全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·499·
发酵三七中的皂苷成分研究
李国红1，沈月毛2，王启方1，张克勤”
(1．云南大学云南省生物资源利用与保护重点实验窒，云南昆明 650091；2．中国科学院昆明植物研究所
植物化学与西部植物资源持续利用重点实验室，云南昆明 650204)
微生物发酵中药将成为中药研究的新内容[1]。
微生物与中药相结合，通过微生物发酵传统中药，使
微生物中丰富的酶系与中药中复杂的化学成分反
应，可能会产生一些中药中不具有的成分或改变一
些成分含量的变化，从而可能为活性化合物的筛选
提供一种新的途径。三七皂苷是三七的主要活性成
分，具有多方面的药理作用，本实验用枯草芽孢杆菌
Bacilluss btilis(Ehrenberg)Cohn对三七须根进
行发酵，对发酵后三七中的皂苷成分进行分离得到
5个化合物，其中化合物人参皂苷Rh。在三七中未
见报道，也未在三七原料药中检测到该化合物，说明
该化合物是通过发酵产生的。
1仪器和材料
材料：三七须根采购于云南省药材市场；枯草芽
孢杆菌B．subtilis保存于云南省生物资源保护与利
用重点实验室。试剂：正相柱色谱硅胶：200～300
目，青岛海洋化工厂；反相柱色谱硅胶(中压柱色
谱)：RP一18，40～63肛M，Merck公司；柱色谱凝胶：
SephadexLH一20，Amersham公司；薄层色谱：硅胶
G板，青岛海洋化工厂；分离所用溶剂均为重蒸工业
纯试剂。仪器：FAB—MS，VGAutoSpec--3000质
谱仪；BrukerAM一400超导核磁共振仪。
2三七的枯草芽孢杆菌发酵
固体发酵，三七须根磨碎成粉状，与水同等比例
混合拌匀，每500g分装入菌袋内，121℃灭菌40
min。每袋接入80mL培养了72h的枯草芽孢杆菌
菌液，将菌种和三七须根充分混匀后培养。7～10d
后培养物为黑褐色，干燥后装入袋内，4℃冰箱保存。
3提取与分离
2kg三七须根发酵产物，80％乙醇提取3次，
浓缩后用正丁醇萃取乙醇提取物，回收溶剂后，萃取
物浓缩得浸膏61g，经硅胶柱色谱(250g)，用氯仿一
甲醇溶剂系统梯度洗脱，根据TLC合并得6个组
分。各组分再经反复硅胶、反相和凝胶柱色谱，得到
化合物I(16mg)、Ⅱ(350mg)、Ⅲ(78mg)、Ⅳ(2
g)和V(70rag)。
4鉴定
化合物I：白色粉末，负离子FAB～MSm／z：
619(IM—HI一，100)，600(M—H一18，20)；
1H—NMR(C5D；N，400MHz)8：0．83(3H，S，H一19)，
1．02(3H，S，H一18)，1．22(3H，S，H一28)，1．57(6H，S，
H一26，27)，1．62(3H，S，H一21)，2．03(3H，S，H一29)，
2．77(3H，m，H一23)，3．92(1H，dd，J1一J2—8Hz，H一
2)，4．23(1H，m，H一6)，4．97(1H，d，J一7．7Hz，H一
6-glc一17)，4．99(1H，d，J一7．4Hz，H一24)，5．47
(1H，d，，一7．4Hz，H一22)；”C—NMR(C5D5N，100
MHz)数据见表1和2。参照文献E2]鉴定化合物I
为人参皂苷Rh4(ginsenosideRh4)。
化合物Ⅱ：白色粉末，负离子FAB—MSm／z：
783(厂M一1]，100)，621(M—H一162，6)；
1H—NMR(C5D5N，400MHz)占：0．78(3H，S，H一19)，
0．81(3H，S，H一30)，0．94(3H，S，H一18)，1．10(3H，S，
H一29)，1．34(3H，S，H一28)，1．41(3H，S，H一26)，1．64
(3H，s，H一21)，1．65(3H，S，H一27)，4．93(1H，d，J一
7．7Hz，H一6一glc(inner)一1’)，5．38(1H，d，J一7．7
Hz，H一6一gle(terminal)一1”)；13C—NMR(C5D5N，100
MHz)数据见表1和2。参照文献[3]鉴定化合物Ⅱ
为人参皂苷R93(ginsenosideR93)。
化合物Ⅲ：白色粉末，负离子FAB—MSm／z：
769([M—1]一，100)，637(M—H一132，6)，475
(M—H一132—162，7)；1H—NMR(C5D5N，400
