全 文 ：中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·691·
蓣皂苷元的收率高、植物药材资源利用充分、产品成
本低等优点。
Referenees：
[1]RothrockJW，HammesPA，McalleerWJ．Isolationof
diosgeninbyacidhydrolysisof apogeninl-J]．IndE gChem，
1957，49：186．
[2]TangXL，XuZL，XiaB，eta1．Optimizationofspontaneous
fermentationandacidhydrolysisofextractingdiosgeninfrom
therhizomefDioscoreazingiberensis[J]．JPlantResour
Environm(植物资源与环境学报)，2004，13(3)：35—37．
[3]TongL，ZhangSK，LiJ，eta1．Extractionsap geninsfrom
[4]
[53
[63
J[hoscoreazingiberensisthroughenzymatichydrolysisl-J]．J
ShaanxiNormUniv(陕西师范大学学报)，2003，31(2)：81．
PanWJ．XiaoXH，YuanHL，eta1．Reviewonstudyofkey
technologiesinmanufactureofChinesemateriamedica[J]．
ChinTraditHerbDrugs(中草药)，2004，35(4)：361—367．
ZhangLM，ZhangLY，DuLX．Technologyforextracting
diosgeninfromseedsofTrigonellafoenum—graecumthrough
enzymatichydrolysis口]．TransactCSAE(农业工程学报)，
2005，21(2)：16l一164．
ZhangYQ，WangDQ．Them thodofextractingdiosgenin
throughstepwisebiocatalysis[P]．CN：200510014456．4，
2005—07一】1．
抗衰老复方化学配伍关系的色谱指纹谱研究
曹进，叶兆波，车镇涛+
(香港中文大学中医学院，香港)
摘 要：目的 对抗衰老复方形成、配伍以及配制过程的变化进行指纹图谱研究。方法 建立HPLC—UV和LC—
MS指纹图谱，对图谱结果进行比较分析。结果 以获取的复方指纹图谱18个编码指纹峰为基础，对药材指纹图谱
将复方中编码的指纹峰进行来源归属，其中复方1、2号峰来自灵芝11L、21L号峰；复方4、5号峰来自女贞子1N、
4N号峰；复方3、8、9、10、11、12、13、14、18号峰来自五味子lW、4W、12W、14W、16W、18W、22W、26W、31W号峰，
而复方6、7、15、16、17号峰无药材归属峰。归属显示在该测定方法下，药材来源的峰在复方中的表达可以划分一定
的指纹区域，其中6～14min主要来自灵芝，20～30min主要来自女贞子，40rain以后主要来自五味子，区域的划
分加强了抗衰老复方的化学配伍研究的针对性。结论 药材到复方的形成过程中，药材会产生两种变化，一种是不
受共存药材的影响；而另一种是受到影响，结合在抗衰老复方的配制中，如果考虑3药共煎和药材先后加入的情
况，则五味子的加入顺序会影响最终复方的质量，而先投入五味子，后投入女贞子或者灵芝，产生的复方与3药共
煎的结果是相同的，说明在复方配置过程中，药材的变化受到了药材间配伍关系的影响，结果为复方的配伍和质量
研究提供了可行途径。
关键词：抗衰老复方；指纹图谱；配伍
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)05—0691一04
FingerprintinchemicalcompatibilityofAnti-agingCompoundRecipe
CAOJin，PAULIp，CHEChun—tao
(SchoolfTraditionalChineseMedicine，ChineseUn v rsityofHongKong，HongKo ，China)
Abstract：ObjectiveTos udythevarianceoffingerprintpeaksintheprocessesofAnti—aging
