全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·743·
室试验结果表明，HSYA为一血小板激活因子受体
拮抗剂，拮抗血小板激活因子的作用为HSYA抗血
栓作用的机制之一。本实验结果表明HSYA可抑制
ADP诱发的家兔血小板聚集，延长PT及RT，提示
该成分为红花抗血栓有效成分，可阻断多种途径诱
发的血栓形成反应。抑制血栓形成为红花活血化瘀
的主要途径之一，本研究结果对进一步阐明红花活
血化瘀作用机制，指导开发相关新药具重要意义。
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天麻醋酸乙酯提取物抗ADP诱导的家兔血小板聚集作用及机制
淤泽溥，林青+，李秀芳，代蓉，孟保华，何晓山，王妍
(云南中医学院药理教研室，云南昆明650200)
天麻为兰科植物天麻GastrodiaelatBlume的
干燥块茎，古名赤箭，是传统的平肝息风药。现代药
理学研究表明天麻及其制剂具有镇痛、镇静、催眠、
延缓衰老、扩张血管、降低血黏度及抑制血小板聚集
等作用[1]。本室前期研究发现天麻醋酸乙酯萃取部
分(主要成分为以4，4r_二苯酚甲烷、三聚对羟基苯
甲醇等为主的酚性化合物)具有较强的抗血小板聚
集作用，本研究在前期工作基础上对天麻醋酸乙酯
部分进行柱色谱分离，筛选出活性最强的b段，观察
其对家兔血小板聚集的影响，并探讨其作用机制。
1材料
1．1 天麻的提取和分离：药材由本院药植鉴定教研
室张庆芝副教授鉴定为兰科植物天麻G．elata
B1ume。取10kg粉碎后，用95％乙醇浸泡6h，连
续提取3次，减压浓缩得到深褐色糖浆状醇提物
155g。然后用醋酸乙酯：正丁醇、水萃取，浓缩回收
分别得到醋酸乙酯萃取部分(143g)、正丁醇萃取
部分(250g)、水萃取部分(100g)。将醋酸乙酯萃
取部分用硅胶柱色谱分离，分别得到a(6．7g)、
b(6．6g)、C(1．8g)、d(0．17g)、e(0．6g)等5
段，经初步测定醋酸乙酯萃取部分b段[洗脱系统为
氯仿一甲醇(6：1)’]有较强的抗血小板聚集作用，故
对其进行活性研究。
1．2试剂与仪器：阿司匹林，由昆明友谊制药厂惠
赠。维拉帕米，上海禾丰制药有限公司产品，批号：
H31021343；二磷酸腺苷(ADP)系Sigma公司产
品，溶于生理盐水中。Fura-2／Am购自Sigma公司，
用DMSO溶解后，一20℃避光保存，质量浓度为1
mg／mL，使用时终浓度为3／-mol／L。其他试剂均为
AR级产品。IISS一1B数字式超级恒温浴槽(成都
仪器厂)，LBY—NJ2血液凝聚仪(北京普利生科贸
集团)，RF一5000荧光分光光度计(13本岛津)，台
式低速离心机(上海电机厂)。
1．3实验动物：日本大耳白兔，体重2～2．5kg，雌
雄兼用，由昆明医学院动物科提供，动物合格证号：
滇实动证第2005014号。
2方法
2．1 体外血小板聚集实验：自清醒兔颈动脉取血，
以3．8％枸橼酸钠(血与抗凝剂体积比为9：1)抗
凝收集于塑料离心管中，以1000r／min离心10
min得到上层液即富血小板血浆(plateletrich
plasma，PRP)，余下以3000r／min离心10min得
到贫血小板血浆(plateletpoorplasma，PPP)∽o，
PPP用以调零和稀释PRP中的血小板数。实验过
程中所有接触血小板的器皿均先进行硅化处理，用
比浊法口3进行血小板聚集性测定，记录血小板聚集
率，并以公式[对照管聚集率一样品管聚集率)／对照
管聚集率×100％]计算药物对血小板聚集抑制率，
实验数据用i士s表示，方差齐用t检验，方差不齐
用t7检验(下同)o
2．2血小板细胞钙浓度([-Ca2+]t)测定(荧光法)：
同上方法得到家兔PRP，以3000r／min离心10
收稿日期：2006—11-22
基金项目：云南省自然科学基金资助项目(2002c0057M)
