全 文 ：声和回流两种方法进行提取, 结果表明 70% 乙醇
和 70% 甲醇超声提取的样品峰数和组分的量较
多,且杂质峰较少。对提取时间做了进一步的筛选,
最终确定为提取 2次,每次 0 5 h。
3 4 样品差异性分析:通过对指纹图谱分析可以看
出,除泰山羊里镇和良庄镇的两批样品外,泰山周边
地区的四叶参药材的指纹图谱相似度都在 0 84 以
上,其差异性可能是由生态环境、采收时期等因素引
起的。
参考文献:
[ 1] 王德才, 李同德, 康颂建 泰山四大名药之一四叶参 [ J ] 食
品与药品, 2006, 8( 9) : 7375
[ 2] 谷红霞, 周茂金, 苏美英 四叶参化学成分和药理作用研究
进展 [ J ] 中草药, 2009, 40( 8) : 13381340
[ 3] 付成国, 文连奎, 董 然 轮叶党参化学成分与药理研究进
展 [ J] 中药材, 2007, 30( 4) : 497499
[ 4] 王欣杨, 于治国, 高晓霞, 等 高效液相色谱法同时测定槲
寄生中 4种黄酮 [ J] 中草药, 2010, 41( 9) : 135137
[ 5] 崔 洋, 王 巧, 张兰桐, 等 河北道地药材连翘的高效液
相色谱指纹图谱研究 [ J] 中草药, 2010, 41( 2) : 297301
[ 6] 龚全炎, 吴晓琴, 夏道宇, 等 RPHPLC测定竹叶提取的中
黄酮类和酚酸类成分 [ J] 中草药, 2010, 41( 1) : 6365
HPLC法同时测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花烃、萜品烯
林万里1 ,王振月1 ,张兰兰2 * ,黄芝娟2 ,李瑞明2 ,宋兆辉2
收稿日期: 20100320
作者简介:林万里( 1982 ) ,男,黑龙江省鸡西市人,黑龙江中医药大学中药学在读硕士,现于天津天士力集团研究院现代中药研究所做
实习研究员。T el: ( 022) 86342546 Email: lin_w an li@ 163. com
* 通讯作者 张兰兰 T el: ( 022) 86342608 Email: zhangll2@ tasly. com
( 1 黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040; 2 天津天士力集团研究院, 天津 300410)
摘 要:目的 建立 H PLC 法同时测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花烃和萜品烯的方法。方法 采用 Agilent
SBC18柱 ( 250 mm 4 6 mm, 5m) ; 流动相为乙腈水 ( 60!40) ;体积流量为 1 0 mL / min; 检测波长为 224 nm;
柱温为 30 ∀ 。结果 驱蛔素、对伞花烃、萜品烯的线性范围分别为 2 02~ 40 4 mg / mL ( r= 0 999 4)、0 525~
10 5 mg / mL ( r= 0 999 8)、0 376 ~ 7 52 mg/ mL ( r = 0 999 7) ; 加样回收率分别为 98 60% ( RSD= 2 06% )、
102 51% ( RSD= 2 70% )、96 92% ( RSD= 2 32% )。结论 本方法简单、快速、灵敏、准确、重现性好, 适用于同时
测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花烃、萜品烯的量。
关键词:驱蛔素; 对伞花烃; 萜品烯; 土荆芥; 高效液相色谱
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2085 03
土荆芥为藜科植物土荆芥 Chenopodium am
brosioides L. 带有果穗的全草, 具有祛风、杀虫、通
经止痛的功效, 用于皮肤风湿痹痛、痛经、闭经、皮肤
湿疹和蛇虫咬伤 [ 1]。据文献报道,驱蛔素、对伞花烃
和萜品烯是土荆芥挥发油的主要成分, 且具有一
