全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
三甲氧基异黄烷。
化合物Ⅳ：白色粉末(甲醇)，mp221～222℃。
ESI—MS、1H—NMR和”C—NMR数据经与文献报道[71
对照，确定化合物1V为7一甲氧基一5，37，4-三羟基异
黄酮，即檀黄素(santal)。
化合物V：白色柱状结晶(甲醇)，mp175～
176℃。FeCl。一K。Fe(CN)6(1：1)溴钾酚绿显黄色，
提示该化合物中含有羧基和酚羟基。ESI—MS、
1H—NMR和”C—NMR数据经与文献报道[8]对照，确
定化合物V为对羟基反式桂皮酸。
化合物Ⅵ：粉色针状结晶(甲醇)，mp156～
157℃。FeCI。一K。Fe(CN)6(1：1)溴钾酚绿显黄色，
提示该化合物中含有羧基和酚羟基。ESI-MS、
1H—NMR和”C—NMR数据经与文献报道[8]对照，确
定化合物VI为邻羟基苯甲酸。
化合物Ⅶ：白色针状结晶(甲醇)，mp109℃。
FeCI。一K。Fe(CN)。(1：1)显蓝色，提示为酚性物质。
ESI—MS、1H—NMR和”C—NMR数据经与文献报道凹1
对照，确定化合物Ⅶ为对羟基苯乙酮。
化合物Ⅷ：无色针状结晶(甲醇)，mp142～
143℃。TLC的Rf值及显色行为与p谷甾醇一致；
将其与p谷甾醇对照品混合后熔点不下降，
1H—NMR(CDCl。)和13C—NMR(CDCl。)数据与文献
报道[103对照，确定化合物Ⅷ为p谷甾醇。
化合物IX：无色片状结晶(甲醇)，mp147～
149℃。TLC的Rf值及显色行为与豆甾醇一致；将
其与豆甾醇对照品混合后熔点不下降，1H—NMR
(CDCl。)和”C—NMR(CDCI。)数据与文献报道D03对
照，确定化合物IX为豆甾醇。
化合物x：白色粉末(甲醇)，mp290293℃。
TLC的Rf值及显色行为与胡萝卜苷一致；将其与
胡萝b苷对照品混合后熔点不下降，1H—NMR
(C。D。N)和13C—NMR(C。D。N)数据与文献报道‘113对
照，确定化合物x为胡萝卜苷。
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三七多糖的分离纯化及理化性质研究
盛卸晃，王健，郭建军，龚兴国
(浙江大学生命科学学院，浙江杭州 310027)
三七Panaxnotoginseng(Burk．)F．H．Chen
又名田七、参三七，为五加科人参属植物，是祖国医
学中常用的理血类药物，传统上主要用于活血、化
瘀、补血和止血。近年来对三七药性成分的研究主要
集中在皂苷类成分上，而有关三七多糖的研究较
少n~3。。三七粗多糖具有促进抗体生成，增强巨噬细
收稿日期：2006—10—26
作者筒介：盛卸晃(1983一)，男，浙江金华人，硕士研究生，主要从事分离纯化和分子生物学研究。
Tel：(0571)88206549E—mail：liwiggle@yahoo．corn．an
万方数据
·988· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
胞吞噬活性的作用卧]。本实验采用色谱技术对三七
多糖进行纯化分级，获得PNPSⅡa、Ⅱb组分并对分
离的单一成分进行光谱学分析，表明其是一种典型
的多糖，水解后对其分子组成的研究发现，该多糖组
分由阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖等单糖组成。
1仪器和材料
2023MinicoldLab色谱系统(LKB公司)，SCR
20BC高速冷冻离心机(日本日立公司)，紫外／可见
光分光光度计(日本岛津公司)，NEOCOOL冷冻干
燥机(Yamato公司)，WZZ一1自动指示旋光仪(上
海物理光学仪器厂)，ZFQ85A旋转蒸发仪(上海医
械专机厂)，UV／VisLambdaBio40(PE公司)，红
外光谱仪470FT—IR(NEXUS公司)，AVANCE
DMX500核磁波谱仪(Bruker公司)。
三七(购自云南)；DEAE—Cellulose一32，DEAE—
Cellulose一52(Waterman公司)；DEAE—Sepharose
FastFlow，CM—SepharoseFastFlow，SephadexG一
200(Pharmacia公司)。其余试剂均为国产分析纯。
2实验方法
2．1 三七粗多糖的提取：将粉碎后的三七用无水乙
醇浸泡抽去油脂和色素，药渣风干后水煮60rain，
