全 文 ：中草1liChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1833·
蒲葵籽提取物体外抗HIV一1活性及机制的初步研究
李春艳1’3，曾艳渡2，彭芳3，戴好富”，郑永唐¨
(1．中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室，云南昆明650223；
2．中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南海口 571101；3．大理学院药学院，云南大理671000)
摘 要：目的 研究蒲葵籽提取物的体外抗HIV一1活性，对有活性粗提物进行初步机制研究。方法采用细胞毒
性、合胞体抑制、HIV一1感染细胞保护实验和H1V一1p24抗原测定等实验对蒲葵籽提取物体外抗HIV一1活性进行
筛选和确认；采用重组HIV一1逆转录酶和蛋白酶活性抑制实验，融合阻断实验初步探讨活性粗提物的作用机制。结
果 蒲葵籽的醋酸乙酯(P3)提取物具有较强的体外抗HIV一1活性，P3抑制HlV一1诱导C8166细胞形成合胞体
的EC50为5．64pg／mI。，对C8166细胞的毒性较小，CC5。大于200pg／mL．治疗指数(TI)大于35．46；P3抑制
HIV一1急性感染中p24抗原表达的ECso为23．04pg／mL，抑制正常C8166细胞与慢性感染细胞H9／HIV一1．B融合
的ECso为8．00pg／mL；P3在质量浓度为200弘g／mI，时，对HIV一1逆转录酶的抑制率为28．86％；P3抑制重组
HIV一1蛋白酶活性的ECso为1．77pg／mL。结论蒲葵籽的醋酸乙酯提取物(P3)具有较强的体外抗HIV一1活性，
其作用机制可能主要为阻断病毒进入和抑制HIV一1蛋白酶活性。
关键词：蒲葵籽；提取物；抗H1V一1活性；HIV一1蛋白酶
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1833—06
Invitroanti—HIV一1activityofextractsfromLivistonachinensisseedsanditsmechanism
LIChun—yanl’3’4，ZENGYan_b02，PENGFan93，DAIHao—fu2，ZHENGYong—tan91
(1．LaboratoryofM lecularImmunopharmacology。KeyLaboratoryofAnimalModelsandHumanDiseaseMechanisms．
KunmingInstituteofZoology，ChineseAcademyofSciences，Kunming650223，China；2．InstituteofTrop cal
Bioscieneea dBiotechnology，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences，Haikou571101，China；
3．FacultyofPharmacy，DaliUniversity，Dali671000，China)
Abstract：ObjectiveTovaluateinvitroanti—HIV一1activitiesofthextractsfromLivistonachinensis
seeds．MethodsToscreenandconfirmtheanti—HIV一1activitiesofthexractsfromL．chinensisseed ．
thecytotoxicityassa ，syncytiumreductionassay，protectionforHIV一1inducedlyticassay，andELISA
forHIV一1p24antigenassaywereused．TheinhibitionassayofrecombinantHIV一1RTactivityand
proteaseactivity，andco-cultivationassaywereusedtostudytheprimarymechanisms．ResultsThethyl
acetateextract(P3)fromL．chinensisseedsinhibitedHIV一1potentlywithatherapeuticindex(TI)over
35．46．TheP3showedtheanti—HIV一1activitywithEC50of5．64／19／mLinsyncytiaformationassaynd
exertedcytotoxicityagainstC8166cellswithCC50>200弘g／mL．Inacuteinfection，theP3in ibitedHIV一
