全 文 ：·1614· 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
黄杨宁原料中生物碱的分离与鉴定
刘 洁，杭太俊，张正行。
(中国药科大学药物分析教研室，南京江苏 210009)
摘 要：目的 分离鉴定黄杨宁原料中的生物碱，为黄杨宁及其制剂质量控制提供依据。方法用高效液相色谱法
分析并分离纯化黄杨宁中各主要生物碱成分，通过理化方法及光谱分析鉴定化学结构。结果 黄杨宁中主要含环
维黄杨星D．另外两个次要成分分别为环黄杨碱D和环常绿黄杨碱C。结论经色谱分析、分离和光谱鉴定，确证
黄杨宁主要由具有相同骨架结构的同系生物碱组成。环维黄杨星D单体不易由传统的柱色谱或重结晶分离等方法
制得。
关键词：黄杨宁生物碱；环维黄杨星D；环黄杨碱D；环常绿黄杨碱c
中图分类号：R284．】 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)11—1614一05
IsolationandidentificationoftworelatedalkaloidsinHuangyangning
I。IUJie，HANGTai—jun，ZHANGheng—xing
(DepartmentofPharmaceuticalAnalysis．ChinaPharm ceuticalUniversity，Nanjing210009，China)
Abstract：ObjectiveToisolateandelucidatethestructuresofalkaloidsinHuangyangning．
MethodsAlkaloidsfHuangyangningwereseparatedwithpreparativeHPI。C．Thenmlecularstructures
werelucidatedonthebasisofchemicalevidencesandpectralanalyses(UV，IR，MS，。H—NMR，
”C—NMR，COSY，DEPT，HMQC，andHMBC)．ResultsCyclovirobuxineI)isthemajorcomponentin
HuangyangningandcyclobuxineDandcyclovirobuxineCarethetworelatedalkaloids．ConclusionItis
demonstratedth alltheHuangyangningalkaloidshavethesamestructuralf mewithonlyminordiffer—
encesinsubstitutionthr ughchromatographicands ectralanalyses．Therefore，itisnoteasytOpurifycy—
elovirobuxineDbyusingusualcolumn，re～crystallization，orchemicalapproachesforthexistenceofthe
relatedalkaloids．
Keywords：HLlangyangningalkaloids；cyclovirobuxineD；cyclobuxineD；cyclovirobuxineC
环维黄杨星D为自黄杨木中提取、分离、精制
得到的具有良好药理活性的生物碱，临床上已长期
用于与气滞血瘀所致的胸痹心痛、脉结代等症候相
关的冠心病、心律失常等心血管疾病的治疗[1‘2]。然
而，现行标准中的高氯酸非水滴定法和酸性染料比
色法测定，均是测定黄杨宁总生物碱；环维黄杨星D
中有关生物碱的T1。C检查法不能有效实现有关生
物碱的分离和控制其限度。笔者曾采用HPI．C—UV
法测定了目前市售环维黄杨星D原料中环维黄杨
星D，在55％～85％，而非单体，实际为有效部位黄
杨宁生物碱。
本实验采用高效液相制备色谱技术对黄杨宁进
行分析，确认其主要含环维黄杨星D两个有关生物
碱分别为环黄杨碱D(cyclobuxineD)和环常绿黄杨
碱C(cycolvirobuxineC)。
1材料与仪器
黄杨宁、环维黄杨星D由南京小营制药厂提
供。甲醇、正己烷、氯仿、磷酸盐等均为分析纯(南京
化学试剂厂)；水为二次重蒸水。
VGZAB—HS质谱仪，PELambada2UV／Vis
光谱仪，NICOI。ETinpact410FT—IR；BrukerAV
一500NMR．
2分离与纯化
黄杨宁是从黄杨木中提取精制得到的总生物
碱。在优化条件的基础上，建立了高效液相制备色谱
的色谱条件：LichrospherSi02色谱柱(250mm×18
mm，5肚m)；流动相为甲醇一环己烷一丙酮一乙二胺
(100：50：50：2)；EI。SD检测器。用此条件分离纯
化得到环维黄杨星D及另外两个主要有关生物碱。
制备液相典型色谱见图1。
收稿日期：2006—03—28
基金项目：江苏省科技厅科技攻关项目(BE2003608)
