全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·345。
合物V为槲皮素。
化合物Ⅵ：黄色粉末，mp239～240℃，ESI—
MS：433(M+H)+，455(M+Na)+。三氯化铝、盐酸一
镁粉反应均呈阳性。1H—NMR8：5．o(1H，d，，一10．0
Hz，H一1”)，6．2(1H，s，H一6)，6．8(1H，s，H一3)，6．9
(2H，d，J一8．5Hz，H一37，57)，8．0(2H，d，J一8．5
Hz，H～27，67)，3—4(糖上其他质子，m)。与文献数据
基本一致口2~1引，故确定化合物Ⅵ为牡荆苷。
化合物Ⅶ：黄色粉末，nap256～258℃，ESI—
MS：449(M+H)+，471(M+Na)+。三氯化铝、盐酸一
镁粉反应均呈阳性。1H—NMR艿：5．o(1H，d，，一10．0
Hz，H—l”)，6．2(1H，s，H一6)，6．6(1H，s，H一3)，6．8
(2H，d，J一8．1Hz，H一57)，7．4(1H，d，J一2．2Hz，
H一27)，7．5(1H，dd，J一8．1，2．2Hz，H一67)，3-4(m，
糖上其他质子)。与文献数据基本一致[12~13]，故确定
化合物Ⅵ为荭草苷。
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葛根地连汤水溶性多糖的研究
王晓娟1，曾和平n，魏传晚1，徐淑永2，王辉2
(1．南华大学化学化工学院，湖南衡阳421001；2．华南师范大学化学系，广东广州510631)
糖尿病是一种慢性进行性内分泌代谢紊乱性疾
病，分为I型和Ⅱ型。全世界Ⅱ型糖尿病占糖尿病总
数的85％左右，在我国占95％以上。目前，国内外还
没有根治糖尿病的特效药物和方法。自1990年研发
葛根地连汤以来，Ⅱ型糖尿病的治愈率明显提高。据
报道，治疗64例，临床治愈56例(其中40例为2～
lo年未见复发者)，好转4例，总有效率93．75％，远
期疗效满意口’2]。葛根地连汤是由葛根(250g)、生地
黄(125g)、黄连(50g)、甘草(15g)4味中药组成的
复方。葛根地连汤水溶性多糖在治疗Ⅱ型糖尿病应
起重要作用。本实验研究了葛根地连汤水溶性多糖，
探索了其分离、纯化及初级结构分析的方法，初步分
析了复方多糖与单方多糖[3~5]之间的组成关系和研
究了葛根地连汤中水溶性多糖的组成及其初级
结构。
1材料、试剂及仪器
葛根地连复方中各药购于广州康华药店。试剂
为分析纯。SephadexG一100、G一150、G一200为上海化
学试剂二厂进H分装。UV一240型紫外光谱仪(日
本岛津)；LC一6A高效液相色谱仪(日本岛津)；红
收稿日期：2004—06—25
基金项目：广东省科技攻关项目资助(2002C30115)
作者简介：王晓娟(1978一)，女，山东荣成人，讲师。E—mail：youyou780207@hotmail．corn
*通讯作者E—mail：zenghr，@scnu．edu．cn
万方数据
·346· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
外光谱仪173型(PerkinElmer公司)。可调微量移
液器(3c海求精玻璃仪器厂)。
2 实验
2．1 葛根地连汤复方中多糖的分离与纯化
2．1．1提取：分别称取葛根250g，生地黄125g，黄
连50g，甘草15g粉碎，加入2L去离子水，煎煮4
h，其间不断搅拌，冷却后滤过；滤渣再次水煮，滤
过。将两次滤液合并，减压蒸馏，浓缩至约500mL，
得到葛根地连汤复方多糖水提取液。取两滴浓缩液，
加入2mL0．2％硫酸一蒽酮溶液，呈现绿色，说明其
中含有糖。取两滴浓缩液稀释，加入几滴0．05％茚
三酮溶液，加热约10min，出现紫色，说明含有蛋白
质，需要去蛋白。
2．1．2去蛋白：在提取多糖的过程中部分蛋白质也
一同被溶入水中。实验中，采用Sevag法[63[氯仿一正
丁醇(4：1)]与蛋白酶法[7]结合脱蛋白多次，水溶液
