全 文 ：中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·741·
瘤细胞生长瞳1；③促进线粒体细胞色素C释放入胞
质，激活相关caspase激酶和引起PARP蛋白降解，
促进细胞凋亡的级联反应过程[31；④通过抑制PKC
上调iNOS的表达，iNOS的过量表达引发caspase一
3表达[4]。芸香苷具有广泛的生物学活性，既可抑制
脂质过氧化、抑制血小板聚集、抑制环氧化酶、对实
验性急性胰腺炎具有一定的保护作用，又能够抑制
细胞增殖和诱导细胞凋亡。本实验通过RT—PCR法
证实芸香苷在诱导K562细胞凋亡过程中激活了效
应蛋白酶caspase一3的表达，Western—blotting检测
到胞浆中细胞色素C的表达，表明细胞色素C促进
线粒体细胞色素C释放入胞质，激活相关caspase
激酶，促进细胞凋亡的级联反应过程，诱导肿瘤细胞
凋亡。芸香苷诱导实体瘤和白血病细胞凋亡的其他
详细机制还有待于进一步研究探讨。
References：
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三七总皂苷改善兔动脉粥样硬化斑块稳定性的机制探讨
袁志兵，李晓辉。，李淑惠，张海港，刘 雅
(第三军医大学基础部，重庆400038)
动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块破裂是导致心
脑血管事件发生的重要原因，大量研究表明：60％～
75％的急性冠脉综合征(acutecoronarysyn—
drome，ACS)是由于斑块破裂继发血栓引起的。不
稳定斑块虽然不易导致严重的管腔狭窄，却容易发
生破裂、糜烂、钙化等情况而易于继发血栓而引起
ACS口]。因此，采取有效措施增强斑块稳定性将对
ACS的防治有重要意义。但是，迄今尚缺乏稳定AS
斑块的有效措施，因此寻找其有效救治药物十分必
要。前期研究发现三七总皂苷(Panaxnotoginseng
totalsaponin，PNS)通过抗炎和免疫调节途径对
兔AS的形成有抑制作用[2]；PNS还能增加兔AS
斑块内胶原水平，增厚斑块纤维帽，减少基质金属蛋
白酶一2(MMP一2)和血管内皮生长因子(VEGF)
表达，有改善兔AS斑块稳定性的作用。本实验进一
步对PNS改善AS斑块稳定性的机制进行探讨。
1材料
1．1动物：日本大耳兔，一级，雄性，体重2．o～2．5
kg，第三军医大学实验动物所提供。
1．2仪器：BX51／61显微镜为Olympus公司产
品；隔水式电热恒温培养箱为上海跃进医疗器械_
厂产品；DGF25012C电热鼓风干燥箱购自重庆华茂
仪器有限公司；ImageProPlus4．5图像分析软件
由MediaCybernetics公司提供，550型酶标仪为
BIO—RAD公司产品。
1．3药物与试剂：PNS(质量分数>990A)由中国
科学院云南植物研究所提供(用时以双蒸水配成
3、9、24mg／mL)[33；胆固醇为成都科龙化工试剂厂
产品。兔抗兔肿瘤坏死因子一a(TNF—a)、白细胞介
素一6(IL一6)一抗为武汉博士德公司产品，小鼠抗兔
二抗、DAB试剂盒为中山生物制剂公司产品。TNF—
a、IL一6ELISA试剂盒购自第四军医大学。
2方法
2．1 实验分组及造模：日本大耳兔46只，给予高
胆固醇饲料[基础饲料+0．5％胆固醇+10％鸡蛋
(去蛋清)+5％猪油]60g／(kg·d)喂养，第12周
末随机选取6只解剖观察模型建立情况。其余动物
随机分4组：模型组[生理盐水5mL／(kg·d)]；
收稿日期：2005—08—12
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30470465；30371768)
作者简介：袁志兵(1979一)，男，湖南省新化县人，硕士，助教，主要从事动脉粥样硬化斑块稳定性的药物干预研究。
Tel：(023)68753397—83E—mail：zhibinyuan@sina．tom