*通讯作者张正行Tel：(025)83271256E—mail：Zhangzx@cpu．edu．cn；hangtj@cpu．edu．crl
万方数据
中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·16 5·
l一环黄杨碱D
2一环常绿黄杨碱C
3一环维黄杨星D
1-cyclobuxineD
2一cyclovirobuxineC
3一cvclovirobuxineD
tfm|n
图1黄杨宁的制备型色谱图
Fig·1PreparativechromatogramofHu ngyangning
3纯度检测方法
研究建立了环维黄杨星D定量测定及有关生物
碱检查的HPI．C—UV法：I。ichrospherNH2色谱柱
(250mm×4。6mm，5弘m)，流动相为乙腈一0。4％的
磷酸氢二钾缓冲液(70：30)，柱温35C，体积流量1
m1．／min，检测波长210nm。黄杨宁的典型图谱见图
2一A。环维黄杨星D对照品及其两个主要有关生物碱
样品的纯度(峰面积归一化法计算)分别为99．1％
(图2一B)、97．4％(图2一C)和96．2％(图2一D)。
卜———r—]r———_r———]
() 2(】 () 2()
r———1———-1 r——T———厂——1
0 20 0 10
t／rain
图2黄杨宁(A)、环维黄杨星D(B)、环黄杨碱D(C)和
环常绿黄杨碱C(D)的HPLC图谱
Fig．2HPLCChromatogramsofHu ngyangning(A)，
cycloVirobuxine(B)，cyclobuxineD(C)，
andcycIoVirobuxineC(D)
4有关生物碱结构鉴定
市售黄杨宁原料用高氯酸滴定法测定，其质量分
数达99％以上。亦可用酸性染料比色法测定，TLC法
检查可分出与碘化铋钾试剂呈色的杂质斑点。证明黄
杨宁中有关物质主要为其有关生物碱，并且所含碱基
单元和相对分子质量与环维黄杨星D相近。
与图2一A色谱图中tx11．89min峰相应的有关
生物碱为类白色结晶性粉末，氯仿中易溶，水中不
溶。其EI—MS质谱中，最高质量区的离子峰m／z：
386，为偶数，分子结构中含有偶数个氮原子。高分辨
质谱得到其相对分子质量为386．36，分子式为
C。。H。：N：O，与环维黄杨星D相比相对分子质量减
少16，即相差CH。。甲醇中UV光谱分析表明仅有
末端吸收(入⋯一206．8nm)，表明分子结构中无共
轭体系，只有杂原子胺基和羟基或未共轭的一个双
键。KBr压片IR光谱中在3414～3100、147．5和
1032cm“有一NH及一oH特征吸收；3092．2和
3035．1cm1及1642．8和1605．4cm⋯‘有与孤对双
键(一C—H)相应的吸收。CDCl。中NMR光谱分析，
测得“4．58／3H4．81的烯氢及其HSQC偶合的
CH。烯碳(艿。、100．6)及HMBC相关的烯季碳(dc
153．6)证明与t。11．89min峰相应的有关生物碱结
构中含有一个双键。NMR谱全面分析确证该生物
碱为环黄杨碱D，分子结构见图3，与环维黄杨星D
核磁共振化学位移归属比较见表1。
与图2一A色谱图中tn9．45min峰相应的有关
25
cI弋。，
吲：，喈
cyclovirobuxineD
23
wm”Ml
＼函．；
¨l⋯II洲
CIt2
22
cyclobuxineD
图3环维黄扬星D和环黄杨碱D化学结构式
Fig．3ChemicalstructuresofcyclovirobuxineD
andcyclobuxineD
万方数据
·1616· 中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
衰l 环维黄杨蔓D和环黄杨碱D的NMR数据和”c-lH相关(CDCl3)
Table1 NMRDataand”C一1HcorrelationsofcyclovirobuxineDandcyclobuxineD(inCDCIs)
环维黄杨星D 环黄杨碱D
＆DEPT1H—IsCHSQCdH location dc DEPT 1H_13CHSQC艿H location
生物碱为类白色结晶性粉末。在氯仿和水中均不溶。
本品EI—MS质谱中，最高质量区的离子峰掰／z
416，为偶数，分子结构中含有偶数个氮原子。由高分
辨质谱得到其相对分子质量Mr416．37，分子式为
C：，H。。N。o，与环维黄杨星D相比相对分子质量增
加14，即在环维黄杨星D分子结构上增加了一个甲
基取代基。根据其EI—MS谱特征裂解碎片离子峰
磁／z71(基峰)、m／z58和m／z346峰，并与环维黄
杨星D比较证明，增加的CH。在20一位仲胺基上，鉴
定为环常绿黄杨碱C。分子结构式见图4，特征碎片
离子质谱裂解过程见图5。
5讨论
有文献报道了“环维黄杨星D分离方法改
进”[3]。根据对环维黄杨星D分离提纯工艺及质量
的系统研究，对该文提出以下二点质疑。(1)文献报
道[3]的结果未对环维黄杨星D实际样品存在的有
26弋
NH
cycloVIrobxlneC