CompoundRecipeformation，compatibility，andpreparatio ．MethodsAnti-agingCompoundRecipeand
itsherbs
7
fingerprintchromatogramwerestudiedanvalidatedbyHPLC／UVandLC／MSwhichwereused
inchemicalcompatibility．ResultsBasedonthe18codepeaksfromcompoundrecipefingerprintand
comparedwithherbfingerprints，18codepeaksofcompoundrecipew reundertheassignmentofherb
source，thatwas，No．1，2fromGanodermaNo．1L，21L；No．4，5fromFructusLigustriLucidiNo．
1N，4N；No．3，8，9，10，11，12，13，14，18fromFructusSchisandrae．No．1W，4W，12W，14W，
16W，18W，22W，26W，31W；andNo．6，7，15，16，17werenoassignment．Theassignmentresulted
thepeaksofherbsourcecouldbedividedintoseveralfingerprintregions，asanti—agingformulae，6—14
minmainlyfromGanoderma，20—30minfromFructusLigustriLucidi，after40minfromFructus
Schisandrde．AllofthemenhancedwhatthestudyonchemicalompatibilityofAnti—agingCompound
Recipewasaimedat．ConclusionThetWOactionshaveappearedduringmixingthecrudeChinese
收稿日期：2005—09—17
基金项目：香港政府中药材质量标准项目资助
作者简介：曹进，香港中文大学中医学院博士，助研。
*通讯作者车镇涛Tel：(00852)26098130E—mail：chect@cuhk．edu．hk
万方数据
·692· 中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
medicinalmaterialsntoaformularecipe，oneiSnoinfluenceamongthecoexistedrawmaterials，whilethe
otheriSwithinfluencea hother．InAnti—agingCompoundRecipeththreeCO—decoctedrawmaterialsand
theirsequenceputintoareconsidered．FinalresultspresentthatFructusSchisandraea dingsequence
couldinfluencethequalityofcompoundrecipewhichillustratedthcompatibilityamongherbsand
determinedthevarianceofh rbsduringthepreparationofcompoundrecipe．Andtheresultsal oprovidea
feasiblewaytOstudythecompatibilityandqualityofcompoundrecipe．
Keywords：Anti-agingCompoundRecipe；fingerprint；compatibility
中药色谱指纹图谱是对中药所含物质成分概况
的一种理化表达方式，一般说来仅通过色谱方法得
到的中药样品色谱图应该仅为样品的化学轮廓图，
必须通过一定的数据处理和多个相关样品比较，指
纹峰的归属鉴别等后才可以赋予色谱图以特征性，
这时样品的化学轮廓表达也就转变成为样品的指纹
图谱。指纹图谱具有一定的化学组成鉴别功能，其中
指纹峰间相对比例的变化可以反映出样品在相互配
合中物质成分交互关系。在一定的规范操作和固定