作者简介：淤泽溥(1957一)，男，教授，硕士生导师，长期从事药理与中药药理学教学和科研工作，发表论文51余篇。
E—mail：yuzepu@126．tom
*通讯作者林青Tel：(0871)6554562Fax：(0871)6212252E—mail：kminqing@yahoo．com．cn
万方数据
·744· ’中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
min得血小板团块，吹打血小板细胞使其悬浮温育
的HEPES缓冲液中(mmol／L，NaCl：134、KCl：
2．9、NaHC03：12、NaH2PO。：0．26、MgCl2：1、葡萄
糖：5、Hepes5mmol／L和BSA0．35％，pH7．2)[2]，
洗涤血小板两次后，在37℃HEPES缓冲液中用终
浓度3p．mol／LFura-2／Am负载45min，以3000
r／min离心5min，连续冲洗3次，去除细胞外残存
的Fura一2／Am，用缓冲液配成4．0×1011～5．0×
1011／L血小板悬浮测定液，取定量测定液分别加入
溶媒和药物，用岛津RF一5000型双波长荧光分光
光度计测定，E。为505nm，发射光栅10nm，E；分别
为340、380nm，激发光栅5nm，双波长下的荧光比
值(R)。先使细胞静息1min后加25／lmol／LADP
20肛L，5min后加入0．1％TritonX一10050弘L破
坏其细胞膜，测饱和状态下的最大荧光比值(尺。。)，
1min后加入终浓度10mmol／LEGTA50弘L完全
络合Ca2+，测其最小荧光比值(R。i。)，同步记录E。为
380nm条件下零Ca2+和饱和Ca2+的荧光强度(Ff。
和Fb2)，按公式‘4]：[Ca2+]i=kd(R—R面。／Rm．；--R)
(Ff。／Fb：)计算出家兔血小板细胞在有无外钙
(CaCl：1mmol／L)下ADP诱导的血小板[-Ca件]i，
前者反应细胞内钙释放和外钙内流引起的胞浆内的钙
增加，后者反应内钙释放。是d值为解离常数224[5’引。
3 结果
3．1 天麻醋酸乙酯萃取部分分离物b段对ADP
诱导的家兔血小板聚集的影响：当诱导剂ADP终
浓度5弘mol／L时，b段对ADP诱导的血小板聚集
具有抑制作用，且呈量效关系，IC。。值为3．41rag／
mL。在质量浓度6．6mg／mL时聚集率为(5．78±
3．84)％，与空白对照组相比差异具有非常显著性意
义，随着质量浓度的稀释，抑制作用递减，在质量浓
度为1．65mg／mL，其聚集率为(39．284-3．98)％，
与空白对照组相比差异无显著性意义。结果见表1。
表1天麻醋酸乙醋萃取部分分离物b段对ADP诱导的
家兔血小板聚集的影响G士s，矗一6)
Table1 Effectofb-fractionofEtOAcextractfrom
G．elataonrabbitplateletaggregation
inducedbyADP(罩土s，雄一6)
与空白对照组比较l—P。。P3．2天麻醋酸乙酯萃取部分分离物b段对家兔血
小板细胞[-Ca2十]t影响：b段在6．6mg／mL时，对
ADP诱导的血小板细胞外钙内流与内钙释放和对
照组相比差异均有非常显著性意义。浓度对半稀释
后对细胞总[-Ca2+]i、释放[-Ca2+]i、胞外流入
[-Ca2+]i的影响相对减弱，但与空白对照组相比差
异均有非常显著意义。当质量浓度为1．65mg／mL
时仅对ADP诱导的外钙内流有明显影响，对内钙
释放无影响。结果见表2。
表2天麻醋酸乙酯萃取部分分离物b段对家兔血小扳细胞[Ca：+]i的影响(；土$，露一5)
Table2 Effectofb-fractionofEtOAcextractfromG．elataonrabbitplatelet[Ca什]iG士s，一一5)
与空白对照组比较：’P。P4讨论
临床报道天麻可以明显改善与脑供血不足有关
的某些疾病的症状，而脑缺血、心肌缺血、动脉粥样
