全 文 ：中革蒋CMneseTraditionalandHerbelDrugs第37卷第9期2007年9月·1379·
血府逐瘀汤对缺氧条件下肺动脉平滑肌细胞增殖
及培养液中NO水平的影响
徐粟1，丁志山z，楼兰花2，高承贤2，宋红”
(1．浙江大学医学院附属第二医院，浙扛杭州310009，2_浙江中医药大学，浙江杭州310053)
摘要：目的研究血府逐瘀汤(XFZYD)对缺氧条件下肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖及培养液中NO水平
的影响。方j击通过建立新生牛PASMC的原代和传代培养及缺氧细胞增殖模型，采用MTT法，光镜计数观察缺
氧对PASMC增殖的影响；Griss试剂法测定PASMC培养液中NO的量。结果血府逐瘀汤能显著抑制缺氧条件
下PASMC增殖，高、中、低剂量组与对照组比较差异显著(P
瘀汤抑制缺氧条件下PASMC增殖作用的途径之一。
关键词；血府莲瘀汤l肺动脉平滑肌细胞(PASMC)；活血化瘀
中田分类号tR286．1 文献标识码：A 文章编号：0255—2670(2007)09—1379—03
EffectofXuefuzhuyuDecoctionOBpulmonaryarterialsmoothmusclecellproliferation
andNOlevelinPASMCculturemediumunderhypoxia
XUSu‘，D1NGZhi—shan2，LOULan．hua2，GAOCheng—xian2，SONGHon92
(1．TheS condA蚰liatedHospital，CollegeofMedicine，Zh刨angUniversity，]-langzhou310009，China；
2．ZhejiangUniversityofTraditionalChlneseMedieine，FIangzhou310053．China)
Keywords：XuefuzhuyuDecoction；pulmonaryarterialsmoothmusclec ll(PASMC)；promoting
bloodcirculationndremovingbloodstasis
在肺心病的病理演变过程中，肺动脉高压
(hypoxemicpulmonaryhypertension，HPH)是其
形成的标志，成为其进一步加重的病理基础稿≈氧是
引起HPH的主要原因之一。HPH形成目前认为包
括低氧性肺血管收缩和肺血管结构重构两个方面。
而肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryarterialsmooth
muscleeell，PAsMc)的异常增生是这种血管重构
的重要基础。NO是～种重要的细胞内信使物质和
发现的第一个气体型递质，同时又是效应分子，具有
拮抗HPH形成的作用。血府逐瘀汤(Xuefuzhuyu
Decoction，xFzYD)是治疗心肺疾患的经典方剂，
研究显示可抑制PAsMC增殖口]，本实验通过观察
血府逐瘀汤对缺氧条件下PASMC培养液中No
水平的影响，来进一步探讨其作用机制。
1材料
1．1血府逐瘀汤组成药物：当归90g、生地90g、
桃仁120g、红花90g、枳壳60g、赤芍60g、柴胡
30g、桔梗50g、川芎50g、牛膝90g、甘草30g，均
购自浙江中医学院门诊部中药部，符合2005年版
《中国药典》。
1．2试剂：1；250胰蛋白酶(进口分装，吉泰科技
有限公司)，超级新生牛血清(杭州四季青生物工程
材料研究所)，RPMI一1640培养基(美国Life
Technologies公司)，噻唑蓝(MTT，上海华美生物
工程公司)，二甲基亚砜(分析纯，江苏鸿声化工
厂)，D—Hanks平衡盐溶液、Folin(甲、乙)试剂、
Griss试剂(自制)。
1．3仪器：兰气细胞培养箱COz细胞培养箱，德国
Heraeus公司、xDS一1相差显微镜系统，重庆光学
仪器厂，uV一754型紫外可见分光光度计，上海第
三分析仪器厂、UR--4100型酶标仪，美国
Dynatech公司。
1．4新生牛PASMC的原代和传代培养：无菌取
出新生牛肺1～2级动脉(取白杭州四季青生物工
程材料研究所)，D-Hanks液清洗后，剪开血管，刮
去血管内皮，剥离并将中膜肌层切成小块，贴块法接
收稿B期：2007—02-20
嚣妻盏异：蓉江羹中1要萼曼弓乎盖蔫?蠡智跫至碧娄帮：；夸主50簧32研5)究方向为呼吸系统疾病慢性阻塞性肺病，抗细菌耐药性研究等。
