全 文 ：·1878· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月
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细辛挥发油对植物病原真菌的抑制作用研究
刘海燕1，范 婧1，高微微r，国 辉1，李荣英2，李学兰2
(1．中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所，北京100094f2．年国医学科学院
中国协和医科大学药用植物研究所云南分所，云南景洪666100)
摘 要；目的测定细辛挥发油抗药用植物病原真菌的活性，探讨其抗菌作用机制。方法 以“甲霜灵”和“农抗
120”为对照农药，采用菌丝生长速率法测定细辛挥发油对5种植物病原真菌的毒力作用，求得毒力方程和ECso，比
较细辛挥发油与两种常用农药的作用；以枸杞炭疽病菌为作用对象，采用电导率法测定细辛挥发油对菌丝细胞膜
的损伤作用。结果在5种供试菌中，细辛挥发油对西洋参疫病菌的抑制作用最强，ECso值为59．70pg／mL，与“甲
霜灵”相近；对枸杞炭疽病菌抑制作用最弱，EC；。值为410．20gglmL，介于“甲霜灵”和“农抗120”之问，对砂仁叶枯
病菌、烟草赤星病菌、土生链格孢菌的EC；。在296．48～334．13ttg／mL，高于“甲霜灵”，与“农抗120“相近。供试菌在
细辛挥发油作用5．0、10．0h后，菌丝细胞外渗液电导率值随着作用时间延长丽增加。分别为7．9001、9．4760gS／
cm，明显高于空白对照组1．8677、1．7956pS／cm(P
炭疽病菌菌丝细胞膜损伤，引起内容物外渗．细胞膜是细辛挥发油对植物病原真菌的作用靶点之一。
关键词：细辛；挥发油；植物病原真菌；抗菌活性
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)12—1878一04
Inhibitionofessentialo lfromAsarumheterotropoidesvat．mandshuricum
againstplantpathogenicfungi
LIUHai-yanl，FANJin91，GAOWei—weil，GUOHuil，LIRong—yin92，LIXue—lan2
(1．InstituteofMedicinalPl ntDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciences’andPekingUnionMedicalCollege，
Beijing100094，ChinaI 2．I stituteofMedicinalPl ntDevelopment，YunnanBranch，ChineseAcad my
ofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCo lege，Jinghong666100，China)
Keywords：AsarumheterotropoidesFr．Schmidtvar．mandshuricum(Maxim．)Kitag；essentialoil；
plantpathogenicfungi；antifungalactivity
细辛AsarumheterotropoidesFr．Schmidtvar．
mandshuricum(Maxim．)Kitag．为马兜铃科草本
植物，细辛全草干燥后，在我国作为重要中药，主要
用于治疗感冒、鼻炎、喉炎、哮喘、胃炎、口腔糜烂、风
湿性关节痛等症。有文献报道细辛提取物对人类致
病菌白色念珠菌、伤寒杆菌以及引起食物腐败的黄
曲霉、黑曲霉有抑菌作用[1’23；另外对人参黑斑病菌
Alternariapan x、西洋参根疫病菌Phytophthora
cactorum、腐皮镰孢Fusariumsol n 、番茄灰霉病菌
Botrytisc nerea等植物病原菌也具有较好的抗菌效
果[3“]。上述研究结果提示，细辛对环境中气生和士
生的有害微生物均有一定的作用，具有开发成为植
物杀菌剂的潜力。在前期的研究中，笔者通过对不同
溶剂提取的细辛提取物的抑菌作用比较，发现细辛
收稿日期；2007—03—15
基金项目：国家“十五”科技专项创新药物与中药现代化项目资助(2001BA701A58)
作者简介：刘海燕(1979一)，女，内蒙古人，北京协和医科大学在读研究生，主要从事药用植物抗菌活性研究。
*通讯作者高微微Tel8LFax：(010)62899737E—mail：gaovvll8@sina．com
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·1879·
的抗菌成分主要存在于挥发油中，细辛挥发油对植
物病原真菌具有较为广谱的抑菌活性[5]。本实验选
择枸杞炭疽病菌、砂仁叶枯病菌和西洋参疫病等5
种植物病原真菌为目标真菌，以两种常用农药为对
