全 文 ：瑞香素不同给药途径在大鼠体内药动学研究
刘 　嘉 ,狄留庆
①
,单进军 ,静芸芸
(南京中医药大学中医药研究院 ,江苏 南京 　210029)
摘 　要 :目的 　建立大鼠血浆中瑞香素的测定方法 ,观察瑞香素在大鼠体内的药动学行为。方法 　将大鼠随机分
组 ,分别 ig 瑞香素溶液 250、31215、375 mg/ kg ,尾 iv 瑞香素溶液 50、6215、75 mg/ kg , HPLC 测定不同时间间隔的
血药浓度 ,运用 DAS 110 药动学程序计算药动学参数。结果 　大鼠 ig 给药后符合单室开放模型 ;iv 后也符合单室
开放模型。结论 　瑞香素在大鼠体内能快速分布并消除 ,两种给药途径瑞香素的体内药动学过程不同 ,静注和口
服给药各有优势。
关键词 :瑞香素 ; HPLC ; 药动学
中图分类号 :R285161 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0120106203
　　瑞香素 (dap hnetin) 是从瑞香属植物长白瑞香
D a p hne koreana Nakai 中提取出来的有效成分 ,又
名祖师麻甲素 ,为我国首创的新药 ,其化学名为 7 ,
82二羟基香豆素 (7 , 82dit hydroxycoumarin) ,主要
存在于瑞香科属植物中。目前 ,有关瑞香素的化学、
药理研究较多 ,但关于其代谢研究还很少。本实验
采用 HPL C 法 ,对 iv 和 ig 瑞香素后大鼠血浆中的
药动学过程进行了研究 ,进而比较这两种不同给药
途径的吸收代谢情况。
1 　材料
111 　仪器 :Agilent 1100 液相色谱仪 ,DAD 紫外检
测器 (Agilent 科技有限公司) ; YXJ —2 台式高速离
心机 (金坛市金城国胜实验仪器厂) ;微量移液器
(北京青云卓立精密设备有限公司) ; H H —6 数显恒
温水浴锅 (江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司) 。
112 　药品与试剂 :瑞香素对照品 (中国药品生物制
品检定所 ,批号 0900220010 ,质量分数 9918 %) ;瑞
香素原料药 (长春迪瑞制药有限公司 , 批号
20051113) ;甲醇为色谱纯 ;水为二蒸水 ;其他试剂均
为分析纯。
113 　动物 :SD 大鼠 ,48 只 ,体质量 200～250 g ,雄
性 ,由南京中医药大学动物中心提供。
2 　方法
211 　色谱条件 :色谱柱为 Kromasil C18 (4. 6 mm ×
250 mm , 5μm) ;流动相 :甲醇2015 % 醋酸 (25 ∶
75) ;体积流量 :110 mL/ min ;检测波长 :327 nm ;柱
温 :30 ℃;进样量 :10μL 。
212 　溶液配制 :精密称取干燥至恒重的瑞香素对照
品适量 ,加甲醇溶解制成 928μg/ mL 的对照品溶
液 ,备用。精密称取干燥至恒重的瑞香素原料药适
量 ,按照不同的给药剂量和途径配制溶液 ,溶剂为丙
二醇2二甲基亚砜 (3 ∶1) ,备用。
213 　血浆样品的预处理 :取空白血浆 500μL 置有
肝素的离心管中 ,8 000 r/ min 离心 5 min ,取上清液
置另一离心管中 ,加入醋酸乙酯 600μL ,涡旋混合
1 min 至萃取完全 ,8 000 r/ min 离心 5 min ,取上清
液至离心管中 ,于 30 ℃水浴氮气吹干 ,残渣加入
015 mL 甲醇 ,涡旋 1 min ,8 000 r/ min 离心 5 min ,
离心后取上清液 10μL 注入高效液相色谱仪分析。
214 　标准曲线与线性范围 :取空白血浆 7 份 ,加入
928μg/ mL 瑞香素溶液配制成 921 8、4614、2312、
1116、518、219、1145μg/ mL 的溶液 ,液相色谱仪进
样 20μL 测定 ,以质量浓度 ( X) 为横坐标 ,峰面积
( Y) 为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程 : Y =
45. 82 X + 91750 9 , r = 01999 3 , 表明瑞香素在
1145～ 9218 μg/ mL 内与峰面积呈良好的线性
关系。
215 　精密度试验 :空白血浆中加入瑞香素配制质量
浓度为 2312μg/ mL 的瑞香素溶液 ,连续进样 5 次 ,
测定峰面积 ,其 RSD 为 0153 %。
216 　回收率试验 :空白血浆中加入瑞香素对照品配
制 1116、2312、4614 μg/ mL 3 个水平的瑞香素溶
液 ,分别进样测定峰面积 ,按 214 项下标准曲线方
程求得药物质量浓度 ,计算回收率分别为 9516 %、
·601· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008205209