*通讯作者李晓辉Tel：(023)68753397—81Fax：(023)68753397—82E—mail：xhl@mail．tmmu．corn．cn
万方数据
·742· 中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
PNS低、中、高剂量E15、45、120mg／(kg·d)]组。
所有动物均采用单笼饲养，各组均ig给药，以基础
饲料喂养至第20周末。
2．2 ELISA方法测定血清中TNF—a和IL一6水
平：分别于第14、17、20周末兔耳缘静脉取血，静置
后离心得血清，按照试剂盒说明操作(同时设正常
组，取血测定)。
2．3 标本取材及免疫组织化学测定斑块中TNF—a
和IL一6表达：于第20周末，兔耳缘iv空气处死后，
立即剖开胸、腹腔，游离主动脉全长，剥离外膜脂肪
组织，纵行剖开，血管壁可见隆起斑块。置于4％中
性福尔马林中浸泡48h，常规酒精脱水，石蜡包埋，
将其横断面制成5肛m连续切片。每个待测指标在
每条动脉中随机选取3张切片用免疫组织化学方法
进行TNF—a和IL一6表达测定(SP法，阴性对照一
抗用0．01mol／LPBS代替[4])，每张切片随机选取
5个视野(X200)，用ImageProPlus4．5图像分析
系统测定阳性物质表达面积和吸光度，取其均值作
为结果。
2．4 统计学处理：所有数据均以z±S表示，采用
Student—t检验方法。
3 结果
3．1 动物模型情况：实验期间有8只兔因腹泻拒
食，于1～4周死亡；第12周末随机选取6只兔解
剖，血管壁均可见明显隆起斑块，表明兔AS模型建
立成功。
3．2血清中TNF—a和IL一6水平：PNS组血清中
TNF—a水平显著降低，与模型组比较，第14、17、20
周末低剂量组分别下降了21．49％、23．03％、
25．15％(P<0．05)；中剂量组分别下降了
31．37％、38．39％、58．560A(P
PNS对血清中IL一6水平的影响与对TNF—a的影
响结果相似(见表1)。
3．3 AS斑块中TNF—a和IL一6的表达：PNS组
AS斑块中TNF—a表达显著降低。与模型组相比，
低剂量组表达面积、吸光度分别下降了15．52％、
32．36％(P<0．05)；PNS中剂量组分别下降了
41．95％、51．60％(P
4讨论
表1 PNS对AS兔血清中TNF—a和IL．6水平的影响(；±s，一一8)
Table1 EffectofPNSonTNF—aandIL一6levelsin erumofASrabbits(；±s，糟一8)
与模型组比较：’P
(；士s，n=8)
Table2 EffectofPNSonTNF—aandIL一6expressions
inASplaquesofrabbits(z士s，疗=8)
组别
剂量／
(mg·kg
l聿达面积(×102)／吸光度
Ⅱm2 (×106)
表达面积(X102)／ 吸光度
Ⅲ12 (×105)
模型 一
PNS 15
45
120
与模型组比较：’P
AS病变的早期，炎症可引起血管平滑肌的增殖及
变的进展；在AS病变晚期，炎症在粥样斑块破裂和
继发血栓形成过程中起决定性作用[5]。成熟斑块中
大量炎症细胞的聚集是斑块不稳定的关键因素，激
活的T细胞释放包括干扰素一7(IFN一7)、IL一6和
TNF—a在内的大量细胞因子，作用在内皮细胞、巨
噬细胞和平滑肌细胞上，使粥样斑块进一步发展[6]。
AS斑块的稳定性与斑块的成分密切相关，是斑块
破裂的内因和主要因素。纤维帽较厚，脂质的量和新
生血管较少的斑块较稳定。纤维帽的主要成分为血
管平滑肌细胞和细胞外基质(ECM)，ECM包括
I、Ⅱ、Ⅲ、IV型胶原，弹性蛋白，蛋白多糖，糖蛋白及
糖胺多糖五大类。TNF—a、IL一6作为炎症反应重要
的级联因子，可以刺激平滑肌细胞、内皮细胞等产生
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万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·743·
