全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·683·
强度，但其对于滴丸中的药物无抑晶作用，且成型性
差，药物在PEG中的溶解度也较在Poloxamer中
差，需加无水乙醇助溶。根据预实验的结果，将主药
质量分数控制在25％以下，并以PEG6000和
Poloxamer188的混合辅料作为固体分散体的载体。
星点设计一效应面优化法是适宜进行非线性拟
合的优化法，通常在最佳条件附近，指标与影响因素
之间的关系为非线性，此时不宜用线性方程进行拟
合，应选用二次多项式或更高次的多项式进行拟合，
以得到最佳的模型拟合度。本实验中三次多项式模
型的拟合相关系数最高达0．998，模型可信度非常
高，通过预测分析也证实所建立的数学模型具有极
佳的预测性。曾采用该优化法对聚乳酸微球的制备
工艺进行了优化[4巧]，将该法用于中药制剂尚是首
次，本实验结果表明，星点设计一效应面优化法可以
较好地推广应用到中药的制剂处方与制备工艺优化
中来。
References：
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液质联用研究麦冬皂苷肠溶微球在大鼠体内的相对生物利用度
沈 岚1，徐德生1，冯 怡1，姜玲海1，刘玉敏2，赖奕坚2
(1．上海中医药大学药剂教研室，上海201203；2．上海交通大学分析测试中心，上海200030)
摘要：目的研究单次ig麦冬皂苷肠溶微球在大鼠体内的相对生物利用度，以期提供最为直接的制剂质量评价。
方法建立HPLC．MS分析方法，以固相萃取技术(SPE)进行血样处理，测定单次ig麦冬皂苷肠溶微球(被测制
剂)及混悬剂(参比制剂)后不同时间血浆中薯蓣皂苷元的质量浓度，绘制药一时曲线，计算药动学参数及相对生物
利用度。结果C⋯为(637．81士17．23)ng／mL，tmax为(4．04-0．o)h，AUC¨2为7840． 1_--4-412．03。结论麦冬皂
苷肠溶微球与普通混悬剂在ig单次给药后，大鼠体内的吸收、分布、消除性质颇为相似，其药动学参数数据也较为
一致，相对生物利用度为(91．10±3．44)％。
关键词：麦冬皂苷肠溶微球；相对生物利用度；HPLC—MS；固相萃取
中图分类号：R283．6；R285．6文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)05—0683—04
Relativebioavailabilityof h opogonjaponicussaponinentericm rosphereinrats
SHENLanl，XUDe—shen91，FENGYil，JIANGLing—hall，LIUYU—min2，LAIYi—jian2
(1．ShanghaiUniversityofTrditionalChineseMedicine，Shanghai201203，China；2．CenterofAnalysisand
Measurement，ShanghaiJiaoTo University，Shanghai200030，China)
Abstract：ObjectiveTos udytherelativebioavailabilityfterigratswithOphiopogonjapo icus
saponinentericmicrosphereinsingle—doseSOa togivedirectlypreparationqualityevaluation．Methods
EstablishingtheanalysismethodfHPLC—MSandealingwiththebloodsamplebysolidphase
extraction．Determiningthdiosge inconcentrationinplasmaafterigOphiopogonjaponicassaponin
entericmicrosphereandthsuspensionasc mparisonin i gle—dose，andcalculatingpharmacokinetic
parametersandrelativebioavailability．ResultsC。。；，t。。。，andAUCo-72were(637．81±17．23)ng／mL，
(4．0土0．0)h，and7 840．01±412．03，respectively．ConclusionThechara teristicsofabsorption，
distribution，andelimi ationreresembledinratsbetweentwopreparationsby gin ingle—dose．The
pharmacokineticparametersareal oidentical．TherelativebioavailabilityiS(91．10±3．44)％．