1p24antigenexpressionwithEC50of23．04弘g／mL．TheP3alsoinhibitedcell—to—cellH9／HIV一1IBfusion
inCO—culturewithECsoof8．00pg／mL．TheP3ataconcentrationof200pg／mLweaklyinhibitedth
recombinantHIV—lRTactivityby28．86％．ItalsoinhibitedsignificantlytherecombinantHIV一1protease
activitywithEC50of1．77pg／mL．ConclusionTheP3iseffectiveagainstHIV一1．Theanti—HIV一1
mechanismofP3mightrelatetotheblockadeofHIV一1entryintocellsinordertoinhibittheactivityof
HIV一1protease．
Keywords：Livistonachinensis(Jacq．)R．Brown；extract；anti—HIVactivity；HIV一1protease
中国艾滋病(AIDS)流行态势严重，HIV／
AIDS感染者的人数已居亚洲第2位，全球第14
位。艾滋病流行已经成为中国最为严重的社会问题
之一。由于HIV疫苗的研制尚未成功，目前抗HIV
药物治疗仍是防治艾滋病的重点。美国FDA批准
了近30种抗HIV药物的临床应用，高效抗逆转录
病毒疗法(HAART)使得HIV感染者的死亡率得
到一定的控制。然而，由于HIV易变异，耐药性和药
收稿日期：2008—03—07
基金项目：国家科技攻关计划资助项目(2004BA719 14)，中国科学院知识创新工程重要方向资助项目(KSCXl一Yw—R一15；KSCXl一
YwR一24)；云南省科技攻关计划资助课题(2004NGl2)
作者简介：李春艳(1983一)，女，云南省云县人，在读硕士生，研究方向为抗HIV药物筛选和研究。E—mail：Icyyanyan@126．com
*通讯作者戴好富郑永唐Tel、Fax：(0871)5195684E—mail：zhengyt@mail．kiz．ac．cn
万方数据
·1834· 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
物不良反应等问题日趋严重，促使人们不断寻找新
的抗HIV药物以及新靶点。从传统中药、植物和真
菌资源等天然资源中寻找抗HIV新药或先导化合
物是重要途径之一。我国至今没有一种具有自主知
识产权的抗HIV药物获准上市，开发利用我国丰富
的植物资源，研制具有我国原创知识产权、有效、价
廉的抗HIV药物，将对我国科技、经济和社会发展
具有特别重要的意义。
蒲葵Livistonachinensis(Jaeq．)R．Brown属
于棕榈科常绿乔木，主要分布于我国南方地区。蒲葵
根具有止痛和止喘的作用，其根的主要化学成分为
饱和脂肪酸酯及不饱和脂肪酸酯。通过对蒲葵根脂
肪油的研究，不饱和脂肪酸占有很大比例[1]。不饱和
脂肪酸具有抗血栓形成和抗血小板凝集作用，防止
动脉硬化、抗衰老、防癌抗癌等功效。国内外有蒲葵
提取物或化合物抗肿瘤细胞、抑制蛋白激酶活性的
文献报道乜’3j，但未见蒲葵提取物或化合物抗HIV一
1活性的研究报道。蒲葵籽的乙醇提取物对蛋白激
酶C(PKC)的活性有明显的抑制作用[4]。PKC是
一类磷脂依赖的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，它参与调
节淋巴细胞的活化、凋亡、细胞毒效应以及细胞迁移
等多种生理功能，而且与某些免疫缺陷性疾病有关。
研究发现，PKC在HIV复制周期的多个环节中起
作用，PKC可以通过多种途径刺激HIV病毒的活
化，并磷酸化病毒复制周期中的多种蛋白，如
P179ag、Nef、Rev和Vif等，这些蛋白的磷酸化在
病毒复制周期中起到了不可忽视的作用[5]。
本课题组筛选了蒲葵籽的乙醇提取物(P1)、正
丁醇提取物(P2)、醋酸乙酯提取物(P3)和石油醚
提取物(P4)的体外抗HIV—l活性，然后对其中具
有抗HIV一1活性的醋酸乙酯提取物(P3)进行了初
步的机制研究。
1材料与方法
1．1蒲葵籽和提取物：蒲葵籽于2005年11月采于
海南省海口市中国热带农业科学院内，经代正福副
研究员鉴定为棕榈科蒲葵属新会蒲葵L．chinensis
(Jaeq．)R．Brown的种子。蒲葵种子晒干粉碎
(416．0g)，用95％乙醇提取两次，滤过后减压浓缩
得到乙醇提取物(P1)。将乙醇提取物分散于水中成
悬浊液，然后依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，
减压浓缩后分别得到石油醚提取物P4(o．3488 g，
收率为0．084％)、醋酸乙酯提取物P3(1．9777 g，
收率为0．48％)和正丁醇提取物P2(8．8500g，收
