全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·853·
夏枯草一泊洛沙姆温敏凝胶中多糖的测定
姜玲海1，冯怡p，沈岚1，徐德生2
(1．上海中医药大学，上海201203；2．上海中医药大学附属曙光医院，上海200021)
摘要：目的研究去除泊洛沙姆对温敏凝胶中多糖测定干扰的方法．并建立制剂中多糖的测定方法。方法采用
凝胶冷冻干燥，醋酸乙酯萃取的前处理方法，并以比色法检测制剂中多糖。结果凝胶经醋酸乙酯萃取后可完全去
除基质的干扰，多糖保留率为100．11％(以=3)，比色法检测制剂中多糖的量，平均加样回收率为102．57％(n一9)。
结论该前处理方法简便，可操作性强，基质干扰去除完全，多糖保留率高，含量测定方法稳定、重现性较好。
关键词：夏枯草温敏凝胶；泊洛沙姆；多糖 ·
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06—0853—03
夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunellavu graris
L．的干燥果穗，有清火，明目，散结，消肿的功效n]。
文献及前期研究表明夏枯草中所含多糖具抗病毒及
提高免疫等作用[23。在分离纯化得到夏枯草多糖抗
病毒有效部位的基础上，本课题组以泊洛沙姆为基
质制备了夏枯草多糖温敏凝胶，但在制剂质量标准
研究中发现，泊洛沙姆对多糖的测定造成严重干扰，
因此寻找一种理想的前处理方法既可去除基质的干
扰又可减少多糖的损失显得尤为重要。因此本实验
通过采用凝胶冷冻干燥后醋酸乙酯萃取处理，很好
地控制了基质干扰，建立了简便、稳定、操作性强的
温敏凝胶中多糖的测定方法，为以泊洛沙姆为主要
基质的含多糖制剂中多糖的测定提供参考。
1试剂与仪器
HP8453可见紫外分光光度计(美国Agilent公
司)；ALPHAl—4冷冻干燥仪(MarenChrist)；
LXJ—IIB低速大容量多管离心机(上海安亭科学仪
器厂)；泊洛沙姆407(Poloxamer407，Pluronic@
F127，F127，德国BASF，简称P407)；泊洛沙姆188
(Poloxamer188，Pluronic@F68，F68，德国BASF，
简称P188)；试剂均为分析纯；夏枯草多糖(自制，质量
分数为50％～60％)；夏枯草多糖温敏凝胶(自制)。
2方法与结果
2．1检测波长的确定：取无水葡萄糖对照品适量，
精密称定，加蒸馏水制成2．10mg／mL无水葡萄糖
的溶液，摇匀，即得母液。取夏枯草多糖冷冻干燥品
适量，精密称定，置10mL量瓶中，加蒸馏水使溶解
并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2．0mL，置5mL量
瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得0．4mg／mL
夏枯草多糖供试品溶液。精密吸取对照品、供试品溶
液各0．2mL，分别于冰浴中加入5％苯酚0．8mL，
涡旋混匀，再加浓硫酸4．0mL，加塞，涡旋混匀，于
沸水浴中加热10min，取出，于冰水浴中冷却，放至
室温。以溶剂为空白，于400～800nm全波长扫描，
结果见图1。无水葡萄糖对照品、夏枯草多糖在483
nm处均有最大吸收。故选择483am作为多糖的检
测波长。
0．8
0．6
、0．4
0．2
0
400 440 480 520 560 600
Mnm
图1 夏枯草多糖和无水葡萄糖的全波长扫描图谱
Fig．1Scanningpatternoffullwavelengthforpolysac-
charidesinP．vulgarisndanhydrousdextrose
2．2 标准曲线的制备：分别自母液中精密吸取
0．05、0．15、0．25、0．50、1．0mL，置5mL量瓶中，加
蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度分别为
20．15、60．44、100．70、201．50、403．00／Jg／mL无水
葡萄糖对照品溶液。精密吸取0．2mL于具塞试管
中，分别于冰浴中加入5％苯酚0．8mL，涡旋混匀，
再加浓硫酸4．0mL，加塞，涡旋混匀，于沸水浴中加
热10rain，取出，于冰水浴中冷却，放至室温，以溶
剂为空白，于483nm测定吸光度。以吸光度为横坐
标，质量浓度为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程
为：C=0．3634A一0．017，r一---0．9996，线性范围
为20．15～403．00／19／mL。
2．3凝胶中泊洛沙姆对多糖测定的干扰及处理
收稿日期：2007—09—18
基金项目：上海市科委中药现代化专项(03DZl9521)
作者简介：姜玲海(I982一)。女，上海人，硕士．研究方向：药物新剂型、新技术。E—mail：jIh0129@163．com
