全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·843·
3讨论
本实验通过对甲醇一水、甲醇一0．2mol／L磷酸
二氢钠、乙腈一水不同比例的流动相系统进行比较，
发现乙腈一水(60：40)系统分离效果较好，峰形对
称，故选择此系统为流动相。在该条件下，臭灵丹酸
峰分离良好，峰形对称，理论板数按臭灵丹酸峰计算
不低于6000，臭灵丹酸与相邻色谱峰的分离度大于
2．0，且阴性样品无干扰。
References：
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丹参中总酚酸的分离纯化工艺研究
杨小宁，唐 星，柳玉石
(沈阳药科大学药学院，辽宁，沈阳 110016)
摘 要：目的 考察不同分离纯化工艺对丹参中酚酸类成分提取效率的影响。方法 以丹参提取液中丹酚酸B和
总酚酸转移率为指标，考察不同分离纯化工艺，并采用HPLC法测定各成分的量。结果纯化工艺确定为60％、
80％乙醇醇沉两次，相应乙醇体积分数洗涤沉淀；醋酸乙酯和10％碳酸钠溶液交替萃取。结论水提醇沉和醋酸乙
酯萃取法适合于丹参总酚酸的分离纯化。
关键词：丹参；丹酚酸B；丹参总酚酸；醇沉
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)06—0843一03
SeparationandpurificationofsalvianolicacidsfromSalviamiltiorrhiza
YANGXiao—ning，TANGXing，LIUYu—shi
(SchoolfPharmacy，ShenyangPharm ceuticalUniversity，Shenyang110016，China)
Keywords：SalviamiltiorrhizaBunge；salvianolicacids；salvianolicacidB；al oholsedimentation
丹参为唇形科植物丹参Salviamiltiorrhiza
Bunge的干燥根茎，其有效成分包括水溶性成分和
脂溶性成分。脂溶性成分是以丹参酮为代表的醌类
化合物，具有良好的抗炎作用；水溶性成分主要有丹
参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、咖啡酸、丹酚酸
A、B等，总称为总酚酸。丹参总酚酸具有明显的抗
血栓形成、溶纤和抗脂质过氧化的作用，是治疗心肌
缺血、心绞痛、心肌梗死等心血管疾病的有效成分，
其中丹酚酸B的量最高，而且是主要的活性成分[1]。
丹参水溶性成分的提取方法多采用水提醇沉法，醇
沉效率低，损失大[2]，且所得产物的质量分数低。本
实验在原有方法的基础上，对总酚酸的分离纯化工
艺进行了新的研究，并以药材中有效成分转移的程
度(转移率)为考察指标，对各个工艺步骤及终产物
的总酚酸与丹酚酸B的提取效率进行了测定。
1仪器与材料
收稿日期：2006一10—04
Hitachi高效液相色谱仪，HSM色谱工作站；
Jspes2012—5—10000、Jspes2012—5—100000聚醚
砜膜组件(50mm×300ram)由吉林市金赛科技开
发公司提供。
丹酚酸B、原儿茶醛、丹参素钠对照品均购于中
国药品生物制品检定所，迷迭香酸对照品由北京百
灵威化学品有限公司提供，甲醇为色谱纯，其他试剂
均为分析纯，去离子水。丹参饮片产自安徽，经鉴定
为丹参S．miltiorrhizaBunge的干燥根茎。
2方法与结果
2．1 总酚酸的HPLC法测定[3]：配制适宜质量浓
度的对照品溶液，采用外标两点法分别测定丹酚酸
B、迷迭香酸、原儿茶醛和丹参素(以丹参素钠计)的
量，以4种成分的量之和作为总酚酸的量。
2．2丹参中总酚酸的测定：取丹参饮片，粉碎至40
万方数据
·844· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
目细粉，取0．6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密
加入50％甲醇溶液50mL，称定质量，超声处理15
min后，加热回流3h，取出，放冷，再称定质量，用
50％甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过。取续滤液稀
释至适宜质量浓度，采用HPLC法测定[3]，结果丹
参素、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B的质量分数
分别为0．0693、0。0623、7．92、40．5mg／g，总酚酸