率为2．12％)。以上样品均溶于DMS()，储存质量浓
度为25mg／mL，分装后4C保存。实验用时，用含
有10％小牛血清的RPMI一1640稀释。
1．2 试剂：RPMI一1640和新生小牛血清购自
Gibeo公司；十二烷基磺酸钠(SDS)、MTT、Ⅳ，Ⅳ一
二甲基甲酰胺(DMF)和TritonX一100均购自
Sigma公司；恩夫韦肽(T20，Enfuvirtide)和
HIV一1RT测定试剂盒购自Roche公司；HIV蛋白
酶底物DABCYL一7一Abu—Ser—GIn—Asn—Tyr—Pro-
Ile—Val—GIn—EDANS购自AnaSpec公司；艾滋病人
血清由日本群马大学医学部卫生学和病毒学教研室
星野洪郎(HirooHoshino)教授惠赠；辣根过氧化
物酶(HRP)标记的羊抗人IgG抗体购自华美生物
工程公司；茚地那韦(IND，Indinavir)购自Merk
公司；齐多夫定(AZT)和膦甲酸钠(PFA，
Foscarnet)购自Sigma公司。抗HIVp24单克隆抗
体、兔抗HIV一1p24多克隆抗体以及重组HIV一1蛋
白酶由本实验室制备邙’7]。
1．3仪器：ELX800酶标仪(Bio—Tek)，微量移液
器(Gilson)，EclipseTS 00倒置显微镜(Nikon)；
二级生物安全柜FormaClassl，CO。细胞培养箱
和荧光酶标仪FluoroskanA ce tFL均为Thermo
公司产品。
1．4细胞和病毒：人T淋巴细胞系MT一4、C8166，
HIV一1．B／H9和HIV一1实验株HIV一1。B由英国
MRC，AIDSReagentProject惠赠。按实验室常规
方法培养细胞和病毒。病毒滴度TCIDso(50％
tissuecultureinfectiousdose)采用Reed&
Muench方法确定，病毒小量分装于冻存管，一70C
保存。本研究所有涉及HIV操作的实验按照国际和
国家有关生物安全操作规程在生物安全三级
(BSL一3)实验室进行。
1．5 蒲葵籽提取物对C8166细胞毒性实验：用
MTT比色法测定蒲葵籽提取物对C8166细胞毒
性。在96孔细胞培养板上将4×105／mLC8166细
胞悬液100肛L与不同质量浓度的蒲葵籽提取物溶
液混合。每个质量浓度设3个复孔，同时设置阴性对
照，空白对照孔及AZT药物对照。37℃、5％COz培
养箱培养3d后，每孔加4mg／mL的MTT溶液
20肛L。37℃、5％CO。培养箱培养4h后每孔吸去
100弘L，补加100弘LSDS—DMF溶液，37C过夜。
Bio—TekELx800酶标仪测定吸光度(A)值，测定
波长为595nm，参考波长为630nm。计算出细胞毒
浓度CC50(50％cytotoxicconcentration)值，即对
50％的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的药
万方数据
中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1835·
物浓度L8]。
1．6 蒲葵籽提取物对HIV一1诱导C8166细胞形
成合胞体的抑制实验：蒲葵籽提取物在96孑L细胞
培养板上进行5倍倍比系列稀释(100f,L／孔)，然
后每孔分别加入50pLC8166细胞(8×105／mL)
和50弘L的HIV一1．B稀释上清(MOI值0．03)。每
个质量浓度设3个复孔，同时设置阴性对照孑L和
AZT为阳性药物对照。37rC、5％C0。培养箱培养
3d，在倒置显微镜下(100×)计数合胞体。计算出
抑制合胞体形成达50％时药物的浓度(50％
effectiveconcentration，EC50)及治疗指数(thera—
peuticindex，TI—CC50／EC50)L8‘。
1．7蒲葵籽提取物对HIV一1感染MT一4细胞的保
护作用：在96孔板上，将蒲葵籽提取物5倍倍比系
列稀释(100肛L／孔)，然后每孔加4×104个MT一4
细胞与HIV—1．。病毒上清(MoI值0．03)，每孑L总
体积200弘L。同时设置细胞对照孔和病毒感染细胞
对照孔。置37℃、5％C0。培养箱内培养，培养6d
后用MTT方法测定细胞存活率。用Bio—TekEL×
800酶标仪测定A值，测定蒲葵籽提取物对正常细
胞的毒性作用和对HIV一1．。感染细胞的保护率，计
算得到CC5。、EC50和TI[8]。
1．8 ELISA测定HIV一1p24抗原的表达：Triton
X一100裂解的病毒培养上清加入到预先包被有抗
HIV一1p24McAb的96孔中，37，C温育1h。充分
洗涤后，加入稀释的人单克隆抗体HIV一1血清，
37C温育Ih。充分洗涤后，加入稀释的HRP标记
羊抗人IgG，37‘C温育1h。充分洗涤后，加入OPD
底物反应液，10～15min后，2mol／L硫酸终止反
应。用Bio—TekEL×800酶标仪测定读取A值，计