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万方数据
中草蠢 ClalnesellradltiommlaridIterl岫lD九噜s第37卷第9期2007年9月
种于培养瓶中，待贴壁后加入含10％小牛血清的
RPMI一1640培养液，置于培养箱内培养10d左右，
待80％融合时，以0．1％胰酶消化传代培养，实验
用4～6代细胞。
2方法
2．1 血府逐瘀汤制备：取组方药材加重蒸水
200mL浸泡30min后，直火煎沸30min，收集煎
煮液，药渣再加重蒸水1500mL，同前煎沸20min，
合并两次滤液，4000r／rain离心15min后取上清
液，浓缩至含生药1g／mL。分装灭菌，备用。
2．2缺氧条件下PASMC增殖的影响：将4～6代
PASMC以1×1舻／mL，200p ／孔接种培养于96
孔板，置CO：培养箱24h后，换不含小牛血清
RPMI一1640培养液静止同步培养24h，实验分为以
下两组：缺氧组(置三气培养箱．充95％N。一5％
CO：混合气)、常氧对照组(置CO：培养箱21％0。)，
每孔12孔。培养48h后，加入MTT溶液(5rag／
mL)20“L／孔，继续孵育5h，终止培养，小心吸弃孔
内培养上清液，加入二甲基亚砜150pL／孔，振荡10
min后，酶标仪波长630nITL处测吸光度(A)值。
2．3血府逐瘀汤对缺氧条件下PASMC增殖的影响
2．3．1光镜计数：将4～6代PASMC以3×105／
瓶培养于20mL培养瓶中，培养24h。换不含小牛
血清的RPMI一1640培养液静止同步培养24h，将
60瓶PASMC分为4组：血府逐瘀汤高、中、低剂量
(分别相当于含血府逐瘀汤生药0．5、0．25、0．125
g／mL)组，对照组(不舍小牛血清RPMI一1640培
养液)，每组lO瓶。血府逐瘀汤组及对照组加药60
“L／瓶。缺氧条件下培养48h后，消化分散，光镜下
计数比较各组细胞。
2．3．2MTT法：分组同z．3．1项，每组1z孔，加
药10“L／孔。方法同2．2项。
2．4血府逐瘀汤对PASMC表达NO的影响：将
4～6代PASMC以3×105／瓶培养于20mL培养
瓶中，培养24h后，换不含小牛血清RPMI一1640培
养液静止同步培养24h，分为5组：血府逐瘀汤高、
中、低剂量(分别相当于含血府逐瘀汤生药0．5、
0．25、0．125g／mL)组，缺氧对照组(加不含小牛血
清RPMI一1640培养液)及常氧对照组(21oA0：)，
每组12瓶，各加药60pL／瓶。常氧对照组充21％
O。，其余各组充95％N：～5％CO：混合气培养。
48h后，以UV一754分光光度计于波长545nlll处
测培养上清液A值，换算成NO水平。
2．5数据处理：数值用z士5表示，应用统计软件包
SPSSl2．0进行t检验。
3结果
3．1 缺氧对PAsMC增殖的影响：镜下观察，缺氧
组与常氧对照组细胞生长状态无明显差gq。MTT
法结果缺氧组A值(0．121士0．008)与常氧组^
值(O．108士0．009)比较有显著差别(P<0．05)，
提示缺氧有促PASMC增殖作用。
3．2血府逐瘀汤对缺氧条件下PASMC增殖的影
响：血府逐瘀汤组PASMC明显被抑制，血府逐瘀
汤高、中、低剂量组与对照组比较差异显著(P<
0．05)。结果见表l。
裹1血府避瘀汤对缺氧条件下IPASMC增殖的影响
(j士i。H一6)
lable1 F．ftectofXFZYO蚰prollferationofPA$MC
uRderIhyooxlacondition“士F，H一6)
与对Jfl{组比较：。P
3．3 血府逐瘀汤对缺氧条件下PASMC分泌No
的影响：表2结果表明，缺氧条件下PASMC可表
达No；血府逐瘀汤高、中、低剂量组均可提高
PASMC培养液中NO水平，与缺氧对照组比较差
异显著(P
(；士l，n一12)
Table2 ElfeetofXFZYDonNOexoresslon0fPASMC
ilndel-hypoy,lacondition(#士s·_=12)
与缺氧对照组比较}。尸
血府逐瘀汤是王清任所刨的活血化瘀经典方
剂，由桃红四物汤和四逆散加桔梗、牛膝组合而成，
桃红四物汤活血化瘀，四逆散疏肝理气。血府逐瘀汤
作为治疗血府血瘀的代表方剂对肺心病具有良好的
治疗作用，这已被大量临床研究表明。既往研究证实
其具提高小鼠耐缺氧能力的作用。血管重构是一个
慢性发生发展的过程，祖国医学认为“久病必瘀”、
万方数据
中革蔫ChineseTraditionalandHerhlDrugs第37卷第9期2007年9月
