全 文 ：中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月·377·
h内分离得到2个流份(流份I和Ⅱ)，高速逆流色
谱图见图2。
衰1不同溶剂体系中大豆素和染料木素分配系数
和分离度值
Table1 Partitioncoefficientandseparationfactorof
daidzeinandgenisteininvarioussolventsystems
溶剂体系
大豆分离染料木
素k1度(口)索k2
0 “) ZU 】8()
t／rain
圈2溃豆豉粗据物高速逆液色谱圈(J和Ⅱ为接收流份)
Fig-2HSCCCChromatogramofcrudeextract
fromSemensojnePreparatum‘Iand
11 wereobtainedfraction．,；)
采用HPLC法对逆流色谱分离流份进行分析，
结果表明两个流份均为单一色谱峰，与对照品比较
表明，流份I为染料木素，流份I为大豆素，产物的质
量分数分别为99．1％和98．4％。200mg大豆异黄酮
粗品可得26mg大豆素和35mg染料木素(图3)。
2
n j e 6
JL 一～几一
0 5 10 15 20 0 5 10 f5 20
1大百素2染料术素
1—daidzein2—genistein
图3流份Ⅱ(A)和流份I(B)的高速逆流色谱
制备流份高效液相色谱图
Fig．3HPI。CChromatogramoffractionⅡ(A)
andfractionI(B)obtainedbyHSCCC
本实验结果表明采用高速逆流色谱法可以从淡
豆豉中分离得到质量分数的大豆素和染料木索单体
化合物，分离时间较短，操作简便、样品无损失。由此
可以进一步制备获得这两个物质的化学对照品，为淡
豆豉深入研究和质景控制提供了必要的物质基础。
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当归多糖铁的溶出度和生物利用度的研究
王凯平，张玉，戴立泉，曾令杰
(华中科技大学同济医学院药学院．湖北武汉430030)
以前的研究表明若以当归多糖与三价铁配合生
成当归多糖铁(Angelicas nensisp01ysaccharide—
ironcomplex，APC)，有可能开发出一种新型的、具
有双重补血功能的补血剂‘”⋯：一方面，不仅具有较
理想的稳定性、水溶性和吸收率等，而且没有游离铁
离子所造成的对胃肠道的刺激作用，可起到良好的
高价铁治疗缺铁性贫血的作用；另一方面，在多糖铁
中的铁释放之后，配体多糖由于具有多方面的生物
鉴鍪最皙；嚣；：薯蟊箍厅攻关项目。，。。。，。．。。。，
作者简介：mat平(1969--)，女，湖北武汉人，副教授，在读博士研究生，主要从事药物开发研究工作。Email：wkpzcq@163corn
万方数据
中革蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
活性，如免疫调节、抗病毒、降血糖等，亦可被机体吸
收、利用，从而又可发挥当归多糖的补血活性““]。
有鉴于此，在对当归多糖铁复合物的合成及理化性
质做了初步的探索之后，本实验进一步对当归多糖
铁复合物的体外溶出度和生物利用度进行研究，以
期为其作为一种具有开发价值的补铁剂提供佐证。
1仪器与材料
zK一82B型电热真空干燥箱(上海申光仪器仪
表有限公司)，PHs2c酸度计(上海精密科学仪器
有限公司雷磁仪器厂)．十万分之一光学读数分析天
平(湘仪天平仪器厂)，72l型分光光度计(上海第三
仪器分析仪器厂)，SpectrAA—do原子分光光谱仪
(美国瓦里安公司)。当归多糖铁由本实验室制备并
经纯化，其他所用试剂均为分析纯，实验用水为双