收穰日期：2004—09—28
作者简介：沈岚(1975一)，女，上海人，博士，讲师，研究方向为中药活性成分新剂型技术研究。
Tel：(021)51322211E—mail：alansusu@sina．corn
万方数据
·684· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
Keywords：Ophiopogonja nicussaponinentericmicrosphere；relativebioava lability；HPLC—MS；
solidphaseextraction
前期研究已证实口服麦冬抗心肌缺血的有效组
分之一为麦冬总皂苷，其经肠内菌代谢后的吸收入
血成分之一为薯蓣皂苷元，且尿中无原形药存在；并
采用喷雾干燥技术制备了麦冬皂苷肠溶微球[1]，显
著降低了皂苷成分的胃黏膜刺激性。本实验以代谢
产物薯蓣皂苷元为指标，建立高灵敏度、高选择性的
HPLC—MS分析方法，对麦冬皂苷肠溶微球与参比
制剂混悬剂进行相对生物利用度研究，以期为麦冬
皂苷肠溶微球提供最为直接的质量评价，并提供一
种切实可行的麦冬皂苷体内代谢产物的检测手段。
1仪器、试药与动物
Agilent1100型HPLC—MSD(安捷伦科技公
司)；TGL一16G高速台式离心机(上海医用仪器
厂)；Xw一80A涡旋混合器(上海医科大学仪器
厂)；TG一332A型微量天平(上海精密学仪器有限
公司)。
薯蓣皂苷元对照品(Sigma公司，质量分数
98．0％)；麦冬皂苷肠溶微球(自制)；麦冬皂苷混悬
液(曙光医院制剂)；固相萃取小柱(StrataC。。一E，50
扯m70A，500mg／6mL，美国)。乙醚、甲醇(AR
级)，生理盐水(医用)，高效液相用乙腈、甲醇均为色
谱纯，水为双蒸水。
SD大鼠，雄性，180～220g(中国科学院上海动
物中心，合格证号：中科动管字005号)。
2方法与结果
2．1血样处理方法的考察
2．1．1 固相萃取法：于空白血浆中加入10．13肛g／
mL薯蓣皂苷元对照品溶液10肛L混匀后，加入甲
醇4mL，混匀，3500r／min离心10min，取上清液
上样于已活化完毕的固相萃取小柱中，用80％甲醇
淋洗后，以乙醚洗脱。收集洗脱液，蒸干后用适量甲
醇溶解残渣，滤过，精密吸取适量滤液，进行HPLC
分析，计算提取率，结果见表1。
表1 固相萃取法与液一液萃取法结果比较(聘一3)
Table1 Resultcomparisonof olidphaseextraction
andliquid—liquidextraction白一3)
2．1．2液一液萃取法：于空白血浆中加入适量薯蓣
皂苷元对照品溶液混匀后，分别加入水饱和正丁醇、
乙醚各萃取3次，分别合并有机层，水浴蒸干，用甲
醇溶解残渣，滤过，精密吸取适量滤液，进行HPLC
分析，计算提取率，结果见表1。结果表明，固相萃取
法优于液一液萃取法。
2．1．3淋洗、洗脱溶剂和色谱柱的选择：取固相萃
取新柱、旧柱(使用过1次，清洗后备用)各8支，活
化后分别上样，然后分别用水，20％、40％、60％、
80％、100％甲醇，乙醚，二氯甲烷8mL洗脱，收集
各自的洗脱液，挥干，用适量甲醇溶解残渣，滤过，精
密吸取适量滤液，进行HPLC分析，计算提取率，结
果见表2。结果表明，对反相固相萃取小柱来说，在
使用水，20％、40％、60％、80％甲醇洗脱时，均无薯
蓣皂苷元被洗脱，但有不同程度的杂质清洗出柱；而
使用二氯甲烷、100％甲醇、乙醚时薯蓣皂苷元均有
不同程度的洗脱，其中以乙醚洗脱最为完全。因此，
宜选用80％甲醇作为淋洗液洗去大量杂质，而以乙
醚为洗脱剂洗脱出所需成分。在新柱与旧柱比较时，
旧柱萃取回收率明显低于新柱，可能由于血样处理量
较大，影响小柱使用寿命，因此旧柱不宜重复使用。
2．1．4洗脱剂量的考察：分别对洗脱剂乙醚的用量
进行考察，结果见表3。表明采用5mL乙醚用量较
为适宜。
表2萃取回收率结果(0A，n一3)
Table2 Resultsofextractingrecovery(％，n一3)
柱 水z0，6_醇40％_醇60％_醇80％_醇二氯_烷100％_酵 乙醚
旧柱0 0 o o o 14．15±3．2761．6317．1988．87：t：6．81
新柱0 0 0 0 0 80．5410．9890．49J-4．20l03．02土2．44
表3乙醚用量的考察(一一3)
Table3 Investigationofdifferenta therdoses(一一3)
乙醚用量／mL 提取率／％
92．71土7．27
99．70土6．83
98．52土3．70
2．1．5血样处理方法：精密吸取血浆，按1：4比例
加入甲醇，混匀，3500r／min离心10min。取上清液
上样于已用甲醇、水活化完毕的固相萃取小柱中，用
80％甲醇5mL淋洗完毕后，1500r／min离心10
min，再用乙醚5mL进行洗脱。收集洗脱液，蒸干后
用适量甲醇溶解，滤过。取滤液进行HPLC—MS测
