全 文 ：高于千万分之三 ,Cu 不得高于百万分之二十) 为参
考 ,按此要求 ,本实验测定的 20 个样品中 , Pb 的合
格率为 85 % ,Cd 的合格率为 55 % ,Cu 的合格率为
100 % ,在雅安石棉、康定折多山、阿坝卧龙、西昌会
东、雅安宝兴、雅安汉源生长的重楼重金属及有害元
素的量在限定范围内 ,因此在这些地区建设重楼药
材的驯化栽培基地有利于其药材的质量控制。
参考文献 :
[ 1 ] 　李　恒1 重楼属植物 [ M ]1 北京 : 科学出版社 , 19981 [ 2 ] 　边洪荣 , 李小娜 , 王会敏1 重楼的研究及应用进展 [J ]1 中药材 , 2002 , 25 (3) : 21822201[ 3 ] 　Robert E B , Henry K J H , James F S1 Newer aspect s of t heroles of Zn , Mn , Cu in human nut rition [J ]1 Clin Chem ,1975 , 21 (4) : 50125201[ 4 ] 　祁俊生 , 徐辉碧 , 周井炎 , 等1 植物类中药中微量元素的因子分析和聚类分析 [J ]1 分析化学 , 1998 , 26 ( 11) : 1309213141[ 5 ] 　袁　晓 , 袁　萍 , 严海燕 , 等1 野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析 [J ]1 武汉植物学研究 , 2004 , 22 ( 6) :57525771
猪苓药材的质量评价标准研究
王 　弘1 ,晁建平2 ,陈文举1 ,杨 　玥1 ,陈世忠1 3
(11 北京大学药学院 ,北京 　100191 ;21 北京石油化工学院 ,北京 　102617)
摘　要 :目的 　进行猪苓质量标准研究 ,解决猪苓药材评价标准不规范、质量差异大、栽培猪苓得不到合理应用和
野生资源濒危问题。方法 　采用高效液相色谱法进行麦角甾醇、麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮定量测定 ,结合多
糖的紫外分光光度法的测定 ,建立以猪苓 3 种化学成分为指标的质量评价标准。结果 　采用猪苓 3 种化学成分为
指标的质量评价方法 ,考察了不同地区猪苓商品药材、栽培和野生猪苓的质量 ,提出了猪苓资源合理应用的建议。
结论 　采用麦角甾醇、麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮和多糖 3 种成分为指标的质量评价方法 ,可以系统、全面地
对不同来源的猪苓进行质量控制 ,为规范猪苓药材质量评价标准 ,提高栽培猪苓药材质量 ,保护野生资源提供科学
方法。
关键词 :猪苓 ;麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮 ;麦角甾醇 ;多糖
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0320971204
　　猪苓为多孔菌科真菌猪苓 Pol y porus umbel2
l at us ( Pers1 ) Fries 的干燥菌核。性味甘、淡、平 ,具
有利水渗湿功效。主产于陕西、河北、四川、云南 ,生
长环境独特[1 ] 。近年来随着其药用价值不断被人们
认识 ,需求量日益提高 ,过度采挖导致了野生猪苓资
源濒临枯竭[ 2 ] 。目前人工半野生栽培技术已获成
功 ,但栽培猪苓质量未被确定 ,商品药材主要来源于
野生猪苓。《中国药典》2005 年版猪苓项下仅有显
微鉴别和试管试验两项 ,无定量测定内容[3 ] ,各地商
品药材质量评价标准不规范 ,造成了猪苓药材质量
不稳定。有报道以猪苓多糖的量为质量控制标
准[4 ] ,也有报道用凯氏定氮法测定猪苓粗蛋白和氨
基酸的量[5 ] 。但猪苓作为传统的利尿药 ,这些成分
不能全面反映其内在质量。因此 ,为合理应用资源 ,
提高猪苓药材质量 ,保护野生猪苓资源 ,建立科学、
可行的猪苓质量评价体系是急需解决的问题。
麦角甾醇是真菌类植物广泛含有的成分 ,在猪苓
中的量较高 ;麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮具有抗
肿瘤、利尿、抗氧化等作用 ,是猪苓药材中的有效成
分[6 ] 。本实验结合猪苓多糖的紫外分光光度法的测
定 ,通过麦角甾醇、麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮
HPLC定量测定方法的研究 ,建立了以猪苓 3 种化学
方法为指标的质量评价方法。并首次采用该方法考
察了全国不同地区商品猪苓药材、野生和栽培猪苓的
麦角甾醇、麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮和多糖 3