硬化和外周血管病的血小板细胞中[-Ca2+]i水平显
著升高[7]。本室的前期研究表明：天麻醋酸乙酯萃取
部分能明显抑制血小板聚集[8]，本研究结果进一步
表明其抑制血小板聚集的作用与抑制血小板外
Ca2+内流有关。
在诱导血小板聚集的激活剂中，ADP虽只是一
种弱的激活剂，但对其他激活剂如诱导致密颗粒释
放、凝血酶、胶原所激发的血小板活性，ADP则是一
个必要的共同因子。研究资料表明ADP诱导血小板
聚集还表现在对[-Ca2+]i的影响，它可以使血小板细
胞上的钙离子通道开放，引发胞外钙内流，同时可以
万方数据
中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·745·
激活磷脂酶C，促进IP分解，产生三磷酸肌醇，促使
胞内的致密管道系统释放钙离子，使[Ca2+]i升高，导
致钙超载[9]。细胞外钙离子进入细胞内或细胞内钙库
释放钙离子都可以引发钙波动，表现为胞浆内钙离子
浓度的变化，最终引发相应的生物行为[10|。
本研究结果表明，从天麻醋酸乙酯萃取部位中
用硅胶柱分离出的b段对ADP诱导的血小板聚集
具有明显的抑制作用，IC。。值为3．41mg／mL。b段
可明显抑制血小板细胞内总钙水平的升高，对内钙
释放和外钙内流均有明显的作用，且呈现出剂量依
赖性，由此认为b段抑制ADP诱导的血小板聚集
的机制是抑制细胞膜上的钙离子通道，使[-Ca抖]i内
流受阻，即通过抑制钙离子的内流达到抑制血小板
聚集的作用；同时也可能与其在胞质中抑制磷脂酶
C，导致胞内的致密系统释放钙离子减少，从而降低
胞内[Ca2+]i有关。
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双黄连粉针剂联合蒙脱石散剂治疗d、JL轮状病毒肠炎的疗效观察
韩成林
(天津市宁河县医院，天津301500)
双黄连粉针剂由金银花、连翘、黄芩3味中药组
成，具有清热解毒、抗菌消炎、解除平滑肌痉挛、修复
肠道、改善肠道循环、增强细胞和体液免疫功能等作
用。蒙脱石散剂为天然的高效消化道黏膜保护剂，其
双八面体微粒，对病毒、病菌、水分及毒素有强大的吸
附固定作用，分布于肠腔表面，提高黏膜屏障对攻击
因子的防御功能，调节肠道微生态平衡。两药联用在
治疗小儿轮状病毒肠炎环节上具有互补性和协同作
用。本院儿科2001年至2005年1月，收治小儿轮状
病毒肠炎171例，通过药物的联合、单独、对照治疗，
进行了疗效对比分析，以寻求其较适合的治疗方法。
1临床资料与方法
1．1 诊断标准及临床资料：诊断符合秋季腹泻标
准[1]的171例患儿列为观察对象：年龄3个月～2
收稿日期：2006—10—25
岁：发病时间为每年10月～次年1月；可伴有腹泻、
呕吐、发热。脱水程度为轻度脱水93例，中度脱水
67例，重度脱水8例；大便稀水样或蛋花样便，无脓
血，常规检查大多正常，少数有少量白细胞≤5／HP，
大便细菌培养阴性；采用ELISA检测粪便轮状病
毒抗原(IgM)阳性。171例患儿随机分为4组，各
组性别、年龄、临床表现均无显著差异。
1．2分组：将171例住院轮状病毒肠炎患儿，随机
分为联合用药组46例；蒙脱石散剂(法国博福一益普
生制药集团)治疗组40例；双黄连粉针剂(哈尔滨中
药厂生产)治疗组42例；对照组43例。
1．3治疗方法：对照组(I)，按病情给予常规治疗，
脱水者按脱水程度给予口服补液盐或静脉补液纠正
及对症处理。双黄连粉针剂组(Ⅱ)在常规治疗基础
万方数据
天麻醋酸乙酯提取物抗ADP诱导的家兔血小板聚集作用及机制
作者： 淤泽溥， 林青， 李秀芳， 代蓉， 孟保华， 何晓山， 王妍
作者单位： 云南中医学院,药理教研室,云南,昆明,650200
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(5)
被引用次数： 5次

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