蒸水。
2方法与结果
2．1 当归多糖铁的还原性试验：采用邻菲罗啉比色
法。该方法以抗坏血酸为还原剂，在酸性条件下，将
多糖铁中的Fe(Ⅲ)还原为Fe(Ⅱ)，Fe(Ⅱ)与邻菲
罗啉结合并迅速作用产生一种红色的螯和物，螯和
物溶剂颜色的深浅反映出Fe(Ⅱ)的高低。
取Fc(Ⅲ)浓度为0．001mol／L的当好多糖铁
溶液50ml，，置三颈烧瓶中，加抗坏血酸溶液[称取
L(+)一抗坏血酸20mg，置100mL量瓶中，加水
溶解并稀释至刻度，混匀，即得]10mL，再加0．12％
邻菲罗啉试剂5mI，，控制温度为37℃并不断搅拌，
取不同时闯点的反应溶液于490neff波长处测定吸
光度(A)；以当归多糖铁溶液中不加入抗坏血酸溶
液．加入相应量的邻菲罗啉试剂，均匀混合，所得溶
液作为空白。结果见表l。实验结果表明，6I·左右当
归多糖铁基本被抗坏血酸还原完全。
表1当归多糖铁的还原性试验
Table1 DeoxldizationtestofAPC
时间t／h A 时间t／h A
0 0 4 0．54
1 0．22 5 0．60
2 0 36 6 0．64
3 0．47 7 0 65
2．2 当归多糖铁的体外溶出性试验：由于Fe(Ⅲ)
可被抗坏血酸还原为Fe(Ⅱ)，因此可以通过测定
Fe(Ⅱ)而间接地测定Fe(Ⅲ)的溶出量，从而掌握当
归多糖铁中的Fe(Ⅲ)的溶出情况。
2．2．1对照品溶液的配制：精密称取硫酸亚铁溶液
1．124g，置200mL棕色量瓶中，加水溶解后，加盐
酸(1—2)1．7mL，再加水稀释至刻度，摇匀，作为贮
备液。临用前，精密量取该贮备液10mL，置200mL
棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL
相当于0．04mg的Fe2+)。
2．2．2标准曲线的制备：分别精密量取对照品溶液
0．00、1．00、2．00、3．00、4．00、5．00、6．00、7．00mL，
置分液瀑斗中，各加水至38mL，再各加入邻苯二甲
酸氢钾(pH4)缓冲液5mL、邻菲罗啉溶液5mI，、苦
味酸钠溶液2ml，放置5min后，以10mL二氯乙
烷进行萃取，萃取3min后，静置分层，分取二氯乙
烷层，滤过，弃去初滤液，取续滤液，以上述不含对照
品溶液、按同法操作所得的二氯乙烷溶液作为空白，
于512nIn波长处测定A。以A对被测溶液的质量
浓度(1求回归方程，得A一0．0271+0．0423 C，
，=0．995l。结果表明，在o～20gag／mI，，线性关系
良好。
2．2．3体外溶出试验：精密称取当归多糖铁(含铁
22．59％)0．0200g，置100mL棕色量瓶中，加水
溶解并稀释至刻度，转移至200mL三颈烧瓶中，加
抗坏血酸20mI，，控制温度为37c并不断搅拌，取
不同时间点的反应溶液5mI．，按“标准曲线的制备”
项下的方法操作，测定A。根据回归方程，由A求出
样品被测溶液质量浓度c，据此再计算溶出铁的质
量分数。结果见表2。实验结果表明，当归多糖铁中
的Fe(Ⅲ)在还原性物质的作用下，6h左右基本全
部溶出。
溶出铁的质量分数一被测溶液质量浓度×V-×100／
(mxV2×106)×100％。
式中，m为当归多糖铁取样量(g)，V。为二氯乙烷体积，Vz为
量取的反应液体积。
表z当归多糖铁的体外溶出试验
Table2 DissolutiontestofAPC／n“tro
2．3当归多糖铁在动物体内的生物利用度
2．3．1血药浓度时间数据：将12只体重200g左
右的健康Wister大鼠随机分为两组，每组6只，雌
雄各半，以硫酸亚铁为对照组，当归多糖铁为实验
组，考察当归多糖铁在Wister大鼠体内的生物利用
度n]。先从连续12h禁食但不断水的大鼠眼底取
血，以原子吸收分光光度法测定全血中铁的质量浓