*通讯作者冯怡Tel：(021)51322493Fax：(021)51322491E-mail：fyi@vip．sina．tom
万方数据
·854· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
2．3．1 泊洛沙姆的对多糖测定的影响：取少量
P407、P188，分别溶胀后，自2．1检测波长的确定项
下“于冰浴中加入5％苯酚0．8mL”起操作，于400-一
800nm全波长扫描，结果见图2。P407、P188在多糖
最大吸收波长483nm处均有吸收，对多糖的测定存
在严重干扰。
2．3．2泊洛沙姆干扰的去除：预试验中发现泊洛沙
姆在室温下易溶于醋酸乙酯，而夏枯草多糖则不溶，
同时又发现以醋酸乙酯对凝胶进行液液萃取时，极
易发生胶凝，此胶凝现象降低了醋酸乙酯萃取率，故
液液萃取并不适合温敏凝胶中基质与多糖的分离，
因此考虑先将凝胶进行冷冻干燥后，再用醋酸乙酯
萃取的方法分离基质与多糖。
取温敏凝胶空白基质(P407／P188)约1g，置10
mL塑料离心管中，精密称定，冷冻干燥。冷冻干燥
样品加醋酸乙酯2．0mL，涡旋使完全溶解，5000
r／min离心20min，弃上清液，沉淀再加醋酸乙酯
2．0mL，同法萃取1次，沉淀于50℃水浴挥尽醋酸
乙酯。残渣用0．2mL蒸馏水完全溶解，自2．1检测
波长的确定项下“于冰浴中加入5％苯酚0．8mL”
起操作，于400--800am全波长扫描，结果见图2。
泊洛沙姆经醋酸乙酯萃取后，在多糖最大吸收波长
483ilm处均无吸收，对多糖的测定无干扰。
4uu 450 ，oU ，，U 6uU OSU
Mnm
圈2泊洛沙姆经醋酸乙酯萃取前后全波长扫描图谱
Fig．2Scanningpattenoffullwavelengthforextracted
orunextactedPoloxamerbyethylacetate
2．4 醋酸乙酯萃取夏枯草多糖保留率的考察：从夏
枯草温敏凝胶中取约1g凝胶，置10mL塑料离心
管中，精密称定，冷冻干燥。冷冻干燥样品加醋酸乙
酯2．0mL，涡旋使完全溶解，5000r／min离心20
rain，弃上清液，沉淀分别再加醋酸乙酯2．0mL，同
法萃取1次，沉淀于50℃水浴挥尽醋酸乙酯。残渣
用蒸馏水完全溶解，转移至100mL量瓶，加蒸馏水
至刻度，摇匀，即得供试品溶液1。取夏枯草多糖
0．03g，精密称定，置10mL量瓶中，加蒸馏水溶解
并稀释至刻度，摇匀，自此溶液中精密移取1．0mL，
置10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得
供试品溶液2。分别自供试品溶液l、2中精密移取
0．2mL于具塞试管中，于483am处进行比色，结
果多糖保留率的均值为100．11％，RSD为3．22％
(以=3)。结果表明，凝胶经醋酸乙酯萃取，夏枯草多
糖并无损失，醋酸乙酯是样品处理的合适溶剂。
2．5醋酸乙酯萃取用量的考察：取夏枯草温敏凝胶
约1g，置i0mL塑料离心管中，精密称定，冷冻干
燥。冷冻干燥样品分别加醋酸乙酯1．0、2．0、3．0、
5．0mL，涡旋使完全溶解，5000r／min离心20
rain，弃上清液，沉淀分别再加醋酸乙酯1．0、2．0、
3．0、5．0mL，同法萃取2次，沉淀50℃水浴挥尽醋
酸乙酯。残渣用蒸馏水完全溶解，转移至100mL量
瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别自
各供试品溶液中精密移取0．2mL于具塞试管中，
于483nm处测定吸光度值，结果见表1。醋酸乙酯
萃取用量为2．0mI．时，制剂中多糖保留率最高，为
99．7％。故选择醋酸乙酯萃取用量为2．0mL。
裹1醋酸乙酯用量对萃取制剂中多糖保留率的
影响(肛一4)
Table1 Retentionratefpolysaccharidesinthermosensi—
tivegelofP-vulgarisextractedbyethylacetate
withdifferentquantityies(席=4)
醋酸乙酯用量／mL 多糖保留率／％
1．O
2．O
3．O
4．O
2．6醋酸乙酯萃取次数的考察：供试品按2．5醋酸
乙酯萃取用量的考察项下方法操作，醋酸乙酯分别
萃取1、2、3、4次，结果见表2。醋酸乙酯萃取次数对
制剂中多糖保留率影响不大，且多糖保留率均较高，
为简化实验步骤并保证基质去除完全，实验中采用
醋酸乙酯萃取2次处理样品。
表2醋酸乙醋萃取次数对制剂中多糖保留率的
影响(一=4)
Table2 Retentionratefpolysaccharidesinthermo—
sensitivegelofP．vulgarisextractedbyethyl
acetatewithdifferentextractingt mes(辟=4)
醋酸乙酯萃取次数／次 多糖保留率／％
2．7方法学考察
