全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1137·
与模型组比较：’P
Fig．3EffectofBYTonproliferationoflymphocyte
inimmune—depressedmicetreatedbycY
淋巴细胞是在免疫应答过程中起核心作用的免
疫活性细胞，按其功能可分为T细胞、B细胞和NK
细胞。T和B淋巴细胞可分别在致有丝分裂原
ConA和LPS的刺激下由静止期淋巴细胞转化为淋
巴母细胞，发生有丝分裂而增殖；NK细胞是机体维
持免疫监视功能的主要细胞之一，在免疫调节方面
起重要作用；淋巴细胞检测NK细胞活性水平，可以
反映出整个机体免疫功能状态。
本研究根据已知BYT的各味药的成分报道，
利用质谱技术对BYT的成分进行初步定性分析，
并检测了其免疫调节作用。结果表明，在本实验的剂
量范围内，BYT基本能够显著提高环磷酰胺免疫抑
制小鼠的NK细胞活性和T、B淋巴细胞增殖能力，
说明提高机体免疫力可能是BYT抗肿瘤、抗感染
等生物活性的机制之一；另外，通过LC—MS分析发
现，BYT除了含有多糖类成分，黄酮类和皂苷类也
是BYT的重要组分之一，可能在其免疫活性中发
挥着重要作用。LC—MS方法可以发展成为复方有效
成分研究中一个有效手段，用来阐明复方药理作用
的物质基础。
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复方五仁醇胶囊血清药化学研究
窦志华1，丁安伟¨，王陆军2，罗 琳3，张兵2，施 忠2
(1．南京中医药大学，江苏南京210029；2．南通市第三人民医院，江苏南通226006；3．南通大学，江苏南通226006)
摘 要：目的 对复方五仁醇胶囊进行血清药化学研究，以便与该制剂血清药理学研究结果进行谱效关系分析，阐
明其药效物质基础。方法 以已经建立的高效液相色谱指纹图谱分析方法，比较复方五仁醇胶囊含药血清色谱图
和空白血清色谱图，分辨该制剂给药后血清中产生的药源性成分，进一步比较全方制剂及各缺味、单味制剂给药后
的血清色谱图，分析血中药源性成分的来源，并通过对照品比对对部分成分进行鉴定。结果ig给药后血清中产生
药源性成分13个，13个成分全部来自君药五味子，其中8个为制剂原形成分，包括五味子醇甲、五味子甲素、五味
子乙素，其余5个为代谢产物。结论复方五仁醇胶囊体内直接作用物质很可能出自血清中的13个药源性成分，
收稿日期：2005一10—28
基金项目：江苏省中医药局中医药科学技术研究专项课题(编号H05173)；江苏省南通市社会发展科技计划项目(编号$4006)
作者简介：窦志华(1966一)，男，江苏南通人，副主任中药师，博士研究生，主要从事中药炮制与复方研究工作。
*通讯作者丁安伟 Fel：(025)51997178E—mail：daw@njutcm．edu．cn
万方数据
·1138· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8,El
结合血清药理学对其作进一步研究有助于阐明该制剂药效物质基础。
关键词：复方五仁醇胶囊；血清药化学；含药血清
中圈分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)08—1137—04
SerumpharmacochemistryofCompoundWurenchunCapsules
DOUZhi—hual，DINGAn—weil，WANGLu—jun2，LUOLin3，ZHANGBin92，SHIZhon92
(1．NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210029，China{2．ThirdPeople’SHospital
ofNantongCity，Nantong226006，China；3．NantongUniversity，Nantong226006，China)
Keywords：CompoundWure ehunCapsules；serumpha macochemistry；serumcontainingdru
20世纪80年代日本学者田代真一提出了“血
清药理学”与“血清药化学”相结合研究中药药效成
分的方法[1]，其基本思路是：中药虽成分众多，但只