基金项目 :教育部重点研究项目 (208051) ; 江苏省中医药局科研项目计划 ( HZ07069) ;
江苏省普通高校研究生科研创新计划项目 (2007238)
作者简介 :刘　嘉 (1983 —) ,男 ,江苏南京人 ,硕士研究生 ,主要从事中药新剂型、新技术以及生物药剂学研究。
Tel : 13770704461 　E2mail : liujia402 @163. com3 通讯作者　狄留庆　Tel : (025) 86798226 　E2mail : diliuqing @yahoo. com. cn
9619 %、9814 % ,RSD 为 0173 % ( n = 3) 。
217 　稳定性试验 :血浆样品处理后 ,将上清液于
- 10～ - 5 ℃密闭避光保存 ,15 d 内基本稳定 ;不避
光 ,室温 (20～25 ℃) 下密闭保存 ,12 h 内基本稳定。
218 　大鼠 ig 和 iv 瑞香素的药动学研究 :大鼠给药
前均禁食 12 h ,全程不禁水 ,给药前分别取 015 mL
空白血浆作同组对照。分别 ig 瑞香素溶液 250、
31215、375 mg/ kg ,以及 iv 瑞香素溶液 50、6215、75
mg/ kg ,每个剂量 8 只大鼠 ; ig 给药后 ,分别于 5、
10、15、20、30、45、60、90、120 min ,iv 给药后 ,分别于
2、5、10、15、20、30、45、60、90 min 眼眶取血 015
mL ,置于预先肝素化的试管中 ,8 000 r/ min 离心 5
min ,取上层血浆约 200μL ,按前述血浆样品的预处
理方法操作。
219 　数据处理 :数据经 DAS 110 药动学程序处理 ,
以 x ±s 表示。
3 　结果
311 　色谱行为 :在上述色谱条件下 ,将大鼠的空白
血浆与空白血浆中加入瑞香素及给药后大鼠血浆色
谱图进行比较 ,结果表明血浆中内源性物质不干扰
瑞香素的测定 ,且峰形良好。见图 1。
312 　药动学研究 :大鼠 ig 与 iv 给药后 ,不同时间
瑞香素的平均血药浓度2时间曲线见图 2 和 3。
　　用 DAS 110 药动学程序对血药浓度2时间数据
进行计算 ,根据 A IC ,拟合优度选择房室数 ,选择
A IC 最小者 ,拟合优度最小 R2 值最大者。判断大
鼠经 ig 瑞香素后为一室开放模型 ,iv 瑞香素后也为
一室开放模型。药动学参数见表 1。
图 1 　瑞香素的 HPLC 色谱图
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of daphentin
表 1 　大鼠不同给药后瑞香素的药动学参数 ( x ±s , n = 8)
Table 1 　Pharmacokinetic parameters of daphentin
by different administration2ways in rats
( x ±s , n = 8)
参　数　 iv ig
Ke/ h - 1 71 620 ±11433 61538 ±11 249
Ka/ h - 1 - 11682 ±01 330
t1/ 2 (a) / h - 01412 ±01 080
t1/ 2 (e) / h 01 091 ±01017 01106 ±01 020
tmax/ h 0 01213 ±01 045
Cmax/ (mg ·mL - 1) 01 144 ±01032 01097 ±01 022
AUC/ (mg ·h ·mL - 1) 01 252 ±01058 01204 ±01 049
4 　讨论
411 　流动相的选择 :由于生物样品中内源性物质较
多 ,流动相考察了不同比例的甲醇2015 % 醋酸。将
甲醇2015 % 醋酸比例调整为 75 ∶25 进行实验[1 ] ,
保留时间合适 ,且分离效果较好。最终选择该比例
为流动相。
412 　血浆样品处理方法的建立 :中药有效成分的量
通常较低 ,进入体内后浓度更低 ,血浆样品处理方法
稀释了样品浓度 ,给检测带来困难 ,因此考察不同的
血浆样品处理方法就显得极为重要。文献报道的血
浆样品处理方法有蛋白沉淀法、沸水浴法和固相萃
·701·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
取法。本实验采用了蛋白沉淀法[2 ] ,考察了醋酸乙
酯、氯仿、乙醚 3 种试剂处理血浆样品。计算用 3 种
不同试剂处理血浆样品的瑞香素提取率大小为醋酸
乙酯 > 乙醚 > 氯仿 ,而用乙醚处理的血浆杂峰较多 ,
故选用醋酸乙酯为萃取溶剂。
413 　药动学结果的探讨 :瑞香素 iv 给药后在大鼠
体内符合一室开放模型 ,而 ig 给药后在大鼠体内也
符合一室开放模型。
瑞香素 iv 后的 t1/ 2 (e) 为 01091 和 ig 后的 t1/ 2 (e)
