全 文 ：中草蔼 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1081·
108—111．
[5]粱红，何宇清，赵
根芽分化的效应口]．
31(3)：228—231．
洁．生长调节物质对丹参叶片脱分化及 [7]
华中师范大学学报：自然科学版，1997，
[63强小利，闫亚平，王☆；之．植物生长因子对丹参愈伤组织有效
成分积累的影响[J]．陕西师范大学学报：自然科学版，2004，
[8]
32：115一118·
冯玲玲，范美华，周吉源．丹参愈伤组织的诱导及增殖效应
口]．生物学杂志。2004，21(5)：25—27．
GamburgOL，MurashigeT，ThorpeTA．Planttissuecul—
turemedia[J]．InVitroc扰DevelopBi l—Plant，1976，1z
(10)：473．
川贝母种子休眠及萌发特性的研究
于婧1，魏建和1-，陈士林1，代勇2，杨成民1
(1．中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京100193；2．成都恩威集团有限公司，四川成都610041)
摘要：目的 了解川贝母种子休眠原因及层积处理打破种子休眠的作用。方法浸种称重法测定种皮透水性；生
物鉴定法检测发芽抑制物；解剖种子观察层积种子种胚发育；光照培养箱发芽检测层积种子萌发温度。结果 浸种
8h后川贝母种子吸水率达80％以上；种子浸提液显著抑制白菜种子的萌发和生长；层积处理促进种胚后熟，60d后
胚率由处理前12％增至43％；层积种子25℃发芽率显著高于其他发芽温度。结论JII贝母种皮无吸水障碍；种子休
眠的主要原因是胚形态后熟及存在发芽抑制物，属于混合休眠类型；层积处理可有效打破休眠，25℃发芽适温。
关键词：川I贝母；种子休眠；胚后熟；发芽抑制物
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1081一04
DormancydgerminationcharacteristicsofFritillariaci rhosaseed
YUJin91，WEIJian—hel，CHENShi—linl，DAIYon92，YANGCheng—minl
(1．InstituteofMedicinalPl ntDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCo lege，
Beijing100094，China；2．ChengduEnweiGroupLimitedCompany，Chengdu610041，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatethemechanismoftheseeddormancyofFritillariaci rhosaand
thestratificationeffectonseeddormancy．MethodsThesoakedseedswereusedtotestwaterpermeabili—
tybyweighting．Thebiologicaltestwasappliedfor etectinghegerminationinhibitor．Seeddiss ction
wasusedtoinvestigatethembryodevelopmentafterstratification．Theemperaturesofseedsgermination
afterstratificationweredeterminedbyartificiallimatechamberatdifferentt mperatures．ResultsTh
waterabsorptionratefF．cirrhosaseedswasmorethan80％aftersoakingfor8h．Theextractssignifi—
cantlyinhibitedboththegerminationofseedandtherootgrowthofChinesecabbage．Thestratificaton
couldeffectivelyacceleratethe mbryoafterripeningandincreasethembryoratefrom12％to43％after
60d．Germinationra eoftheseedafterstratificatonn25℃wassignificantlyhigherthanthatinother
temperatures．ConclusionThereiSnoobstacleofwaterpermeabilityontestaofF．cirrhosa．Theseed