离心，沉淀中加入蒸馏水再煮60min，重复2～3
次，弃沉淀，合并上清液(棕黄色)，减压浓缩，上清液
加入3倍体积95％乙醇，静置24h，离心收集沉淀。
沉淀经无水乙醇、丙酮分别洗涤2次，用抽滤漏斗抽
于，P。O。干燥，中性蛋白酶结合Sevag法[31脱蛋白
得粗多糖。
2．2 三七多糖的纯化：500mg粗多糖溶解在10
mLPBS中，离心除去不溶物，上清液过DEAE—
SepharoseFa tFlow阴离子色谱柱进行色谱分离，
用0～0．8mol／LNaCl一PBS溶液梯度洗脱(pH
7．6)，以苯酚一硫酸法测490nm处吸光度值(A。。。)，
做洗脱曲线，合并主峰部分，冻干，获得粗多糖
PNPSI、PNPSⅡ组分。
分别称取PNPSI、PNPSⅡ组分200mg，溶于
少量蒸馏水，过CM—SepharoseFastFlow阴离子色
谱柱，用pH5．0的缓冲液(2．5mmol／LNaAc—
HAc)梯度洗脱，盐梯度为0～0．5mol／LNaCl，收
集组分，以苯酚一硫酸法[53测定A。。。，作洗脱曲线，合
并主峰，冻干备用。
2．3理化性质的研究
2．3．1糖的测定：苯酚一硫酸法测定糖的量[6]。
2．3．2纯度鉴定：采用比旋光度法，将配制15rag／
mLPNPSⅡa、PNPSⅡb溶液，分别用30％、60％、
80％乙醇沉淀，然后分别测定乙醇沉淀下的旋光度，
判断其纯度。
2．3．3相对分子质量测定：采用凝胶渗透色谱
(GPC)分析[7]，色谱柱为弘一Bondagel一2Elinear(30
am×7．8ram)，柱填料为UltrahydrogelTm200013
弘m，以环氧己烷(PEO)为标准相对分子质量，制作
标准曲线。样品配制质量浓度为2mg／mL，上样量
1．5mL，用双蒸水洗脱，流速控制在0．8mL／min，
用自动分析仪记录洗脱峰，积分算出样品的相对分
子质量。
2．3．4糖基组成：糖组成分析采用薄层色谱法：以
2mL2mol／LH。S04溶解5mg多糖样品，封管100
℃，水解8h，65℃BaCO。中和，离心收集上清液，
浓缩备用。水解样品液浓缩后点硅胶板，展开剂为正
丁醇一醋酸乙酯一异丙醇一醋酸一水(7：20：12：7：
6)，苯胺一邻苯二甲酸显色。
2．3．5波谱分析
红外光谱(IR)：样品与KBr以1：10混和压
片，上机测定红外光谱。
核磁共振谱(NMR)分析：1H—NMR、13C—NMR
以D：0为溶液，以TMS为参考进行测定。
3结果与分析
3．1 三七多糖的提取与纯化：三七经沸水提取，醇
沉，中性蛋白酶+Sevag法脱蛋白得到的粗多糖中
糖的量为83％。三七粗多糖经DEAE—Sepharose
FastFlow色谱分离，以苯酚一硫酸法跟踪检测，得2
个组分PNPSI、PNPSⅡ。两组分再分别过CM—
SepharoseFa tFlow阳离子色谱柱，以苯酚一硫酸
法跟踪检测，发现PNPSI为单峰，而PNPSⅡ含有
2个组分(PNPSⅡa、PNPSⅡb)，将获得的样品
PNPSⅡa、PNPSⅡb分别经SephadexG一200凝胶
色谱柱纯化，由洗脱曲线可知，PNPSⅡa洗脱峰为
双峰重叠，表明其组分为非单一组分，由洗脱曲线
(图1)可知，PNPSⅡb洗脱峰为单一对称峰，表明
已是单一组分。
3．2三七多糖的理化性质 ’．
3．2．1三七多糖的一般理化性质：三七多糖PNPS
Ⅱa为白色黏稠物，溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有
机溶剂，其溶液呈中性，pH7．0。三七多糖PNPSⅡb
为淡黄色粉末，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机
溶剂，其溶液呈中性，pH7．0。
3．2．2纯度分析：在溶液浓度为15mg／mL条件
下，采用比旋光度法测定三七多糖PNPSⅡ的比旋
光度，结果见表1。可见PNPSⅡa在3种乙醇体积
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·989·
分数沉淀下的比旋光度相差较大，说明PNPS1Ia为
非均一组分。而PNPSⅡb在3种沉淀下的比旋光度
基本相同，由此可知PNPSⅡb为均一组分。
洗脱体积／mL
图1 PNPSⅡb的SephadexG一200凝胶纯化洗脱曲线
Fig．1ElutioncurveofPNPSⅡbonagelcolumn
ofSephadexG一200
表1 三七多糖在不同体积分数乙醇下沉淀的比旋光度