定，计算血样中薯蓣皂苷元的质量分数。
2．2 HPLC—MS分析方法的建立
2．2．1HPLC—MS条件：色谱柱：AllteehP atinum
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·685·
C18100A柱(250mmx4．6mm，5扯m)；流动相：乙
腈一醋酸水溶液(74：26，pH3．54)；体积流量：1．00
mL／min；电喷雾电离源(ESI)，选择性监测质荷比
为m／z415带正电荷的分子离子峰；电喷雾电压：70
V；毛细管电压：3000V；干燥气(N：)体积流量：10
L／min；干燥气温度：350oC；色谱图见图1。
0 5 10 15
t／min
*一薯蓣皂苷元
*一diosgenin
图1薯蓣皂苷元对照品(A)、空白血浆(B)和
血样样品(C)的HPLC—MS色谱图
Fig．1HPLC—MSchromatogramsfdiosgenin
referencesubstance(A)，blankplasm
(B)，andbloodsample(C)
2．2．2标准曲线的建立：精密称取薯蓣皂苷元对照
品10．02mg置10mL量瓶中，用甲醇溶解并加至
刻度，即得1．002mg／mL对照品溶液。用甲醇逐级
稀释成一系列质量浓度的对照品溶液。取空白血浆
分别加入上述系列对照品溶液，按“血样处理方法”
处理，进样，HPLC—MS测定。以峰面积(A)对质量
浓度(y)进行线性回归，得回归方程y=0．02999+
0．0002585A，r一0．9994，线性范围为0．05～4．0
／-tg／mL，最低定量限为0．05ttg／mL。
2．2．3萃取回收率：于空白血浆中加入适量薯蓣皂
苷元对照品溶液形成高、中、低3个质量浓度的样
品，按“血样处理方法”处理，进行HPLC—MS分析；
另用甲醇配制相应质量浓度的薯蓣皂苷元对照品溶
液，不经萃取直接以相同量进样进行HPCL—MS分
析。将两组峰面积进行比较，计算薯蓣皂苷元的萃取
回收率。见表4。
2．2．4方法回收率：于空白血浆中加入适量薯蓣皂
苷元对照品溶液，形成高、中、低3个质量浓度的样
品，按“血样处理方法”处理，进行HPLC—MS分析，
计算薯蓣皂苷元的方法回收率。见表4。
2．2．5精密度试验：于空白血浆中加入适量薯蓣皂
苷元对照品溶液，形成高、中、低3个质量浓度的样
品，各质量浓度日内重复测定5次，并连续测定5d，
计算薯蓣皂苷元日内、日间精密度。见表4。
表4薯蓣皂苷元萃取回收率、方法回收率、精
密度试验结果(一一5)
Table4 Resultsofextractionandmethodrecoveries
andtheirp ecision(辟一5)
2．3相对生物利用度的研究
2．3。l麦冬皂苷肠溶微球的制备：称取一定量丙稀
酸树脂Ⅱ为囊材，用95％乙醇溶解并制成2％丙烯
酸树脂Ⅱ乙醇溶液。将麦冬总皂苷溶解于囊材溶液
中，麦冬总皂苷和囊材按1：4比例配成待喷液，加
入增塑剂蓖麻油适量，充分搅拌均匀，再加入抗黏剂
微粉硅胶适量，搅拌均匀后，进行喷雾干燥。工艺条
件为进风温度90℃，加料速度10mL／min，雾化器
转速50r／rain。
2．3．2试验方案：取大鼠，随机分成两组，于笼中饲
养3d，待其充分适应本室环境后，禁食12h。微球
组ig给予微球9．61g／kg(相当于给予麦冬总皂苷
600mg／kg)，混悬剂组给予等量麦冬总皂苷的混悬
剂，分别于给药后0．5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、
48、72h腹主动脉取血。全血4500r／min离心10
min，吸取血浆按“血样处理方法”处理后，进行
HPLC—MS分析，评价制剂质量。结果见表5。
2．3．3数据处理：C⋯、￡。。均采用实测值。用梯形法
计算AUC¨。由药一时曲线末端相血药浓度的对数对
时间t回归，求算消除速率常数k。。C。。为最末取血点
血药浓度。相对生物利用度(F)按下式计算，结果见
表6。结果表明，麦冬皂苷肠溶微球与普通混悬剂在
ig单次给药后，大鼠体内的吸收、分布、消除性质颇
为相似，其药动学参数数据也较为一致，F为
一。一一协
；|一巧
一。一
A
一一m
B
一一∞
c
一
万方数据
·686· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
(91．10±3．44)％。
F—AUC。一，(被测制剂)／AUc。(标准参比制剂)×100％
表5大鼠ig不同麦冬皂苷制剂的药时过程(聆一3)
Table5 Drugconcentration—timec urseofdifferent
O．japonicassaponinpreparationsafter
igadministrationtorats
时间／h
血药浓度／(ng·mL_1)
混悬剂 微球
表6大鼠ig不同麦冬皂苷制剂的药动学参数比较(拜一3)