算HIV一1复制的抑制率和EC5。[8]。
1．9 HIV一1感染和未感染细胞融合阻断检测：在
96孔板上，将提取物P3进行5倍倍比系列稀释
(100弘L／孑L)，然后每：fL力u入HIV一1．e慢性感染H9
细胞2×105／mL和C8166细胞6×105／mL各50
弘L。同时设阴性对照孑L和含恩夫韦肽(T20)的阳性
药物对照孔。37℃、5％CO。培养箱中培养6--8h。
倒置显微镜下(100倍)计数合胞体数，计算得到提
取物P3抑制合胞体形成达50％时的浓度(EC。。)。
1．10蒲葵籽提取物对重组HIV—lRT活性的抑
制实验：采用Roche公司的HIV一1RT测定试剂盒
检测提取物对重组HIV一1逆转录酶(HIV一1rRT)
活性的抑制作用[9]。取出试剂盒反应条，每孔滴加含
2ng重组HIV一1RT的溶液20肛L，20pL提取物
溶液和20肛L含模板和核苷酸的反应缓冲液。使提
取物的终质量浓度为200弘g／mL。设置PFA(20
／mg／mL)阳性药物对照孔和不含化合物的阴性对照
孔。置37C、1h。洗涤5次后，每：fLail入200弘L抗
DIG—POD抗体工作液。37℃温育1h，洗涤5次。
每孔滴加200弘LABTS底物反应液。室温反应
15～30rain，Bio—TekEl×800酶标仪测定A值。
1．11蒲葵籽提取物对重组HIV一1蛋白酶活性的
抑制实验：使用EnzolyteTMHIV一1蛋白酶试剂盒
(AnaSpec)测定提取物对HIV一1蛋白酶活性的抑
制作用[7’1州。在96孔板上每孔加入40弘L蛋白酶溶
液(终质量浓度为4．75ng／mL)和待测样品10
t．tL，混匀后，30℃温育15min。加入荧光标记的合
成蛋白酶底物工作液50弘L，混匀。分别在不同时间
段(0、30、45、60、90min)用荧光酶标仪上读取荧光
值。计算出抑制率和EC。。。
1．12 统计学处理：实验资料以z士s表示，采用
SPSS13．0统计分析软件，对组间实验数据进行单
因素方差分析及LSD—t检验。
2结果
2．1 蒲葵籽提取物对C8166细胞的毒性作用：从
图1可见，蒲葵籽的乙醇提取物(P1)、正丁醇提取
物(P2)、醋酸乙酯提取物(P3)对C8166细胞的毒
性较小，CC。。均大于200弘g／mL。蒲葵籽石油醚提取
物(P4)有一定的毒性，其CC5。为68．72弘g／mL。
—_-AZT
—-o—P1+P2+P3
—蕾一P4
提取物质量浓度／(pg’mE,-。)
图l蒲葵籽提取物对C8166细胞的毒性作用(x±s，n一3)
Fig．1Cytotoxicityofex ractsfromL．chinensis
seedsonC8166cells(；士s，n一3)
2．2蒲葵籽提取物对HIV一1诱导C8166细胞形
成合胞体的抑制作用：HIv一1感染C8166细胞后，
感染细胞与未感染细胞将会相互作用并融合形成合
胞体，通过计数合胞体的数量可以判断提取物对
HIV一1感染细胞的抑制作用。如图2所示，提取物
P3具有显著抑制HIV一1诱导C8166细胞形成合胞
体的活性，EC。。为5．64pg／mL，TI大于35．46；提取
∞∞∞鲫∞柏加0
《龉蜒忙善最
万方数据
·1836· 中草1i5ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
物P1、P2和P4对HIV一1诱导C8166细胞形成合胞
体的抑制作用弱于提取物P3，EC。。分别为24．91、
20．82、11．72pg／mL，其T1分别大于8．03、9．61、
5．86。阳性对照药物AZT的EC5。为4ng／mL。
AZT质爱浓度／(ug·mL4)
000160．0080．04 l 2
芝
糌
磊
嚣
疆
碘
兰
墓
≈Ⅱ
提取物质量浓度／(pg·mL-。)
图2蒲葵籽提取物对HIV-1诱导C8166细胞形成
合胞体的抑制作用(；土s，辟一3)
Fig．2InhibitionofextractsfromL．chinensisseeds
onHIV一1inducingsyncytiumformation
(；土s，n=3)
2．3蒲葵籽提取物对HIV一1致MT一4细胞死亡的
保护作用：HIV一1体外感染MT一4细胞后4～6d，
被感染的MT一4细胞会发生死亡，化合物或提取物
如能抑制病毒的复制，细胞存活率就会增加。从图3
中可知，提取物P1和P2在高质量浓度下对体外
HIV—l感染MT一4细胞有一定的保护作用。在200
肛g／mL时，提取物P1和P2对HIV一1感染MT一4
细胞的保护率分别是57．25％、67．99％。提取物P3
和P4未显示出对体外HIV—l感染MT一4细胞的
保护作用。提取物P1、P2、P3和P4对体外HIV一1
感染MT一4细胞保护作用的EC。。分别是158．9、
114．02、大于200、大于200pg／mL。
120
芝
茎80
隧
霎 40
寐
馋0
·20
AZT质景浓度／(ug·mL-1)