照，研究比较细辛挥发油抗植物病原真菌的活性强
弱，并初步探讨其对真菌的作用机制。
1材料与方法
1．1供试药剂：细辛购自安国中药材市场，经中国
科学院植物研究所陈艺林教授鉴定为北细辛A
heterotiopoidesFr．Sehmidtvat．mandshuricum
(Maxim．)Kitag．。按照2005年版《中国药典》附录
XD方法[61提取挥发油，得率为2．125％，置4℃冰
箱中保存备用。
对照药剂“农抗120”(4％水剂，HarimycanCIr
H。，o。N。)，为陕西蒲城绿盾生物制品有限公司生
产；“甲霜灵”(metalaxyl，58％原药)江苏宝灵化工
股份有限公司提供，为国产化学纯试剂。
1．2 供试病原菌：枸杞炭疽病菌Colletotrichum
gloeosporioidesPenz．由宁夏农林科学院植保所提
供，砂仁叶枯病菌Pestalotiasp．由中国医学科学院
药用植物研究所云南分所提供，烟草赤星病菌
Alternarialongipes(EllisetEv)Tisdaleet
Wadkins、土生链格孢A．humicolaOudemans由中
国科学院微生物研究所提供，西洋参根疫病菌
Phytophthoracactorum(LebetCohn)Schrot由本
实验室分离鉴定并保存。
1，3生长速率法[7]测定各药剂对5种病原真菌的
毒力作用：在预备试验基础上，选择各药剂对菌丝生
长抑制率在10％～90％的6个浓度；将供试药剂用
无菌水配制成系列浓度的含药PDA培养基，倒入
灭菌的培养皿中，接种①5mm菌饼，25--28℃培
养，96h后测定菌落直径(ram)，计算抑制率，将抑
制率换算成几率值(y)、药剂质量浓度(p．g／mL)换
成对数值(X)，求出毒力回归方程(y—a+bX)和
相关系数(r)，计算抑制供试病菌生长50％的药物
浓度(EC5。)。
1．4 电导法[83测定各药剂对枸杞炭疽病菌菌丝细
胞膜通透性的影响：用灭菌的重蒸水配制浓度为
EC。。的细辛挥发油、“农抗120”、“甲霜灵”药液，将
处于对数生长期的菌丝用重蒸水洗涤3次，抽滤后
分别称取一定量菌丝加到上述药液中，以灭菌的重蒸
水作对照，各处理重复3～4次，室温下放置2．5、
5．0、10．0h后，用DDS--307电导仪测定电导率，扣
除背景，用SPSS11．0进行方差分析和多重比较。
2结果与分析
2．1药剂对5种病原真菌的毒力作用和有效中浓
度：检测结果表明(表1)，“甲霜灵”对供试的5种植
物病真菌菌丝生长均具有较强的抑制作用，EC∞
均<50pg／mL。“农抗120”对西洋参根疫病菌、枸杞
炭疽病菌的EC5。分别为3162．28、l148．15pg／
mL，抑制作用较差，对砂仁叶枯病菌和交链孢属两个
菌属真菌的EC。。在298．46～467．74弘g／mL。细辛挥
发油对西洋参疫病菌的抑制作用较强，EC；。为59．70
pg／mL，与“甲霜灵”相当；对椅杞炭疽病菌EC。。为
410．20ug／mL，活性介于“甲霜灵”和“农抗120”之
间；对另外3个菌的EC5。在296．48～334．13t,g／
mL，活性低于“甲霜灵”，但与“农抗120”接近。
表1药剂对5种病原真菌毒力作用
Table1 ToxicityofchemlcMstofivefungi
2．2药剂对枸杞炭疽病菌菌丝细胞膜通透性的影
响：由表2可以看出，用浓度为EC。。的“甲霜灵”、
“农抗120”、细辛挥发油处理枸杞炭疽病菌菌丝，随
着处理时闻的延长，对照组电导率值没有显著变化，
各处理组电导率值逐渐增大。多重比较结果显示，
“甲霜灵”、“农抗120”试验组在2．5、5．0、10．0h电
导率值均显著高于对照组(P<0．01)；细辛挥发油
组在处理2．5h时电导率值低于对照组，5．0、10．0
h后电导率值迅速增加为7．90、9．48pS／cm，显著
高于对照组的1．87、1．80肛S／cm(尸<0．01)；在作
用5h时细辛挥发油组显著高于“甲霜灵”(P<
0．05)，与“农抗120”作用效果无显著差异(P>
0．05)；10h时细辛挥发油组与“甲霜灵”及“农抗
120”相近。这些结果表明“甲霜灵”、“农抗120”、细
辛挥发油均可以作用于病原菌细胞膜，破坏细胞膜
的完整性，降低细胞膜选择通透性，使细胞内物质大
量外渗，导致渗出液的电导率值增高。但这种作用较
万方数据
·1880· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月
表2药剂对枸杞炭疽病菌菌丝细胞膜通透性的影响
Table2 Effectofchemicalsoncellmembrancepotential
permeabilityofC。gloeosporioideshypha
同一列数字后不同字母表示各处理在P—o．05或P=o．Ol水
平上差异显著
Differentl ttersincolumnmeansignificantdifferencebetween