为 01106 ,说明瑞香素属于快速消除药物 ,且两种给
药途径使瑞香素在大鼠体内的保留时间不同 ,ig 给
药比 iv 给药在体内停留时间长些。iv 给药曲线下
面积 (AUC) 为 01252 mg ·h/ mL ,ig 给药为 01204
mg ·h/ mL ,两者差异不大 ,但在给药剂量上 ,ig 给
药为 iv 给药剂量的数倍 ,提示瑞香素 iv 给药的药
物利用率大于 ig 给药。
由此可知 ,瑞香素在临床用药上需要采取相应
的制剂手段增加其在体内的保留时间 ,才可确保其
疗效。静注和口服给药各有优势。
参考文献 :
[ 1 ] 　钱桂英 , 单进军 , 狄留庆1 瑞香素大鼠在体肠吸收动力学研
究 [J ]1 南京中医药大学学报 , 2007 , 23 (3) : 17721781
[ 2 ] 　Tsai T H , Chou C J , Chen C F1 Pharmacokinetics of paeonol
after int ravenous administ ration in rat s [J ]1 J Pharm Sci ,
1994 , 83 (9) : 1307213091
珍珠菜提取物对肝癌抑制作用的研究
唐丽华1 ,王祎茜1 ,梁中琴2 ,游本刚1 ,杨世林1
①
(11 苏州大学医学部 药学院 ,江苏 苏州 　215123 ; 21 苏州大学医学部 基础医学与生物科学学院 ,江苏 苏州 　215123)
摘　要 :目的 　观察珍珠菜提取物 (ZE4) 对肝癌体内外的抑制作用。方法 　体外采用 M TT 法、3 H2TdR 掺入法、
集落形成实验观察 ZE4 对肝癌 SMMC27721 细胞的杀伤作用 ;采用划痕实验法与内皮细胞黏附实验观察 ZE4 对
SMMC27721 细胞迁移的抑制作用。体内以抑瘤率和脏器指数为指标观察 ZE4 对小鼠肝癌 H22 的作用。结果 　
ZE4 可抑制 SMMC27721 细胞的增殖和转移 ;体内实验显示 ZE4 可显著抑制小鼠肝癌 H22 的增殖 ,抑瘤率均在
30 % 以上 ,其中中剂量 (200 mg/ kg) 组的效果最好 ,可达到 5718 %。结论 　ZE4 对肝癌有很好的抑制作用。
关键词 :珍珠菜 ; 肝癌 ; 转移 ; 凋亡
中图分类号 :R286191 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0120108204
　　肝癌在我国癌症发病率中高居第 2 位 ,且在某
些地区呈逐年增高趋势。由于肝癌恶性程度高 ,病
情发展快 ,治疗难度大 ,成为严重威胁人类健康和生
命的“癌症之王”。虽然手术治疗是首选 ,但并不能
解决肿瘤的扩散与转移。所以药物治疗成为中、晚
期肝癌常用的治疗方法。中药因不良反应小 ,且有
去邪扶正之功效 ,更易被患者接受 ,因此从中草药中
寻找抗肿瘤药物已成为人们关注的焦点。
珍珠菜为报春花科植物虎尾珍珠菜 L ysi m a2
chi a clet hroi des Duby 的根或全草[ 1 ] ,具有清热解
毒、活血调经、利水消肿等功效 ;在民间广泛用于治
疗咽喉肿痛、虫蛇咬伤、跌打损伤、妇女月经不调等
症。珍珠菜的化学成分研究较多 ,而药理作用研究
却少见报道[2 ] 。早在 1977 年就有报道显示珍珠菜
总黄酮苷具有良好的抗肿瘤作用[3 ] ,但其后报道甚
少。本课题组通过对珍珠菜抗肿瘤有效部位的进一
步纯化 ,提高了提取物中总黄酮的量 ,观察了该提取
物 ( ZE4) 体外对人肝癌细胞 ( SMMC27721) 的作
用和体内对荷瘤 H22小鼠的抑瘤作用。
1 　材料与仪器
111 　药物 :珍珠菜采用醇提水沉法提取后 ,浓缩至
一定浓度 ,经大孔吸附树脂分离纯化 ,经体外筛选得
到活 性 部 位 ( ZE4 ) , 其 中 总 黄 酮 质 量 分 数
为 33135 %。
112 　试剂和仪器 :培养基 RPMI 1640 培养基 , Gib2
co 产品 ;超级新生小牛血清 ( FBS) ,杭州四季青生
物工程材料研究所生产 ;胰酶、四氮唑蓝 (M T T) 为
AMRESO 分装 ;氟尿嘧啶注射液 (52FU ,南通精华
制药有限公司 ,批号 051002) ;注射用盐酸柔比星
(DSR ,深圳万乐有限公司 ,批号 0505 E1) ; 3 H2TdR
·801· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008205210
基金项目 :江苏省苏州市社会发展基金资助项目 ( ZS0307) ; 苏州大学医学发展基金项目 ( EE132609)
作者简介 :唐丽华 (1952 —) ,女 ,副教授 ,硕士生导师 ,研究方向为中药药理、中药新制剂及新剂型研究。
Tel : (0512) 65880029 　E2mail : tanglihua @suda. edu. cn.