0．000320．ool60．0080．04 0．2 l
AZT
Pl
P2
P3
P4
提取物质量浓度／(pg·mL‘)
圈3蒲葵籽提取物对HIV一1感染MT一4细胞的
保护作用(；士s，n一3)
Fig．3ProtectionofextractsfromL．chinensisseeds
onHIV一1infectedMT一4cells(；±$，糟一3)
2．4蒲葵籽提取物P3对HIV一1急性感染病毒复
制的影响：HIV一1p24为病毒核衣壳蛋白，HIV一1感
染细胞培养上清中p24量的变化i是判断待测样品
抑制病毒复制的重要指标和通用指标。根据细胞毒
性实验和抑制HIV一1诱导细胞合胞体形成实验，蒲
葵籽的4个提取物中P3具有显著体外抗HIV一1活
性。采用ELISA法测定HIV—lp24抗原表达，观察
提取物P3对HIV一1急性感染的病毒抑制作用。
AZT在2#g／mL时，抑制HIV一1p24抗原活性高，
且在此质量浓度下对C8166细胞毒性小，以此为对
照进行LSD—t检验。从表1可知，提取物P3在质量
浓度为200～0．064pg／mL的抑制率与阴性对照及
AZT对照差异非常显著(P制HIV一1p24抗原表达呈剂量依赖性，其ECso为
23．04弘g／mL。AZT的EC5。为0．046pg／mL。
表1蒲葵籽提取物P3对HIV—l急性感染中p24
抗原表达的抑制作用(；士s，露=3)
TableInhibitionofP3onp24antigenexpression
inHIV一1acuteinfection(；土s，以一3)
与阴性对照比较：一P。。P2．5蒲葵籽提取物P3对HIV一1慢性感染细胞与
未感染细胞间融合的抑制作用：未感染细胞C8166
与慢性感染H9细胞共培养后，会相互融合形成合
胞体。化合物或提取物如能干扰感染细胞表面
gpl20与未感染细胞CD4受体的结合，就能抑制
HIV—l慢性感染细胞与未感染细胞间的融合。作用
于该靶点的抗HIV药物如恩夫韦肽(T20)就表现
出很强的抑制细胞融合作用。在0．04vg／mL时，
T20完全地抑制了细胞融合的发生(表2)。以0．2
pg／mL的T20进行实验组与对照组比较，提取物
P3在200pg／mL时，对HIV一1慢性感染细胞与未
感染细胞问融合的抑制率为100％，与阴性对照差
异具有统计学意义(P<0．01，表2)；提取物P3在
加∞
∞
∞
加加
o
∞
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1837·
表2提取物P3对HIV—l慢性感染细胞与未感染细胞问
融合的抑制作用(工士s，一一3)
Table2 InhibitionofP3oncell··to·-cellfusioninCO--culture
betweenHIV—lchronicinfectionandu infected
cells(；士s，万一3)
与阴性对照比较：一P‘‘P40～0．064pg／mL的抑制率与阴性对照和T20对
照差异都具有统计学意义(尸<0．01，表2)。提取物
P3也有一定的干扰细胞融合作用，在40弘g／mL
时，该提物能够抑制75．38％的细胞融合，其EC。。
为8．00ug／mL。T20的EC50为0．00042弘g／mL。
2．6蒲葵籽提取物P3对HIV一1逆转录酶的体外
活性抑制作用：逆转录酶是HIV复制过程中必需参
与的关键酶，是抗HIV药物最重要的靶点。提取物
P3对重组HIV一1RT表现出微弱的体外抑制活性
作用。在质量浓度为200肛g／mL时，提取物P3(200
pg／mL)能够抑制28．86％的体外重组的HIV一
1RT活性。阳性对照药膦甲酸钠(PFA，20肛g／mL)
则表现出很好的抑制HIV—lRT活性(图4)。
2．7蒲葵籽提取物P3对HIV一1蛋白酶的体外活
性抑制作用：实验利用荧光共振能量传递
图4提取物P3对重组的HIV一1逆转录酶活性
的体外抑制作用
Fig．4InhibitionofP3onrecombinant
HIV-1RTactivityinvitro
(fluorescenceresonancee ergytransfer，FRET)
原理，在合成的蛋白酶底物两端分别偶联荧光发光
基团和淬灭基团，通过检测底物被切割后产生的荧
光强度来测定蛋白酶反应活性。提取物P3在200～
8／Ⅱg／mL时，抑制HIV一1蛋白酶活性差异具有统计
学意义(表3)，提取物P3对重组HIV一1蛋白酶的体
外活性抑制作用呈质量浓度依赖性，其EC。。为1．77
弘g／mL，茚地那韦(INV)的EC50为0．076ng／mL
(表3)。
表3提取物P3对HIV—l蛋白酶活性的体外抑制作用
(；±s，辟一3)
Table3 InhibitionofP3onHIV一1protease
activityinvitro(工士s，意一3)
与阴性对照比较：。P<0·05一尸’P<0．05。’P3讨论
