全 文 ：·610· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月
薄壁细胞含有大量多酚类化合物。因此，根据多酚类
化合物的分布与分泌腔特有位置关系，生产上可以
把分泌腔的分布密度做为多酚类物质含量多少的一
个形态学指标，即分泌腔较多的根状茎应该含有较
多的多酚类化合物。这样的药材品质较好，可认为是
上品。同时，根据此特点在进行组织培养快速育苗过
程中，可以选择这些含多酚类化合物较多的薄壁组
织细胞，培养和筛选含有效成分较高的植株或者细
胞株。
另外，根据观察比较，虽然根和根状茎中均具有
大量分泌腔，但在根中分泌腔周围的薄壁组织细胞
中多酚类化合物的量较少，加之，在根状茎中多酚类
化合物合成部位大于根中(图1—1、5)，而且根状茎
中烷基酰胺的量明显大于根中Ix6]。因此，生产上可
以将具有发达根状茎的植株作为优良单株选育的形
态指标。
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花叶开唇兰种子非共生萌发的研究
周伟香1’2，龚 宁1’，李 光h2，郑继军1’2
(1．贵州师范大学生物技术与工程学院，贵州贵阳 550001；2．贵州省
山地环境信息与生态环境重点实验室，贵州贵阳 550001)
摘要：目的筛选花叶开唇兰种子非共生萌发最佳培养基。方法 比较不同的基本培养基、蔗糖质量浓度、植物
生长物质和培养方式对种子萌发的影响，观察并统计种子萌发率。结果 花叶开唇兰种子萌发最适培养基为
1／4MS十NAA0．1～0．5mg／L+蔗糖20g／L，液体悬浮培养。结论首次报道了花叶开唇兰种子萌发最佳培养
基，为花叶开唇兰快速繁殖提供技术参考。
关键词：花叶开唇兰；种子；非共生萌发
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)04—0610一04
收稿日期：2006—07—10
基金项目：贵州省高校发展专项资金自然科学类重点项目(黔教科2004110)；贵州省科学技术基金项目[黔科合J字(2005)2040号]。
作者简介：周伟香(1978一)，女，浙江省松阳人，在读研究生，主要从事药用植物的研究工作。
Tel：(0851)6701434E—mail：zhouweixiang@163．corn
*通讯作者龚宁E—mail：gn2033@126．corn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月·611·
SeedgerminationofAn ectochilusroxb rghiiinasymbioticculture
ZHOUWei—xian91“，GONGNin91“，LIGuan91“，ZHENGji—junl’2
(1．SchoolofBiologicalTechnologyandEngineering，GuizhouNormalUniversity，Guiyang550001，China；2．Guizhou
ProvincialKeyLaboratoryforMountainEnvironmentInformationndBio—environment，Guiyang550001，China)
Keywords：Anoectochilusroxburghii(Wall．)Lindl．；seed；asymbioticgermination
花叶开唇兰Anoectochilusroxb rghii(Wall．)
Lindl．即金线兰，为兰科开唇兰属植物，全草入药，
是民间珍稀名贵的中草药口]，也是一种观赏价值较
高的室内观叶植物，具有广阔的开发利用前景。花叶
开唇兰的种子极为细小，一枚蒴果含有数千至上万
粒种子，在自然条件下需由某种真菌侵入，将种子胚
细胞中的淀粉转化为糖，才促进萌芽，因此萌发率很