Table6 Comparisonofpharmacokineticparameters
ofdifferentO．japonicassaponinprepara—
tionsafterigadministrationtorats(n一3)
参数 混悬剂 微球
k。
Ct。／(ng·mL一1)
AUCo一72
C。。／(ng·mL一1)
tmax／h
Ff％
0．0110士0．0039 0．0146-k0．0035
60．54士10．87 55．30±6．53
8606．11土594．517 840．01土412．03
598．60土6．92 637．81士17．23
4．0±0．0 4．0±0．0
91．10±3．44
3讨论与小结
3．1 固相萃取法与传统的液一液萃取法相比，有效
地克服了乳化现象造成的样品丢失，保证了样品中
超微量药的有效回收，且操作简便，节省溶剂，回收
效。近年来，固相萃取法与TLC、GC—MS、HPLC—
MS、CE等技术在鉴定药、毒物方面的联合应用，更
是大大降低了检出限，并使自动化、大批量的快速测
定成为可能。本实验采用反相C，。固相萃取小柱对血
样进行处理后进行HPLC—MS分析，有效地除去了
血浆中的杂质成分，降低了MS检测器被污染的可
能性，满足了代谢产物薯蓣皂苷元的体内监测的需
要。固相萃取法比液相萃取法更体现了“去粗存精”
的原则，在生物样品的预处理中发挥很大的作用，具
有广阔的发展前景。
3．2本实验首次建立了麦冬皂苷代谢产物薯蓣皂
苷元HPLC—MS分析方法，高、中、低浓度的平均方
法回收率分别为(104．63±3．67)％、(94．38±
3．06)％、(93．24±9．20)％，平均萃取回收率均大于
65％，日内、日间精密度均小于10％，符合分析的要
求，且方法专属性较好，为麦冬皂苷代谢产物的体内
监测提供一种有效的手段。
3．3相对生物利用度研究结果表明，两制剂ig单
次给药后，大鼠体内的吸收、分布、消除性质颇为相
似，其药动学参数数据也较为一致，F为(91．10±
3．44)％。用SPSS统计软件程序对两制剂进行生物
等效性的统计分析，即对两制剂各时间点血药浓度、
C⋯进行方差分析和双单侧检验。从各时问点血药
浓度比较、微球与参比制剂混悬剂两种制剂间差异
无显著性；从c⋯比较，两种制剂具有生物等效性。
初步表明将麦冬总皂苷制成肠溶微球，不但可显著
降低胃黏膜刺激性，提高冠心病患者顺应性，而且与
混悬剂等效，有望成为一种新的中药微球制剂供治
疗冠心病心绞痛临床应用。
Reference：
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率高，有利于样品的浓集和纯化，对特征样品尤为有 I-J]·ChinTraditPatMed(中成药)，2004，26(8)：611—613·
秘零秘零零秘祭苕均爵零零零秘琴祭祭祭苔啦孓牙嗡搴零秘密琴祭g的器g沁莽苍黜雾琴祭g啦莽茸譬零茸黜零甥乳琴迎潞牙弛孓牙迎皋牙
· 项目转让 ·
复方灯盏花胶囊
新药类别：
处方组成：
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项目特点：
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中药新药六类
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联系电话：022—2748107127382519联系人：孙女士
万方数据
液质联用研究麦冬皂苷肠溶微球在大鼠体内的相对生物利用
度
作者： 沈岚， 徐德生， 冯怡， 姜玲海， 刘玉敏， 赖奕坚， SHEN Lan， XU De-sheng， FENG
Yi， JIANG Ling-hai， LIU Yu-min， LAI Yi-jian
作者单位： 沈岚,徐德生,冯怡,姜玲海,SHEN Lan,XU De-sheng,FENG Yi,JIANG Ling-hai(上海中医药大
学,药剂教研室,上海,201203)， 刘玉敏,赖奕坚,LIU Yu-min,LAI Yi-jian(上海交通大学
,分析测试中心,上海,200030)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(5)
被引用次数： 7次

参考文献(1条)
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4.徐德生.冯怡.张宁.沈岚.林晓.刘怡 中药提取物物理性质评价与改性技术研究的探索[期刊论文]-世界科学技术-
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5.耿魁魁.段贤春.夏伦祝 液质联用技术在中药药代动力学中的应用[期刊论文]-安徽医药 2010(5)
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