embryoafterripeningandthegerminationinhibitorarethemainmechanismofseedormancyofF·cir—
rhosa，whereasitisatypeofmix-dormancy．Thestratificationiseffectivefors eddormancyreliefandthe
optimumgerminationtemperatureis25℃．
Keywords：FritillariacirrhosD．Don；seeddormancy；embryoafte ripening；germinationi hibitor
川贝母Fritillariaci rhosaD．Don属百合科多
年生草本植物，分布于云南、四川、甘肃和西藏等海
拔3500m以上的高原地区。鳞茎药用，有清热润
肺、止咳化痰的功效，是一味常用大宗名贵药材。野
生资源已趋于濒危，目前正在开展大规模野生抚育
工作‘¨。生产上曾采用鳞茎繁殖，但繁殖系数太低；
用种子繁殖，繁殖系数高，但种子地处高原，不易采
集，休眠期长，出苗率低，整齐度不理想。已有研究指
收稿日期：2007—11—07
基金项目：国家高技术产业化专项(2005一I)；北京市科技新星计划项目(2004A60)；国家中医药管理局科技专项(2004ZX06—2)；国家中
药材生产扶持资金项日(2005—1)
作者简介：于婧(1981一)，女，农学学士，2005年毕业于北京农学院，主要从事药用植物繁殖生物学、细胞生物学及育种研究。
Tel：(010)62895272E—mail：yujing@impladac．cn
*通讯作者魏建和Tel：(010)6281884iE—mail：wjianh@263．net
万方数据
·1082· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
出川贝母种子存在形态后熟，赤霉素对川贝母种子
有促进种子萌发、有效地提高出苗率和整齐度的作
用‘2~引，但未在生产上广泛使用。终其原因，在于川
贝母种子休眠机制尚未得到系统揭示，而层积作用
的效果未见报道。为此笔者开展了JII贝母种子休眠
机制及解除的系统研究，现将种皮透性、发芽抑制物
及层积作用对胚后熟的影响等结果报告如下。
1材料
种子采自四川I甘孜州康定县折多山中国医学科
学院药用植物研究所与成都恩威集团有限公司共同
建设的川贝母野生抚育试验基地，经陈士林研究员
鉴定为川贝母种子。每年8月中旬至下旬采集川贝
果实，干燥保存。种子保存处理方法见表1。
表1 用于实验的种子保存及处理方法
TableI Storagendtreatmentthod
ofseedsu edinexperiment
种子收获时间保存地点 保存方法 处理方法 实验时胚
开始本
⋯、
发育阶段
2 方法
2．1种皮透水性检测方法：将干燥种子(A批次)分
为3组(重复)，每组100粒，称取干质量后，装入纱
布中，室温浸种，30rain后每隔1h取出，用滤纸吸
干，称质量。计算种子吸水率[吸水率=(w，一W)／
W×100％，W。为种子吸水后质量，W为种子干质
量]，绘制吸水曲线。
2．2发芽抑制物检测：生物鉴定法检测。设5个处
理(表2)，前4个处理质量浓度口1均为1．0g／20
mL，处理5浓缩4倍，所有浸提方法均是将川I贝母
种子(A批次)置60℃水浴浸提24h。观察浸提液
对白菜种子发芽的抑制作用，以蒸馏水为对照。每个
发芽盒中加5mL浸提液，播白菜种子50粒，置于
25℃恒温培养箱内培养，24h后观察白菜种子发芽
的情况，48h后测量胚根长度，计算简化活力指数
[简化活力指数=发芽终期胚芽长度(cm)×发芽率
(％)]，每浸提物发芽试验3次重复。
2．3层积作用观察方法
2．3．1层积处理对胚形态后熟作用观察方法：测定
表2川贝母种子中发芽抑制物的浸提方法(A批次种子)
Table2 Extractingmethodsfgerminationinhibitor
inF．cirrhosaseeds(hatchA)
处理 种子形态 浸提液 浸提方法
浸提法1完整种子 蒸馏水1·0g种子蒸馏水20mL浸种
浸提法2粉碎种子蒸馏水1．0g种子粉碎至可全部通过0．9
mill筛孔，蒸馏水20mI．浸种
浸提法3粉碎种子80％甲醇1．0g种子粉碎至可全部通过0．9
mill筛孔，80％甲醇共浸提2
次，合并浸提液，减压蒸干二，蒸
馏水20ml。溶解提取物
浸提法4完整种子 蒸馏水10．0g种子蒸馏水200mL浸种
浸提法5完整种子蒸馏水5．0g种子蒸馏水100m1．浸种，
浸提液减压浓缩至25mL
湿沙层积种子(B批次)0、30、60d及四JII牛粪层积
(C批次)180d的胚率。测定时，采用分离胚的方法
对不同层积阶段的种子进行胚形态观察。每阶段选
取10粒种子，用解剖刀划开种胚腔，将胚轻轻挑出，
在OLYMPUS—SZX9显微镜下观察，测定胚长、胚
