全 文 ：中革蒋ChineseTraditionalandHerhlDrugs第37卷第4期2006年4月
异，DH7a和DH5a显著地高于DH5c和DH5d。
由于克隆与培养基之间存在互作，对其进一步
分析结果表明，4种单克隆大黄毛状根在不同培养
基上蒽醌产量差异显著。以DH7a在B5培养基上蒽
醌产量最高，DH5a在WP培养基上次之，以DH5d
在B5培养基上产量最低。
3讨论
研究表明，不同毛状根无性系具有不同的生长
速率及次生代谢产物量，这是由于毛状根起源于单
细胞，这些细胞在大小、结构、遗传、生理生化特征上
各不相同，其代谢状态和合成次生代谢物的能力也
不同，因此不同毛状根克隆系之间存在很大差
异口“]。本实验诱导产生的4个单克隆毛状根株系
中，其生物量积累和5种游离蒽醌总量存在显著差
异，以克隆DH7a生长速率快，且蒽醌化合物含量
高，因此，要提高蒽醌化合物含量，必须对毛状根细
胞系进一步筛选，以获得生长速度快和蒽醌化合物
含量高的细胞系。
各种培养基由于所含组分及其比例不同，对毛
状根生长及次生代谢产物的形成有不同的影
响E9,103。不同培养基的无机元素浓度差异很大，一般
分为高盐、高硝酸钾、中盐和低盐4种类型，对植物
细胞生长和次生代谢产物的形成必然会有较大的差
异。培养基中硝态氮和铵态氮之间的比例也会影响
毛状根生长和次生代谢产物的合成口“。本实验中，
WP培养基最有利于掌叶大黄毛状根生物量积累，
显著优于MS、N6和B5培养基。对培养基优化的研
究有待进一步深入，应采用统计分析方法对培养基
中各种成分进行多因素多水平的筛选。
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半夏药材中蛋白质IEF电泳图谱的研究
黄必胜，碌科力’，曹艳
(湖北中医学院，湖北武汉430061)
摘要：目的通过对半夏及其近缘植物的蛋白质电泳图谱比较，研究半夏药材的电泳鉴别方法。方法应用等电
聚焦(isoetectrofocusing，IEF)技术，对不同产地半夏及其近缘植物块茎进行比较。结果半夏具有稳定的IEF电
泳图谱，显示具有8条特征蛋白质带．并测定了其等电点(PI)值，半夏与其几种近缘植物的IEF谱有明显的区别。
结论半夏IEF电泳图谱可作为半夏药材的鉴别依据，半夏特征蛋白质的PI值为半夏的鉴定和蛋白质分离纯化
提供了参数。
关键词：半夏；掌叶半夏；本半夏；蛋白质电泳；等电聚焦
中图分类号：R282．7 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)04—0598—03
收稿日期：2005—06—10
*通讯作者陈科力
万方数据
中草噶CMneseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月
IEFElectrophorogramofproteininRhizomaPinelliae
HUANGBi—sheng，CHENKe—li，CAOYan
(HubeiCollegeofTradhionalChineseMedicine，Wuhan430061，China)
Abstract：ObjectiveTodiscriminateRhizomaPinelliaefromitsre[ativesp ciesbyelectrophoro—
gramofprotein．MethodsUsingisoelectrofocusi“g(IEF)technologytocompareheleetrophorogramof
tuberofPinelliaternataproducedindifferenthabitatsandfromitsrelativeplantsthendeterminingthepH
values．ResultsTheIEFeleetrophorogramofRhizo aPinelliaewastablewitheightclearcharacteristic
proteinba dsandhadobviousdifferencesfromthelectrophorogramofthetubersofitsrelativeplants．