种成分的量 ,进行了质量分析评价 ,提出了猪苓资源
合理应用的建议。该方法可系统、全面地对不同来源
的猪苓药材进行质量评价 ,并为修订《中国药典》规范
猪苓药材质量标准提供了科学参考。
1 　仪器与试药
岛津 L C —10A TV P 高效液相色谱系统 ;L C —
10A TV P 泵 , SPD —M10AV 型二极管阵列紫外可
见检测器 ; CL ASS —V P510 色谱工作站 ;紫外光谱
仪 :Varian Cary —300 型。
·179·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2009204210　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　3 通讯作者　陈世忠　Tel : (010) 82802723 　E2mail :hw9505 @bjmu. edu. cn
麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮、麦角甾醇对
照品由本实验室制备 ,质量分数 > 98 % ; D2无水葡
萄糖对照品购于中国药品生物制品检定所。甲醇为
色谱纯 ,其余为分析纯试剂 ,北京化学试剂厂产品 ;
超纯水由北京大学医学部分析中心提供。
猪苓试验样品 :猪苓商品药材为从全国不同地
区收集的商品药材饮片 ;野生猪苓为湖北神农架和
陕西秦岭太白山采集 ;栽培猪苓为陕西省留坝县猪
苓栽培基地栽培的三年生、四年生猪苓。以上猪苓
试验样品经北京大学药学院陈世忠博士鉴定。试验
样品处理为 60 ℃烘干后 ,粉碎过 40 目筛。
2 　方法与结果
211 　麦角甾醇的 HPL C 测定
21111 　色谱条件 :色谱柱为 Alltima2C18 (250 mm ×
416 mm ,5μm) ;流动相为甲醇2水 (96 ∶4) ;检测波
长 281 nm ;体积流量 110 mL/ min ;柱温 :室温。色
谱图见图 1。
图 1 　麦角甾醇对照品( A)和供试品( B)的 HPLC色谱图
Fig11 　HPLC Chromatogram of ergosterol reference
substance ( A) and sample ( B)
21112 　对照品溶液制备 :取麦角甾醇对照品 1215
mg ,精密称定 ,置 25 mL 量瓶中用无水乙醇溶解并
定容 (含麦角甾醇 015 mg/ mL) 。
21113 　供试品溶液制备 :取猪苓药材样品 110 g ,精
密称定 ,置于 50 mL 具塞三角瓶中 ,加入无水乙醇
20 mL ,称质量 ,超声 60 min ,放至室温 ,加溶剂补足
质量 ,混匀 ,滤过 ,量取续滤液 8 mL ,蒸干 ,残渣用无
水乙醇溶解 ,于 2 mL 量瓶中定容 ,用 0145μm 微孔
滤膜滤过 ,取续滤液备用。
21114 　标准曲线和线性范围 :精密吸取麦角甾醇对
照品溶液 410、810、1210、1610、2010μL 注入高效液
相色谱仪 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,以麦角甾醇
量为纵坐标 ,峰面积积分值为横坐标 ,绘制标准曲线 ,
得回归方程 Y = 71227 6 e - 07 X + 21452 l e - 02 , r =
01999 9。表明麦角甾醇在 210～1010μg 与峰面积
呈良好线性关系。
21115 　精密度试验 :精密吸取麦角甾醇对照品溶液
15μL ,重复进样 6 次 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,
计算 RSD 为 0168 % ,说明精密度良好。
21116 　稳定性试验 : 取猪苓药材样品 110 g ,按
21113 项下方法制备供试品溶液 ,分别于 0、2、4、6、8
h 精密吸取 15μL 进样 ,按上述色谱条件测定峰面
积 ,计算 RSD 为 1178 % ,说明供试品溶液中麦角甾
醇在 8 h 内稳定性良好。
21117 　重现性试验 :取猪苓药材样品 110 g 共 6
份 ,精密称定 ,按 21113 项下方法制备供试品溶液 ,
各精密吸取 15μL 进样 ,按上述色谱条件测定峰面
积 ,计算其质量分数的 RSD 为 1136 % ,说明重现性
良好。
21118 　回收率测定 :取 6 份已测定的猪苓药材样品
各 015 g ,精密称定 ,分别精密添加 018、110、112 倍
量麦角甾醇对照品 ,按 21113 项下方法制备供试品
溶液 ,进样 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,根据回归
方程计算出麦角甾的量 , 结果平均回收率为
97118 % ,RSD 为 1142 %。
21119 　样品测定 :取不同来源猪苓样品各 110 g ,精