的质量分数为48．5mg／g。
2．3水提工艺的选择[4]：对水提的时间、所用溶剂
量和提取次数进行了正交试验考察，确定最佳提取
条件为水提取3次，第1次加8倍量的水，煎煮2h，
第2次加6倍量水，煎煮1．5h，第3次加5倍量水，
煎煮1．5h。合并煎煮液，浓缩至含生药约1g／mL。
测定浓缩液中丹酚酸B的质量浓度，计算得转移率
为90．01％；以丹酚酸B、迷迭香酸、原儿茶醛和丹
参素(以丹参素钠计)的转移率之和计算得总酚酸的
转移率为88．60％。
2．4醇沉工艺的选择：采用60％、80％乙醇二次醇
沉，但是两次醇沉的总损失率很高，约为30％，这会
影响到后续步骤的转移效率和终产品的质量，因此
尝试对醇沉所得沉淀进行洗涤，以减少有效成分的
损失。将60％、80％乙醇醇沉液滤过，滤液另置。所
得两份沉淀分别用相应体积分数的乙醇洗涤，充分
搅拌，静置2h，滤过。乙醇用量分别为药材量的2、
4、6、8倍。以沉淀洗涤液中总酚酸和丹酚酸B的量
占原药材质量的比例(即洗涤液中的转移率)为指标
进行考察，结果见表1。60％乙醇醇沉沉淀中有效成
分的转移在溶剂为6倍量时达到最高，但4、6、8倍
量所得结果差别无显著性，为节约溶剂，采用2倍量
溶剂洗涤沉淀2次。80％乙醇醇沉沉淀中有效成分的
转移虽然随溶剂用量的增加而增加，但考虑投入与产
出的比值，80％乙醇醇沉所得沉淀不再进行洗涤。将
两次醇沉所得滤液与60％乙醇醇沉沉淀的洗涤液合
并，回收乙醇并浓缩至含生药约1g／mL。结果显示，
丹酚酸B的转移率为75．56％，总酚酸的转移率为
78．14％，损失显著降低。表明醇沉工艺采用二次醇
沉，乙醇体积分数分别为60％、80％。60％乙醇醇沉
沉淀用2倍量60％乙醇洗涤2次，洗涤液并入二次
醇沉滤过液，回收乙醇，浓缩至含生药约1g／mL。
2．5 大孔树脂吸附洗脱口]：综合药物和树脂的性
质，D一101树脂是使用最多的树脂，而D301树脂的
洗脱效果最好，因此，本实验仅对D一101和D301树
脂进行考察。将丹参水提醇沉后所得浓缩液加入树
脂柱中，控制流量以3BV／h流过，定时收集流出液，
表1不同溶剂■洗涤沉淀结果
Table1 Resultsofalcoholsedimentationelutied
bydifferentamountsofsolutions
溶剂
用量
丹酚酸B／％ 总酚酸／％
60％醇沉液 80％醇沉 60％沉淀 80％沉淀
洗涤液 洗涤液 洗涤液 洗涤液
2倍 6．501
4倍 13．31
6倍 15．61
8倍 13．38
1．26
1。69
2．17
3．06
5．430
lO．97
13．37
11．37
1．07
1．40
1．89
2．39
取样，甲醇定容，HPLC法测定总酚酸的变化。在接
近上清液中有效成分质量浓度时密集取样，取流出
液中有效成分质量浓度达到上清液的质量浓度的
95％为最大有效吸附量。达到最大有效吸附量后，用
5BV去离子水洗，置换掉树脂柱内的原液，再用
80％乙醇以3BV／h洗脱，定时收集流出液，取样，
甲醇定容，HPLC法测定总酚酸的变化，至流出液中
有效成分的量为所加料液的5％为洗脱完全。回收
乙醇并浓缩至含生药约1g／mL，结果D一101和
D301树脂对丹酚酸B转移率分别为30。14％、
25．55％，对总酚酸转移率分别为35．29％、
31．27％。由所得结果分析，两种型号的树脂对丹参
总酚酸的转移率都较低，与文献报道有较大差异，故
不采用此方法进行除杂纯化。其他型号树脂对丹参
总酚酸的洗脱效果尚有待考察。
2．6分子筛分离纯化：采用聚醚砜膜对丹参水提浓
缩液进行进一步分离纯化。丹参酚酸的各成分相对
分子质量均在1000以下，而杂质多为大分子物质，
因此得以分离。取适量丹参药材，进行水煎煮、浓缩
至含生药约1g／mL。浓缩液第一次通过相对分子质
量为10万的分子筛，分别接收相对分子质量在10
万以上和以下的流出液，采用HPLC法进行测定，
比较转移率和损失率。将相对分子质量在10万以下
的接收液再次浓缩至含生药约1g／mL，按照2．4项
下确定的醇沉工艺进行两次醇沉和沉淀洗涤，减压
回收乙醇，浓缩至含生药约1g／mL。将浓缩液通过
相对分子质量为1万的分子筛，分别接收相对分子
质量在1万以上和以下的流出液，采用HPLC法进
行测定，结果见表2。结果显示：分子筛转移丹参总
酚酸的效率高，损失小，但除杂的能力较差，尚不能
达到制备质量分数较高的丹参提取物的要求。
2．7溶剂萃取法纯化工艺
2．7．1溶剂类型的考察：溶剂萃取多采用正丁醇和
醋酸乙酯进行，为了考察两者对丹参酚酸的选择性，
实验将正丁醇与醋酸乙酯按不同比例混合后萃取，