2．7．1 稳定性试验：供试品溶液分别于0．0、0．5、
1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5、4．0h于 83am波长
处测定吸光度值，结果样品显色后至少4h内，吸光
度值基本稳定(RSD为0．26％)。
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·855·
2．7．2精密度试验：取同一质量浓度的葡萄糖对照
品溶液连续测定5次，测定吸光度值，计算，结果吸
光度值的RSD为0．23％。
2．7．3重现性试验：取同一批次样品5份，制备供
试品溶液，测定，计算，结果样品中多糖质量分数的
RSD为2．3％。
2．7．4加样回收率试验：取夏枯草温敏凝胶0．5g
(含多糖约5．2mg)，精密称定，分别加入3．98、
5．01、6．04mg无水葡萄糖对照品，制备供试品溶
液，测定，计算回收率，结果平均加样回收率为
102．57％，RSD为1．79％(咒=9)。
2．8温敏凝胶中多糖的测定：分别自3批夏枯草温
敏凝胶中取约1g凝胶，置10mL塑料离心管中，精
密称定，冷冻干燥。冷冻干燥样品加醋酸乙酯2．0
mL，涡旋使完全溶解，5000r／min离心20min，弃
上清液，沉淀分别再加醋酸乙酯2．0mL，同法萃取
1次，沉淀于50℃水浴挥尽醋酸乙酯。残渣用蒸馏
水完全溶解，转移至100mL量瓶，加蒸馏水至刻
度，摇匀，即得供试品溶液。自供试品溶液中精密移
取0．2mL于具塞试管中，于483nm处测定吸光度
值，结果见表3。
表3夏枯草温敏凝胶中多糖的测定结果(万一3)
Table3 Determinationofpolysaccharidesinthermo-
sensitivegelofP．vulgaris(矗=3)
3讨论
泊洛沙姆为聚氧乙烯(PE0)和聚氧丙烯(PPO)
组成的ABA型嵌段共聚物，其高浓度水溶液具有
受热反向胶凝的性质，即冷藏温度下是自由流动的
液体而室温或体温时形成澄明的凝胶[3]。泊洛沙姆
在多糖定量测定中的干扰，可能是由于其在硫酸作
用下脱水形成的化合物可与苯酚反应生成有色化合
物，该物质与多糖经显色所得化合物颜色相近，因而
造成严重干扰。经预实验发现泊洛沙姆在室温下易
溶于醋酸乙酯，而夏枯草多糖则不溶，据此采用醋酸
乙酯为萃取溶剂对多糖及基质进行分离。但因制剂
本身为温敏凝胶，在温度达29～30℃时即可发生相
转变而成凝胶，以醋酸乙酯进行液液萃取时属于放
热过程，凝胶的胶凝阻碍了醋酸乙酯的萃取，故液液
萃取的方式并不适合温敏凝胶中基质与多糖的分
离，因此采用先将制剂进行冷冻干燥后，再用醋酸乙
酯萃取的方法分离基质与多糖，较符合温敏凝胶的
特性，多糖保留率为100．11％，是较为理想的样品
前处理方法，为以泊洛沙姆为主要基质的多糖制剂
中多糖的含量测定提供参考。
参考文献：
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／ea5e．2002，83(1)：65—74．
龙血竭胶囊的HPLC指绞图谱研究
高秀丽，蒋倩，张敏
(贵阳医学院药学院，贵州 贵阳 550004)
摘要：目的 用HPLC法对龙血竭胶囊指纹图谱进行研究。方法采用色谱条件：EclipseXDB—ODS柱(150mm×
4．6ram)，流动相为乙腈一水，梯度洗脱进行色谱分离；检测波长为275nm；体积流量为1．0mL／min；柱温为40℃．
以龙血素B作为参照物。结果初步建立了龙血竭胶囊的HPLC指纹图谱，并进行相似度评价。结论方法简单可
行，能够有效地控制龙血竭胶囊的内在质量。
关键词：龙血竭胶囊I指纹图谱；HPLC；相似度
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06—0855一04
血竭为传统名贵中药，有“活血之圣药”的美誉， 含多种黄酮类、皂苷类、甾醇类、萜类和其他化合物，
收稿日期：2007—09—30
作者简介：高秀丽(1965一)．女，副教授．硕士．1990年毕业于华西医科大学药学院，2001—2003年作为英国Portsmouth大学访问学者，
2003—2004年作为英国Manchester大学访向l学者．现为贵阳医学院实验室管理与设备处副处长，在药学系分析测试中心任
教．从事药物质量及其新药开发研究。药物药动学研究。Tel：(0851)6908468E—mail：xiuligao@hotmail．com
万方数据
夏枯草-泊洛沙姆温敏凝胶中多糖的测定
作者： 姜玲海， 冯怡， 沈岚， 徐德生
作者单位： 姜玲海,冯怡,沈岚(上海中医药大学,上海,201203)， 徐德生(上海中医药大学附属曙光医院
,上海,200021)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(6)

参考文献(3条)
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