用紫外光谱仪在200400nm扫描，至其紫外光谱
图在280和260nm无吸收峰，表明不含蛋白质和
核酸。
2．1．3纯化：将去蛋白后的水溶液加入同体积的
95％乙醇，沉淀，离心后得半干状固体RPC—A；上清
液加入与上同体积的95％乙醇，沉淀，离心后得半
干状固体RPC—B。将PRC—A、PRC—B盛于CaCl。的
干燥器中真空干燥，得粗多糖PRC—A4．66g，得粗
多糖PRC—B2．78g。
2．2定性试验
2．2．1溶解性试验：两种多糖各取少量，分别加入
水、二甲亚砜、乙醇、乙醚、丙酮，结果都只溶于水，不
溶于二甲亚砜、乙醇、乙醚、丙酮。
2．2．2硫酸一蒽酮试验：各取少量多糖溶于水中，加
入适量新配制的0．2％硫酸一蒽酮溶液，出现绿色；
在紫外光谱仪进行扫描发现在620nm处有最大
吸收。
2．2．3茚三酮试验：两种多糖各取少量溶于水中，
加入几滴0．05％茚三酮溶液，加热约10min，无紫
色出现。
2．3 葛根地连汤水溶性多糖的精制：将葛根地连汤
复方粗多糖PRC—A和PRC—B溶于水制成饱和溶
液，在SephadexG一150柱(60am×2．7cm)上进行
纯化。用0．5mol／LNaCl溶液洗脱。洗脱液经分步
收集器收集后，用0．2％硫酸一蒽酮显色，经紫外检
测，作A—y曲线，依洗脱曲线合并洗脱液，加入无水
乙醇沉淀，干燥，由PRC—A得精制多糖PRC一1、
PRC一2；由PRC—B得PRC一3。
2．4纯度鉴定及相对分子质量测定
2．4．1 纯度鉴定：凝胶色谱法：PRC一1、PRC一2、
PRC一3各5mg分别溶于2mL去离子水中，依次进
行SephadexG一200凝胶柱色谱分离测其纯度，用去
离子水洗脱，体积流量6～8mL／10min，按2mL每
管分部收集，用0．2％硫酸一蒽酮显色法跟踪鉴定，
绘制洗脱体积与多糖含量之间的关系曲线。结果表
明，PRC一1、PRC一2、PRC一3多糖的洗脱峰为单一对
称峰，说明都为均一组分。
2．4．2相对分子质量测定：SephadexG一200凝胶
柱色谱测定多糖的相对分子质量。将标准Dextran
葡萄糖(量均相对分子质量分别为5．8×105、7．1×
104、3．77×104、1．15×104)分别测得洗脱体积Ve，
用标准蓝色葡聚糖(平均相对分子质量为2×106)
测出柱的外水体积Vo，绘制量均相对分子质量标准
曲线(19M-Ve／Vo)，然后将所测多糖在相同条件下
洗脱一次。以去离子水洗脱，得Ve／Vo值，查标准曲
线，求得样品多糖的量均相对分子质量分别为
1．22×105、2．5×104、7．62×103。
2．5单糖的组成分析：分别称取多糖10mg，加入2
mol／LH。SO。2mL，用N：除氧封管，100‘C水浴水
解10h，水解后用BaCO。中和至中性，离心，上清液
进行HPLC测定。色谱条件为Hypersil—NHz(150
mm×4．6mm，5弘m)(大连依利特科学仪器有限公
司)，流动相：乙腈一(80：20)，体积流量：0．8mE／
min，进样量：10弘L，室温：25℃。PRC一1的单糖组成
为L一鼠李糖(35％)、D一木糖(11．5％)、L一阿拉伯糖
(11．5％)、葡萄糖(35％)、D一半乳糖(7％)、PRC一2
的单糖组成为L一鼠李糖(5．3％)、D一木糖(2．8％)、
D一果糖(16．3％)、葡萄糖(73．9％)、D一半乳糖
(1．7％)，PRC一3的单糖组成为三一鼠李糖(12．4％)、
D一木糖(16％)、L一阿拉伯糖(11．3％)、D一果糖
(43％)、葡萄糖(17．3％)。
2．6糖苷键类型分析
2．6．1红外光谱(IR)：取PRC一1、PRC一2、PRC一3，
用1％KBr进行压片，4000～400cml扫描。可以看
出3种多糖在3400cm_1附近都有O—H伸缩振动
的强吸收，2900cm_1附近有C—H伸缩振动峰
1 400～1200cml是C—H的变角振动吸收峰，
1200～1000cm-1的一组强峰，是吡喃糖环的C—O
(属于C—O—C和C—O—H类)伸缩振动引起的。由IR
图可初步判断[9]：对于PRC一1，920cm-1是p异头物