低[2]，野生资源稀少。利用组培方法进行种子非共生
萌发，是兰科植物快速繁殖的重要途径，目前国内外
有关花叶开唇兰种子非共生萌发研究报道很少，黄
慧莲嘲仅研究了基本培养基对种子萌发的影响，本
实验首次系统研究了植物生长物质、蔗糖质量浓度
和培养方式等多种因素对花叶开唇兰种子非共生萌
发的影响，筛选出种子非共生萌发的最佳培养基，其
结果可为花叶开唇兰的快速繁殖提供参考。
1材料与方法
1．1 材料：对栽植于实验园地的野生花叶开唇兰进
行人工授粉获得的成熟蒴果。野生花叶开唇兰A．
roxburghii(Wall．)Lindl．采自贵州省荔波县翁昂
乡，由贵州师范大学王承录副教授鉴定。
1．2方法
1．2。1外植体消毒：野生花叶开唇兰尚未开裂的成
熟蒴果，用75％酒精槔擦拭果皮，再置10％次氯
酸钠溶液中浸泡10～12min后，用无菌水冲洗5～
6次。
1．2．2培养基及培养方式：基本培养基对种子萌发
的影响：培养基为KC、改良KC、N6、MS、1／2MS
(大量元素质量浓度是MS的1／2，其余同MS)、
1／4MS(大量元素质量浓度是MS的1／4，其余同
MS)以及1／10MS(大量元素质量浓度是MS的
1／10，其余同MS)。
蔗糖质量浓度对种子萌发的影响：在最佳基本
培养基中分别加10、20、30、40g／L蔗糖。
植物生长物质对种子萌发的影响：在最佳基本
培养基、最佳蔗糖质量浓度基础上分别添加不同质
量浓度的NAA或2，4一D。
培养方式对种子萌发的影响：最佳基本培养基，
最佳蔗糖质量浓度，最佳的生长物质质量浓度条件
下考察固体、液体悬浮、液俸静置培养对花叶开唇兰
种子萌发的影响。
所有培养基pH均调至5．6，除蔗糖试验外，所
有培养基均加入20g／L蔗糖，固体培养基加10
g／L琼脂。
1．2．3接种、培养和观察：在超净工作台上，用无菌
解剖针将消毒后的蒴果纵向剖成两半，用无菌镊子
夹取少量种子，均匀地洒在培养基上。为使种子在培
养基表面分布均匀，可滴数滴无菌水到接种后的培
养瓶中，轻轻晃动。每种处理接种8瓶，用放大镜统
计每处理接种种子数。
培养条件为光照12h／d，光照强度为1000
1500lx，温度为(23±2)℃，液体悬液振荡的转速
为60r／min。
每天用放大镜观察种子萌发情况，记录最早萌
动日期及培养到70d的萌发率。萌发标准为胚膨大
形成白色原球茎H]。
2结果
2．1 花叶开唇兰种子萌发过程：以1／4MS+NAA
0．3固体培养为例，无菌播种35d后胚明显膨大，
40d后小球体陆续出现，45d后可以用肉眼明显看
到白色原球茎，60d后原球茎继续膨大同时观察到
原球茎基部外表面长满白色根毛状物。光下继续培
养到90d，原球茎开始陆续转为绿色，并逐渐伸长
分化。
2．2几种基本培养基对花叶开唇兰种子萌发的影
响：考察了KC、改良KC、N6,MS、1／2MS、1／4MS
以及1／10MS7种基本培养基对花叶开唇兰种子
荫发的影响，结果显示花叶开唇兰种子在7种基本
培养基上都能萌发，但开始萌发时间及萌发率有很大
差异。在N6培养基上，种子萌发速度最快，但在1／4
MS培养基上种子萌发率最高，培养到70d时萌发
率达到77．37％，原球茎生长状况最好，说明花叶开
唇兰种子适宜在较低盐质量浓度下萌发。见表1。
2．3不同蔗糖质量浓度对花叶开唇兰种子萌发的
影响：在1／4MS基本培养基中分别加入不同质量
浓度的蔗糖，观察对花叶开唇兰种子萌发的影响，结
果表明在20g／L时种子萌发率最高，30g／I。次之。
万方数据
·612· 中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月
同时观察到萌发后原球茎在30g／L时生长膨大速
度快。说明花叶开唇兰种子在相对较低蔗糖质量浓
度(如20g／L)下易于萌发，萌发后及时转入较高
蔗糖可促进原球茎的生长。见表2。