乳长，并计算胚率(胚率一胚长／胚乳长)。
2．3．2 层积后种子活力测定方法：采用四唑
(TTC)法染色测定饱满种子胚的活力。
2．3．3发芽温度对层积后种子萌发的影响：种子(C
批次)进行常规发芽实验，在15、20、25、20～25℃
4个温度处理的光照培养箱中发芽，确定最适发芽温
度。每个处理3次重复，每重复50粒种子。测定参照
《国际种子检验规程》(1996)[63中的有关规定。每日记
录发芽的粒数、霉烂粒数，发芽结束后计算发芽起始
时间、发芽持续时间、最终发芽率和霉烂率。
3结果与分析
3．1休眠种子吸水率变化：由图l可知，川贝母种子
吸水可分为3个阶段。3组种子在种子吸胀阶段(O～
8h)吸水率逐渐上升，在吸水停滞期(8～12h)种子
吸水率波动较小，种子在恢复吸水期(12h以后)吸
水率又明显上升。川贝母种子吸水率在8h后均达到
80％以上，说明川贝母种子不存在透水性障碍[7~10‘。
吸水时间／h
图1不同浸泡时间川贝母种子吸水率(A批次种子)
Fig·lWaterabsorptionrateofF·cirrhosaseeds
afterdifferentsoakingtimes(batchA)
3．2发芽抑制物的生物鉴定：表3结果表明，与蒸
馏水对照相比，川贝母种子的水浸提液和醇浸提液
对白菜种子发芽均有抑制作用，对种子胚根的生长
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1083·
(简化活力指数)有极显著抑制作用，因此川贝母种
子存在发芽抑制物。粉碎川贝母种子水浸提液对白
菜种子发芽的抑制作用(浸提法2)显著强于完整川
贝母种子浸提液(浸提法1、4)，表明川贝母种子发
芽抑制物不仅存在于种子表皮，更多存在于种子内
部n]。80％甲醇的粉碎川贝母种子浸提液下白菜种
子发芽率只低于蒸馏水对照5．7％，未达到显著水
平，因此川贝母种子发芽抑制物主要是水溶性化合
物而非醇溶性化合物。
3．3层积作用
3．3．1层积处理对胚形态后熟作用：从图2及表4
可以看出层积对种子胚生长的影响。层积处理前，胚
尚未完全发育成熟，处于刚分化的心形胚时期，胚位
于种子一角隅(珠孑L端)，体积很小，胚率仅为12％；
湿沙层积处理30d后胚明显长大，胚形变为鱼雷形
胚，胚率增长至26％；层积60d后胚率增长至43％。
这说明川贝母种子一方面存在胚形态休眠，另一方
面，层积作用可以有效促进川贝母种子胚完成形态后
表3不同川贝母种子浸提液对白菜种子萌发的影响
Table3 EffectofdifferentaqueousextractsofF．cirrhosa
seedsoncabbageseedgermination
*采用修正最小显著差异法(LSD)进行显著性测验，同列不同
小写字母表示差异显著性，P≥5％，同列不同大写字母表示差异显
著性，P≥1％，表5同
。LSDwasusedforleastignificantdifferencetest，different
smallettersinsamecolumnrepresentignificanee，P≥5％，differ—
entcapitallettersin amecolumnrepresentignificance，P≥1％，
Table5 issame
熟。在实际生产中，一般每年8月中旬至下旬采集川
贝果实，种子自然干燥贮藏，9月下旬在四川折多山
室外层积处理，至第2年春天种子即可播种发芽。
图2层积对川贝母种子胚发育的影响(B、C批次种子)
Fig．2EffectofstratificationonembryodevelopmentofF．cirrhosaseeds(batchesBandC)
表4层积处理对胚形态后熟作用
Table4 Effectofstratificationonembryo
afterripeninginmorphology
3．3．2层积后的种子萌发特性：为了考察四川折多
山层积处理180d饱满种子的发芽能力，以及川贝
母种子发芽对温度的需求，笔者进行相关试验。首先
测定了种子的生活力。胚呈红色的种子皆具生活力，
并具萌发潜力；胚呈粉红色的种子，其生命力较弱，
无色胚为丧失生命力的种子。共测定396粒胚，其中
呈红色的有283粒，占71．5％，呈粉色的有92粒，
占23．2％，无色胚有21粒，占5．3％。即层积后川贝
母饱满种子中有71．5％具有活力。
从表5结果可知，对已破除休眠的种子，在15、
20、25℃恒温及20～25℃变温中均能萌发。但25
℃发芽率显著高于其他3种温度，开始萌发日期也
比其他3种温度提前1～3d，因此25℃为川贝母种
子最适发芽温度。
表5不同温度对川贝母种子萌发的影响(C批次种子)
Table5 Effectofdifferentt mperaturesonse d
germinationofF．cirrhosa(batchC)