中药作为我国的传统医药和中华民族瑰宝，不
仅为我国人民的健康水平做出了巨大贡献，也是我
国医药产业的三大支柱之一，在经济发展中发挥了
重要作用。从我国国情出发，利用中医药的独特性及
经济性，开发传统的具有我国特色的抗HIV药物或
抗艾滋病辅助药物是完全可能和可行的。中药有效
部位是经过筛选确定的某一中药或复方中的各类有
效成分的组合，是研发有效部位新药和活性跟踪有
效成分或先导化合物的基础。
国内外曾对蒲葵提取物或化合物的抗肿瘤细
胞、抑制蛋白激酶活性做过初步研究。发现蒲葵根醋
酸乙酯部分和从蒲葵籽中分离出的化合物薯蓣皂苷
元在体外具有抗肿瘤作用‰11]。陈屏等m3也从蒲葵
籽的醋酸乙酯部位和石油醚部位分得8个化合物，
并对化合物表儿茶素进行5个肿瘤细胞株的活性筛
选；蒲葵籽的水提物体外有抑制血管和肿瘤生长作
用，体内实验也证明该提取物有抗肿瘤活性[1引，从
蒲葵籽乙醇提取物中纯化得到的LC—X具有体外抗
加
∞
∞
∞
∞
加
0
《瓣磊暴
万方数据
·1838· 中草蒋 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
肿瘤和抑制蛋白激酶活性，且在人的肿瘤细胞中能
选择性地抑制表皮生长因子受体(EGFR)[3]。蒲葵
果实水提取物和乙醇提取物体外有抑制细胞增殖，
抗氧化作用，在非特异性酯酶实验中，乙醇提取物还
能诱导HL一60细胞的单核细胞或巨噬细胞分化且
有剂量依赖性n引。
本实验通过对蒲葵籽的4个提取物进行初筛，
表明蒲葵籽的醋酸乙酯提取部分(P3)具有体外抗
HIV一1活性。P3能阻断HIV一1慢性感染细胞与正
常细胞的融合，提示其作用靶点或靶点之一可能为
阻断病毒进入细胞。通过基因工程重组HIV—l蛋白
酶和逆转酶的体外活性抑制实验，发现提取物P3
能有效的抑制蛋白酶活性，也有微弱的抑制逆转录
酶活性。由此可见，蒲葵籽的醋酸乙酯提取物具有较
强的体外抗HIV一1活性，其作用机制可能主要为阻
断病毒进入和抑制HIV一1蛋白酶活性。目前本课题
组正在对蒲葵籽的醋酸乙酯提取物P3进行进一步
的分离纯化，希望从中筛选出具有抗HIV活性的化
合物，明确其作用机制。
参考文献：
[1]何小玉，崔建国．黄初升，等．蒲葵根中脂肪油的GS—MS联
用分析口]．化工技术与开发，2003，32(2)：32．
[23钟振国，张凤芳，张雯艳。等．蒲葵根提取物的体外抗肿瘤
实验研究EJ]．中药材，2007，30(1)：60—63．
[3]HuangWC，HsuR M，ChiLM，eta1．Selective
downreguIationofEGFreceptorand ownstremMAPK
[4]
Is]
E6]
[7]
[8]
[9J
Do]
1-11-1
[123
E13-1
E14]
pathwayinhumancancercell inesbyactivecomponets
partiallypurifiedformtheseedsofLivistonachinensisR．
BrownEJ]．CancerL“f，2007，248(1)：137—146．
黄才，覃燕梅，梁念慈．石上柏和蒲葵籽对蛋白激酶C活
性的影响[J]．中草药，1995。26(8)：414—416．
张高红．唐宏，郑永唐．蛋白激酶c在HIV复制中的作用
与药物发现l-J3．中国药理学通报，2005，21(9)：1025—
1029．
LiuGJ，WangJ P。XiaoJ C，eta1．Preparationand
characterizationofthreem oclonalantibodiesagainstHIV一1
p24capsidprotein[J]．CellMolmmunol，2007，4(3)：203—
208．
王云华，王睿睿，杨柳萌。等．HIV-1蛋白酶的表达、纯化及
其抑制剂体外筛选方法的建立eli．中国病毒学，2006，21
(2)：126一130．
WangRR，GuQ，YangI。M，eta1．Anti—HIV一1activities
ofextractsfromthemedicinalplantRhuschinensisEJ-I．J
Ethnopharmacol·2006·105：269—273．
WangJH，TamS C。HuangH，甜a1．Site—directed
PEGylationoftrichosanthinre a editsanti—HIVactivity
withreducespotencyinvitro[J]．BiochempbsR s
Commum，2004。317：965—971．
WangYH，TangJG，WangRR，eta1．AnovelBeta—
carbolinecompoundwithanti—HIV一1actions[J]．Biochem
BiophysReCommun，2007，355(4)：1091—1095·
刘志平，崔建国，黄初升，等．蒲葵籽中有效化学成分的研