表1 不同基本培养基对花叶开唇兰种子萌发的影响
Table1 Effectofvariousc lturemediaonseed
germinationofA．roxburghii
荔篇篇萌铲7篇宇 黼征培养基种子数种子数 ％ 时间／d ⋯⋯一
表2不同蔗糖浓度对花叶开唇兰种子萌发的影响
Table2 Effectofdifferentsucroseconcentration
onseedgerminationofA．roxburghii
2．4植物生长物质对花叶开唇兰种子萌发的影响：
NAA对花叶开唇兰种子萌发有很大影响，从表3
可知NAA在0．1～0．5mg／L内都不同程度地促
进种子萌发，萌发速度较快，0．3mg／L最高，萌发
率达87．18％。当高于0．5mg／L时则抑制种子萌
发，为2．0mg／L时，萌发率只有19．12％。同时实
验中观察到当NAA高于1．0mg／L时，原球茎表
面易形成淡黄色的愈伤组织，但极易褐化。
2，4一D在0．2～2．0mg／L的处理只有0．5
mg／L处理萌发率较高，比对照高1．18个百分点，
其他质量浓度的萌发率均低于对照，同时各组添加
2，4一D后与对照相比开始萌发时间推迟到60d左
右，原球茎生长缓慢，始终保持乳白色原球茎不分
化；而对照组最早萌发时间为38d左右，继续培养
原球茎变绿伸长，所以花叶开唇兰种子萌发一般不
宜添加2，4一D。
2．5不同培养方式对花叶开唇兰种子萌发的影响：
结果见表4，液体悬浮培养效果最佳，种子萌发提
前，原球茎整齐粗大，生长速度也快，同时在液体培
养基上继续培养不易分化，这为今后原球茎悬浮体
裹3植物生长物质对花叶开唇兰种子萌发的影响
Table3 Effectofplantgrowthsubstanceo se d
germinationofA．roxburghii
表4不同培养方式对花叶开唇兰种子萌发的影响
Table4 Effectofdifferentcul uremethodsnseed
germinationofA．roxburghii
系的建立提供了依据。
综上所述，花叶开唇兰种子非共生萌发最佳培
养条件为1／4MS+NAA0．1～0．5mg／L+蔗糖
20g／L，液体悬浮培养。
3讨论
花叶开唇兰种子数量极多，快速繁殖应利用这
一优势。实验室已通过种子无菌培养获得了大量种
子苗，并且这些种子苗可在实验室增殖，已建立了无
菌培养系(另文报道)，利用这条途径培养苗比通过
茎段诱导途径快，因此这一途径是种苗工厂化生产
的一条重要途径，本文探讨的种子非共生萌发的最
佳培养条件对于花叶开唇兰的快速繁殖具有很好的
参考价值。
黄慧莲研究认为种子萌发的适宜培养基是KC
培养基i-引，实验发现有比KC培养基更适合种子萌
发的培养基，即1／4MS培养基，花叶开唇兰种子在
1／4MS培养基上比在KC培养基上萌发更快，萌发
率更高，萌发得到的原球茎更健壮。，
蔗糖质量浓度实验表明20g／L时萌发率最高，
30g／L时萌发率略低于20g／L，但种子萌发得到的
原球茎比较粗大，实际应用时可考虑用30g／L蔗
糖，或在较低蔗糖浓度下萌发后转入较高质量浓度
下培养。
NAA在0．1～o．5mg／L均不同程度地促进种
子的萌发，高于0．5mg／L则不同程度地抑制种子
万方数据
中革蒋 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月·613·
的萌发，这与文献嘲报道石斛种胚萌发的结果相似。
2，4一D对种子萌发基本起抑制作用。其他生长物质
以及各种生长物质的不同配伍对花叶开唇兰种子萌
发的影响有待研究。
致谢：本实验得到了贵州师范大学生物技术与
工程学院的乙引教授和陈庆富教授在实验场地方面
给予的帮助。
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(1．西北大学陕西省生物医药重点实验室，陕西西安710069；2．洛阳陆生天然植物研究所，河南洛阳471000)