有那些被消化吸收进入血液的成分或其代谢产物
(本研究将这些成分和代谢产物统称为药源性成分)
才有产生药效的可能，中药药效成分研究应该以给
动物或人服用药物后的血清(即含药血清)为人手
点。血清药理学主要通过体外试验研究含药血清药
效及作用机制，血清药化学主要是对进入血清的移
行成分进行分析、分离、鉴定等。我国中药界对以上
方法给予了高度评价和关注，相关研究也见报道，因
为此法不但大大简化了中药复方这一复杂体系，而
且对血清中所含复方化学成分进行进一步分析、鉴
定，把得到的成分与复方再次进行药效学比较，就有
可能揭示复方药效成分[z’3]。复方五仁醇胶囊由五味
子、三七、柴胡等4味中药组成，是一种治疗急慢性
肝炎的制剂[4]，不但具有组方简单的特点，而且临床
疗效确切，所以本实验选定该制剂为研究对象，根据
以上思路，进行含药血清谱(指纹图谱)效(药效)关
系分析探寻中药复方药效物质基础的方法学探讨。
1实验材料
1．1 仪器：Agilent1100Series高效液相色谱仪
(G1311AQuaternaryPump，G1379ADegasser，
G1313AAutosampler，G1314AVariableWawve—
lengthDeterctor)，HPChemSation工作站(美国
Agilent科技公司)；AS20500A超声波清洗器(天津
奥特赛恩斯仪器有限公司)，旋转蒸发器(上海亚荣
生化仪器厂)，XW一80A微型旋涡混合仪(上海沪西
分析仪器厂)，100～1000pL芬兰可调式移液器
(上海雷勃分析仪器有限公司)，LIBRORAEL一
40SM电子分析天平(日本SHIMADZU)。
1．2试剂：甲醇(色谱纯，江苏汉邦科技有限公司)，
乙腈(色谱纯，美国TEDIA公司)，纯净水(杭州娃
哈哈集团有限公司)，硫酸铵(分析纯，上海浦口化学
试剂有限公司)。
1．3 对照品与药品：五味子醇甲(批号1171—
040208)、五味子乙素(批号1173—040110)对照品购
自中药固体制剂制造技术国家工程研究中心(江西
南昌)，五味子酯甲(批号1529—200001)、五味子甲
素(批号0764—2000107)购自中国药品生物制品检
定所，复方五仁醇胶囊及其缺味制剂，单味制剂由南
通市第三人民医院提供。
1．4动物：SD大鼠，SPF级，体重(248．4±16．3)
g，雌雄各半，南通大学实验动物中心提供，许可证号
SYKX(苏)2002—0022。
2实验方法
2．1血清的制备：取复方五仁醇胶囊内容物，分别
加甲醇10倍量、8倍量回流提取2次，每次1h，回
收甲醇，加0．5％CMC—Na研磨，制备成含内容物
0．9g／mL的混悬液。同法制备各缺味制剂、单味制
剂混悬液。
取SD大鼠40只，随机分成10组(即全方制剂
组，缺味、单味制剂各4组，空白组)，每组4只。各制
剂组禁食12h(自由饮水)，称体重，每天按照全方
制剂混悬液0．45mL／100g(相当于成人临床等效
剂量的10倍，缺味、单味制剂组按各成分在全方中
等剂量折算)分2次ig给予各种制剂提取物混悬
液，连续给药3d，未次给药后1h，3％戊巴比妥钠
0．15mL／100gip麻醉，颈总动脉取血，置冰箱4‘C
冷藏过夜，分离血清，即为含药血清。空白组每天ig
0．5％CMC—Na0．45mL／100g，同法制备空白血
清。各组每2只大鼠血清合并，分别分成两份，一份
供本实验用，另一份一70℃低温保存，留作血清药
理学研究用。
2．2血清的预处理及其供试品溶液的制备：分别取
各含药血清、空白血清1mL，置离心管中，加入硫酸
铵0．36g，置微型旋涡混合仪快速溶解、混匀，分次
加甲醇(每次1mL，总计5mL)同法充分混匀，
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1139·
16000r／rain离心10min，上清液即为各含药血清、
空白血清供试品溶液，进样前0．4gm微孔滤膜滤
过。
2．3 制剂供试品溶液的制备：精密称取复方五仁醇
胶囊内容物0．5g，置25mL量瓶中，加甲醇适量，
浸泡5h，超声处理30rain，甲醇定容至刻度，摇匀，
滤过，取续滤液进样前0．45肛m微孔滤膜滤过。
2．4对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲、五