究[J]．中草药，2007，38(2)：178—180．
陈屏，杨峻山．蒲葵籽化学成分研究EJ-I．中草药，2007，
38(5)：665—667．
SartippourMR．LiuC，ShaoZM，eta1．Livistonaextr ct
inhibitsangiogenesisandcancerg owthEJ-i．OncolRe／,，
200l，8(6)：1355—1357．
CheungS，TaiJ．InvitrostudiesofthedryfruitofChinese
fanplamLivistonachinensis[J]．OncolRe／,，2005，14：1331—
1336．
20(S)一原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠
肿瘤生长的抑制作用
张锐，徐华丽，曲绍春，于小风，陈明侠，睢大贫+
(吉林大学药学院药理教研室，吉林长春130021)
摘 要：目的 研究20(S)一原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采
用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)一原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用，流式细胞术测定20(S)一原
人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响，并在裸小鼠人肺癌模型E观察20(5)一原人参二醇对荷瘤裸
小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)一原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系，并
且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰，24小时凋亡率分别为32．47％、32．75％、33．51％。荷瘤裸小鼠动物实验
表明，20(S)一原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用，抑瘤率分别为18．78％、34．37％、50．02％。
结论20(S)一原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。
关键词：20(S)一原人参二醇；A549细胞；肺癌；裸小鼠
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1838—04
收稿日期：2008—03—29
基金项目：国家“九五”重点科技攻关课题(96—901—01—83)
作者简介：张锐(1978一)，女，博士研究生，研究方向为抗肿瘤药物研究。Tel：(0431)85619705E—mail：zgrl219@163．com
*通讯作者睢大贫Tel：(0431)85619705E—mail：suidy@jlu．edu．cn
万方数据
蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性及机制的初步研究
作者： 李春艳， 曾艳渡， 彭芳， 戴好富， 郑永唐， LI Chun-yan， ZENG Yan-bo， PENG Fang
， DAI Hao-fu， ZHENG Yong-tang
作者单位： 李春艳,LI Chun-yan(中国科学院昆明动物研究所,动物模型和人类疾病机理重点实验室,分
子免疫药理学实验室,云南,昆明,650223;大理学院药学院,云南,大理,671000)， 曾艳渡,戴
好富,ZENG Yan-bo,DAI Hao-fu(中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南,海口
,571101)， 彭芳,PENG Fang(大理学院药学院,云南,大理,671000)， 郑永唐,ZHENG Yong-
tang(中国科学院昆明动物研究所,动物模型和人类疾病机理重点实验室,分子免疫药理学实
验室,云南,昆明,650223)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(12)
被引用次数： 1次

参考文献(14条)
1.何小玉;崔建国;黄初升 蒲葵根中脂肪油的GS-MS联用分析[期刊论文]-化工技术与开发 2003(02)
2.钟振国;张凤芳;张雯艳 蒲葵根提取物的体外抗肿瘤实验研究[期刊论文]-中药材 2007(01)
3.Huang W C;Hau R M;Chi L M Selective downregulation of EGF receptor and downstrem MAPK pathway in