MHz)艿：0．78(3H，S，H一30)，0．95(3H，S，H一19)，
1．10(3H，S，H一18)，1．38(3H，S，H一29)，1．45(3H，S，
H一28)，1．61(3H，S，H一26)，2．07(3H，S，H一21)，4．94
(1H，d，J一7．7Hz，H一6-glc(inner)一17)，5．77(1H，
d，J一7．7Hz，H一6一xyl(terminal)一1”)；13C—NMR
收稿日期：2004—07—20
作者简介：李国红(1974一)，女，贵州人，云南大学生物资源利用与保护重点实验室博士研究生，主要从事中药的微生物发酵和微生物代
谢产物的研究。Tel：(0871)5033805E—mail：Lghrlx@163．net
*通讯作者
万方数据
·500· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
(c。D。N，100MHz)数据见表1和2。参照文献[4]鉴
定化合物Ⅲ为三七皂苷R2(notoginsenosideR2)。
化合物Ⅳ：白色粉末，负离子FAB—MSm／z：
637([M—1]一，100)，619(M—H—18，13)，475
(M—H～162，20)；1H—NMR(C5DsN，400MHz)6：
0．80(3H，s，H一30)，1．01(3H，s，H一】9)，1．59(3H，s，
H一29)，1．62(3H，s，H-28)，1．67(6H，s，H一26，27)，
2．06(3H，s，H一21)，5．01(1H，d，J一7．7Hz H一6一
glc一17)；13C—NMR(C5D5N，100MHz)数据见表1和
2。参照文献[4]可鉴定化合物Ⅳ为人参皂苷Rh。
(ginsenosideRhl)。
化合物V：白色粉末，负离子FAB—MSm／z：
表1化合物I～V的”C—NMR数据(苷元部分)
Table1 ”C—NMRdataofcompoundsI—V(glycosidepart)
碳位 I Ⅱ Ⅲ N V 碳位 I Ⅱ Ⅲ Jv V
l 39．7 39．2 39．7 39．5 39．7 16 27．3 26．8 26．9 27．1 27．1
2 27．6 26．9 27．8 28．0 27．8 17 50．8 54．8 54．8 54．8 54．7
3 79．7 89．0 78．1 78．2 78．5 18 17．0 16．4 17．7 17．5 17．7
4 39．9 39．7 41．1 40．4 40．1 19 17．5 15．9 17．4 17．7 17．6
5 61．6 56．4 61．4 61．5 61．0 20 140．2 73．0 73．0 73．1 73．0
6 78．2 18．5 79．5 80．1 74．6 21 13．3 27．1 27．1 26．9 26．9
7 45．4 35．2 45．0 45．3 46．0 22 123．6 35．8 35．9 35．9 35．9
8 40．5 40．0 39．7 41．2 41．3 23 29．0 23．0 23．0 23．1 23．0
9 50．6 50．4 50．2 50．3 49．9 24 124．0 126．4 126．4 126．4 126．4
10 39．3 36．9 39．5 39．7 39．5 25 131．4 130．8 130．8 130．9 130．8
11 31．8 32．1 31．8 32．1 32．2 26 25．9 25．9 25．9 25．9 25．8
12 71．9 71．1 71．1 71．1 72．3 27 17．5 17．8 17．7 17．8 17．6
13 50．5 48．6 48．3 48．3 48．3 28 31．9 28．2 32．1 31．7 31．8
14 50．8 51．8 51．7 51．7 51．8 29 17．O 16．6 17．7 16．5 17．2
15 32．4 31．4 31．3 31．8 31．4 30 16．5 17．3 16．7 16．5 17．0
表2化合物I～V的”C—NMR数据(糖链部分)
Table2”C—NMRdataofcompoundsI—V(sugarpart)
碳位 I I II Ⅳ V 碳位 I I Ⅲ Ⅳ V
中间的 6-gle 3-gle 6-gle 6-glc 6-glc末端 3-glc 6-xyl 6-rha