量比的情况下，建立指纹图谱，可利用指纹图谱变化
说明复方中药材之间的相互作用。
抗衰老复方是中国南方民间常用的经验方剂，
由五味子、女贞子、灵芝3味中药组成，通常将3味
中药等比例混合进行水煮，取其滤后水溶液服用。按
照药材组成，其中成分主要包括蛋白质、内酯、氨基
酸、有机酸以及木脂素类成分，以上成分构成显示复
方主要成分包括强极性和中等极性两个部分，在强
极性部分主要包括蛋白质和氨基酸等，而主要的活
性和指标成分集中在中等极性部分，包括有机酸和
木脂素类等成分，为使用反相色谱测定，比较试验证
明采用60％乙醇进行沉淀滤过后取清液测定，可保
留大部分成分，并不减失测定的指纹图谱的特征性，
故本实验中使用供试品均按此处理方式得到。
1仪器与试剂
Agilent1100型高效液相色谱仪(带有二极管
阵列检测器，自动进样装置)，离子阱质谱检测器
(Agilent公司，美国)，Milli—Q纯水器(美国
Millipore公司)。
抗衰老复方(10批，自制)，95％医用乙醇(英国
Unichem公司)，乙腈(Merck公司，色谱纯)，去离
子水(自制)。五味子、灵芝、女贞子药材购自安徽毫
州药材市场，经香港中文大学中医学院鉴定。
2方法与条件
2．1供试品溶液的制备：抗衰老复方对应处方量的
药材，粉碎，混合，以6倍量水煮提2h，滤过，残渣以
3倍量水重复煮提1次，时间为1h，滤过，合并滤
液，浓缩至2倍量，以60％乙醇沉淀，放置24h，滤
过，清液用0．45／_tm滤膜滤过，进样。药材样品及缺
药材阴性样品均按上述步骤，依据处方量分别提取
制备。
2．2 液相色谱条件：色谱柱：PrevailODS—C。。柱
(250mmx4．6mm，5弘m)；流动相：A相为水，B
相为乙腈，线性梯度洗脱，0～80min，A相由100％
洗脱至0％；柱温：25‘C；体积流量：0．7mL／min；进
样量：20弘L；检测波长：210、254、280、320、380am。
2．3 LC—MS条件：液相色谱条件同2．2项。质谱采
用APCI源，电极电压3000V，雾化气压4．1×105
Pa，干燥气5．0L／min，干燥气温度325℃，雾化温
度400cC，扫描范围优屈50～800正离子模式。
3结果与讨论
3．1 方法的验证：复方指纹图谱的测定方法是利用
复方供试品溶液进行摸索的，在得到相应的测定方
法后，指纹图谱的方法需要进行一定的验证，其中包
括精密度、重复性、稳定性以及耐用性等，结果显示
方法的指纹峰精密度和重复性保留时间RSD均小
于1．5％(咒=6)，峰面积RSD均小于5．5％(以一
6)，供试品溶液在48h内保持稳定，保留时间
RSD<1．5％(咒一6)，峰面积RSD<6．7％(咒一6)，
图谱测定在0．5～1．0mL／min体积流量范围，20～
35‘C的温度范围，以及80～100min的运行时间范
围均可以保持指纹图谱的相对稳定，即峰数和峰面
积比之间的稳定和相似。
3．2指纹图谱测定波长的认定：在建立指纹图谱方
法的过程中，采用了210、254、280、320、380am作
为测定的检测波长，最后的结果显示，在254nm下
得到的指纹峰最多，与其他波长的指纹图谱进行比
较，254nm显示了大部分的特征响应，其他波长与
254nm指纹图谱的差异峰在各自波长下占相应波
长下总峰面积均小于10％，因此实际测定中选择
254nm作为指纹图谱的测定波长，用于比较。
3．3供试品的确定：供试样品测定了药材、药材阴
性以及复方的指纹图谱(咒=lO)，为保证评价的一致
性，均采取同样的方法测定。
3．4供试品图谱的编码与标记：供试品指纹峰是对
万方数据
中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·693·
样品中可能成分的表达，需要进行编码才可以用于
比较，另外必须对峰进行认定，才可以保证评价和判
别的准确。以LC—UV为准，其中复方标记了18个
编码指纹峰，五味子、女贞子及灵芝药材分别标记了
31、8、8个编码指纹峰。按照顺序分别以咒、nW、nN、
nL表示，其中、咒为峰号，W、N、L分别表示五味子、
女贞子和灵芝。结果见图1～7。
指纹图谱的标记通过紫外和质谱检测两种方式
同时进行，对编码的指纹峰分别采取其LC—UV图
谱的百分峰高和LC—MS总离子流图谱各对应MS
图谱中所含丰度大于30％以上m／z值，作为该指纹
U lU 20 30 40 50 60 70 80 州100
