全 文 ：研究 [J ]1 中国中医药科技 , 2001 , 8 (1) : 302331
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HPLC2UV法测定通光藤药材中通光藤皂苷 A
马 　尧 ,赵陆华 3 ,肖望书 ,李 　琼 3
(中国药科大学 分析测试中心 ,江苏 南京 　210009)
　　通光藤又名乌骨藤、通关藤等 ,系萝藦科牛奶菜
属植物通光散 M ars deni a tenacissi m a ( Roxb1 )
Wight et Arn. 的干燥藤茎 ,主产于云南、贵州等地 ,
具有清热解毒、止咳平喘、消炎镇痛等功效。现代药
理学研究表明 ,通光藤独特的 C21甾体衍生物 (主要
是 C21甾体皂苷)具有显著的抗肿瘤活性 ;通光藤皂
苷提取物对人胃癌细胞 M KN28、人结肠腺癌细胞
Lovo 均有显著的抑制作用[1 ,2 ] 。由其研制而成的单
方制剂“消癌平”,对小鼠体内移植性实体瘤 S180 、
P388 也有明显抑制作用[3 ,4 ] 。
有文献曾报道对通光藤中主要药效成分通光藤
皂苷 A、G ( tenacisside A、tenacisside G) 等的
H PL C2EL SD 研究[ 5 ] , 但关于通光藤皂苷 A 的
H PL C2UV 测定法目前尚未见报道。鉴于 HPL C2
EL SD 法的重现性差 ,以及 H PL C2UV 分析法的普
及率高 ,建立了通光藤皂苷 A 的 HPL C2UV 测定
法 ,并比较了 9 个不同产地药材以及药材不同部位
中通光藤皂苷 A 的量 ,为通光藤药材的质量控制提
供了简单、可行的方法和依据。
1 　仪器与试药
岛津 L C —10AD V P 高效液相色谱仪 ,岛津
SPD —10A V P 紫外检测器 ,浙江大学 N2000 色谱
工作站。
通光藤药材分别由南京圣和制药有限公司 (药
材产自云南金平)和云南医药公司提供 ,共 9 个不同
产地 ,经中国药科大学宋学华教授鉴定为正品。通
光藤皂苷 A 对照品自制 (经 MSn 、1 H2NMR、13 C2
NMR 确定其化学结构 ,经 HPL C2DAD 测定 ,归一
化法计算质量分数 > 98 %) 。乙腈购自 TIDIA 公
司 ,甲醇为色谱纯 ,水为纯净水。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 : Alltech C18 色谱柱 (250 mm ×4. 6
mm , 5μm) ;流动相 :乙腈2水 (38 ∶62) ;检测波长 :
220 nm ;体积流量 :1. 0 mL/ min ;柱温 : 30 ℃;进样
量 :20μL ;灵敏度 :011 AU FS。
在上述色谱条件下 ,通光藤皂苷 A 峰形良好 ,
与其他组分的分离度大于 1. 5 ,色谱图见图 1。
图 1 　通光藤皂苷 A对照品( A) 和通光藤药材(南京圣和
制药) ( B)的 HPLC2UV色谱图
Fig. 1 　HPLC2UV Chromatograms of tenacisside A
to reference substances ( A) and sample
of M1 tenacissima ( Shenghe) ( B)
212 　对照品溶液的制备 :取干燥至恒重的通光藤皂
苷 A 对照品适量 ,精密称定 ,加甲醇制成质量浓度
为 2. 04 mg/ mL 的对照品储备液 ;临用前精密量取
适量 ,加甲醇制成 0. 51 mg/ mL 的对照品溶液。
213 　供试品溶液的制备 :通光藤药材 ,粉碎 ,取 2 g ,
准确称定 ,置 100 mL 圆底烧瓶中 ,加 70 %甲醇 50
mL 浸泡 30 min ,回流 1 h ,放冷 ,滤过 ;药渣加 70 %
甲醇 50 mL 再回流 1 h ,放冷 ,滤过 ,合并 2 次滤液 ;
滤液水浴蒸干 ,残渣加乙腈溶解并定容至 5 mL ,摇
匀 ,用微孔滤膜 (0. 45μm)滤过 ,取续滤液 ,即得。
214 　线性关系考察 :精密量取通光藤皂苷 A 对照
品储备液 0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、1、1. 5 mL 于 2 mL 量
·028· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
3 收稿日期 :2008208202　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :江苏省自然科学基金资助项目 (B K2005100)
作者简介 :马　尧 (1984 —) ,男 ,江西铜鼓人 ,中国药科大学药物分析专业硕士研究生 ,研究方向为中药分析。
E2mail :f ranklinxinzhe @hot mail . com3 通讯作者　赵陆华　Tel : (025) 83271185 　E2mail :luhuazhaocpu @hot mail . com
瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,制成 0. 05、0. 10、0. 20、0.