度，作为t一0时刻的质量浓度，然后按每千克体重5
万方数据
中草蒋ChineseTradlUonala dHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月·379·
mg铁的给药量灌胃给药，分别在给药后}一1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10h，从眼底取血，测定全血中铁的质
量浓度。结果见表3。
表3大鼠单剂量口服给APC和FeSO．后不同时间
血中铁的质量浓度(n=6)
Table3 Ironconcentrationsinbl odfratsatdifferent
timesaftersingleoraladministration
ofAPCandFeSO-抽一6)
时间／h
铁质量浓度／(腿·mL叫)
实验组 对照组
2．3．2药动学参数：应用3p87药代动力学程序对
硫酸亚铁和当归多糖铁的血药浓度时间数据进行
处理，经F检验拟合优度，以血药浓度拟合值与实
测值相关性最好、AIC最小原则作为判别标准，确定
最佳房室模型并计算药动学参数。结果表明，两种铁
剂的体内过程均符合单隔室模型一级动力学过程；
按此模型处理数据并计算药动学参数．结果见表4。
衰4大风单剂量口服APC和FeSO．的药动学参数白一6)
Table4 Pharmacoklnetlcparametersinratsaftersingle
oraladministrationofAPCa dFeSO^抽一6)
3讨论
食物铁供给不足造成的缺铁性贫血和缺铁症是
世界性的营养铁缺乏病之一。临床上一般以硫酸亚
铁、葡聚糖酸亚铁等作为补铁剂治疗缺铁性贫血，但
是这些药物往往有刺激胃肠道的副作用o““]，还存
在生物利用度低、化学性质不稳定等问题；并且r游
离的亚铁离子Fe(Ⅱ)在体内易产生内源性自由基，
可使细胞膜脂质过氧化，从而造成细胞膜损
伤[J2,13l。研究表明o“，食物中的铁为三价铁Fe(Ⅲ)，
在体内，Fe(Ⅲ)被食物中所含的还原性物质如抗坏
血酸、含巯基的化合物还原为Fe(Ⅱ)，然后被机体
吸收、利用。
评价补铁剂生物利用度高低的主要指标之一是
补铁剂在机体的主要吸收部位十二指肠(生理pH
值6～7)中是否可溶。当归多糖铁溶液在pH值3～
12无沉淀出现且溶液保持透明澄清。这表明当归多
糖铁在生理pH条件下可溶且能够稳定存在，因而
有利于机体的吸收。
当归多糖铁6h左右基本被抗坏血酸还原完全，
而当归多糖铁中的Fe(Ⅲ)在还原性物质的作用下，6
h左右基本全部溶出。这提示当归多糖铁的溶出时
间与其被还原时间之间有一定的对应关系。当归多
糖铁的溶出时间较长，亦有利于机体的充分吸收。
从大鼠单剂量口服给药当归多糖铁和硫酸亚铁
后不同时间血中铁浓度数据可以看出，大鼠对硫酸
亚铁和当归多糖铁的吸收速率相似，但实验组(当归
多糖铁)不仅具有更高的铁浓度，而且维持高浓度的
时间更长，生物利用度明显高于对照组(硫酸亚铁)。
比较当归多糖铁和硫酸亚铁两种铁剂的主要药代动
力学参数，当归多糖铁的吸收速率常数E大于硫
酸亚铁而消除速率常数K。小于硫酸亚铁，达峰时
间}⋯小于硫酸亚铁，药时曲线下面积AUc大于硫
酸亚铁。以上种种数据表明，与硫酸亚铁相比，当归
多糖铁吸收快、消除慢，因此在机体内停留的时间
长，能够更为充分地被机体利用。
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超临界CO：提取蜂胶中总黄酮的工艺研究
谷玉洪1，罗 潆2，徐飞3，赵余庆”
(1-沈阳东宇药物技术研究院，辽宁沈阳110015；2．沈阳市药学会，辽宁沈阳110013‘3吉林省药品