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
表2分子筛分离纯化丹参总酚酸
Table2 Separationandpurificationofsalrianolicacids
bymoleculearscreen
根据总酚酸的转移率确定溶剂的种类和比例。将含
生药约1g／mL的浓缩液用等量的混合液萃取，分
别测定有机层和水层中总酚酸的量，两者之比即为
分配系数。结果见表3。可以看出，单独用醋酸乙酯
萃取时分配系数最大，萃取效果最好。
表3正丁醇与醋酸乙酯不同比例混合液的萃取结果
Table3 Extractionbyn—butanolandethylacetate
indifferentproportions
正丁醇与醋酸乙酯比例—_再鬲磊i————i面r分配系数
0．387
0．204
0．311
0．356
0．374
0．597
2．7．2溶剂用量的考察：用等量的醋酸乙酯萃取浓
缩液5次，分别计算转移率，确定醋酸乙酯萃取的次
数，结果见表4。可见有效成分的转移率随着萃取次
数的增加而增加，但是萃取4次后转移率基本不再
变化。因此确定用醋酸乙酯萃取4次，首次加倍，每
次用量分别为2、1、1、1倍。
表4醋酸乙酯萃取结果
一
Table4 Extractionbyethylacetate
萃取次数 丹酚酸B转移率／％ 总酚酸转移率／％
2．7．310％碳酸钠溶液萃取体积的选择：丹参总酚
酸为酸性物质，采用碳酸钠溶液与醋酸乙酯交替萃
取可使终产品总固体量减少，有效成分的量提高。因
此将萃取液有机层合并，回收醋酸乙酯并将其浓缩
至原体积的1／20，用不同量的lo％碳酸钠溶液萃
取，考察丹参总酚酸的转移率，结果见表5。可见碳
酸钠溶液与醋酸乙酯交替萃取浓缩时，有效成分的
转移率最高。综合考虑，确定用10％碳酸钠溶液萃
取4次，每次用量分别为1、1／2、1／4、1／4倍。
表5 10％碳酸钠溶液萃取结果
Table5 Extractionbys diumcarbonatesolution
10％碳酸钠溶液用量丹酚酸B转移率／％总酚酸转移率／％
2．7．4最佳结果：按水提醇沉工艺所得的浓缩液中
加盐酸酸化至pH值约为2，用醋酸乙酯萃取4次，每
次用量分别为2、1、1、1倍。合并萃取液有机层，回收
醋酸乙酯并浓缩至原体积的1／20，用10％碳酸钠溶
液萃取4次，每次用量分别为1、1／2、1／4、1／4倍。分
离并合并碱液，立即加适量盐酸酸化至pH值约为2，
继用醋酸乙酯萃取酸化液4次，每次用量分别为2、
1、1、1倍。合并萃取液，回收醋酸乙酯至成流浸膏。流
浸膏中加适量氢氧化钠调节pH值至6．8，减压干燥，
即得。结果流浸膏中丹酚酸B的转移率为45．27％，
总酚酸的转移率为58．56％；干燥品中丹酚酸B的质
量分数为30．97％，总酚酸的质量分数为51．62％。
3讨论
丹酚酸B为丹参总酚酸中量最高的成分，也是
主要的药理活性成分，性质不稳定。随着煎煮时间的
延长丹酚酸B的量呈下降趋势，但是延长煎煮时问
也有利于丹参总酚酸各有效成分的析出。因此在确
定水提时间时要考虑这两方面因素的影响。提高煎
煮温度可提高有效成分的转移率，煎煮溶剂的用量
对提取率影响不大。
醇沉时乙醇的体积分数越高，丹参总酚酸的损
失越大[2]。由本实验所测的数据来看，醇沉时乙醇的
体积分数的提高确使转移率有一定程度的降低，但
同时也使杂质去除得更为彻底，因此确定采用
60％、80％乙醇醇沉两次，而洗涤醇沉沉淀明显降低
了醇沉所造成的损失，弥补了二次醇沉的不足。
本实验采用3种分离纯化方法平行进行。大孔
树脂吸附洗脱工艺的效率较低，损失了大部分有效
成分，可能与其离子相互作用有关。分子筛分离工艺
虽然损失小，但是杂质去除不彻底，不能得到高质量
分数的总酚酸。醋酸乙酯与碳酸钠溶液交替萃取的
工艺损失小，分离效率高，且同时具有脱色作用，适
合产业化。
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复方抗病毒喷雾剂的质量标准研究
黄亚东1，项 琪1，赵文2，王林川3，张卉1，姚崇舜1
(1．暨南大学医药生物技术研究开发中心，广东广州 510632；2．暨南大学药学院，广东广州510632；
3．华南农业大学兽医学院，广东广州 510632)
笔者通过体外抗病毒实验筛选出了以贯叶连翘
提取物和莪术油为主要成分并辅以其他中药的处方
制备成复方抗病毒喷雾剂，用于禽流感病毒的预防
和治疗。为明确本复方喷雾剂的化学物质基础，本实
验对其中的莪术油和贯叶连翘提取物的主要药效成
分进行了定性鉴别和定量测定。
1仪器与试剂
日本岛津LC--2010C高效液相色谱仪、sPD—