密称定 ,制备供试品溶液 ,各精密吸取 15μL 进样 ,
按上述色谱条件测定峰面积。并计算出各猪苓样品
的麦角甾醇的量。结果见表 1～3。
212 　麦角甾24 , 6 , 8 ( 14) , 222四烯232酮的 HPL C
测定
21211 　色谱条件 :色谱柱为 Alltima2C18 (250 mm ×
416 mm ,5μm) ;流动相为甲醇2水 (96 ∶4) ;检测波
长 343 nm ;体积流量 110 mL/ min ;柱温 :室温。色
谱图见图 2。
图 2 　麦角甾24 ,6 ,8( 14) ,222四烯232酮对照品( A)
和供试品溶液( B)的 HPLC色谱图
Fig12 　HPLC Chromatogram of ergosta24 , 6 , 8 ( 14) ,
222tetraen232one reference substance ( A)
and sample ( B)
21212 　对照品溶液制备 :取麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222
四烯232酮对照品 510 mg ,精密称定 ,置 25 mL 量瓶
中 ,用无水乙醇溶解并定容 ,精密吸取 1 mL 量 25
mL 量瓶中 ,用无水乙醇溶解并定容[含麦角甾24 ,6 ,
8 (14) ,222四烯232酮 01008 mg/ mL ]。
21213 　供试品溶液制备 :取猪苓药材样品 110 g ,精
密称定 ,置于 50 mL 具塞三角瓶中 ,加入无水乙醇
·279· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
20 mL ,称质量 ,超声 60 min ,放至室温 ,加溶剂补足
质量 ,混匀 ,滤过 ,精密量取续滤液 8 mL ,蒸干 ,残渣
用无水乙醇溶解 ,定量转移至 2 mL 量瓶中 ,用 0145
μm 微孔滤膜滤过 ,取续滤液备用。
21214 　标准曲线和线性范围 :精密吸取麦角甾24 ,
6 ,8 (14) ,222四烯232酮对照品溶液 410、810、1210、
1610、2010μL 注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条
件测定峰面积 ,以麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮
量为纵坐标 ,以峰面积积分值为横坐标 ,绘制标准曲
线 ,得回归方程 Y = 21208 7 e - 07 X + 31610 5
e - 04 , r = 01999 8 ,结果表明麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222
四烯232酮在 01032～01160μg 与峰面积值呈良好线
性关系。
21215 　精密度试验 :精密吸取麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,
222四烯232酮对照品溶液 15μL ,重复进样 6 次 ,按
上述色谱条件测定峰面积 ,计算 RSD 为 0127 % ,说
明精密度良好。
21216 　稳定性试验 :取猪苓药材样品 110 g ,按 21213
项下方法制备供试品溶液 ,分别于 0、2、4、6、8、10 h 精
密吸取 15μL 进样 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,计
算 RSD 为 1169 % ,说明供试品溶液中麦角甾24 ,6 ,8
(14) ,222四烯232酮在 10 h 内稳定性良好。
21217 　重现性试验 :取猪苓药材样品 110 g 共 6
份 ,精密称定 ,分别按 21213 项下方法制备供试品溶
液 ,各精密吸取 15μL 进样 ,按上述色谱条件测定峰
面积 ,计算其质量分数的 RSD 为 1135 % ,说明重现
性良好。
21218 　回收率试验 :取 6 份已测定的猪苓药材各
015 g ,精密称定 ,分别精密添加 018、110、112 倍量
麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮对照品 ,按 21213
项下方法制备供试品溶液 ,进样 ,按上述色谱条件测
定峰面积 ,根据回归方程计算出麦角甾醇的量 ,计算
回收率 , 结果平均回收率为 97189 % , RSD =
1174 %。
21219 　样品测定 :取不同来源猪苓样品各 110 g ,精
密称定 ,制备供试品溶液 ,各精密吸取 15μL 进样 ,
按上述色谱条件测定峰面积。精密吸取麦角甾24 ,
6 ,8 (14) ,222四烯232酮对照品溶液 410、810、1210、
1610、2010μL ,注入高效液相色谱仪中 ,按上述色谱