检验所，吉林长春1300624，4，辽宁省中药现代化工程技术中心，辽宁沈阳110032)
蜂胶是蜜蜂采集不同植物树脂、花粉等部位，混
合其上颚分泌物及蜂蜡加工而成的胶状物。目前已
从蜂胶中分离鉴定的成分有黄酮类、萜烯类、醌类、
有机酸、氨基酸、酶类、维生素及大量的微量元素等，
具有生理学和药理学活性的成分达300多种“]。其
中黄酮类化合物具有较强的抗氧化、清除自由基作
用，能够软化血管、减少血栓形成及改善人体的微循
环。被誉为珍贵的天然“血管清道夫”。对于蜂胶中
黄酮类成分的提取工艺研究报道较多，乙醇冷提提
取法较简单，并且温度不高，某些易挥发和失活的有
效黄酮类不易失去，但是提取率受时间限制，一般在
两周内随时间的延长而升高，而且乙醇体积分数以
70％为最好[2]。回流浸提法所需时间较短，且提取率
随温度的升高而升高，但温度升高时很容易使某些
黄酮类失去活性口]。70％丙酮提取总黄酮，效果很
好，但由于价格较贵，且会造成溶剂残留，所以不适
合于生产上应用Ⅲ。超临界萃取法作为“绿色”提取
技术，可以克服上述不足。本实验采用超临界CO。
萃取技术研究了蜂胶中黄酮类成分的提取工艺。
1仪器与材料
DYl68—5005超临界萃取装置(沈阳东宇药
物技术研究院超临界设备制造分公司)、7230G可见
分光光度计。上海精密科学仪器有限公司制造)、二
氧化碳(食用，液态纯度为99％，钢瓶装)、芦丁对照
品购于中国药品生物制品检定所，批号：00809705，
蜂胶由吉林省药品检验所鉴定和提供，所用溶剂均
为分析纯。
2方法与结果
2．1蜂胶中总黄酮的超临界革取”M：蜂胶样品低
温粉碎，称取100g投入萃取釜中，经热交换器分别
加热萃取釜、解析釜I、Ⅱ，使达到设定温度。通过制
冷设备冷却贮罐，开启CO。钢瓶，打开加压泵升高
萃取釜、解析釜I和Ⅱ的压力，使分别达到设定压力
时，关闭CO：钢瓶阀门。打开循环，加入一定量的夹
带荆(95％乙醇)至夹带剂储罐中，打开夹带剂高压
泵阀门，按试验设定条件使夹带剂泵人萃取釜。并控
制压力，调节CO：流量，保持恒压、恒温，萃取3h。
收集从解析釜I、Ⅱ出料口放出的萃取物，合并，回
收乙醇及水分，称定提取物，计算萃取率(萃取率一
提取物质量／样品质量×100％)。
2．2总黄酮的测定”一
2．2．1对照品溶液的制备：精密称取120C减压干
燥至恒重的芦丁对照品200mg，置100mL量瓶中，
加甲醇70mL，置承浴上微热使溶解，放冷，加甲醇
至刻度，摇匀。精密吸取10m1．，置100mI。量瓶中，
加水至刻度，摇匀，即得(含芦丁0．2mg／mL)。
2．2．2 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、
1．0、z．0、3．0、4．0、5．0、6．0mL，分别置25m1．量瓶
中，各加水至6mL，加5％亚硝酸钠1．0mL，使混
匀，静置6rain，再加入10％硝酸铝溶液1．0mL，摇
匀，静置6rain，再加入氢氧化钠试液10mL，再加水
至刻度，摇匀，放置15rain，照分光光度法在50011111
渡长处测定吸光度。以吸光度值为纵坐标，质量浓度
为横坐标．绘制标准曲线，得回归方程A一12．42C一
譬釜景箨窑。。赵50余5庆Ol，。】：。。。。，。。。。。，。。E⋯，，：：。。。，。。。。。。。。@，。。．。。。。
万方数据
当归多糖铁的溶出度和生物利用度的研究
作者： 王凯平， 张玉， 戴立泉， 曾令杰
作者单位： 华中科技大学同济医学院药学院,湖北,武汉,430030
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(3)
被引用次数： 7次

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