4讨论
川贝母药材主要来源于百合科植物川贝母F．
cirrhosaD．Don、暗紫贝母F．unibracteataHsiaoet
K．C．Hsia、甘肃贝母F．przewalskiiMaxim．或
梭砂贝母F．delavayiFranch．，其中川贝母F．fi卜
rhosaD。Don是最主要的来源之一。野生抚育已成
万方数据
·1084· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
为解决川贝母药材严重匮乏的主要方式，其主要做
法就是在海拔3000ITI以上地区集中繁育种子，然
后在海拔3500m的川I贝母适生群落中补播种子，
增加川I贝母种群密度，经过3～5年抚育生长收获药
材。由于川贝母种子存在深度休眠，补播种子休眠的
解除成为野生抚育成功须解决的关键技术环节之
一。伊贝母F．pallidift0112Schrenk、浙贝母F．
thunbergiiMiq．[1矗“¨种子休眠研究表明其为胚形
态后熟与发芽抑制物存在的混合休眠类型。
川贝母4种药材的基源植物中，只有川贝母F．
cirrhosaD．Don有少量研究，陈士林[1]、陈瑛[2]等研
究了卷叶贝母种子胚后熟的层积温度条件。笔者研
究揭示出川贝母种皮无吸水障碍；通过对不同层积
阶段种子胚的形态观察，揭示了川贝母种子从层积
前的心形胚发育至层积后期鱼雷形胚的动态过程，
这也表明川贝母存在胚形态后熟，且可以通过层积
方法促进胚完成形态后熟。采用白菜种子发芽法进
行生物鉴定，首次报道了川贝母种子存在发芽抑制
物，且为存在于种子表皮及种子内部的水溶性抑制
物质；另外还揭示了经过层积处理的JJI贝母种子发
芽适温。本实验首次揭示出了川贝母种子为混合休
眠类型，研究结果为深入了解川贝母种子休眠机制、
采用合适方法解除休眠奠定了基础。一
参考文献：
[1]陈十林，肖诗鹰，魏建和，等．川贝母野生抚育——中药材可
持续利用模式研究[J]．亚太传统医药，2006(2)：72-75．
[21陈瑛．张军，李先恩．卷叶贝母种子胚后熟的温度条件
FJ3．中国中药杂志，1993，18(5)：270—272．
[3]陈瑛．实用中药种子技术手册[M]．北京：人民卫生出版
社，1999．
[4]宋廷杰，肖杰易，李祥洲．川贝母种子赤霉索处理试验研究
[J]．基层中药杂志，1994。8(1)：14—16．
[5]李铁华．木荷种子休眠与萌发特性的研究[J]．种子，2004，
23(6)：15—17．
[6-1ISTA．1996国际种子检验规程[M]．中国农业出版社，1999．
[7]唐安军．龙春林，刀志灵．种子休眠机理研究概述[J]．云南
植物研究．2004。26(3)：241—251．
[8]李蓉，叶勇．种子休眠与破眠机理研究进展[J]．西北植
物学报，2005，25(1)：2350—2355．
[9]茼经，杨青松，李小刚，等．砂梨种子休眠原因与解除休眠
方法的研究[J]．江阿农业大学学报，2006，28(4)：525528．
[10]杨万霞，猷香香，方升佐．青钱柳种子的种皮构造及其对透水
性的影响[J]．南京林业大学学报：自然科学版，2005，29
(5)：25—28．
[11]李志亮，潘映缸，李风．贝母种子浸液抑制性测定[J]．中
国中药杂志，1989，14(5)：15-16．
人参体细胞胚胎发生过程中内源激素变化和基因表达研究
王 义1，赵文君2，孙春玉1，杨晶1，张美萍p
(1．吉林农业大学生命科学学院，吉林长春130118；2．白山经济开发区管理委员会，吉林白山134300)
摘要：目的探讨外源激素一内源激素一特异基因之间的关系，为阐明人参体细胞胚胎发生的分子机制奠定基础。
方法 对人参不同发生途径，不同时期的培养物进行AFLP分析，对体细胞胚胎发生不同时期培养物的内源IAA
和ABA以及皂苷的量进行了测定。结果在早期胚时期IAA的量最高，在成熟胚时期ABA的量最高，而ABA／
IAA的值在成熟胚时较高；不同发生途径，不同时期的培养物基因表达不同；体胚发生试管苗总皂苷的量比子叶胚
时期高出4倍多。结论IAA的存在是维持人参体胚正常发育到早期胚的条件，ABA与胚性启动，体胚发生、发育
相关，尤其对胚胎发育后期有较大的影响；在不同生理状态或不同的培养条件下产生了不同的基因调控类型，不同
的发育过程会有特异基因表达，导致了人参分化情况的不同；随着形态建成的逐步完成，也是次生代谢产物逐渐积
累的过程。
关键词：人参；内源激素；cDNA—AFLP
中图分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1084—06
Changesof ndogenoush rmonea dgeneexpressionduringprocess
ofsomaticembryogenesisinPanaxginseng
WANGYil，ZHAOWen—iun2，SUNChun—yul，YANG—Jin91，ZHANGMei—pin91