Table1 SpecificrotationofPNPSⅡaandPNPSⅡb
fromP．notoginseng，precipitatedwith
differentethanolc ncentrations
3．2．3相对分子质量：经GPC(300mm×7．8ram)
分析[8]，测得样品PNPS11a含相对分子质量为
9．98×i05和2．83×104的混合物，PNPSⅡb的相
对分子质量为2．07×104。
3．2．4糖基组成：三七多糖PNPSⅡb经酸水解
后，薄层色谱结果表明：PNPSⅡb主要由葡萄糖、半
乳糖、阿拉伯糖组成。
3．2．5红外光谱：从PNPSⅡb红外图谱可以得到
以下信息，PNPSⅡb在3422．52cm-1和2888．46
cm叫处具有多糖的特征吸收峰，1636．98cm-1的吸
收峰可能为水饱和峰，1467．62cml的吸收峰可能
是饱和C—H的弯曲振动，148．76am-1和1060．67
cm叫的峰可能分别为>CH—OH、一CH：一OH中的vC—
O振动，981．85cm．1处的吸收峰可能是C—C的伸
缩振动。PNPSⅡb在842．98cm_1处有吸收峰，表明
其存在a型糖苷键。
3．2．6 核磁共振：PNPS1I b的1H—NMR和
13C～NMR谱图表明，PNPSⅡb存在a、p两种苷键构
型；在糖异头碳C1区有3个峰，结合薄层色谱结
果，推测PNPSⅡb主要由3种多糖残基组成。pD一
葡萄吡喃糖中各个碳的化学位移可能分别为
艿100．89(C一1)，艿72．62(C一2)，艿74．36(C一3)，70．65
(C一4)，艿72．78(C一5)，艿61．79(C一6)。a—D一吡喃半乳
糖中各个碳的化学位移分别为8100．75(C一1)，
68．53(C一2)，71．01(C一3)，70．49(C一4)，72．29(C一
5)，62．19(C一6)，仅一D一吡喃阿拉伯糖中各个碳的化学
位移为艿：105．44(C一1)，71．22(C一2)，73．79(C一3)，
70．89(C一4)，64．43(C一5)，54．12(C一6)。
4讨论
近年来，大量药理及临床研究表明，多糖类化合
物是一种免疫调节剂，它能激活免疫受体，提高机体
的免疫功能。许多实验已经证明它们与感染、肿瘤、
炎症和一些自身免疫性疾病有密切关系嘲，且临床
报道应用三七治疗慢性肝炎，收到很好的效果‘10]。
这说明三七不单是活血化瘀、改善肝脏的血液循环，
还可能与其抗炎、抗病毒及调节机体免疫功能有关。
故本实验对三七多糖成分进行了分析，成功纯化了
两种三七多糖组分(PNPSI，PNPSⅡb)，并对单一
组分PNPSⅡb结构进行了初步解析。今后将对
PNPSⅡb的构效进行深入的分析，同时展开PNPS
Ⅱb的免疫学研究。
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万方数据
三七多糖的分离纯化及理化性质研究
作者： 盛卸晃， 王健， 郭建军， 龚兴国
作者单位： 浙江大学生命科学学院,浙江,杭州,310027
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(7)
被引用次数： 5次

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2. 张向平 中性人参多糖GRN的分离纯化及结构分析[学位论文]2009
3. 田美红.魏民.张丽萍.梁忠岩.TIAN Mei-hong.WEI Min.ZHANG Li-ping.LIANG Zhong-yan 人参果胶SB的分离纯
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4. 王扣 水提三七总皂苷副产物多糖的应用基础研究[学位论文]2007

引证文献(5条)
1.翁艳英.韦藤幼.童张法 内部沸腾法提取三七多糖的研究[期刊论文]-时珍国医国药 2011(6)
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医药学院学报 2009(1)
3.陶俊.文汉 油茶籽多糖分离纯化和结构分析[期刊论文]-食品工业科技 2011(6)
4.张永太.修彦凤.陶建生.施建国.吴浩萍 黄芪、 参、三七中多糖提取工艺考察[期刊论文]-中国中医药信息杂志
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200707008.aspx