基质金属蛋白酶(MMPs)，可有效地降解胶原和纤
维帽内其他细胞外基质，使得纤维帽变薄，纤维帽的
不断变薄将最终导致粥样斑块的破裂。另外，TNF—a
还能诱导斑块内平滑肌细胞的凋亡，从而使得平滑
肌细胞产生的问质胶原减少，斑块的稳定性降低。炎
症细胞因子还能促使斑块中VEGF表达增加口]，
VEGF能促进斑块新生血管生成，新生血管形成是
斑块不稳定的又一因素口]。
目前，临床上发现的AS病人大部分属于中、晚
期病变，这一时期最大的威胁是不稳定斑块破裂后
产生的并发症。目前对斑块稳定性的研究也越来越
受到重视。本室既往研究发现PNS对AS的早期病
变有防治作用，在此基础上进一步研究发现PNS对
AS成熟斑块也有改善稳定性作用。本实验发现
PNS能降低兔AS中、晚期病变血清中TNF—a和
IL一6的水平及斑块内TNF—a和IL一6表达；中、高
剂量组效果更为显著，二者无明显差异。PNS能有
效改善斑块稳定性，其抗炎作用能延伸至AS斑块
内部，提示PNS改善斑块稳定性的机制可能与其抗
炎作用有关。斑块稳定性的影响因素是非常复杂的，
本课题组将继续就PNS改善斑块稳定性的机制做
进一步探讨。
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4种中药提取液对不同来源成纤维细胞作用的实验研究
郭 军h2，陈宝田1，刘文超2，孟华3，谢炜1，杜永平4
(1．南方医科大学南方医院中医科，广东广州 510000；2．第四军医大学西京医院肿瘤中心，陕西西安710032；
3．第四军医大学生理教研室，陕西西安710032；4．第四军医大学西京医院中医科，陕西西安710032)
胸部恶性肿瘤患者常需要接受胸部放射治疗，
其中胸部的两个重要脏器心脏和肺脏是最易受到放
射损伤的部位，这不仅限制了肿瘤的照射剂量，从而
也限制了疗效，也影响患者的生存质量，有时甚至成
为导致肿瘤患者死亡的直接原因。在放射性损伤过
程中比较重要的一个机制就是成纤维细胞的过度增
殖[1]，因此本实验体外培养了这两种不同来源的成
纤维细胞，并观察当归、川芎、黄芪及丹参各中药提
取液对其的作用。
1材料
川I芎(RhizomaChu nxiong，四川)购于四川
绿色药业科技发展股份有限公司；当归(RadixAn—
gelicaeSinensis，甘肃)、丹参(RadixSalviaeMilti—
orrhizae，甘肃)，黄芪(RadixAstragali，甘肃)均购
于甘肃陇南礼县药材公司，药材均由第四军医大学
西京医院药剂科杨喜忠主任药师鉴定；1个月SD
雄性大鼠由第四军医大学动物中心提供。DMEM
(Sigma)，胶原酶(Gibco)，胰酶(Gibco)。
2方法
2．1 中药制备：当归、川芎、黄芪、丹参粉碎，各称取
100g，其中当归置圆底烧瓶内，加50％乙醇浸泡
30min，在水浴锅上加热回流提取60min，搅拌、滤
过；药渣同法提取60min，滤过。川芎、黄芪、丹参置
烧杯内，加蒸馏水600～800mL浸泡30min，在水
浴锅上加热60min，搅拌、滤过；药渣再加蒸馏水同
法煎煮60min，滤过。合并两次煎液，浓缩至含生药
收稿日期：2005—08—17
作者简介；郭军(1966一)，男，山西人，第四军医大学西京医院主治医师、讲师，南方医科大学中医科博士研究生，主要研究方向为中西
医结合临床药理、肿瘤。Tel：13008409962E—mail：guojundoc@163．com
万方数据
三七总皂苷改善兔动脉粥样硬化斑块稳定性的机制探讨
作者： 袁志兵， 李晓辉， 李淑惠， 张海港， 刘雅
作者单位： 第三军医大学,基础部,重庆,400038
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(5)
被引用次数： 13次
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200605039.aspx