图4环常绿黄杨碱C的结构式
Fig．4StructureofcycloVIrobuxlneC
关生物碱进行分离鉴定。仅根据文献作出了“黄杨宁
中存在的有关生物碱结构中的20一位均为叔胺结
构，而不被乙酰化，从而与可被乙酰化的环维黄杨星
D分离”的结论。而本研究表明环维黄杨星D原料
中主要有关生物碱为环黄杨碱为环黄杨碱D(cy—
clobusineD)，该成分及环维黄杨星D结构中的3
和20一位均是仲胺，与其设想的3个有关生物碱结
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·16 7·
弋
NI
m／=：{46(M-70)
：W：332
川
{荆
?W=7()
驯：{ ／CIl3
＼(+_N／
+
c|12——c№
ml：H4
cIl3 ．／CI．{
⋯＼ 、
。 {
C‰
m／=72
川I{。弋高。
m／=5H
。巡～i∥{
夺
c叱
m／=71
m／=7
圈5环常绿黄杨碱C的EI—MS裂解碎片
Fig·5E1一MSFragmentationrouteofcyclovirobuxineC
构特征不同。因此其设计的乙酰化提纯原理不成立。 分离前后主成分和有关生物碱的测定结果，及分离
(2)既然是“环维黄杨星D分离方法改进”，应提供鉴定的对照图谱。文献仅以不灵敏且分离度较差的
叫
耋|／心
≮，
∽＼Ⅻ
Ⅲ＼M
；；_＼M
万方数据
·1618· 中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
TLC法监控纯化结果，准确度值得讨论。
研究表明，黄杨宁有关生物碱与主成分的结构
极其相似，不可能用一般重结晶和选择性反应方法
分离提纯。
References：
[1]I．iuRY．Clinicalapp icationofHuangyangningTablet[J]．
JClinMed(临床内科学杂志)，1997，14(2)；112．
E2]ZhangKS。WuYY．Summarizationofclinicalapplicationof
HuangyangningTablets[J3．PrimJChinMaterMed(基层
中药杂志)，2000，14(4)：52—53．
[33HuGQ，XuQT，ZhangBG，eta1．Animprovedseparation
methodfcyclovirobuxineDfromthetotalalkaloidsof
Buxus[j]．Chin。，NatMed(中国天然药物)，2004，2(3)：
1 55—156．
龙葵全草皂苷类化学成分研究
周新兰。，何祥久2，周光雄2，叶文才2，姚新生h2’
(1．沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳 110016；2．暨南大学中药及天然药物研究所。广东广州510630)
摘 要：目的 研究龙葵Sol。111ItInnigl训押全草的皂苷类化学成分。方法采用硅胶、反相ODS开放柱色谱及反相
Hl’I。c等手段分离化合物，运用波谱技术分析确定化学结构。结果龙葵全草60％乙醇提取物经D一101大孔树脂
柱吸附，获得的60％乙醇洗脱部分再经分离得到8个化合物。利用理化及波谱分析确定这些化合物结构分别为
uttrosideB(1)、uttrosideA(I)、22u，25R一26一O—p—D一吡喃葡萄糖基一22一羟基一呋甾一△5—3p，26一二醇一3一O—pD一吡喃葡
萄糖基一(1—2)一O一[p—z)一吡喃木糖基一(1—3)]一O—pD一吡喃葡萄糖基一(1—4)一D—p-D一吡喃半乳糖苷(Ⅲ)、22a，25R一
26一O一3一I)一毗哺葡萄糖基一22一甲氧基一呋甾一∥一3p，26一二醇一3一O—p—D～吡哺葡萄糖基一(1—2)一f)一[pD一吡喃木糖基一(1—
3)]一O—p—z)一吡喃葡萄糖基一(1—4)一O一肛D一吡喃半乳糖苷(Ⅳ)、5a，22a，25R一26一O—pD一吡喃葡萄糖基一22一羟基一呋甾一
3p，26一二醇一3一O—pI)一毗喃葡萄糖基一(1—2)一D一[pID一毗喃葡萄糖基一(1—3)]一O—pD一吡喃葡萄糖基一(1—4)一。一pD一
吡喃半乳糖苷(V)、5u。22a．25R一26一O—pD一吡喃葡萄糖基一22一甲氧基一呋甾一3p，26一二醇一3一O—pD一吡喃葡萄糖基一
(1—2)一。一[p—z)一吡喃葡萄糖基一(1—3)]一O一口一D一吡哺葡萄糖基一(1—4)一O—pD一吡喃半乳糖苷(Ⅵ)、dumoside(VII)、
5a，20S一3p．16p一二醇一孕甾一22一羧酸一(22，16)一内酯一3一O一8一D一吡哺葡萄糖基一(1—2)一。一[pD一吡喃木糖基一(1—3)]一。一
p一1)一吡喃葡萄糖基一(1—4)一O—p—D一吡喃半乳糖苷(Ⅷ)。结论化合物I～Ⅶ为首次从该属植物中分离得到。
关键词：龙葵；化学成分；甾体皂苷
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)11—1618—04
