全 文 ：·1806· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月
固相萃取分离纯化杜仲中环烯醚萜类化合物
曹 慧1，陈晓青2
(1．南通大学化学化工学院，江苏南通226000；2．中南大学化学化工学院，湖南长沙410083)
杜仲是我国传统的名贵药材，有补肝降压、增强
免疫功能及抗癌、抗疲劳等多种药理作用[1’2]。药理
研究表明，杜仲中的京尼平苷、京尼平苷酸等环烯醚
萜类化合物是主要的降血压活性成分，而其中的桃
叶珊瑚苷却具有升高血压的作用[3,43。因此，将杜仲
中京尼平苷、京尼平苷酸与桃叶珊瑚苷分离十分有
应用价值。固相萃取技术是一个包含液相和固相的
物理过程，在药物、环境、农药等的分析中常作为一
种预处理手段，具有分离纯化效率高、操作简便、溶
剂耗量少等优点[5]。本实验采用以未键合的硅胶为
填料进行固相萃取，以不同极性的溶剂萃取分离纯
化杜仲中的环烯醚萜类化合物，所得产品质量分数
高，易实现工业化生产。
1仪器、试剂与材料
日本岛津2010A高效液相色谱仪；SPD—
M10AVP检测器；甲醇为色谱纯；高效液相色谱所
用水为石英亚沸水；其他试剂均为分析纯；京尼平苷
对照品(质量分数≥98％)、京尼平苷酸对照品(质量
分数≥98％)，日本和光纯药工业株式会社提供；硅
胶(100～140目)，青岛海洋化工厂；杜仲药材购于
湖南张家界，经笔者鉴定为杜仲Eucommiaul—
moides0liv．的干燥树皮。
2方法与结果
2．1 京尼平苷和京尼平苷酸的HPLC测定日’7]
2．1．1色谱条件：VP—ODS反相C，。柱(150mill×
4．6ram)，预柱(10mm×4．6ram)，流动相甲醇一水一
冰醋酸(20：79．5：0．5)，体积流量1．0mL／min，
测定波长237nm，进样量10弘L，柱温25℃。
2．1．2标准曲线的制备：以对照品溶液质量浓度
(x)对色谱峰面积(y)进行线性回归。结果表明，京
尼平苷在5．1～20．4>g／mL，京尼平苷酸在4．0～
16．0肛g／mL与峰面积呈良好的线性关系。线性回
归方程分别为京尼平苷：Y一3314．5+13026．1
X，r一0．9995；京尼平苷酸Y一23114．0+27273．8
X，r一0．9999。
2．1．3测定：用峰高增加法定性，标准曲线法定量。
2．2硅胶的预处理：先用甲醇浸泡12h，甲醇具有
净化和活化硅胶的双重作用。然后用甲醇淋洗以除
去硅胶中的杂质和惰性溶剂，再用大量蒸馏水淋洗，
以除去硅胶中残留的甲醇，最后把硅胶置于于燥炉
里，于120℃干燥活化24h。
2．3有效成分的分离：精确称取干燥杜仲粗粉8g
于索氏提取器中，加入80mL60％乙醇，在50‘C恒
温水浴锅中提取2h，提取次数为3次，滤过，合并滤
液，减压蒸馏，浓缩至约10mL，20mL石油醚萃取
3次，石油醚萃余液用20mL醋酸乙酯萃取3次，醋
酸乙酯萃余液再用20mL正丁醇萃取3次。合并正
丁醇萃取液，减压蒸馏，回收正丁醇，并蒸至近干，所
得膏状物用40mL甲醇溶解完全后，转移入200
mL烧杯中，加入24g处理后的硅胶，在60℃水浴
中加热，挥发除去甲醇，加热时不停搅拌(防止受热
不均，硅胶溅出)。将上述硅胶干法装入底部已铺玻
璃纤维(防止硅胶随溶液流出)的500mL分液漏斗
中，用不同配比的氯仿一甲醇溶液作萃取剂，高效液
相色谱法跟踪指标成分。先加入萃取液(14：1)80
mL，充分振荡，放出萃取液，重复操作2次。再依次
加入萃取液(11：1、9：1、6：1)重复上述操作。合并
萃取液(11：1)，减压蒸馏，得京尼平苷粗品，冷冻干
燥。HPLC测定质量分数为67．86％。合并萃取液
(6：1)，减压蒸馏，得京尼平苷酸粗品，冷冻干燥，
HPLC测定质量分数为63．73％。
2．4有效成分的纯化：将京尼平苷粗品用20mL
甲醇溶解完全后，转移入200mL烧杯中，加入30g
处理后的硅胶，其余操作与2．3项下方法相同，先采
用氯仿一甲醇(14：1)萃取液80mL萃取，再用萃取
液(11：1)80mL萃取，重复操作2次，合并萃取液
(11：1)，减压蒸馏蒸至近干。用10mL甲醇溶解完
全后，重结晶，得京尼平苷精品，HPLC测其质量分
收稿日期：2006—02—06
基金项目：国家自然科学基金重大研究计划项目(90209047)；湖南省科研计划项目(02JZY3029)；湖南省计委科研项目(2002--772)
作者简介：曹慧(1978一)，女，江苏东台人，硕士，助教，主要从事天然药物分离分析研究，在国内核心期刊和SCI／EI核心期刊发表论