51、1. 02、1. 53 mg/ mL 的对照品溶液。分别吸取上
述对照品溶液及对照品储备液进样测定 ,记录色谱
峰面积。以质量浓度为横坐标 ,峰面积为纵坐标线
性回归 ,得回归方程为 : Y = 2 ×10 6 X - 2 . 169 ×
10 4 , r = 0. 999 7。结果表明通光藤皂苷 A 在 0. 05
～2. 04 mg/ mL与峰面积线性关系良好。
215 　最低检测限 :取通光藤皂苷 A 对照品溶液 ,以
不同比例稀释后进样测定 ,以信噪比3 ∶1为最低检
出 ,结果在本色谱条件下通光藤皂苷 A 的最低检测
限为 511 ng。
216 　精密度试验 :取同一对照品溶液 ,连续进样 6
次 ,记录色谱峰面积 ,计算通光藤皂苷 A 峰面积的
RSD 为 0. 71 % ,表明精密度良好。
217 　稳定性试验 :取同一供试品溶液 (南京圣和制
药有限公司 ,批号 20080428) ,分别于制备品 0、2、4、
6、8、12 h 依法测定 ,记录色谱峰面积 ,计算通光藤
皂苷 A 峰面积的 RSD 为 1. 24 % ,表明供试品溶液
在 12 h 内稳定。
218 　重现性试验 :取同一批通光藤药材 (南京圣和
制药有限公司 ,批号 20080428) 6 份 ,制成供试品溶
液 ,依法测定 ,计算通光藤皂苷 A 的质量分数 ,其
RSD 为 1. 81 % ,表明该方法重现性好。
219 　回收率试验 :准确称取已测定的通光藤药材 (南
京圣和制药有限公司 ,批号 20080428) 0. 5 g ,6 份 ,分
别精密加入 1. 0 mL 0. 51 mg/ mL 的通光藤皂苷 A 对
照品溶液 ,按 213 项下方法制成供试品溶液 ,依法测
定 ,计算加样回收率和 RSD。结果通光藤皂苷 A 的
平均回收率为 96. 38 % ,RSD 为 2. 03 %。
2110 　样品测定
211011 　通光藤药材不同部位中通光藤皂苷 A 的
测定 :取同一产地通光藤药材 (南京圣和制药有限公
司 ,批号 20080428) ,分离皮部、木质部 ,分别按2. 3
项下方法操作 ,制成供试品溶液 ,依法测定 ,以外标
法计算样品通光藤中皂苷 A 的量 ,结果见表 1。
表 1 　通光藤药材不同部位中通光藤皂苷 A
的测定结果 ( n = 3)
Table 1 　Determination of tenacisside A in different parts
of M1 tenacissima ( n = 3)
部　位 通光藤皂苷 A/ (mg ·g - 1)
皮部　 1. 584 8
木质部 0. 303 2
211012 　不同产地通光藤药材中皂苷通光藤皂苷 A
的测定 :取不同产地的通光藤药材各 3 份 ,制成供试
品溶液 ,依法测定 ,以外标法计算药材中通光藤皂苷
A 的量 ,结果见表 2。
表 2 　不同产地通光藤药材中通光藤皂苷 A
的测定 ( n = 3)
Table 2 　Determination of tenacisside A in M1 tenacissima
from different habitats ( n = 3)
产地 通光藤皂苷 A/ (mg ·g - 1) 产地 通光藤皂苷 A/ (mg ·g - 1)
圣和 0. 975 7 玉溪 1. 344 9
曲靖 3. 588 0 楚雄 —
贵州 0. 153 6 禄劝 0. 406 7
文山 1. 727 4 山西 —
红河 2. 444 1
3 　讨论
311 　提取方法的选择 :对药材的提取方法 ,曾试用
乙醇、甲醇、70 %甲醇、50 %甲醇、醋酸乙酯为提取溶
剂 ,分别采取超声提取和回流提取的方法 ,以及水煎
煮后醋酸乙酯萃取等方法。结果表明采用 70 %甲
醇回流提取效果最好 ,虽杂质也较多 ,但分离度良
好 ,不影响测定 ,且经方法学验证 ,重现性和回收率
均符合要求 ,因此采用 70 %甲醇进行回流提取。
312 　色谱条件的选择 :考虑到 C21 甾体皂苷的紫外
末端吸收 ,故本实验选用 220 nm 作为检测波长。
试验中曾对甲醇2水、甲醇20. 1 %冰醋酸和乙腈2水 3
种洗脱系统以及梯度洗脱和等度洗脱两种洗脱方式
分别进行考察 ,结果表明在乙腈2水 (38 ∶62) 等度洗
脱条件下 ,通光藤皂苷 A 与其他组分分离度最好 ,
峰形较理想 ,且能在 30 min 内完成样品测定 ,故确
定为本实验的流动相系统。
313 　质量差异 :由表 1 结果可以看出 ,通光藤药材不
同部位中通光藤皂苷 A 的量存在很大差异 ,皮部中
的量为木质部中量的 5 倍多 ,因此在药材的质量评价
时 ,应注意取样的影响 ;另外在研发新药时 ,建立重点
对皮部进行提取。由表 2 结果可以看出 ,受气候、土
壤、生态环境等因素的影响 ,不同产地通光藤药材中
通光藤皂苷 A 的量也存在着明显差异 ;9 个产地药材
中 ,通光藤皂苷 A 的量在 0. 153 6～3. 588 0 mg/ g ,且
有 2 个产地的药材中未检出通光藤皂苷 A ,因此在新
药研发时 ,应尽量选用量高的药材。
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·128·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月