全 文 ：·1576· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年lo月
HPLC法测定金银花中常春藤皂苷元、齐墩果酸、
槲皮素、木犀草苷和绿原酸
张 雪1’2，何丙辉¨，杨 宪1’2，李隆云3
(1．西南大学，重庆400716}2．重庆赛诺生物药业股份有限公司，重庆400041；
3．重庆市中药研究院，重庆400065)
擅要：目的用反相高效液相色谱法，同时测定重庆武陵山区金银花药材5种成分的量。方法采用SHlMADZU
C18(250mm×4．6mm，5弘m)色谱柱，以乙腈一0．4％磷酸水溶液为流动相，检测波长为210和350nm，进行梯度洗
脱。结果上述5种成分分离效果较好。结论本法简单，准确．快速，可同时测定金银花药材中5种成分的量。
关键词：金银花lHPLC，常春藤皂苷元；齐墩果酸}槲皮素I木犀草苷；绿原酸
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)10—1576—02
金银花LonicerajaponicaThunb．为忍冬属
(LoniceraL．)缠绕亚组的忍冬干燥花蕾或初开的
花，重庆地区主要集中在梁平、秀山等地[1]。药理研
究表明，金银花具有抗病毒、解热、抗炎、保肝、止血、
抗氧化、抗生育、降血脂作用[2]。其化学成分有黄酮
类如槲皮素和木犀草苷[3]，有机酸类如绿原酸[‘]，三
萜皂苷类如常春藤皂苷元和齐墩果酸等成分，这5
种成分都是解热抗炎作用的活性成分[5]。故本实验
采用高效液相紫外检测法，建立了同时测定金银花
中常春藤皂苷元、齐墩果酸、槲皮紊、木犀草苷和绿
原酸5种成分的方法，为制定金银花药材的质量标
准和开发更多的活性成分提供了科学依据。
1材料
1．1 仪器与试剂：岛津2010系统高效液相色谱仪，
含四元梯度泵、自动进样器以及Labsolution色谱工
作站，二极管阵列检测器。甲醇、乙腈为色谱纯
(Tedia公司，美国)，水为纯化水。常春藤皂苷元、齐
墩果酸、槲皮素、木犀草苷和绿原酸对照品均购自中
国药品生物制品检定所。
1．2采样：样品于2007年8月中旬采集于重庆武陵
山区，在12个基地的每一个地方，分别随机采集5年
生金银花干燥花蕾或初开的花。由重庆市中药研究
院生药教研室李隆云研究员鉴定。采集好的样品及
时置于干燥、通风、无阳光照晒处阴干。
2方法与结果
2．1色谱条件：日本岛津C18(250mm×4．6mm，5
gm)色谱柱；梯度洗脱，流动相A乙腈一水(85。15)，
B为乙腈一0．4％磷酸溶液(13l 87)，梯度洗脱程序：
从0～13min，A100％；13～15min，B0～100％，
15～30min，B100％；30～60min，A50％。体积流
量为1．0mL／min；检测波长：0---13min为210am，
30～60min为350nm。柱温30℃；进样量10弘L。
2．2供试品溶液的制备：取金银花药材，干燥，研细
(过四号筛)，精密称取约0．5g，置圆底烧瓶中，精密
加入1mol／L硫酸溶液25mL，再加入甲醇25mL，
称定质量，加热回流2h后，放冷，用甲醇补足损失
的质量，摇匀，用微孔滤膜滤过，弃去初滤液，精密量
取续滤液5mL，置50mL量瓶中，用50％甲醇稀释
至刻度，摇匀，即得。
2．3 对照品溶液的制备：精密称取上述各对照品适量，
加50％甲醇溶解制成常春藤皂苷元、齐墩果酸约0．51
mg／mL，槲皮素为0．021mg／mL，木犀草苷为0．022
mg／mL，绿原酸为0．024mg／mL的各对照溶液。
2．4方法的专属性：在拟定的色谱条件下，分别取
对照品溶液和供试品溶液进样测定，得到特征峰，与
杂质分离良好，无干扰，见图1。
2．5标准曲线制备：分别精密吸取上述各对照品溶
液，按上述色谱条件测定，分别进样2、4、6、8、10pL，
以峰面积(y)为横坐标，进样量(X)为纵坐标制工作
曲线，结果见表1。
2．6精密度试验：精密量取各对照品溶液，连续测量
6次，测得上述5种成分峰面积值，结果表明，以峰面
积计算常春藤皂苷元RSD为0．97％，齐墩果酸RSD
为1．58％，槲皮素RSD为1．02％，木犀草苷RSD为
0．86％，绿原酸RSD为0．58％，表明精密度良好。
2．7稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0、2、
收稿日期：2007．12-03
基金项目：科技部支撑计划项目(2006BAl06A12—14)
作者简介：张雪(198l一)，女．研究生，从事中药质量分析研究。
-通讯作者何丙辉Tell(023)6825124913752836711E．mailIzhangxue0012003@183．com