t|rain
5一女贞苷8一五味子素
5-ligustroside8-schizandrin
圈1抗衰老复方HPLC指纹图谱
Fig．1HPLCFingerprintofAnti—aging
CompoundRecipe
o 10 20 30 40 50 60 70 80 90100
t|min
4W一五味子素
4W—schizandrin
图2五昧子HPLC指纹图谱
Fig．2HPLCFingerprintofFructusSchisandrae
0 lO 20 30 40 50 60 70
r，min
80 90100
4N一女贞苷
4N—ligustroside
图3女贞子HPLC指纹图谱
Fig．3HPLCFingerprintofFructusLigustriLucidi
0 10 20 30 40 50 60 70
r／rain
80 90100
图4灵芝HPLC指纹图谱
Fig．4HPLCFingerprintofGanoderma
0 10 20 30 40 50 60 70
r／min
80 90100
图5缺五味子阴性HPLC指纹图谱
Fig．5HPLCFingerprintofnegativesample
withoutFructⅣsSchisandrae
6
9
} j ．∞
0 10 20 30 40 50 60 70
r／min
80 90100
图6缺女贞子阴性HPLC指纹图谱
Fig．6HPLCFingerprintofnegativesample
withoutFructusLigustriLucidi
6
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90100
r，mill
图7缺灵芝阴性HPLC指纹图谮
Fig．7HPLCFingerprintofnegativesample
withoutGanoderma
峰的标识，这样组成的序列是各个指纹峰的所含内
容物的数字标记，其中由于各个峰的优屈值个数不
一致，按照由小到大的顺序以0补齐，上述结果均经
过10批样品的测定，取共有数据作为标识结果。另
外为考察数据的准确性还分别比较了各供试样品
10批数据的LC—UV和LC—MS的MS平均谱的相
～ 。l垃l卜饵
万方数据
·694· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
似性，数据未列出，同时比较了10批数据各个指纹
峰的在线紫外扫描图，结果表明数据具有一定的准
确性，可以表达图谱的专属程度。
3．5 复方指纹峰的归属鉴别：对结果按照保留顺序
进行指纹峰匹配后，通过比较复方、药材以及药材阴
性图谱，可以将复方中编码的指纹峰进行来源归属，
其中复方1、2号峰来自灵芝11L、21L号峰；复方
4、5号峰来自女贞子IN、4N号峰；复方3、8、9、10、
11、12、13、14、18号峰来自五味子lW、4W、12W、
14W、16W、18W、22w、26W、31W号峰，而复方6、
7、15、16、17号峰无药材归属峰。
从归属结果并结合LC—MS的平均质谱图比较
可以发现，抗衰老复方中的指纹峰是由相应药材来
源的峰组成的，同时在该测定方法下，药材来源的峰
在复方中的表达可以划分一定的指纹区域，其中6～
14rain主要来自灵芝，20～30min主要来自女贞
子，40min以后主要来自五味子，区域的划分加强
了抗衰老复方的化学配伍研究的针对性。
3．6复方形成过程的变化研究：在对比中可以发
现，虽然复方中的指纹峰可以找到一定的药材来源，
但是与同剂量药材图谱比较，其指纹峰之间的比例
发生了变化，其中对应五味子4W、7W、9W、22w、
25W号峰，女贞子3N、4N、5N号峰和灵芝61、71、
81号峰在复方图谱显示中均大大减少甚至不出现，
而其他药材图谱量较小的指纹峰如对应五昧子
12W、14W、16W的峰则在复方中得到了加强，这从
一方面说明了药材在为复方提供了物质基础的同
时，主要的物质变化源于药材间的配伍关系，而另一
方面药材相互之间所含的物质成分在配制复方的过
程中会促进或者干扰成分转移，甚至会产生无法指
定药材归属的成分。进一步为考察比例变化的来源，
采取固定两个药材的量变化剩余的一个药材的量，
分别考察了减少1倍和增加I倍的情况，结果发现
复方中各药材来源的峰有不同的变化情况，其中五
味子来源的峰相对其药材量有明显的改变，12W、