淫羊藿属E；pimediumL．药用植物，在我国有
29种，产于川陕者14种[1|，具有多方面的药理活
性。《中国药典》作为淫羊藿药材的有5种，分别为淫
羊藿、朝鲜淫羊藿、箭叶淫羊藿、巫山淫羊藿和柔毛
淫羊藿凹]，笔者在进行淫羊藿成分系统分离研究的
基础上，对采集的川陕豫产9种习惯入药的淫羊藿
品种[3。，将其叶中的主要成分朝藿定C和淫羊藿苷
的量进行了考察，结果表明大部分品种朝藿定C量
大于淫羊藿苷。
1仪器、试剂及样品
1．1仪器：美国Beckman高效液相色谱仪，125型
泵，168型PDA检测器，32Karat色谱工作站：
HAMILTON微量进样品(HAMILTON公司)；微
孔滤膜圣一13mm，4．5弘m(天津市色谱科学技术
公司)；YCQ一300型超声波清洗器(上海凯波超声
设备有限公司)。
1．2-试剂：乙腈为色谱纯，水为双蒸水并经0．45
弘m水系滤膜滤过。
1．3 对照品：均为自行分离精制，并经UV、IR、
FAB—MS、1HNMR、13CNMR鉴定结构，HPLC检
测，面积归一化法计算质量分数，均大于98％。
1．4药材：各品种淫羊藿样品均由洛阳陆生天然植
物研究所王忠东提供并鉴定。见表1。
2方法与结果
2．1 色谱条件与系统适用性实验：色谱柱：
BECKMANCoULTER—C18柱(250mm×4．6
mm，10ttm)；流动相：乙腈一水，梯度洗脱(乙腈：0
rain、20％，5rain、30％，10rain、50％，35rain、
50％)，柱温：室温；灵敏度0．02AUFS；体积流量：1
mL／min；检测波长270nm；理论塔板数以朝藿定C
计为17616(1号峰)、以淫羊藿苷计为18496(2
号峰)。在本实验条件下，各对照品及样品的色谱图
见图1。
2．2供试晶溶液的制备：取各品种淫羊藿的干燥
叶，60℃下烘3h，取烘干品，粉碎，过40目筛，取
约0．3g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，加入
70％乙醇30mL，称质量，超声提取1h，称质量并
补足减失质量，滤过，弃去初滤液，取续滤液用微孔
滤膜(4．5“m)滤过，作为供试品溶液。
2．3对照晶溶液的制备：精密称取朝藿定C6．02
mg，淫羊藿苷5．35mg，分别用甲醇溶解并定容于5
mL量瓶中，各取0．1、0．3、0．5、0．7、0．9、1．0mL于
10mL量瓶中，混合，加甲醇稀释至刻度，摇匀作为
混合对照品溶液。
2．4标准曲线及线性范围的考察：精密吸取上述各
混合对照品溶液进样20弘L，按色谱条件测定峰面
积，以峰面积为纵坐标(y)，以对照品进样量(ptg)
为横坐标(X)，绘制标准曲线，朝藿定C和淫羊藿
收稿日期：2006—06—17
作者简介：谢娟平(1972一)，女，陕西宝鸡人，工程师，现为西北大学生命科学院2004级硕士研究生，专业方向为中药有效成分分离分析
与制备。Tel：13319266304E—mail；xjp7312052@153。com
*通讯作者孙文基Tel：(029)88304569
万方数据
花叶开唇兰种子非共生萌发的研究
作者： 周伟香， 龚宁， 李光， 郑继军， ZHOU Wei-xiang， GONG Ning， LI Guang， ZHENG
Ji-jun
作者单位： 贵州师范大学生物技术与工程学院,贵州 贵阳 550001;贵州省山地环境信息与生态环境重点
实验室,贵州 贵阳 550001
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(4)
被引用次数： 5次

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