定的代表性,但是对这 3种成分同时进行定量测定
的方法一直未见报道。挥发油类成分一般选用气相
色谱法进行分析,但气相色谱采用毛细管柱, 由于分
流等因素影响其测定的稳定性 [ 24] ,本实验建立了用
HPLC 法同时测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花
烃、萜品烯的方法, 为土荆芥挥发油质量标准的制
定打下基础。
1 仪器与材料
美国 Ag ilent 1100高效液相色谱仪 (配有紫外
检测器、二元泵、自动进样器、柱温箱)。
驱蛔素对照品 (自制, 质量分数为 90 0% ) , 对
伞花烃对照品 ( St . Louis, USA, 质量分数为
99 0% ) , 萜品烯对照品 ( 自制, 质量分数为
92 37% ) ,二纯水 (自制) ,乙腈 ( M erck 公司) 为色
谱纯,其他试剂为分析纯。
土荆芥经黑龙江中医药大学药学院中药资源与
开发 教 研 室 王 振 月 教 授 鉴 定 为 土 荆 芥
Chenopodium ambr osioides L. , 其挥发油由陕西天
士力植物药业有限责任公司提供。
2 方法与结果
2 1 色谱条件: 色谱柱 Ag ilent SBC18 ( 250 mm
4. 6 mm, 5 m) ;流动相为乙腈水 ( 60 ! 40) ;体积
流量 1 0 mL/ m in; 检测波长为 224 nm; 柱温为
30 ∀ 。色谱图见图 1。
2 2 溶液的制备
2 2 1 对照品溶液的制备: 精密称取驱蛔素对照
品、对伞花烃对照品、萜品稀对照品适量,用无水
乙醇溶解, 制成含驱蛔素 40 mg / mL、对伞花烃 10
mg/ mL、萜品烯 7 mg / mL 的溶液,即得。
#2085#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
1驱蛔素 2对伞花烃 3萜品烯
1 as carid ole 2 pcym ene 3 t erpinene
图 1 驱蛔素、对伞花烃、萜品烯对照品(A)及土荆芥
挥发油供试品(B) 的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatograms of ascaridole, pcymene,
andterpinene reference substances ( A) and
sample of volatile oil in C. ambrosioides (B)
2 2 2 供试品溶液的制备: 取土荆芥挥发油 200
mg, 精密称定,置于 10 mL 量瓶中, 加无水乙醇稀
释至刻度,摇匀,取适量过 0 45 m 滤膜,即得。
2 3 线性关系考察: 精密吸取对照品溶液 0 1、
0 2、0 4、1 0、1 6、2 0 mL 于 2 mL 量瓶中, 用无水
乙醇稀释至刻度,摇匀,注入高效液相色谱仪测定峰
面积。以峰面积为纵坐标、对照品浓度为横坐标, 进
行线性回归, 得到驱蛔素、对伞花烃、萜品烯的回
归方程,见表 1。
表 1 驱蛔素、对伞花烃、萜品烯标准曲线测定结果
Table 1 Regression equations, correlation coef ficients,
and linearity ranges of ascaridole, pcymene,
andterpinene
组 分 回归方程 r 线性范围/ ( mg # mL - 1)
驱蛔素 Y= 1 058 4 X+ 230 73 0 999 4 2 020~ 40 4
对伞花烃 Y= 15 124 X+ 402 32 0 999 8 0 525~ 10 5
萜品烯 Y= 10 662 X+ 31 77 0 999 7 0 376~ 7 52
2 4 精密度试验:取同一份对照品溶液进行高效液
相色谱分析,测定峰面积,连续重复测定 6 次, 考察
精密度。驱蛔素、对伞花烃、萜品烯的 RSD 分别
为 1 55%、1 92%、1 79%。
2 5 稳定性试验:取同一份对照品溶液,分别于 0、
1、2、4、6、8 h 进行高效液相色谱分析,测定峰面积,