human cancer cell lines by active eomponets partially purified form the seeds of Livistona chinensis
R.Brown[外文期刊] 2007(01)
4.黄才;覃燕梅;梁念慈 石上柏和蒲葵籽对蛋白激酶C活性的影响 1995(08)
5.张高红;唐宏;郑永唐 蛋白激酶C在HIV复制中的作用与药物发现[期刊论文]-中国药理学通报 2005(09)
6.Liu G J;Wang J P;Xiao J C Preparation and characterization of three monoclonal antibodies against
HIV-1 p24 capsid protein[期刊论文]-Cellular & Molecular Immunology 2007(03)
7.王云华;王睿睿;杨柳萌 HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立[期刊论文]-中国病毒学
2006(02)
8.Wang R R;Gu Q;Yang L M Anti-HIV-1 activities of extracts from the medicinal plant Rhus chinensis
[外文期刊] 2006(1-2)
9.Wang J H;Tam S C;Huang H Site-directed PEGylation of trichosanthin retained its anti-HIV activity
with reduces potency in vitro[外文期刊] 2004
10.Wang Y H;Tang J G;Wang R R A novel Betacarboline compound with anti-HIV-1 actions[外文期刊]
2007(04)
11.刘志平;崔建国;黄初升 蒲葵籽中有效化学成分的研究[期刊论文]-中草药 2007(02)
12.陈屏;杨峻山 蒲葵籽化学成分研究[期刊论文]-中草药 2007(05)
13.Sartippour M R;Liu C;Shao Z M Livistona extract inhibits angiogenesis and cancer growth 2001(06)
14.Cheung S;Tai J In vitro studies of the dry fruit of Chinese fan plam Livistona chinensis 2005

本文读者也读过(10条)
1. 陈艳.林新华.李少光.翁绳美.姚宏.CHEN Yen.LIN Xinhua.LI Shaoguang.WENG Shengmei.YAO Hong 蒲葵子的体
外抗癌活性[期刊论文]-福建医科大学学报2008,42(2)
2. 王慧.董小萍.李傲.潘晓丽 蒲葵子脂肪酸组成分析[期刊论文]-成都中医药大学学报2008,31(2)
3. 秦盛莹.刘雯.张园园.陈晓辉.劳佳.毕开顺.QIN Sheng-ying.LIU Wen.ZHANG Yuan-yuan.CHEN Xiao-hui.LIAO
Jia.BI Kai-shun 4种中药抗肿瘤活性的初步研究[期刊论文]-西北药学杂志2007,22(1)
4. 王慧.李傲.董小萍.徐晓玉.WANG Hui.LI Ao.DONG Xiao-ping.XU Xiao-yu 蒲葵子抗肿瘤活性部位筛选及抗血管
生成作用[期刊论文]-中药材2008,31(5)
5. 钟振国.张凤芬.张雯艳.崔建国.ZHONG Zhen-guo.ZHANG Feng-fen.ZHANG Wen-yan.CUI Jian-Guo 蒲葵根提取物
的体外抗肿瘤实验研究[期刊论文]-中药材2007,30(1)
6. 陈屏.杨峻山.CHEN Ping.YANG Jun-shan 蒲葵籽化学成分的研究[期刊论文]-中国药学杂志2008,43(21)
7. 郭健.刘义.李延平.宋文东.梁伟钧 银杏叶总提取物对H2O2诱发的心肌细胞损伤的保护作用[期刊论文]-中草药
2008,39(12)
8. 兰万成.李俊.罗翌.丁邦晗 甘草人参汤治疗急性消化性溃疡出血67例[期刊论文]-新中医2008,40(10)
9. 张诚光.许家骝.罗霄山 抗病毒颗粒治疗流感的实验研究[期刊论文]-吉林中医药2004,24(5)
10. 陈伟平.卢宪伟.梁健宜.吕小亮.韦继政.曾永壮.刘笑云 清幽胃方治疗胃络瘀血型幽门螺杆菌相关慢性胃炎
35例疗效观察[期刊论文]-新中医2008,40(10)

引证文献(1条)
1.杨洁.孙魏.刘叔文 天然来源HIV进入抑制剂的研究进展[期刊论文]-中草药 2009(11)


本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200812027.aspx