1 106．1 105．2 103．6 106．1 101．8 1 106．1 104．9 101．8
2 75．5 83．5 79．9 75．5 78．9 2 77．2 75．9 72．4
3 80．2 78．4 78．8 79．9 79．4 3 79．9 78．8 72．3
4 72．8 71．6 71．8 71．9 72．8 4 71．1 71．3 74．3
5 78．7 78．2 79．4 78．7 78．3 5 78．0 67．3 69．5
6 63．1 62．7 63．0 63．1 63．3 6 62．9 18．7
784([M]一，100)，638(EM—H～146]一，9)，475
(M—H一146—162，20)；1H—NMR(C。D。N，400
MHz)8：0．95(3H，s，H一6一rha一6”)，0．98(3H，s，H一
30)，1．27(3H，s，H一19)，1．31(3H，s，H一18)，1．39
(3H，s，H一29)，1．49(3H，s，H一21)，1．63(3H，s，H一
26)，1。68(3H，s，H一27)，2．08(3H，s，H一28)，5．25
(1H，d，，一8．0Hz，H一6一glc一1’)，6．43(1H，d，J一
1．8Hz，H一6一rha一1”)；13C～NMR(C5D5N，lOOMHz)
数据见表1和2。参照文献[53鉴定化合物V为人参
皂苷R92(ginsenosideR92)。
5讨论
化合物I鉴定为人参皂苷Rh。，该化合物对一
些癌细胞具有细胞毒作用‘2|，在三七中还未见报道。
本实验从三七须根的枯草芽孢杆菌发酵物中分离到
该化合物，说明在三七的微生物发酵过程中，产生了
该化合物，或至少是提高了该化合物的量，因为经
TLC检测在未发酵的三七须根提取物中没有明显
的人参皂苷Rh。的点，而发酵三七中有明显的该
点，说明发酵过程中，三七须根中的某些皂苷被微生
物转化为人参皂苷Rh；，其来源需进一步研究。
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万方数据
发酵三七中的皂苷成分研究
作者： 李国红， 沈月毛， 王启方， 张克勤
作者单位： 李国红,王启方,张克勤(云南大学云南省生物资源利用与保护重点实验室,云南,昆明
,650091)， 沈月毛(中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用重点实验
室,云南,昆明,650204)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(4)
被引用次数： 14次

参考文献(5条)
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检测[期刊论文]-中药材2006,29(2)
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4. 韩杨.刘翠艳.林德贵 中药制剂发酵前后成分的变化及发酵物急性毒性试验研究[会议论文]-2006
5. 赵雯玮.陈祥贵.李鑫 微生物发酵在中药研究中的应用[期刊论文]-生命科学仪器2008,6(10)
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7. 朱新术 发酵黄芪的乳酸菌选育与发酵参数优化研究[学位论文]2008
8. 王士中 黄芪的糙皮侧耳发酵及其发酵液的药效研究[学位论文]2008
9. 陈智 微生物发酵转化红花增效及其物质基础探索[学位论文]2006
10. 秦琴 发酵在中药研究中的应用概况[期刊论文]-中国西部科技2010,09(21)

引证文献(14条)
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12.杨光明.涂霞.潘扬 发酵对中药减毒增效的研究进展[期刊论文]-食品与生物技术学报 2013(8)
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14.赵鹏 微生物发酵中药三七初步研究[学位论文]硕士 2006


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