全 文 ：·936· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
crosidecontentsbetweenwildandplantingGentianainQing—
haiprovince[J]．WestChinaJPharmSci(华西药学杂志)，
2005，20(2)：137．
[10]LiXY，LiFA，LiJM，eta1．Researchtheinfluencefa tors
onthegentiOpicrosideinplantingGentianafromQinghai
Province[J]．ChinTraditHerbDrugs(中草药)，2005，36
(8)：1237．
[11]Ha0BH，SunWJ，ZhiZH，eta1．Supersonicextra tionof
gentiopicrininGent妇namacrophyllaPallandetermination
ofitscontentbyHPLC[J]．JNorthwestUniv：NatSci(西
北大学学报：自然科学版)，2004，36(1)：81．
[123BaiS，NiJ，KongH，eta1．Studiesonextractionprocessof
Gentiana[J]．ChinTraditPatMed(中成药)，2005，9(27)：
1 074．
连翘中连翘苷HPLC测定方法的改进
陆红柳1‘2，谭喜莹1’2，张飞1’2，赵陆华1’2。
(1．药物质量安全与预警教育部重点实验室，江苏南京210009；2．中国药科大学分析测试中心，江苏南京210009)
连翘Forsythiasuspensa(Thunb．)Vahl是木
犀科植物连翘属落叶灌木，以果实入药，连翘药材商
品分为“青翘”、“老翘”[1]。连翘是中药中最常见的药
材之一，具有清热解毒、散结消肿之功效。其主要成
分为连翘苷、连翘酯苷、连翘酚等。对连翘及连翘相
关制剂的质量评价中，多以连翘苷作为一项主要指
标。对于样品的预处理，《中国药典》[21是采用过氧化
铝柱方法，文献[3~61中有采用石油醚脱脂后超声法，
冷浸过夜法，sPE法等。但经研究表明这些方法比
较繁琐，特别是对于因产地差异或药材储存期限所
致连翘苷量较低的样品测定，回收率低，重现性差。
对于测定波长的选择，《中国药典》及文献多采用
277nm，由于连翘苷在该波长处吸收小，低量的样
品测定误差较大。因此，本实验对《中国药典》方法及
文献方法进行改进，采用直接超声方法提取连翘药
材，并选择低波长进行测定，结果可靠，方法简便，回
收率及灵敏度高，重现性好。
1仪器与试药
岛津LC一10ADVP高效液相色谱仪，岛津
SPD一10AVP检测器，浙江大学N2000型色谱工
作站。乙腈为HPLC级，水为乐百氏纯净水。连翘苷
对照品和连翘对照药材由中国药品生物制品检定所
提供。连翘药材收集于河南、南京，经中国药科大学
宋学华教授鉴定为正品。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：大连依利特HypersilC，。
(250mm×4．6mm，5肛m)；流动相：乙腈一水(24：
76)；体积流量1·0mL／min；检测波长205nm；柱
温：室温；迸样量t20FL。
2．2 对照品溶液制备：精密称取连翘苷对照品
4．94mg，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，
制成质量浓度为494}tg／mL储备液。精密吸取连翘
苷储备液适量，配制成为19．8lug／mL连翘苷溶液。
2．3供试品溶液的制备：精密称取连翘药材粉末1
g，加80％甲醇100mL浸泡30min，超声30min，静
置10min，再超声30min，滤过，浓缩，定容至50mL
量瓶中，微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2．4测定方法：精密吸取供试品和对照品溶液各
20弘L，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，
以外标法计算样品的量。见图1。
t／rain
1一连翘苷
1-forsythin
图1 连翘苷对照品(A)和样品(B)色谱图
Fig．1Chromatogramsfforsythinreference
substance(A)andsample(B)
由图1表明，本法测定基线平稳；杂质峰对连翘
苷的测定无干扰；虽然2～4min极性大的成分峰较
多，但容易洗脱，不影响测定。
2．5 线性关系：分别精密吸取连翘苷储备液适量，
配制成98．8、49．4、19．8、9．88、4．94、1．98、0．988
pg／mL连翘苷对照品溶液，分别进样20弘L。以连翘
苷的质量浓度对色谱峰面积进行回归统计，回归方
收稿日期：2006一08—10
*通讯作者赵陆华Tel：(025)83271185E—mail：zhaoluhua@hotmail．com
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·937·
程为y一55420X+14838，r一0．999。连翘苷在
0．988～98．8ttg／mL与峰面积呈良好的线性关系。
2．6稳定性试验：取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8
h进样，计算得连翘苷峰面积的RSD为1．9％(咒=
5)，表明供试品溶液在8h内稳定，均可进行测定。
2．7精密度试验：取河南青翘供试品溶液，连续进
样6次，计算得连翘苷峰面积的RSD为1．4％(，z=
6)，表明进样精密度良好。
2．8重现性试验：取同一产地连翘药材6份，制备
供试品溶液，进样测定，计算得其质量分数的RSD
为2．2％(咒=6)，表明重现性良好。
2．9回收率试验：采用加样回收率测定方法。取连
翘药材0．5g，分别加入定量的连翘苷对照品溶液
1．2、1．0、0．8mL，制备供试品溶液，依法测定，结果
连翘苷的平均回收率为96．7％(以一3)，RSD为
0．4％。
2．10样品测定：取各产地的老翘和青翘，制备供试
