全 文 ：中革喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月
HPLC法测定天麻蜜环菌片中腺苷
赵保华，贺秀霞，徐丽珍，杨世林
(中国医学科学院中国协和压科大学药用植物研究所．北京100094)
天麻蜜环菌片是由与天麻共生的蜜环菌
ArmilIaviellameliea(VahlexF)Karst．经培养发
酵加工的产物直接加工压制而成，具有定惊．熄风的
功效，主要用于眩晕头痛、惊风癫痫、肢体麻木、腰膝
酸痛等症。其质量标准无定量指标。本实验选择腺
苷作为测定对象，建立了测定天麻蜜环菌片中腺苷
的HPLC法一11“j。
l仪器、试剂和样品
Waters高效液相色谱仪，Waters996紫外检测
器，Waters600型泵，2010色谱工作站。
乙腈(色谱纯)、磷酸=氢钾、无水乙醇、甲醇均为
分析纯：水为重蒸水；天麻蜜环菌片由江西汇仁药业
有限公司提供；腺苷(批号879—200001，质量分数为
99．83％)对照品由中国药品生物制品检定所提供。
2方法与结果
2．1 色谱条件：InertsilODS3 c18色谱柱
(250rllm×4．6Him，5pm)i流动相：乙腈一0．010
moI／I。磷酸二氢钾(7．5：92．5)；检测波长254nm；
体积流量：1mL／min；柱温：20C。
2．2溶液的制备
2．2．1对照品溶液的制备：取腺苷对照品适量，精
密称定，用60％乙醇溶解，制成质量浓度为200pg／
mL的对照品储备溶液，备用。
2．2．2供试品溶液的制备：除去糖衣的天麻蜜环菌
片压碎粉，混匀，取480mg，精密称定，置25mI。量
瓶中，加入60％乙醇约15mL，超声处理10min，放
冷，定容，摇匀，用0．45bLm微孔滤膜滤过，作为供
试品溶液。
2．2．3阴性样品溶液的制备：本实验室自制不含蜜
环菌发酵物的阴性样品，照供试品溶液的制备项下
操作制备成阴性样品溶液。
2．3方法可行性考察：分别取对照品溶液、供试品
溶液和阴性样品溶液各10pL注入HPLC仪，测
定，绘制色谱图。结果腺苷理论塔板数为4000，样品
中腺苷与相近峰分离度为1．7，且阴性样品在相同
位置无干扰，见图l。
*一腺苷
*一adenosine
图1腺苷对照品(A)，天麻蜜环菌片(B)和缺天麻的阴性对照(c)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsofadenosineref rencesubstance(A)，Tianma
MihuanjunTablets(B)·andnegativesample(C)
2．4线性关系考察：取腺苷对照品储备液0．3mL， 峰面积呈良好的线性关系。
定容于10mL量瓶中，制成6．06pg／mL的对照品2．5 精密度试验：精密吸取腺苷对照品溶液10
溶液。分别取样2、6、10、14、18、22tLL注入液相色谱 pL，注入HPI。C仪，重复进样6次，测定对照品溶液
仪。以腺苷的质量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标 峰厩积积分值，计算得其RSD为0．98％。
准曲线，得回归方程为y=2．14×i06x+1．25×2．6稳定性试验：取同一供试品溶液lo“I。，每隔1
104，r一0．99993，表明腺苷在0．012～0．133Pg与h进样，共进样6次，测定峰面积积分值．结果腺苷
收稿日期：2005—061 5
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月
峰面积的RSD为1．079％。表明供试品溶液在5h
内稳定。
2．7重现性试验：取同一批样品5份，精密称定，制
备供试品溶液。进样10yI。，测定腺苷的质量分数，
其平均值为0．076rag／片，RSD为2．41％。
2．8 回收率试验：精密称取含腺苷约0．16mg／g的
样品5份，约0．24g／份，分别精密加入0．0392mg
腺苷对照品．制备供试品溶液，进样测定，结果腺苷的
平均回收率为101．79％，RSD为2．77％(一一5)。
2．9样品测定：取样品制备供试品溶液，精密吸取供
试品10止，按上述色谱条件测定，用外标法计算天
麻蜜环菌片中腺苷的质量分数，结果见表1。
表1夭麻蜜环菌片中腺苷的剐定结果恤一5)
TableJ DeterminationofadenosineinTianma
MihuanjunTablets(n=5)
批号腺馨{I；g．8嚣7批e腺翟mg一嚣7
200204210 076 】7 200206090．076 1．7
200204220．075 l 7 l 0．079 1．6
200204230．078 1 7 2 0．076 1．7
200208070．077 1 1 3 0．074 1 8
200206080074 1-8 4 0．075 1．7
3讨论
3．1提取溶剂的选择：供试品溶液的制备中．考察了
90％甲醇、60％乙醇、50％甲醇和水作为提取溶剂，
各超声提取30min，结果腺苷的质量分数分别为
0．052、0．081、0．071、0．076rag／片，表明60％乙醇
提取效果最好。
3．2提取时间的选择：以60％乙醇为提取溶剂，采