味子酯甲、五味子甲素及五味子乙素适量，甲醇溶解
并稀释，配制分别含五味子醇甲0．1345mg／mL、五
味子酯甲0．107mg／mL、五味子甲素0．123rag／
mL、五味子乙素0．0995mg／rnL的混合溶液，进样
前0．45ttrn微孑L滤膜滤过。
2．5 色谱条件：LichrosphereC18(250mm×4．6
mm，5肛m)色谱柱：PhenomenexRDescriptionC18保
护柱(4．0mm×3．0mm)，水(A)一乙腈(B)梯度洗
脱(o～20min，15％～55％B；20～40rnin，55％～
60％B；40～50rnin，60％～70％B；50～60min，
70％～90％B；60～70rnin，90％～100％B)，体积
流量1．0mL／min，柱温301C，检测波长210nm。
2．6测定：以上条件下分别吸取各制剂供试品溶
液、对照品溶液10pL及各含药血清、空白血清供试
品溶液20_uL，注入高效液相色谱仪，记录70min色
谱图。
3结果与讨论
3．1 通过对空白血清与全方制剂含药血清色谱图
的比较，发现复方五仁醇胶囊全方制剂给药后血中
出现了13个药源性成分，进一步比较全方制剂含药
血清与全方制剂的色谱图，可以看出其中6至13号
峰代表的8个成分为制剂原形成分入血，1至5号
峰5个成分为制剂成分的代谢产物。相同条件测定
对照品色谱图，鉴定出8个原形成分中6号峰、10
号峰和12号峰分别为五味子醇甲、五味子甲素和五
味子乙素。见图1。比较全方制剂含药血清、缺五味
子制剂含药血清以及单味五味子制剂含药血清的色
谱图，认定13个血中移行成分全部来自君药五味
子，其余3味药的缺味、单味制剂含药血清色谱图与
全方制剂含药血清色谱图放在一起比较进一步证实
了这一点。见图2～5。
3．2本实验前已经对10个批号的制剂及10组大
鼠ig给药制备的含药血清分别进行了指纹图谱研
究(论文另发)。经比较，以上全方制剂及其含药血清
的色谱图与相应标准指纹图谱的相似度良好，含药
血清色谱图上标出的13个峰即为其指纹图谱的全
0 10 2U 30 40 50 60
t／rain
a一五味子醇甲 b一五味予酯甲 c一五昧子甲素d一五味子乙素
a—schisandrinb-schisantherinc—deoxyschizandrin
d，schisandrinB
图1复方五仁醇胶囊(A)、对照品(B)、复方五仁醇胶
囊含药血清(c)及空白血清(D)HPLC图谱比较
Fig．1HPLCComparisonofC mpoundWurenehun
Capsules(A)，referencesubsta (B)，serum
containingCompoundWurenchunCapsules
(C)，andcontrolserum(D)
t／min
图2五味子单味含药血清(A)、复方五仁醇胶囊缺五味
子含药血清(B)、复方五仁醇胶囊全方含药血清
(c)及空白血清(D)HPLc图谱比较
Fig．2HPLCComparisonof erumcontainingFructus
Schisandra(A)，serumcontainingCompound
WurenchunCapsuleswithoutFructusSchisandra
(B)，serumcontainingCompoundWurenchun
Capsules(C)，andcontrolserum(D)
0 10 20 30 40 50 60
t／min
图3三七单昧含药血清(A)、复方五仁醇胶囊缺三七含
药血清(B)、复方五仁醇胶囊全方含药血清(c)
及空白血清(D)HPLc图谱比较
Fig．3HPLCComparisonof erumcontainingRadix
Notoginseng(A)，serumcontainingCompound
WurenchunCapsuleswithoutRadixNotogi捍一
seng(B)，serumcontainingCompoundW ren’
chunCapsules(C)，andcontrolserum(D)
部共有峰，表明复方五仁醇胶囊给药后血中出现13
个移行成分具有普遍性。
3．3本次研究发现复方五仁醇胶囊大鼠含药血清
万方数据
·1140· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