品溶液，平行操作3份，依法测定。并与《中国药典》
方法测定作比较，见表1。
表1样品测定结果(一一2)
Table1 Determinationofsamples锄一2)
从表1可以看出：《中国药典》规定连翘药材中
连翘苷的量不得少于0．15％，连翘苷的量在o．2％
以上的样品，两种方法的测定结果基本一致。对于连
翘苷的量较低，在0．15％以下的样品，两种方法的
测定结果差异较大。其原因是《中国药典》法过柱时
损失较大，另外277nm处检测灵敏度较低。对于低
量样品的测定，《中国药典》法回收率低，重现性差，
而本法回收率高、重现性好。
3讨论
3．1样品预处理方法选择：在连翘苷的提取方法选
择中，主要注意两个因素的影响，一是提取回收率，
尽可能地提取完全；二是除去杂质，以免干扰测定或
损坏色谱柱。《中国药典》法及文献法[4’51都集中于在
连翘苷的提取过程中除去杂质，但经试验发现，这些
处理过程复杂，重现性差，特别对于低含量样品回收
率偏低。而本实验改进后的方法，采用80％甲醇直
接超声提取，无需除去杂质步骤，操作简便，耗时短，
样品损失少，同时杂质对样品的测定不仅无干扰，且
容易洗脱。经多次试验证明，柱压没有升高，柱效没
有降低，所以按本法制备的供试品溶液中的杂质不
损坏色谱柱。
3．2色谱条件选择：连翘苷对照品溶液在200～
400nm有3个吸收峰[6]，其中205nm处吸收最强，
230nm处次之，277nm处最弱，并且205nm处的
吸收系数相当于277nm处的约4倍。《中国药典》法
及现有文献报道的连翘苷测定都是采用277nm左
右，对于连翘苷量较低的样品的测定结果偏差大。本
实验在吸收系数最大的205nm处测定，所以大大
提高了灵敏度，排除了其他成分的干扰，适合含连翘
苷量较低的样品的测定。
References：
[1]EditorialBoardofChinaHerbal，StateAdministrationof
TraditionalChineseMedicine，China．ChinaHerbal(中华本
草)[M]．Shanghai：ShanghaiScientificandTechnicalPub—
lishers，1999．
E23ChP(中国药典)Es]．VolI 2005．
[3]ZhangT，ChenXS．Determinationofforsythinind fferent
processingproductsofFructusForsythiae[J]．ChinTradit
HerbDrugs(中草药)，2005，36(9)：1339—1340．
E4]ZhengC，ZuYG，LiQY，eta1．ApplicationofSPE—Ultra—
soundinquality—controlofF uctusForsythiae[J]．ChinL，
AnalChem(分析化学)，2005，33(6)：894．
[5]HouL，WangQ，RenJ B．Determinationofph llyrinin
FructusForsythiaefromdifferentplacesbyRP—HPLCl-J]．
ResPractChinMed(现代中药研究与实践)，2005，19(1)：
48—50．
E6]HanGR，PangGX．Studiesondetectionwavelengthfor
forsythin[J]．DrugStandChina(中国药品标准)，2005，6
(3)：7】一73．
万方数据
连翘中连翘苷HPLC测定方法的改进
作者： 陆红柳， 谭喜莹， 张飞， 赵陆华
作者单位： 药物质量安全与预警教育部重点实验室,江苏,南京,210009;中国药科大学,分析测试中心,江
苏,南京,210009
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(6)
被引用次数： 6次

参考文献(6条)
1.Editorial Board of China Herbal State Administration of Traditional Chinese Medicine China 中华本
草 1999
2.中华人民共和国药典(一部) 2005
3.Zhang T;Chen X S Determination of forsythin in different processing products of Fructus Forsythiae
[期刊论文]-中草药 2005(09)
4.Zheng C;Zu Y G;Li Q Y Application of SPE-Ultrasound in quality-control of Fructus Forsythiae[期刊
论文]-分析化学 2005(06)
5.Hou L;Wang Q;Ren J B Determination of phillyrin in Fructus Forsythiae from different places by RP-
HPLC[期刊论文]-现代中药研究与实践 2005(01)
6.Han G R;Pang G X Studies on detection wavelength for forsythin[期刊论文]-中国药品标准 2005(03)

引证文献(6条)
1.谭喜莹.赵陆华.王淑云 HPLC法测定急咳停颗粒中连翘苷的含量[期刊论文]-中国药师 2009(11)
2.刘宏明.赵昌军 高效液相色谱法测定六味五灵片中连翘苷的含量[期刊论文]-中国中医药信息杂志 2010(11)
3.于春霞.王爱青.王玮 高效液相色谱法测定肾炎解热片中连翘苷的含量[期刊论文]-山东化工 2011(11)
4.史大军.邱海蕴.康红英 HPLC法测定清喉咽颗粒中连翘苷的含量[期刊论文]-中国药事 2012(1)
5.李延雪.孙菲.邵礼梅 HPLC法测定复方芩兰口服液中连翘苷的含量[期刊论文]-中国医药导报 2012(26)
6.索银科.邝小莉.罗兰.李乃高 HPLC法测定退热解毒注射液中连翘苷的含量[期刊论文]-中国药事 2010(10)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200706055.aspx