用超声方法进行提取，选择提取时问10、zo、30min，
结果腺苷的质量分数分别为0．076、0．076、0．076
mg／片，表明10min即可提取完全。
3．3本方法准确灵敏，可作为天麻蜜环菌片中腺苷
的定量分析方法，为进一步制定天麻蜜环菌片质量标
准提供了依据，并对含有腺苷的其他产品的检测也具
有一定的参考价值。
References：
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(C,∥dyepssinensis)andfruitbodyofGanodermalucidum
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[sJWuCM．YeRP．Determinationof denosinelnDongchong
xiaehao(Cord2weps,sinensis)byHPLC[J]．ChinTrad tHerb
Drugs(中草药)，1999．30(9)：658．
欧亚旋覆花中多糖的苯酚一硫酸法测定
付焱1，郭毅2，张嫡群”，扬豌革1，徐力昆1，吴一兵1
(1，河北医科大学新药开发研究室，河北石家庄050017；2．河北省药品检验所．河北石家庄050011)
旋覆花为菊科植物旋覆花Inulajaponica
Thunb+或欧亚旋覆花I．britannicaL．，具有降气、
消痰，行水，止呕的功效，主治风寒咳嗽，痰饮蓄结，胸
膈痞满，喘咳痰多，呕吐噫气，心下痞硬等症o]。旋覆
花含有旋覆花素、大花旋覆花宁、蒲公英甾酵、槲皮
素、异槲皮素、绿原酸、咖啡酸等成分o]。欧亚旋覆花
地上部分的水提物可影响小鼠辅助性T细胞
(HelperTcell)Thl和Th2之间平衡，显示出抑制
小鼠肝损伤的免疫学作用“]。笔者在进行欧亚旋覆花
化学成分研究中，从中提取出水溶性多糖。初步药理
试验表明，欧亚旋覆花多糖有一定的免疫增强作用。
参考文献报道““]，本实验对欧亚旋覆花多糖的提取
方法及测定进行了研究。
1仪器与药品
TU一1901双光束紫外分光光度计(北京谱析通
用仪器有限公司)，DHX--9243B型电热恒温鼓风干
燥箱(上海福马实验设备有限公司)，Laborata4000
旋转薄膜蒸发器(德国Heidolph集团)。
(+)葡萄糖、浓硫酸、苯酚、乙醚、丙酮、无水乙
醇均为分析纯试剂。试验药材采自山西运城，经本院
药用植物教研室聂凤提教授鉴定为欧亚旋覆花，．
britannicaL．。
2方法与结果
2．1 多糖的提取与精制：欧亚旋覆花地上部分粉碎，
收稿日期：2005—06—07
基金项目：河北省自然科学基金项目(303470)
作者简介：付焱(1965)，女，山东烟台人，副教授，博士研究生，从事药物有效成分的分离制备研究与教学
Tel：(0311)86266335E—mail{hbsypjys@hotmail．COtTt
*通讯作者张嫡群
万方数据
HPLC法测定天麻蜜环菌片中腺苷
作者： 赵保华， 贺秀霞， 徐丽珍， 杨世林
作者单位： 中国医学科学院,中国协和医科大学药用植物研究所,北京,100094
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(4)
被引用次数： 1次

参考文献(3条)
1.Yang D H Determination of adenosine in Dongchongxiacao (Cordyceps sinensis) and fruit body of
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3.Wu C M;Ye R P Determination of adenosine in Dongchong xiachao (Cordyceps sinensis) by HPLC[期刊论
文]-中草药 1999(09)

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3. 张颖.沈业寿.张宪中.陈涛 蜜环菌菌索多糖提取条件的优化及其部分生物学性质[期刊论文]-中国食用菌
2001,20(4)
4. 程显好.王春兰.郭顺星.CHENG Xian-hao.WANG Chun-lan.GUO Shun-xing 蜜环菌不同特化菌体的HPLC-DAD图谱
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5. 唐巧玉.周毅峰.TANG Qiaoyu.ZHOU Yifeng 蜜环菌对硒的富集及多糖中硒的分布[期刊论文]-中国酿造2009(11)
6. 饶圣宏.吴萍.李正鹏.Rao Shenghong.Wu ping.Li Zhengpeng 假蜜环菌液体发酵培养基优化研究[期刊论文]-中
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2009(7)

引证文献(1条)
1.闫良 复方天麻蜜环菌片联合尼莫地平治疗颈性眩晕30例疗效观察[期刊论文]-世界中西医结合杂志 2009(1)


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