文i0多篇。
万方数据
中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月·1807·
数为93．09％。
将京尼平苷酸粗品用20mL甲醇溶解完全后，
转移入200mL烧杯中，加入30g处理后的硅胶，其
余操作与2．3项中相同，先采用氯仿一甲醇(9：1)萃
取液80mL萃取，再用萃取液(6：1)80mL萃取，
重复操作2次，合并萃取液(6：1)，减压蒸馏蒸至近
干。用10mL甲醇溶解完全后，重结晶，得京尼平苷
酸精品，HPLC测定其质量分数为95．74％。
2．5吸附剂用量的选择：在吸附过程中，吸附剂的
用量是一个非常重要的参数。吸附剂用量直接影响
到吸附是否完全、吸附剂的利用率和分离的效果。本
实验考察了硅胶用量与京尼平苷、京尼平苷酸收率
的关系，见表1。
表1收率与硅胶用■的关系
Table1 Relationshipbetweenyieldandsilicageluselevel
可知，在吸附剂用量与原料比达到3：1时，京
尼平苷和京尼平苷酸的收率均较高，分别达到了
69．45％和67．52％。继续增大吸附剂用量，收率没
有显著提高，且增加了成本；较低的吸附剂用量又会
导致收率的降低，所以选择吸附剂用量与原料质量
的比例为3：1。
2．6 萃取液的选择：采用固相萃取小柱进行预试验
选择萃取剂时，考虑到实验的简便，采用氯仿一甲醇
溶液。因氯仿和甲醇的配比不同，混合溶液的极性呈
梯度变化，分别萃取出不同极性的物质。不同配比氯
仿一甲醇溶液对环烯醚萜类化合物进行萃取，萃取液
中甲醇体积分数对成分萃取率的曲线关系见图1。
100
80
量60
褥
鬈ao
20
O
洗脱液中甲醇体积分数／％
图1不同配比的萃取液与萃取率的关系
Fig．1Relationshipbetweenxtractsolution
invariousratiosandextractingrates
可知，当萃取液中甲醇体积分数为6．67％，即
氯仿一甲醇(14：1)时，京尼平苷开始被萃取出，但量
较少，至甲醇体积分数为9．09％，即氯仿一甲醇
(10：1)时，京尼平苷全部被萃取下来。当萃取液中
甲醇体积分数为11．11％，即氯仿一甲醇(9：1)时，
京尼平苷酸开始被萃取出，至甲醇体积分数为
20．oo％，即氯仿一甲醇(5：1)时，京尼平苷酸全部被
萃取下来。考虑到溶剂的消耗和萃取组分的纯度，京
尼平苷粗品收集配比为13：1、12：1、11：1的萃取
液，京尼平苷酸粗品收集配比为8：1、7：I、6：1的
萃取液，萃取率分别达到92．51％和92．48％。
2．7 回收试验：精确称取40g杜仲样品，提取，减压
蒸镏，浓缩提取液，定容至50mL。移取10mL，稀释
至适当质量浓度，测定提取液中京尼平苷和京尼平苷
酸的量。其余取4份10mL浓缩液，制备得京尼平苷
和京尼平苷酸精品，测定，计算回收率，结果见表2。
表2回收率试验结果
Table2 Resultsofrecoveryyieldtest
3讨论
回收试验中有一部分京尼平苷和京尼平苷酸在
制备过程中损失了，其原因可能是硅胶上的不可逆
吸附；有机溶剂萃取的不完全；重结晶过程中的损
失。采用的固相萃取分离纯化技术与中药中有效成
分的其他分离制备方法如制备色谱法、柱色谱法相
比，具有对仪器要求不高、成本低、产品纯度高的优
点。从杜仲中通过优化的提取、分离和纯化方法获得
京尼平苷和京尼平苷酸纯品，不仅为进一步的药理
药效研究奠定了基础，而且为中试规模的生产提供
了技术支持。
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万方数据
固相萃取分离纯化杜仲中环烯醚萜类化合物
作者： 曹慧， 陈晓青
作者单位： 曹慧(南通大学化学化工学院,江苏,南通,226000)， 陈晓青(中南大学化学化工学院,湖南
,长沙,410083)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(12)
被引用次数： 3次

参考文献(7条)
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3.郑礼胜.倪娜.刘向前.陈常青 京尼平苷和京尼平研究及应用现状[期刊论文]-药物评价研究 2012(4)


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