SteroidalglycosidesfromSolanumigrum
ZHOUXin—lan‘，HEXiang—jiu2，ZHOUGuang—xion92，YEWen—cai2，YAOXing—shen91’2
(1．CollegeofChineseMateriaMediea，ShenyangPharmaeentiealUniversity，Shenyang110016，China；2．Institute
ofTraditionalChineseMedicine＆．NaturalProducts，JinanUn versity，Guangzhou510630，China)
Abstract：ObjectiveTostudythesteroidalglycosidesfromthewholeh rbofSolamumnigrum．
MethodsCompoundsI—Viiiwereisolatedbysilicagel，ODSchromatographies，andreparativeHPLC．
Theirstructureswered terminedbyspectral‘technique．ResultsEightcompoundswerei olatedfromthe
wholeh rbofS。nigrum．Theirstructureswereidentifiedas：uttrosideB(I)，uttrosideA(I)，22a，
25R一26一O—p—D—glucopyranosyl一22一hydroxy—furost—A5—313，26一diol一3-0一t3-D—glucopyranosyl一(1—-2)一O—E13-D—
oxylopyranosyl一(1—’3)]一O—pD—91ucopyranosyI一(1—’4)一。一pD—glucopyranoside(Ⅲ)，22a，25R一26一O—pD—
glucopyranosyl一22一methoxy—furost—A5—36，26一diol一3一O—pD—glucopyranosyl一(1—’2)一。一[pD—xylopyranosyl一
(1—’3)]一O一13-9一glucopyranosyl一(1—’4)一。一pD—galactopyranoside(1V)，5a，22a，25R一26-0—3-D—glucopyra—
nosyl一22一hydroxy—furost一313，26一diol一3—0一p_D—glucopyranosyl一(1—，2)一O—Et3-D—glucopyranosyl一(1—·3)]一O一
0一D—glucopyranosyl一(1—，4)一。一肛D—galactopyranoside(V)，5a，22a，25R一26一O—pD—glucopyranosyl一22一
methoxy—furost一3p，26一diol一3一O—p—D—glucopyranosyl一(1+2)一0一[pD—glucopyranosyl一(1—3)]一D—pD—glu一
收稿日期；2006—03—16
作者简介：周新兰(1978一)，女。湖南省新邵县人，在读博士研究生，主要从事天然产物活性成分研究。
Tel：(020)85223553E—mail；zhouxinlan．student@sina．corn
*通讯作者姚新生Tel：(020)85225849Fax：(020)85221559E—mail：yaoxs@sz．tsinghua．edu．ca
万方数据
黄杨宁原料中生物碱的分离与鉴定
作者： 刘洁， 杭太俊， 张正行， LIU Jie， HANG Tai-jun， ZHANG Zheng-xing
作者单位： 中国药科大学,药物分析教研室,南京,江苏,210009
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 1次

参考文献(3条)
1.Liu R Y Clinical application of Huangyangning Tablet[期刊论文]-临床内科学杂志 1997(02)
2.Zhang K S;Wu Y Y Summarization of clinical application of Huangyangning Tablets 2000(04)
3.Hu G Q;Xu Q T;Zhang B G An improved separation method of cyclovirobuxine D from the total
alkaloids of Buxus[期刊论文]-中国天然药物 2004(03)

引证文献(1条)
1.王雷娜.景士云.宋敏.杭太俊.姜红.文红梅.张正行 探讨LC-MS技术在快速发现和鉴定药物有关物质及代谢产物中
的应用[期刊论文]-药学进展 2007(8)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200611005.aspx