M10Avp检测器(日本岛津公司)，TGL一16G台式
离心机(上海安亭科学仪器厂)，HH一2数显恒温水
浴锅(金坛市富华仪器有限公司)，ZF型紫外透射反
射仪(上海嘉鹏科技有限公司)。
复方抗病毒喷雾剂和空白对照样品(自制，25
mE／瓶)，莪术醇对照品(批号100185—200405)、栊
牛儿酮对照品(批号111665—200401)购于中国药品
生物制品检定所，金丝桃素对照品购于中山大学药
学院，甲醇、乙腈(色谱纯)，薄层色谱硅胶GF：。。(上
海谊恒公贸有限公司精良精细化工厂)。
2薄层色谱鉴别
2。1 对照品溶液的制备：分别取莪术醇、拢牛儿酮
和金丝桃素对照品各约5mg，精密称定，置5mL量
瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得。
2．2供试品溶液的制备：取本品50mL，置分液漏
斗中，加石油醚(30～60℃)25mL，振摇，静置，分取
石油醚层，浓缩至约1mL，作为供试品溶液I。
取上述石油醚提取后的溶液30mL，70℃水浴
加热浓缩至约2mL，加乙醇一醋酸乙酯(1：1)4mL
搅匀，滤过，取滤液，作为供试品溶液Ⅱ。
2．3 莪术醇和栊牛儿酮的鉴别：吸取供试品溶液
I、莪术醇对照品溶液和铭牛儿酮对照品溶液各10
肛L，分别点于硅胶GF。。。板上，以石油醚(30～60
℃)一醋酸乙酯(9：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置
紫外灯(254nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点
(图l-A)；再喷以1％的香草醛硫酸试液，在供试品
色谱中分别在与对照品相应的位置上，显相同颜色
的斑点(图1一B)。
2．4金丝桃素的鉴别：吸用供试品溶液II和金丝
桃素对照品溶液各10pL，分别点于同一硅胶GF。。。
板上，以甲苯一甲酸乙酯一甲酸(7：4：1)为展开剂，
展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，结果
供试品色谱中分别在与对照品相应的位置上显相同
颜色的荧光斑点(图1一C)。
3金丝桃素、莪术醇和栊牛儿酮的测定
3．1 色谱条件：色谱柱：ShimadzuShim—packVP—
ODS(150mm×4．6mm)，ShimadzuShim—pack
GVP—ODS(10mm×4．6mm)保护柱；莪术醇和拢
牛儿酮：流动相：乙腈一H。O(60：40)，柱温：25℃，检
测波长：210nm，体积流量：1．0mL／min，色谱图见
图2。金丝桃素：流动相为乙腈一0．3％正磷酸一三乙胺
(pH6．O)一甲醇(80：9：11)，柱温：25℃，检测波
长：590nm，体积流量：1．2mL／min，色谱图见图3。
3．2标准曲线的制备：精密吸取各对照品溶液0．25、
0．40、0．50、0．60、0．80mL置25mL量瓶中，加甲醇
稀释至刻度。0．45gm滤膜滤过，吸取滤液20弘m注入
收稿日期：2006—09—03
基金项目：广东省科技计划攻关项目(20042080068)；广州市科技计划攻关项目(200623一E0501)
作者简介：黄亚东(1971一)，男，湖北人，副研究员，博士，研究方向为微生物与生化药学。
Tel：(020)85564387E—mail：ydhuan92004@126．corn
万方数据
丹参中总酚酸的分离纯化工艺研究
作者： 杨小宁， 唐星， 柳玉石， YANG Xiao-ning， TANG Xing， LIU Yu-shi
作者单位： 沈阳药科大学药学院,辽宁,沈阳,110016
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(6)
被引用次数： 4次

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中药杂志2005,30(17)
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军药学学报2008,24(4)
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文]-南京工业大学学报（自然科学版）2008,30(3)
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报：自然科学版 2011(6)


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