条件测定峰面积 ,并计算出各猪苓药材样品的麦角
甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮的量 ,结果见表 1～3。
213 　猪苓多糖的定量测定[4 ,7 ]
21311 　测定条件 :显色剂 ;蒽酮 20 mg ,加入 10 mL
水 ,再缓缓加入浓硫酸 30 mL ,搅拌使溶解 ;仪器 :
721 分光光度计 ;最大吸收波长 :630 nm。
21312 　对照品溶液制备和标准曲线的绘制 :取 D2
无水葡萄对照品 510 mg ,精密称定 ,置 25 mL 量瓶
中 ,加水溶解并定容 ,精密吸取 110、210、310、410、
510 mL ,置 10 mL 量瓶中定容 ,精密吸取 1 mL 于
试管中 ,于冰水浴中加入蒽酮显色剂 4 mL ,置沸水
浴中加热 10 min ,再置冷水浴降至室温 ,于分光光
度计 630 nm 波长下测定吸光度。以质量分数为纵
坐标 ,吸光度值为横坐标 ,绘制标准曲线 ,计算回归
方程 : Y = 31472 8 e - 02 X - 01001 776 , r =
01999 7。
21313 　供试品溶液制备方法 :取猪苓样品 110 g ,精
密称定 ,加水 50 mL ,称质量 ,热提 1 h ,补足损失质
量 ,混匀 ,滤过 ,取续滤液 20 mL ,减压浓缩至 5 mL ,
用乙醇调含醇量至 80 % ,摇匀 ,静置 30 min 后离心 ,
沉淀用 80 %乙醇洗涤 3 次。沉淀物用水溶解 ,定量转
移至 25 mL 量瓶中 ,加水至刻度混匀备用。
21314 　样品测定 :取不同来源猪苓样品 110 g ,精密
称定 ,制备供试品溶液 ,各精密吸取 1 mL 置试管
中 ,于冰水浴中加入蒽酮显色剂 4 mL ,置沸水浴中
加热 10 min ,再置水浴降至室温 ,于 721 分光光度
计 630 nm 波长处测定吸光度 ,根据回归方程计算
出各猪苓样品中多糖的量 ,结果见表 1～3。
表 1 　不同产地猪苓商品药材的 3 种成分的量( n = 3)
Table 1 　Determination of three components in P1 umbellatus
from of different regions ( n = 3)
产 　地
麦角甾醇
/ (mg ·g - 1 )
麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222
四烯232酮/ (mg ·g - 1 ) 多糖/(mg ·g - 1 )
河北安国市购 　　　 01963 01 023 111 837
北京市购 　　　　　 01721 01 017 41 110
辽宁丹东市购 　　　 01871 01 107 21 992
新疆乌鲁木齐市购 　 01517 01 021 31 150
西藏拉萨市购 　　　 01481 01 020 61 096
陕西西安市购 　　　 01439 01 012 31 263
陕西西安市购 　　　 01769 01 017 51 249
陕西西安市购 　　　 01507 01 023 31 133
陕西汉中市购 　　　 01459 01 031 41 008
山西亳州购 　　　　 01503 01 011 31 101
山西灵丘购 　　　　 01500 01 014 31 795
山西陵川购 　　　　 01657 01 011 51 597
山西万荣购 　　　　 01742 01 012 41 989
山西永济购 　　　　 01625 01 039 31 046
河南郑州市购 　　　 01576 01 009 31 448
山东济南市购 　　　 01587 01 027 31 828
四川汝州中医院购 　 01539 01 009 61 118
云南陆良人民医院购 01655 01 007 31 187
浙江无锡市购 　　　 01337 01 012 21 762
广西桂林市购 　　　 01091 01 005 121 034
广西南宁市购 　　　 01449 01 011 71 040
广东深圳市购 　　　 01272 01 071 41 935
海南三亚市购 　　　 01138 01 006 111 707
·379·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
表 2 　野生猪苓的 3 种成分的量( n = 3)
Table 2 　Determination of three componentsin wild
P. umbellatus ( n = 3)
产 　地
麦角甾醇
/ (mg ·g - 1 )
麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222
四烯232酮/ (mg ·g - 1 ) 多糖/(mg ·g - 1 )