中的1b型的特征吸收光谱，760cm_1是a异头物中
的3a型的特征吸收光谱，说明多糖分子中同时存在
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·347·
a和p糖苷键；对于PRC一2和PRC一3在930cm一1和
760cm_1有吸收，说明多糖分子中存在a糖苷键。
2．6．2高碘酸氧化：高碘酸可以选择性地断裂糖分
子中2个或3个羟基连接处，生成相应的多糖醛、甲
醛或甲酸。反应定量地进行，每开裂一个C—C键消
耗一分子高碘酸。通过测定高碘酸消耗量及甲酸的
释放量，可以判断糖苷键的位置。分别称取20mg
多糖溶解于25mL0．02mol／LNaIO。中，于4℃避
光氧化，每次依时取样，稀释250倍，用紫外光谱仪
在233Dm处测定NaIO。的消耗量，直至吸光度不
再改变。用0．01mol／LNaOH测甲酸的释放量，可
以初步判断糖苷键的位置。反应144h后，高碘酸氧
化达最大值。PRC一1平均每摩尔己糖残基消耗1．14
mol高碘酸，释放甲酸0．38mol，说明其中一定含有
1—6糖苷键，还可能含有1—2或1—4或1—3糖
苷键；PRC一2平均每摩尔己糖残基消耗0．84mol高
碘酸，没有甲酸释放，说明其中不含有1—6糖苷键。
PRC一3平均每摩尔己糖残基消耗0．80mol高碘酸，
释放甲酸0．4mol，说明多糖中只含有l一6糖
苷键。
2．6．3Smith降解：将多糖高碘酸氧化后的溶液装
入透析袋中，对流水透析48h，加入20mg硼氢化
钠以还原糖醛，于窒温暗处搅拌24h，用醋酸调节
pH值5～6，以分解剩余的硼氢化钠。溶液透析后减
压蒸发至干，残留物用1．3mol／LH。SO。在室温水
解96h，水解液用BaCo。中和，滤过、离心，上清液
进行HPLC分析。结果PRC一1水解产物有乙二醇、
丙三醇和葡萄糖醇，其摩尔比为11：37：5，说明其
连接方式为1—3，1—6和1—2，主要以1—6和1—
2方式连接；RPC一2水解产物有丙三醇、乙二醇、丁
四醇和葡萄糖醇，其摩尔比为62：5：5：14，说明
其连接方式为1—3，1—4和1—2，主要以1—2方
式连接；PRC一3水解产物只有乙二醇和丙三醇，说
明糖苷键连接方式是1—6连接。
3讨论
葛根地连汤原料中所含蛋白质比较丰富，单独采
用Sevag法[氯仿一正丁醇(4：1)处理]脱蛋白反复次
数多，工作量很大，易损失提取液。本实验采用了Se—
vag法与蛋白酶法结合的方法，时间大大减少了。
进行凝胶柱色谱分离，柱的装填好坏对分离效
果及分离所需时间有很大影响。分离前，要将凝胶进
行充分溶胀，利用倾泌的办法去掉一些微小颗粒，可
进行分级，所得颗粒分布更均匀。一般要一次装柱，
平衡时流速要慢且稳定；另外，在分离过程中要注意
操作压不要太高，这样才能保证流速不会太慢。
将实验结果和各单味药的研究情况进行比较，
可以发现葛根地连汤水溶性多糖的相对分子质量及
糖苷键类型与各单味药都各不相同，这说明葛根地
连汤水溶性多糖中不含有甘草多糖、地黄多糖；但其
单 组成及功能却与各单味药有相似之处，这说明
其兼具有甘草多糖、地黄多糖各自活性作用，同时还
具有配伍协调作用，疗效显著，作用机制复杂。
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万方数据
葛根地连汤水溶性多糖的研究
作者： 王晓娟， 曾和平， 魏传晚， 徐淑永， 王辉
作者单位： 王晓娟,魏传晚(南华大学化学化工学院,湖南,衡阳,421001)， 曾和平,徐淑永,王辉(华南师
范大学,化学系,广东,广州,510631)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(3)
被引用次数： 1次

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引证文献(1条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200503010.aspx