考察稳定性。驱蛔素、对伞花烃、萜品烯的 RSD
分别为 2 93%、2 76%、2 85%, 表明溶液中各个待
测定成分在 8 h 内稳定。
2 6 重现性试验:精密称取同一批号的土荆芥挥发
油约 200 mg ,按照∃ 2 2 2%项下供试品溶液制备的
方法制备 6份样品, 依上述色谱条件进行测定,结果
驱蛔素、对伞花烃、萜品烯质量浓度分别为
67 07%、18 56%、25 99% , RSD 分别为 1 23%、
2 24%、2 30%。
2 7 加样回收率试验:精密称取已测定的土荆芥挥
发油 6 份, 每份约 100 mg, 精密加入对照品溶液
1 7 mL, 按照∃ 2 2 2%项下供试品溶液制备的方法
制备 6份样品, 依上述色谱条件进行测定, 结果驱
蛔素、对伞花烃、萜品烯的平均回收率分别为
98 60%、102 51%、96 92%, RSD 分别为 2 06%、
2 70%、2 32%。
28 样品测定:精密称取不同批号的土荆芥挥发油约
200 mg,分别按照∃ 22 2%项下供试品溶液制备的方法
制备供试品溶液,依上述色谱条件进行测定,以外标法
计算土荆芥挥发油中各成分的量,结果见表 2。
表 2 不同批号土荆芥挥发油样品的测定结果 ( n= 3)
Table 2 Determination of different samples of volatile oil
in different batches of C. ambrosioides ( n= 3)
批 号 产 地 质量浓度/ ( mg # mL- 1)驱蛔素 对伞花烃 萜品烯
20080915 广东 65 97 18 01 30 79
20080916 广西 67 06 18 24 25 21
20080917 陕西 66 43 18 17 28 56
20080918 广西 67 52 18 26 26 51
20080919 福建 66 49 18 77 29 19
20080920 广东 64 76 17 84 25 37
3 讨论
驱蛔素、对伞花烃和 萜品烯是土荆芥挥发油
中的主要成分,以往的分析检测方法都是以对伞花
烃和萜品烯为指标, 不能够全面反映土荆芥挥发
油的质量。经初步药理实验证明, 驱蛔素一方面具
有抗溃疡、抗幽门螺旋杆菌的作用,但同时具有一定
的毒副作用。本实验建立的同时测定土荆芥挥发油
中驱蛔素、对伞花烃和 萜品烯的 HPLC 分析检测
方法避免了气相色谱法测定结果不稳定的缺陷, 又
比以往的方法能够在功能性及安全性方面更加客观
地评价土荆芥挥发油的品质,不仅为土荆芥挥发油
的质量标准研究奠定了基础,同时为进一步研究土
荆芥的药理活性、寻找抗溃疡、抗幽门螺旋杆菌等活
性的药用物质基础及土荆芥挥发油的体内代谢提供
检测手段。
本实验建立的 H PLC 分析检测方法曾采用了
不同比例的甲醇水、乙腈水系统作为流动相,通过
对比结果表明,以乙腈水 ( 60 ! 40) 系统作为流动
相洗脱时, 驱蛔素、对伞花烃和 萜品烯峰分离效
果良好。
从不同批号土荆芥挥发油样品的测定结果看,
#2086# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
陕西天士力植物药业有限责任公司提供的土荆芥挥
发油批次间差异不大, 能够保证土荆芥挥发油的质
量及相关上市产品的稳定性。
参考文献:
[ 1] 中国药科大学 中药辞海 [ M ] 第一卷 北京:中国医药科
技出版社, 1993
[ 2] 李 意 RPHPLC法分离和测定荆花胃康原料药和胶丸中
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[ 3] 番 馨, 梁 鸣, 陈森鸿 土荆芥中挥发油的气相色谱质谱
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UFLC法测定茜草中羟基茜草素和大叶茜草素
李芙蓉,陈世忠,罗世恒, 王 弘*
收稿日期: 20100514
作者简介:李芙蓉( 1982 ) ,女,山东烟台人,北京大学药学院硕士,研究方向为药用植物资源和质量控制。