ConclusionTheIEFelectroDhore8isofRhizomaPinelliaecanb usedasthedistinguishingbasis．ThePI
valueofthecharacteristicproteinofP．ternanaoffersthebasicparameterforseparationandpurificationof
theproteininRhizomaPindliae．
Keywords：Pinelliat rnata(Thunb．)Breit．；P．pedatisectaSchott；Typhoniumflagelliforme
(Lodd．)BIume；proteinelectroforesis，isoekctrofocus(IEF)
半夏为常用中药材，但在使用上存在品种混乱
现象，其同科和同属近源植物掌叶半夏和水半夏在
某些地区作半夏使用，且一直缺乏有效的理化鉴别
方法。本文采用等电聚焦(IEF)技术对不同产地的
半夏及其近缘品种块茎进行了蛋白质电泳谱的比较
研究，希望为半夏药材的品种鉴别提供科学的依据。
1仪器与试剂
DYY一6B型电泳仅，DYYⅢ27型圆盘电泳
槽，90mm×5mm玻璃管8支。过硫酸铵(AP)，磷
酸，乙二胺，N—N亚甲基双丙烯酰胺，四甲基乙二胺
(TEMED)，PH4—10两性电解质(中国医药集团上
海生化试剂有限公司)，其他试剂均为AR级。
样品均由作者采集并鉴定，鞭檐犁头尖由广东
省中药学校王玉生教授鉴定，材料见表1。
裹1样品来源
Table1 Sourceofsamples
序号 品名 乐植静学名 生长获矗 采集嫱 罘橐对甸
2方法和结果
2．1样品液的制备：精确称取上述各种新鲜样品2
g，置于研钵中，加冰水(--蒸水)5mL匀浆后，置试
管中离心(4000r／min)15min，取上清液即得样品
液，样品液置4℃冰箱中备用。
2．2凝胶的制备：在10mI。烧杯中依次加人30％
凝胶母液0．625mL，40％两性电解质0．19mL，样
品液80pI，，三蒸水1．7mL，lo％AP20pL，
TEMED0．2mL，混匀后立即灌注。胶加到离顶部
约3mm处(注意管内不能有气泡)，胶上再小心覆
盖水层，以隔绝空气并使胶面平整，室温下聚合30～
40min，待胶水界面清晰可见后，缓缓倾出水层。空
白管依法操作，但不加样品液。
2．3电泳槽的安装：制备好的8支凝胶管，编号并
分别用阳极电泳液(5％磷酸缓冲液)清洗各管下端，
用阴极电泳液(5％乙二胺)冲洗上端。按统一的方法
垂直固定于圆盘电泳槽中，上槽加阴极电泳液(以浸
投胶管为宜)，下槽加入阳极电极液(以凝胶管浸入
3／5为宣)。
2．4等电聚焦：按上(一)下(+)接通电源，调恒压
200V进行电泳，电流不断下降，最后以电流不再下降
(电流指示为o)作为电泳完毕标志。全程电泳约2h。
2．5 固定、染色、脱色：电泳结束
后，从电泳槽中小心取出各凝胶
管(标记好各管的上下端)。用三
蒸水洗涤凝胶管两端及玻璃管外
壁3次，随后取出胶条，精确测量
胶管的长度后将样品胶柱置于
20％三氯乙酸中固定30min，然
后置于染色液中染色3～6h，取
出，7％乙酸脱色2：4h，其间每隔1
h换一次脱色液，直到谱带背景清圈1半夏药材
晰为止，进行观察。样品胶柱上出 IEF圈请样
现清晰的谱带，结果见图1。 品l～7
2．6 pH值测定：取空白胶柱按F19。1IEFEle。一
0．5cm／段切成若干段，分别置于“p“”ogramof
各已编号并盛有1mL三蒸水的试P””m
in2耐’
管中，4℃下浸泡lh，用精密pH：：：：：I：：一一7
计测定各样品段浸泡液的pH值。
‘
测定结果见表2。以空白管各段胶所在的位置(即胶
万方数据
-600· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDr gs第37卷第4期2006年4月
柱的长度)为横坐标，一相对应的浸泡液pH值为纵
坐标作图，可求得各样品胶柱上pH梯度曲线。
表2 pH值测定结果
Table2 ResultofpHvalue
柱长，cm pH值 柱长／cm pH值
05 9．4 5．0 5 2
1．0 8．9 5 5 5．0
1．5 8．2 6．0 4 8
2．0 7．8 6 5 4．5