湖北神农架 01703 01 021 41 739
陕西太白山 01461 01 024 31 965
表 3 　栽培猪苓不同生长年限的 3 种成分的量( n = 3)
Table 3 　Determination of three components in cultivation
P. umbellatus in different growth years ( n = 3)
年 　限
麦角甾醇
/ (mg ·g - 1 )
麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222
四烯232酮/ (mg ·g - 1 ) 多糖/(mg ·g - 1 )
三年生 01708 01 021 41 750
四年生 01589 01 019 41 338
3 　结论
311 　本实验 HPL C 定量测定的方法学研究过程中
分别使用了甲醇20150 % H3 PO4 水溶液 (92 ∶8) 、甲
醇2水溶液 (96 ∶4) 、乙腈2水 (60 ∶40) 等条件进行色
谱分离试验 ,经综合考虑试验结果 ,选择的流动相为
甲醇2水溶液 (96 ∶4) 。其中麦角甾24 ,6 ,8 (14) ,222
四烯232酮在 343 nm 检测波长下与其他组分能达到
基线分离 ;麦角甾醇在 281 nm 检测波长下与其他
组分能达到基线分离。同时对猪苓有效成分不同提
取方法进行了对比试验 ,结果表明用 20 倍量无水乙
醇超声 60 min 的提取方法效果最好。在建立的灵
敏、可靠的 H PL C 定量测定方法的基础上 ,结合多
糖的紫外分光光度法的测定 ,制定了猪苓麦角甾24 ,
6 ,8 (14) ,222四烯232酮、麦角甾醇和多糖 3 种化学成
分为指标的质量评价方法。本方法可系统、全面地
对不同来源的猪苓药材进行质量评价 ,并为规范猪
苓药材标准提供了科学依据。
312 　首次采用 3 种成分为指标的方法考察了不同
地区猪苓商品药材、野生和栽培品的麦角甾醇、麦角
甾24 ,6 ,8 (14) ,222四烯232酮和多糖的量。其中麦角
甾醇最低量为 01091 mg/ g ,最高量为 01963 mg/ g ;
麦角甾24 , 6 , 8 ( 14) , 222四烯232酮最低量为 01005
mg/ g ,最高为 01107 mg/ g ;多糖量最低为 21992
mg/ g ,最高为 121034 mg/ g ;部分药材多糖量高达
111707、121034 mg/ g ,而另两种成分的量却很低。
以上结果表明 ,不同地区猪苓商品药材 3 种成分的
量差异很大 ,反映了猪苓药材存在的质量问题。因
此应及时采用科学的质量评价方法 ,制定出猪苓各
成分量限度标准 ,进行质量控制。本方法的应用和
实施可解决目前猪苓药材市场质量控制标准不规
范、质量差异大的问题 ;另外建议对于多糖量高而另
两种成分量很低的猪苓药材可作为提取猪苓多糖的
原料使用 ,由此可使猪苓资源合理应用。
313 　研究表明 ,野生、栽培猪苓的 3 种成分的量与
不同地区猪苓商品药材 3 种成分的量平均值相近
似 ,但由于试验样品来源数量有限 ,缺乏一定的代表
性 ,还需充分收集试验样品和进一步研究。
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柱前衍生化 RP2HPLC法测定地黄中葡萄糖、半乳糖和蜜二糖
刘有平 ,张佳蕊 ,邵 　华 ,李小童 ,刘永利 ,邸 　欣 3
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 　110016)
摘 　要 :目的 　建立同时测定地黄中葡萄糖、半乳糖和蜜二糖的 RP2HPLC 方法 ,为地黄药材的质量控制提供新的
依据。方法 　地黄药材以水超声提取 ,再用 12苯基232甲基252吡唑啉酮 ( PMP)衍生化后 ,采用 Diamonsil C18柱 (150
mm ×416 mm ,5μm)分离 ,流动相为乙腈和 100 mmol/ L 醋酸铵水溶液 (p H 515)进行梯度洗脱 ,体积流量 110 mL/
min ,检测波长为 245 nm ,柱温为 2315 ℃,以内标法定量。结果 　葡萄糖、半乳糖和蜜二糖分别在 90～900μg/ mL
·479· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2008208225　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (20445003)
作者简介 :刘有平 (1970 —) ,男 ,山西长治人 ,博士 ,研究方向为药物代谢与药物动力学研究。　
Tel : (024) 23986342 　E2mail :yp2iu @1631com3 通讯作者　邸　欣　E2mail :dixin63 @hot mail1com