14W、16W号峰随量的增加会增加，而4W、22W号
则减少，女贞子和灵芝来源的峰则不受量改变的影
响，相对比例不变。但是在相同量溶剂提取的过程
中，如果共同减少或者增加药材的投药量，各种药材
来源的指纹峰却可以在一定范围内保持其比例相对
稳定，具体数据没有在这里列出。
3．7 复方配伍的化学变化考察：配伍化学变化研究
需要研究复方组成药材相互之间的干扰和促进的关
系，以复方图谱指纹峰间比例出发，各个药材阴性样
品的图谱显示，药材会由于共存成分的改变而发生
一定的变化，其中五味子和灵芝配伍，五味子的指纹
峰12W、14W、16W号峰会增加，而其他不变，而与
女贞子的配伍中，4W、7W、9W号会减少，而14w、
16W号峰会增加，其余不变，女贞子和灵芝配伍则
不引起指纹峰大的变化，这个结果说明五味子受共
存成分的影响较大，同时在与不同药材配伍过程中
的指纹峰的增减情况也恰恰解释了3．6项中为什么
如果共同减少或者增加药材的投药量，各种药材来
源的指纹峰却可以在一定范围内保持其比例相对稳
定的问题。
3．8复方配制中的质量变化：从以上结果可以看
出，药材到复方的形成过程中，药材会产生两种变
化形式，一种是不受共存药材的影响；而另一种是
受到影响，在抗衰老复方的配制中，如果考虑3药
共煎和药材先后加入的情况，则五味子的加入顺序
会影响最终复方的质量，而先投入五味子，后投入
女贞子或者灵芝，产生的复方与3药共煎的结果是
相同的，这点说明了在复方配制过程中，药材的变
化受到了药材间配伍关系的影响，因此在解决复方
质量问题的过程中，应对药材之间的配伍关系进行
研究和考察，在某些复方投药顺序对质量有最终影
响的情况下，必须考虑共煎和分煎的关系，从而保
证复方的质量。
4结论
本实验利用抗衰老复方进行了复方化学配伍关
系的研究，初步讨论了配伍关系与复方质量变化的
关系，需要指出的是，利用指纹图谱进行复方研究的
过程中，指纹图谱本身对复方成分的显示程度，以及
分析仪器对分析样品的选择性和图谱显示的信息包
容情况都应该是研究的重点。在如何从表达复方化
学轮廓到形成化学指纹图谱，再利用化学指纹图谱
的特征性，结合药物的功效，指明指纹图谱的功能区
域，最终形成功能化的指纹图谱的过程中，指纹图谱
本身特征信息处理和识别以及表达的全面性将直接
影响对复方的阐释和对复方质量的合理评价。
万方数据
抗衰老复方化学配伍关系的色谱指纹谱研究
作者： 曹进， 叶兆波， 车镇涛， CAO Jin， PAUL Ip， CHE Chun-tao
作者单位： 香港中文大学中医学院,香港
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(5)
被引用次数： 1次

本文读者也读过(10条)
1. 冯枫.桑彤 复方升白胶囊的质量标准研究[期刊论文]-广西医学2001,23(5)
2. 陈媛祺.郑赛华.林惠芬 非酶糖基化抑制剂体外筛选方法的研究[会议论文]-2008
3. 马月光.李进 炮制对抗衰老中药材中微量元素的影响[期刊论文]-山东中医杂志2007,26(1)
4. 王举涛.章江生.谢冬梅.陈明 HPLC法测定更年灵胶囊中淫羊藿苷的含量[期刊论文]-安徽中医学院学报
2004,23(4)
5. 郑荔军.徐伟.叶静.ZHENG Li-jun.XU Wei.YIE Jing 复方淫羊藿胶囊质量标准的研究[期刊论文]-海峡药学
2005,17(2)
6. 钟星明.曾靖.江丽霞.刘春棋.肖海 大豆苷元对老龄大鼠心、脑、肝组织SOD、MDA水平的影响[期刊论文]-山东
医药2009,49(6)
7. 郭恒岳 汉方药的抗衰老作用[期刊论文]-国际中医中药杂志2007,29(1)
8. 黄静 补肾抗衰方的抗衰老作用研究[期刊论文]-时珍国医国药2010,21(12)
9. 邓力为.倪健.沈小春.Deng Liwei.Ni Jian.Shen Xiaochun 复方咳喘消颗粒液相指纹图谱研究[期刊论文]-中国
执业药师2010,07(8)
10. 刘玉龙 试论中医药在抗衰老方面的特色[期刊论文]-中国中医药咨讯2010,02(10)

引证文献(1条)
1.李国信.张会宗.刘晶.刘君 生脉拆方系列注射液的制备及质量标准研究[期刊论文]-中国中医药信息杂志
2009(5)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200605020.aspx