T el : ( 010) 82802723 Email: f ronglee@ 163. com
* 通讯作者 王 弘 T el: ( 010) 82801559 Email: hw 9505@ bjmuedu. cn
(北京大学药学院 天然药物化学系, 北京 100191)
摘 要:目的 进行超快速液相色谱 ( UFLC) 测定茜草中羟基茜草素和大叶茜草素的方法研究,并与 HPLC 方法
比较 ,建立准确、高效的茜草药材质量分析方法。方法 使用新型的 UFLC 系统, 色谱柱为 Shimpack XRODS&
( 75 mm 3. 0 mm, 2. 2m) ,流动相为乙腈0 2% 磷酸 ( 52! 48) 溶液, 体积流量: 1 0 mL/ min,柱温 60 ∀ , 检测
波长为 250 nm。结果 UFLC 法和 HPLC 法测定的茜草两种化学成分的量差异不大; UFLC 分析时间显著缩短,
羟基茜草素和大叶茜草素的分析时间由 H PLC 法的 7 2、25 3 min 缩短为 1 2、10 5 min。结论 本研究建立的
UFLC 测定方法精密度高、重现性好、快捷简便,适用于茜草中羟基茜草素和大叶茜草素的分析, 是一种高效、可行
的质量评价技术。
关键词:茜草; UFLC; 羟基茜草素; 大叶茜草素
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2087 03
超快速液相色谱 ( ult ra fast liquid chromato g
r aphy, UFLC) 是一种新型液相色谱技术, 其色谱
柱使用 2 2 m 粒度的填料,能获得更高的柱效, 并
能缩短分析时间, 增加峰容量, 降低柱外峰展宽效
应[ 1]。作为一种新的快速分析技术, 它与超高效液
相色谱的最大区别是其不需要系统超高压, 在略高
于普通液相色谱压力极限下即可实现高流速、高分
辨率,适用于高通量、高效率的分析[ 2] 。采用高效、
灵敏、快速的分析技术进行中药质量分析,是制定科
学可行的质量评价标准的保障。U FLC 采用较小的
填料颗粒,达到更高的分辨率被越来越广泛地应用
于快速分析生物制品和中药材中目标化合物的分
离[ 34]。本实验通过方法学研究, 首次建立了 UFLC
法同时测定茜草中羟基茜草素和大叶茜草素的方
法,并与 HPLC 方法进行比较。结果, U FLC 测定
方法精密度高、重现性好,与 HPLC 法比较,在测定
结果差异不大的前提下, U FLC 法可显著缩短分析
时间,并且平衡、冲洗色谱柱的时间也显著缩短, 减
少了溶剂消耗。
1 仪器与试药
岛津 LC 20A 液相色谱系统: LC 20ADXR
泵; CT O 20AC 柱温箱; P rominence SIL 20AC
自动进样器; SPD M20A 二极管阵列紫外可见光
检测器; DGU 20A3 脱气机; CBM 20A 系统控
制器, Shimpack XR ODS & ( 75 mm 3. 0 mm,
2. 2 m) 色谱柱。
色谱纯甲醇购自天津大茂试剂公司; 色谱纯乙
腈为美国 J. T . Baker 公司生产; 磷酸均为分析纯,
由北京化工厂生产; 水为超纯水。大叶茜草素
( r ubimaillin) 由中国药品生物制品检定所提供, 批
号 110884200604; 羟基茜草素 ( purpurin) 由本课
题组纯化精制, 质量分数达 98% 以上。样品为自
采集与市购,经北京大学医学部王弘副教授鉴定为
茜草科植物茜草 Rubia cor dif olia L. 的干燥根和
根茎。
2 方法与结果
2 1 色谱条件: 色谱柱为 Shimpack XRODS &
( 75 mm 3. 0 mm, 2. 2 m) ; 流动相为乙腈0 2%
磷酸 ( 52 ! 48) ; 体积流量为 1 0 mL/ min; 柱温
60 ∀ ;检测波长为 250 nm。色谱图如图 1。
#2087#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月