhuo,ZHOU Qi-xin(重庆医科大学,重庆市生物化学与分子药理学重点实验室,重庆,400016)
， 张力,ZHANG Li(重庆医科大学基础医学院病理生理教研室,重庆,400016)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(10)
被引用次数： 5次

参考文献(8条)
1.张蕾磊;王海生;姚庆强 积雪草化学成分研究[期刊论文]-中草药 2005(12)
2.明志君;刘世增;曹莉 积雪草总苷抗DMN诱导大鼠肝纤维化的作用[期刊论文]-中国中西医结合杂志 2004(8)
3.Rao P S;Mangipudy R S;Mehendale H M Tissue injury and repair as parallel and opposing responses to
CCl4 hepatotoxicity:a novel dose-response[外文期刊] 1997
4.Lee T Y;Mai L M;Wang G J Protective mechanism of salvia mihiorrhiza on carbon tetrachloride-
induced acute hepatotoxicity in rats[外文期刊] 2003(3)
5.Clancy R M;Amin A R;Abramson S B The role of nitric oxide in inflammation and immunity[外文期刊]
1998
6.Zhu W;Fung P C The roles played by crucial free radicals like lipid free radicals.nitric oxide.and
enzymes NOS and NADPH in CCl4-induced acute liver injury of mice[外文期刊] 2000
7.AI-Shabanah O A;Alam K;Nagi M N Protective effect of aminoguanidine,a nitric oxide synthase
inhibitor,against carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in mice[外文期刊] 2000
8.Begay C K;Jay Gandolfi A Late administration of COX-2 inhibitors minimize hepatic necrosis in
chloroform induced liver injury[外文期刊] 2003(1/2)

本文读者也读过(10条)
1. 张丽娜.郑佳佳.李晓会.吴孟娇.张力.万敬员.ZHANG Li-na.ZHENG Jia-jia.LI Xiao-hui.WU Meng-jiao.ZHANG
Li.WAN Jing-yuan 积雪草苷对小鼠脓毒症致急性肝损伤的保护作用研究[期刊论文]-时珍国医国药2010,21(11)
2. 白洁如.刘颖菊.宋昀.孙峰.高丽佳 羟基积雪草苷干预神经元退变的机制研究[期刊论文]-中国老年学杂志
2008,28(23)
3. 高连印.王融冰.张秋云.付修文.杜宇琼 清毒汤对硫代乙酰胺致肠源性内毒素血症大鼠免疫功能的影响[期刊论
文]-北京中医药2010,29(12)
4. 章卓.万敬员.李洪忠.罗福玲.周岐新.张力.ZHANG Zhuo.WAN Jing-Yuan.LI Hong-Zhong.LUO Fu-Ling.ZHOU Qi-
Xin.ZHANG Li 积雪草苷对脂多糖诱导大鼠发热的预防及对相关炎症因子的影响[期刊论文]-中国药理学与毒理学杂
志2007,21(3)
5. 王春妍.曹武奎 大承气汤对急性肝损伤大鼠肠源性内毒素血症的干预作用[会议论文]-2008
6. 杨姣 葫芦素B对阿霉素抗肝癌活性的影响[学位论文]2011
7. 章卓.刘明华.万敬员.周岐新.肖顺汉.李洪钟 积雪草苷对LPS诱导急性肺损伤COX-2/PGE2影响研究[期刊论文]-
中成药2008,30(12)
8. 孙峰 1.羟基积雪草苷对慢性铝中毒致痴呆小鼠的保护作用;2.高胆固醇血症对慢性铝中毒致神经元损伤的促进
作用[学位论文]2006
9. 李恒华 羟基积雪草苷对慢性鱼藤酮中毒致大鼠帕金森病的治疗作用及机制研究[学位论文]2007
10. 刘颖菊.小林裕太.李颂华.高丽佳.LIU Ying-ju.KOBAYASHI Yuta.LI Song-hua.GAO Li-jia 羟基积雪草苷对转
基因肌萎缩侧索硬化小鼠的治疗作用[期刊论文]-中草药2006,37(5)

引证文献(5条)
1.夏丽文.董培良 羟基积雪草苷在大鼠肠内吸收的研究[期刊论文]-药物评价研究 2011(1)
2.张楠楠.陶瑾.姜民.高洁.白钢 番茄红素对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用[期刊论文]-现代药物与临床
2013(1)
3.甘平.张旭强.何旭.陆丽.彭芳 美洲大蠊醇提物对小鼠急性肝损伤的保护作用[期刊论文]-现代药物与临床
2011(2)
4.黄啸.周植星.段为钢.江振洲.孙丽新.张陆勇 内质网应激与肝脏损伤的治疗[期刊论文]-现代药物与临床
2011(3)
5.翁小香.黄文武.孔德云 积雪草中三萜类成分及其药理活性研究进展[期刊论文]-中国医药工业杂志 2011(9)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200810026.aspx