万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月· 577·
1一常春藤皂苷元2一齐墩果酸3一槲皮素
4一木犀草苷5一绿原酸
1-hederagenin2一ohanolicacid3-quercefin
4-luteo|in一7一O-glucoside5-chlorogenicacid
圈1 5种成分对照晶(A)和粱平产金银花药材
样品(B)色谱圈
Fig．1Chromatogramsoffivemixedreference
SUIbstances(A)andsamplesofFlos
LoniceraeJaponicae(B)
衰l 回归方程、相关系数和线性范圈
Table1 Regressionequation，correlationcoeffic ent，
andmeassurerange
4、8、12、24h进样，测得上述5种成分峰面积值，结
果表明，以峰面积计算常春藤皂苷元RSD为
1．55％，齐墩果酸RSD为1．38％，槲皮素RSD为
1．43％，木犀草苷RSD为1．36％，绿原酸RSD为
1．45％，结果表明，供试品溶液在24h内稳定。
2．8重现性试验：精密称取同批金银花药材6份，每
份约0．5g，按“供试品溶液制备”项下操作，进样。测
定并计算5种成分的质量分数，春藤皂苷元RSD为
1．37％，齐墩果酸RSD为0．89％，槲皮素为1．47％，
木犀草苷RSD为0．72％和绿原酸RSD为1．23％。
2．9回收率试验：采用加样回收法。取已知质量分
数的同批样品6份，每份约0．25g，精密称定，按拟定
的定量方法试验，精密加入各对照品溶液适量，按
“供试品溶液制备”项下操作，测定并计算各成分的
回收率，结果5种成分平均回收率分别为98．18％、
99．24％、99．01％、99．25oA、100．08％，RSD分别为
2．1％、1．8％、0．73％、1．15％、0．99％。
2．10样品测定：取所收集的12批重庆地区不同产
地的金银花药材，按“供试品溶液”制备项下操作，进
样，测得上述5种成分的质量分数，结果见表2。
3讨论
绿原酸的50％甲醇溶液应避光阴凉处保存，否
则峰面积会有所改变而影响测定的准确性。从测定
哀2金银花药材中常春藤皂苷元、齐墩果酸、槲皮素、
木犀草苷和绿原酸的测定结果(开=3)
Table2 Contentsofhederagenin，oleanollc
acid，quercetin，luteolin一7-0一gluco—
side，andchlorogenicacidinF／os
LoniceraeJaponicae佃=3)
产地常春藤皂苷元／OA齐墩果酸／％*皮索／％木犀草苷／％绿原酸／％
酉阳0．42 0．12 0．63 0．17 2．05
石柱0．45 0．16 0．16 0．078 1．84
云阳0．49 0．17 0．21 0．19 I．92
巫山0．59 0．25 0．34 0．16 1．87
黔江0．74 0．28 0．18 0．20 1．94
秀山0．81 0．20 0．21 0．19 2．Z6
南川0．35 0．24 0．22 0．16 2．03
涪陵0．78 0．25 0．23 未检出 2．16
丰都0．79 0．23 0．35 0．24 I．64
彭水0．65 0．28 0．46 0．30 2．19
奉节0．66 0．26 0．37 0．67 1．54
结果来看(表2)，不同产地的金银花样品中常春藤皂
苷元、木犀草苷量差别较大。
三萜皂苷类成分是金银花的另一类有效成分。
为了全面评价药材的质量，有必要同时对金银花药
材中的三萜皂苷类成分进行定量分析。本实验建立
了先采用硫酸水解金银花药材中的三萜皂苷类成
分，这样就能用高效液相色谱法测定金银花药材中
的常春藤皂苷元和齐墩果酸量。
通过对样品在190--400nm的三维色谱图和各
对照品的最大吸收波长的测定，以50％甲醇为溶剂，
结果槲皮素最大吸收波长在360am处；木犀草苷最
大吸收波长在350nm处；绿原酸最大吸收波长在
327nm处；齐墩果酸和常春藤皂苷元最大吸收波长
在210nm处；对4个波长下的色谱图进行比较，发
现选用210、350nm两种检测波长时．基线较稳，且
能最大限度地显示出药材中所含的样品信息，故选
用210、350nm两波长作为测定波长。
实验中考察了不同系统的流动相，包括甲醇一水
(含0．2mol／L的冰醋酸水溶液)、乙腈一水(含0．4％
的磷酸水溶液)、甲醇一乙腈一水系统。结果表明以乙
腈一水(含0．4％的磷酸水溶液)效果为最好，各类药
主要成分在60rain内洗脱，且得到良好的分离。
参考文献：
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中常春藤皂苷元及卉墩果酸的含量D]．药物分析杂志，

万方数据
HPLC法测定金银花中常春藤皂苷元、齐墩果酸、槲皮素、木
犀草苷和绿原酸
作者： 张雪， 何丙辉， 杨宪， 李隆云
作者单位： 张雪,杨宪(西南大学,重庆,400716;重庆赛诺生物药业股份有限公司,重庆,400041)， 何丙
辉(西南大学,重庆,400716)， 李隆云(重庆市中药研究院,重庆,400065)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(10)
被引用次数： 8次

参考文献(5条)
1.苟占平;万德光 四川忍冬属药用植物资源调查[期刊论文]-华西药学杂志 2005(06)
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4.刘恩荔;李青山 大孔吸附树脂分离纯化金银花中总有机酸的研究[期刊论文]-中草药 2006(12)
5.马双成;刘燕;毕培曦 RP-HPLC法测定金银花药材中常春藤皂苷元及齐墩果酸的含量[期刊论文]-药物分析杂志
2006(07)

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3. 姬铁强 金银花木犀草苷提取工艺研究[期刊论文]-齐齐哈尔大学学报（自然科学版）2009,25(4)
4. 李萍.金红星.贾静 HPLC法同时测定金银花中三种成分的含量[期刊论文]-天津医药2009,37(6)
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6. 郝凤霞.郝洪涛.杨敏丽 RP-HPLC法同时测定金银花中绿原酸·芦丁·木犀草素的含量[期刊论文]-安徽农业科学
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7.任爱农.顾学红.王大为 清气凉营注射液中15个成分的HPLC/ESI/MS分析研究[期刊论文]-中成药 2011(3)
8.李建军.李军芳.贾国伦 金银花研究进展概述[期刊论文]-生物学教学 2012(6)


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