treatmentsatP一0．05andP一0．01level
两种农药慢，在处理5h后才能表现。
3讨论
本试验所选的靶标菌主要是药用植物病原真
菌，从生态分布上包括气生和土生真菌，其中枸杞炭
疽病茵、砂仁叶枯病菌、烟草赤星病菌分别引起枸
杞、砂仁、烟草地上部叶片和果实病害，西洋参根疫
病菌引起西洋参全株性萎蔫、土生链格孢可引起药
用植物Alangiumlamarckii叶斑病，棉花幼苗根病
等[9^0|，均为生产中的重要病害，造成产量、质量下
降，甚至造成毁灭性损失。目前中药材病害防治几乎
全部使用化学农药，并且由于缺乏有效的监督和管
理机制，致使中药材中农药残留超标现象极为普遍，
开发对非靶标生物安全、环境相容性好的生物农药
是我国农药开发的重要方向之一，同时也是减少中
药产品中农药残留、生产绿色中药材的重要途径。
毒力试验测定结果表明，细辛挥发油对5种病
原真菌的抗菌活性有明显差异，对西洋参疫病菌的
抑制作用最强，与生产上常用的化学农药“甲霜灵”
接近。“甲霜灵”属苯酰胺类杀菌剂，主要用于霜霉
菌、疫霉菌和腐霉菌引起的多种病害，通过抑制作用
比较，说明细辛挥发油在抗疫病方面有一定的开发
前景，但尚需要进一步的田问验证。“农抗120”属碱
性核苷类农用抗生素，用于白粉病、疫病、叶斑病、纹
枯病，瓜类枯萎病菌引起的病害，以预防保护作用为
主，兼具一定的治疗作用，本试验中“农抗120”对刺
盘孢属、疫霉属真菌直接抑制作用较差，与以往报道
相同，而细辛挥发油对刺盘孢属真菌枸杞炭疽病菌
的抑制作用明显好于“农抗120”。
真菌的细胞壁、细胞膜在维持细胞固有形态，细
胞高渗状态、完成胞内外物质交换、营养物质吸收、
生物合成等方面起重要作用，因此真菌细胞膜的活
性成分生物合成以及膜结构的完整性成为抗真菌药
物研究的重要靶点。目前，研究天然植物成分对真菌
细胞膜作用的方式主要通过电镜观察、测定细胞膜
中成分的量的变化以及测定细胞电解质渗漏的变化
来进行。夏忠第等[11]用电镜观察发现山苍子油乳剂
使白色念珠菌胞壁疏松、膜密度减少，张龙[12]通过
测定细胞壁、细胞膜中麦角甾醇的量韵变化考察杀
菌剂绿帝和银泰防治小麦纹枯病菌Rhizoctonia
cerealis的作用机制，罗曼[133发现柠檬醛使黄曲霉
细胞电解质渗出率增加，提示细胞膜受到损伤。本实
验以枸杞炭疽病菌为靶标菌，研究细辛挥发油对菌
丝细胞膜通透性的影响，并与“甲霜灵”和“农抗
120”进行了比较。以往文献报道[7]‘‘甲霜灵”对掘氏
疫霉菌的细胞膜通透性有显著影响，“农抗120”的
主要杀菌原理是直接阻碍植物病原菌蛋白质的合
成，导致病菌死亡，对菌体细胞膜的影响未见报道。
本试验显示3种药剂作用于枸杞炭疽病菌后，细胞
外渗液的电导率值均随处理时间延长而增加，且显
著高于同时间段的空白对照组(P<0．05)，表明3
种药剂都可以作用于细胞膜，造成菌丝细胞膜选择
通透性的降低，导致内容物的外渗，可能具有同样的
作用方式。但细辛挥发油在处理菌丝2．5h时电导
率值低予对照组，5h时才表现出对细胞膜的破坏
作用，与“甲霜灵”、“农抗120”相比，细辛挥发油的
作用比较缓慢。
由于细辛挥发油中含有多种单体成分，抗菌作
用效果可能是多种成分协同、多靶点作用的结果，本
实验只对其作用于细胞膜的影响进行了研究，有关
对菌体其他细胞器及对细胞能量代谢和生物合成的
影响正在研究中。
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氮、磷、钾对益母草生长及水苏碱和总生物碱影响的研究
张燕1，王文全，杜世雄2，魏菊1，解军波1，侯富强3，许永新3
(1．北京中医药大学中药学院，北京100102；2．北京济世恩康中草药种植中心，北京101511；
3．北京市农业局，jE京100029)
摘要：目的研究氮、磷、钾肥对益母草生长发育及次生代谢物的影响。方法采用大田试验与室内分析相结合
的方法。结果益母草各项生长、产量及水苏碱和总生物碱的量基本均为复肥型高于单肥型，复肥型中又以营养平
衡型大于营养失调型，但单施氮肥对以上各项指标均有很大促进作用。在复肥型中，足量磷元素与氮元素的合理配
施可以提高氮的肥效。结论 以益母草株高、叶片数、分蘖数、产量及水苏碱和总生物碱的量为评价标准，根据氮、
磷、钾二次肥料数学模型的计算结果，确定最佳施肥量为：N：37．5～44．09／m2，P：37。4～54．3g／m2，K；31．6～34·4
g／m2，氮、磷、钾的最佳配比为4：4．5：3．3。
关键词：益母草；施肥}生长；产量；水苏碱；总生物碱
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)12—1881—04
Effectsofnitrogen，phosphorus，andotas iumonsee linggrowthandstachydrine
andtotal kaloidfromLeonurusjaponicus
ZHANGYanl，WANGWen—quanl，DUShi—xion92，WEIJul，