2．5 7 5 7．0 4 2
3 0 7．0 7，5 3 7
3．5 6 5 8．0 3．1
4．0 6 0 8．5 2 0
4．5 5．5
2．7半夏(A庐山、B蛇山、c钟祥)新鲜品自然干
燥l周，其中钟祥半夏按照炮制方法口1炮制成清半
夏(D)、姜半夏(E)。将上述5种样品按2．1制备样
品液，按电泳方法操作，结果见图2。
3讨论
3．1 由图1可见不同产地半夏具有相似的谱带，其
中江西庐山半夏因采集时间早，样品个头小，谱带较
弱；半夏的近缘植物谱带与半夏有明显的区别，可用
此鉴别半夏药材。
3．2 由图2可见干燥的半夏除具有原有的谱带外，
在主带附近新增了细小的条带，可能是干燥的过程
中蛋白质发生部分降解，估计放置时间越长降解越
多，但于半夏和新鲜半夏的谱带非常接近。半夏炮制
品中清半夏虽经过浸泡处理，但未经过高温处理，仍
然有微弱条带；姜半夏由于经过了高温处理，蛋白质
已变性，故无带。由该实验方法可方便、准确地鉴别
半夏药材，且不同产地半夏具有
相对稳定的谱带。
3．3 因胶柱经固定后其长度会
发生变化，故由pH一胶柱长度关
系曲线求被测样品(半夏)所含主
要蛋白质成分的等电点(PI)，所
用长度是经校正后的长度即：
胶柱长度一蛋白质迁移距
离×原胶柱长(固定前)／现胶柱
圈2不同产地长(固定后)
干燥品殛 根据样品各条谱带在各自
炮制品IEF胶柱上的位置(经校正后)，再
IEF图谱分别与各自的pH一长度关系曲
：培‘：1E78kc一线对比，可方便得出样品中主要
ofootei：indry蛋白质PI值。半夏(3种不同产地
andpr。。。。。。dP．的半夏具有相同的谱带，可认为
t口Ⅲ。”口fromdi一是半夏的特征谱带)8种主要蛋
fferenthabitats白质的PI值是：6．50，5．90，5．40，
5．30，5．18，5．03，4．82，4．60。
3．4 两性电解质的加入是为了在电泳支持物上产生
适宜平滑的pH梯度。本实验采用将样品液混入凝胶
液中的点样方法，既简化了操作，增大了加样量，又避
免了样品液在胶柱中所占的一段pH梯度，从而扩大
了电泳分离范围，提高分辨率并缩短电泳时间。
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HPLC—ELSD测定彭泽贝母中浙贝甲素和浙贝乙素
刘红宁1，颜冬梅1，朱卫丰1，饶毅2
(1．现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院，江西南昌 330004
2．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330006)
摘要；目的建立HPLC—ELSD测定彭泽贝母中浙贝甲素、浙贝乙素的分析方法。方法以C-e柱为色谱柱，蒸发
光闶射检测器，运用HPI．C法分离及分析彭泽贝母中的浙贝甲素和浙贝乙索。结果建立了HPLC—ELSD测定彭
泽贝母中浙贝甲素、浙贝乙素的分析方法：色谱柱：HypersilODS2(200raNl×4．6mm，5“m)，柱温30℃。流动相：
乙腈一0．03％二乙胺水(65：35)，体积流量1．0mL／min。检测器参数：漂移管温度83．5c，载气体积流量2．2mI。／
rain，进样量10I=L。结论运用HPI，C—ELSD能够同时测定彭泽贝母中斯J且甲衷、澌贝乙素的量。
关键词：浙贝甲索；浙贝乙素；HPLC—ELSD
中围分类号：R282．6 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)04—060003
鏊鐾是皙{留鉴莒募喜学基金资助项目“江西特产中药彭泽贝母的药效物质及其作用机理的研究。(项目编号；3。】60。母7)
万方数据
半夏药材中蛋白质IEF电泳图谱的研究
作者： 黄必胜， 陈科力， 曹艳， HUANG Bi-sheng， CHEN Ke-li， CAO Yan
作者单位： 湖北中医学院,湖北,武汉,430061
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(4)
被引用次数： 2次

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