0 10 20 30 40 7-,0 60
t／rain
圈4柴胡革昧含药血清(A)、复方五仁醇胶囊缺柴胡含
药血清(B)、复方五仁醇胶囊全方含药血清(C)
及空白血清(D)HPLC圈请比较
Fig．4HPLCComparisonof erumcontainingRadix
Bupleuri(A)，serumcontainingCo pound
WurenchunCapsuleswithoutRadixBupleuri
(B)，serumcontainingCompoundWurenchun
Capsules(C)，andcontrolserum(D)
J 一． ——．．，、～——⋯．^一．．—+——————一!二
^^．．．J^～L^t^．。～一．一． ，1． !．
L一 ⋯ I ^． c
-^ ． ^D
0 J0 ZlJ 30 40 删 “J
t／min
图5 叶下珠单味含药血清(A)、复方五仁醇胶囊缺叶下
珠含药血清(B)、复方五仁醇胶囊全方含药血清
(C)及空白血清(D)HPLC图谱比较
Fig．5HPLCComparisonof erumcontainingRhyllan—
thusUrinaria(A)，serumcontainingCompound
WurenchunCapsuleswithoutPhyllanthusUri-
naria(B)，serumcontainingCompoundW ren-
chunCapsules(C)，andcontrolserum(D)
中13个移行成分全部来自五味子，其主要原因可能
是五味子以提取后的浸膏入药，而且在处方中的比
例也最大(处方中各味药五味子浸膏、三七、柴胡、叶
下珠的比例为3：3：2：2)，制剂指纹图谱26个共
有峰中也仅有2个来自三七，其余全部来自五味子。
当然也不排除高效液相色谱法检测灵敏度不够的问
题。五味子在处方中虽为君药，但是它到底能否发挥
全方的药效有待随后的血清药理学研究证实。
3．4关于含药血清中与药物因素有关的成分目前
还没有统一的定义，有学者将其统称为“血中移行成
分(constituentsmigratingoblood或compounds
absorbedtoblood)”[5．引，也有学者提出了“方剂体
内／血清成分谱(方剂吸收或进入体内／m清内化学
成分的结构、性质、分布与数目及其动态状态)”和
“方剂体内／血清靶成分(‘谱’中与母方效应相关成
分)”的概念啪。笔者认为，不管是消化吸收或称“移
行”进入血液药物的原形成分，还是其代谢产物，都
是因为药物因素而产生，将其统称为“血中药源性成
分(drug—inducedconstituentsinblood)”更加准确
和直观。
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《中草芮》杂志被评为“第四届中国百种杰出学术期刊”
2005年12月，中国科学技术信息研究所公布了“第四届中国百种杰出学术期刊”名单，《中草药》杂志获
此殊荣——“第四届中国百种杰出学术期刊”。这个名单是按照期刊指标评价体系对重要指标(影响因子、总
被引频次、他引总引比、基金论文比和即年指标)进行打分的结果，并在近几年来召开了20余场专家研讨会，
对评价指标不断进行推敲和改进而评出的。
摘引自中国科学技术信息研究所《2004年度中国科技论文统计与分析年度研究报告》
万方数据
复方五仁醇胶囊血清药化学研究
作者： 窦志华， 丁安伟， 王陆军， 罗琳， 张兵， 施忠， DOU Zhi-hua， DING An-wei，
WANG Lu-jun， LUO Lin， ZHANG Bing， SHI Zhong
作者单位： 窦志华,丁安伟,DOU Zhi-hua,DING An-wei(南京中医药大学,江苏,南京,210029)， 王陆军
,张兵,施忠,WANG Lu-jun,ZHANG Bing,SHI Zhong(南通市第三人民医院,江苏,南通,226006)
， 罗琳,LUO Lin(南通大学,江苏,南通,226006)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(8)
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