(1．CollegeofLifeScience，JilinAgr culturalUniversity·Changchun130118，China；2．ManagementCommitt e
收稿日期：2007—10—15
基金项目：吉林省科技厅基金资助项目(250113)
作者简介：王 义(1964一)．男．占林省德惠县人，博上，副教授，硕上生导师。吉林农业大学生命科学院副院长，主要从事药用植物细胞
工程、药用植物种质资源创新和开发领域的研究，主持和参加国家中医药管理局、省科技厅和省教育厅等课题12项，核心期
刊I：发表论文30余篇，出版著作1部。Tel：(0431)84533182 13504 5977E—mail；wanglaoshi2007@tom．corn
*通讯作者张美萍Tel：(0431)8453163013394489398E—mail：wzhaoyun@tom．con
万方数据
川贝母种子休眠及萌发特性的研究
作者： 于婧， 魏建和， 陈士林， 代勇， 杨成民， YU Jing， WEI Jian-he， CHEN Shi-lin，
DAI Yong， YANG Cheng-min
作者单位： 于婧,魏建和,陈士林,杨成民,YU Jing,WEI Jian-he,CHEN Shi-lin,YANG Cheng-min(中国医
学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京,100193)， 代勇,DAI Yong(成都恩威集团有
限公司,四川,成都,610041)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(7)
被引用次数： 9次

参考文献(11条)
1.陈士林;肖诗鹰;魏建和 川贝母野生抚育--中药材可持续利用模式研究 2006(02)
2.陈瑛;张军;李先恩 卷叶贝母种子胚后熟的温度条件 1993(05)
3.陈瑛 实用中药种子技术手册 1999
4.宋廷杰;肖杰易;李祥洲 川贝母种子赤霉素处理试验研究 1994(01)
5.李铁华 木荷种子休眠与萌发特性的研究[期刊论文]-种子 2004(06)
6.ISTA 1996国际种子检验规程 1999
7.唐安军;龙春林;刀志灵 种子休眠机理研究概述[期刊论文]-云南植物研究 2004(03)
8.李蓉;叶勇 种子休眠与破眠机理研究进展[期刊论文]-西北植物学报 2005(01)
9.蔺经;杨青松;李小刚 砂梨种子休眠原因与解除休眠方法的研究[期刊论文]-新疆农业大学学报 2006(04)
10.杨万霞;猷香香;方升佐 青钱柳种子的种皮构造及其对透水性的影响[期刊论文]-南京林业大学学报(自然科学版
) 2005(05)
11.李志亮;潘映缸;李风 贝母种子浸液抑制性测定 1989(05)

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科学版)2003,40(2)
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武汉植物学研究2002,20(6)
4. 李强.傅华龙.卿人韦.兰利琼 组培川贝母鳞茎形成和发育过程中的同功酶分析[期刊论文]-应用与环境生物学报
2002,8(6)
5. 暗紫贝母人工繁育中应注意的技术问题[期刊论文]-四川农业科技2006(7)
6. 田晓艳.刘延吉.TIAN Xiao-yan.LIU Yan-ji 辽东楤木种子休眠原因及休眠破除研究[期刊论文]-种子
2008,27(12)
7. 黎开强.吴卫.郑有良.代勇.牟兰.廖凯.LI Kai-qiang.WU Wei.ZHENG You-liang.DAI Yong.MOU Lan.LIAO Kai
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4.伍燕华.付绍兵.黄开荣.万德光.王海.王萌.严铸云 川贝母种子质量分级标准研究[期刊论文]-种子 2012(12)
5.张少发.魏建和.陈士林.代勇.李西文 川贝母开花动态及授粉习性研究[期刊论文]-中国中药杂志 2010(1)
6.杨仕军.祖承哲.赵欣.黄林芳.蔡大勇.陈士林 不同品种川贝母对小鼠复发性哮喘的疗效比较[期刊论文]-中草药
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7.向丽.韩建萍.陈士林 人工栽培川贝母种苗质量标准研究[期刊论文]-环球中医药 2011(2)
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2012(5)


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