XIEJun-b01，HOUFu—qiangS，XUYong—xin3
(1．CollegeofChineseMateriaMedica，BeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Beijing100102，China；
2．BeijingFavorandHealthServingHerbalCultivationCenter，Beijing101511，Chinal
3．BeijingAgricultureBureau，Beijing100029，China)
Abstract：ObjectiveTos udytheffectsofdifferentl velsandcombinationsofnitrogen(N)，
phosphorus(P)，andpotassium(K)onthegrowtha dsecondarymetabolitesofL onurusjaponicus．
MethodsThegrowthandyieldquantitiesandstachydrineandtotalkaloidcontentsofL．japonicusin
differentf r ilizationtreatmentswereinvestigatedand、comparedinthcombinationof rialfieldandindoor
analysis．ResultsThegrowthquantitiesandstachydrineandtotal kaloidcontentsofL．japonicusin
complexf rtilizationtreatmentsarebetterthanthoseinsingleelementfertilizationtreatment。andin
complexfertilizationtreatments，nutritionbalancetypesarebetterthanmaladjustmenttyp ．However，
nitrogenfertilizerplaysagreatroleinpromotingheaboveindexes．Incomplexfertilizationtreatments，
reasonablyfertilizingPto etherwithNcallimprovetheuptakingefficiencyof itrogen．Conclusion
、Accordingtotheresultsoffertilizationm thematicmodel，theoptimumfertilizationdosagesshouldbe
primarilydefinedasN：37．5—44．0g／m2，P：37．4—54．3g／m2，K：31．6—3“4g／m2，theoptimum
fertilizationdosageratioofN—P—KiS4：4．5：3．3basedontheheightandnumbersofleafandtilleringof
L．japonicusaswellasyieldandthecontentsofstachydrineandtotalkaloids．
Keywords：LeonurusjaponicusHo tt．；fertilization；growth；yield，stachydrine；totalalkaloids
收稿日期：2007—02—22
基金项目：国家发改委北京中药材良种选育基地建设系统工程(8)；北京市自然科学基金课题(6042021)
作者简介：张燕(1978一)，女，山东泰安人，北京中医药大学博士，主要研究方向为矿质元素对药用植物有效成分积累的影响。
E-mail：zhangyan8669@126．comTel：13691318669
*通讯作者王文全Tel：(010)84738623E—mail：wwq57@126．COY／I
万方数据
细辛挥发油对植物病原真菌的抑制作用研究
作者： 刘海燕， 范婧， 高微微， 国辉， 李荣英， 李学兰， LIU Hai-yan， FAN Jing， GAO
Wei-wei， GUO Hui， LI Rong-ying， LI Xue-lan
作者单位： 刘海燕,范婧,高微微,国辉,LIU Hai-yan,FAN Jing,GAO Wei-wei,GUO Hui(中国医学科学院
,中国协和医科大学,药用植物研究所,北京,100094)， 李荣英,李学兰,LI Rong-ying,LI
Xue-lan(中国医学科学院,中国协和医科大学,药用植物研究所云南分所,云南,景洪,666100)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(12)
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