“久病人络”，王清任《医林改错》说“人络为瘀”，缺氧
促进PASMC增殖，而致肺动脉血管重构，正是这
一理论的体现。本研究表明，血府逐瘀汤可明显抑制
缺氧对PASMC增殖的促进作用，并且随药物浓度
的增加，呈剂量依赖性作用。
在病理状态时，HPH患者的肺动脉内皮有严重
的组织学异常，其内皮型一氧化氮合酶(eNOs)基
因很少表达甚至不表达，eNOS的酶活性与组织学
病变严重程度呈显著负相关关系∞。而诱导型一氧
化氮合酶(iNOs)被认为是在受到缺氧，细胞因子
等刺激后呈诱导性表达，是Ca”／CaM非依赖性
的，可能起到介导免疫和细胞毒性的作用。缺氧可诱
导大鼠PASMC中的iNOs基因和蛋白的表达，使
PASMC具有NOs活性，而发挥NO调节作用[3]。
本实验结果与以往报道一致，在无内皮细胞及其他
因素时，常氧条件下PAsMC培养液无No测出，
而缺氧条件下则有NO测出，表明在缺氧条件下，
PASMC具有自分泌NO的能力。研究发现内源及
外源性NO都有抑制PASMC增殖的作用[I]。作用
机制一方面可能是NO在血管平滑肌细胞内，与细
胞浆可溶性鸟苷环化酶血红素部分结合，激活鸟苷
环化酶，后者再催化三磷酸鸟苷变成cGMP，增加细
胞内的cGMP浓度，使No活性区局部血管扩张，
组织血流增加，从而使局部缺氧得到改善，cGMP被
磷酸二酯酶水解而失活。另一方面可能是其细胞毒
作用。
血府逐瘀汤能明显增加体外培养的PASM培
养液中的No浓度，可能是提高了PAsMc的自分
泌No的水平，从而抑制PASMC增殖。 ．
致谢：沃兴德教授时本研究的指导帮骑。
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红花提取物对犬急性心肌缺血的保护作用
李路江1，昊子芳2，吕文伟3，陈霞”
(1．吉林大学第一医院器官移植中心，吉林长春130021}2．吉林石油集团公司总医院，吉林松原138000
3．吉林大学白求恩医学院药理学教研室．吉林长春130021)
红花系菊科红花属植物红花Carthamus
tinctoriusL．的干燥花，性温味辛，能活血通经、散
瘀止痛。研究表明，红花提取物能抑制血小板聚集，
抑制血栓形成，延长凝血时间口3；对结扎冠状动脉所
致的大鼠急性心肌缺血有保护作用o]。为全面研究
红花提取物抗心肌缺血作用，本实验采用结扎犬左
冠状动脉前降支造成的心肌缺血模型，探讨红花提
取物对犬急性心肌缺血的保护作用。
1材料与方法
1．1药品：红花提取物由吉林省中医中药研究院提
供(吉红花黄素81．37oA)。地奥心血康胶囊由成都
地奥制药集团有限公司生产，批号0312066。氯化硝
基四氮唑蓝(NBT)，上海惠世生化试剂有限公司生
产，批号20040708。磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱
氢酶(LDH)、游离脂肪酸(FFA)、过氧化脂质
(LPo)，超氧化物歧化酶(sOD)、谷胱甘肽过氧化
物酶(GSH—Px)测定试剂盒由中生北控生物科技
股份有限公司生产。
1．2动物；健康成年杂种犬24只，雌雄兼用，体重
12～16kg，由吉林大学实验动物部提供。
‘
1．3仪器{RM--6000型多道生理记录仪，日本光
电公司。Sc一3型电动呼吸机，上海医疗器械厂。
Eos880型半自动血液生化分析仪，意大利。SSW
电热恒温水槽，上海博迅实业有限公司。输液泵，保
嚣薯昙羿：翟翟差；盏4一)，男，副主任技师，主要从事器官移植研究工作。
-通讯作者豫曩Tel}(0431)85619799E—maillxiachen616@yahoo．C0111．cn
万方数据
血府逐瘀汤对缺氧条件下肺动脉平滑肌细胞增殖及培养液中
NO水平的影响
作者： 徐粟， 丁志山， 楼兰花， 高承贤， 宋红， XU Su， DING Zhi-shan， LOU Lan-hua，
GAO Cheng-xian， SONG Hong
作者单位： 徐粟,XU Su(浙江大学医学院附属第二医院,浙江,杭州,310009)， 丁志山,楼兰花,高承贤
,宋红,DING Zhi-shan,LOU Lan-hua,GAO Cheng-xian,SONG Hong(浙江中医药大学,浙江,杭
州,310053)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(9)
被引用次数： 5次
参考文献(4条)
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