全 文 ：570· 中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月
阿魏酸钠和白芍总苷对小鼠H22肿瘤生长与血管内皮细胞
生长因子及增殖细胞核抗原表达的影响
徐晓玉1，陈伟海2，叶 兰3，陈 刚4，王淑美3，胡益勇s
(】．西南大学药学与中医药学院，重庆400715；2．重庆医药工业研究院有限公司药理毒理评价中心，重庆400061；
3．重庆医科大学中医药学院，重庆400051；4．重庆工商大学药物化学与化学生物学研究中心，重庆400067)
摘要：目的探讨阿魏酸钠及白芍总苷对小鼠H。：肿瘤生长及血管生成的影响。方法 昆明小鼠前腋下皮下接种
小鼠H∞肝癌细胞，第2天ip阿魏酸钠(200、100、50mg／kg)或唔白芍总苷(200、100、50mg／kg)，每3天测量1次
肿瘤体积。用免疫组化诛标记肿瘤血管及测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表
达。MTT法检测阿魏酸钠对Hzz肿瘤细胞体外增殖的影响。结果阿魏酸钠组小鼠H。：肿瘤体积、质量增长明显较
模型组缓慢(尸0．05)，阿魏酸钠对小鼠Hzz肿瘤细胞俸外增殖无显著抑制作用。白芍总苷各剂量组的肿瘤生长、微血管密度、H：。肿
瘤细胞增殖与模型组相比均无显著性差异。结论阿魏酸钠可以显著抑制小鼠H：。肿瘤的生长及血管生成，且能抑
制VEGF的表达。但在体外实验中不能抑制Hzz肿瘤细胞的增殖。自芍总苷尚不能被证明有抑制小鼠H：：肿瘤生
长的作用。阿魏酸钠对肿瘤组织VEGF表达的抑制作用可能是其抗H。：肿瘤及抗血管生成的一个重要原因。
关键词：阿魏酸钠；白芍总苷；肿瘤；血管生成；VEGF
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)04—0570—04
Effectofsodiumferulateandtotalg ucosidesinpaeonyoiltumorg owth
andexpressionofvascularendothelialgrowthfactorand
proliferatingcellnuclearantigeninH22mice
‘
XUXiao—yul，CHENWei—hai2，YELan3，CHENGan94，WANGShu—mei3，HUYi—yon93
(1．CollegeofPharmaceuticsandTraditionalChineseMedicine，SouthwestUniver ity，Chongqing400715，China；2．Center
ofPharmacologyandT xicologyEvaluation，ChongqingP armaceuticalRese rchInstituteCo．，Ltd．，Chongqing400061，
China；3．CollegefTraditionalChineseMedicine，ChongqingUniversityofMedicalSciences，Chongqing400051，
China；4．ResearchCenterofP armaceuticalChetnistryandChemobiology，ChongqingTech ology
andBusinessUniversity，Chongqing400067，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheffectofsodiumferulatendtotalg ucosidesinpaeonyon
tumorg owthandangiogenesisinH22mice．MethodsH22Cellswereinoculatedsubcutaneouslyinto
anteroaxillaofKMmice．Animalswererandomizedfortherapyontheseconddayandtreatedwithip
sodiumferulate200，100，and50mg／(kg·d)，origthetotalg ucosidesofpaeony200，100，and50mg／
(kg·d)．Thevolumeoftumorwasmeasuredatthreedaysintervals．Theexpressionoftumor
microvessel，VEGF，andPCNAwereexaminedbyimmunohistochemicalstaining．TheproliferationofH，，
cellsinvitrowasexaminedbyMTTassay．ResuitsInvivo，theincreaseoftumorvolumnandweighti12
sodiumferulategroupwasobviousslowerthanthatinmodelgroup(Psodiumferulateinhibitedth xpressionofVEGF(PwhichalsodecreasedthpositivecellofVEGFandPCNA(P<0．05)withintumor．Invitro．sodium
ferulatefailedtoinhibittheproliferationofH22cells．Inaddition，itcanotbeprovedthathoseinthe
groupstreatedwithtotalg ucosidesnpaeonyi everydosagesareignificantlydifferentcomparedwith
themodelgroup．ConclusionSod umferulateinhibitstumorg owth，angiogenesisasw llasVEGF
expressionsignificantlyinH22mice．Whiletotalg ucosidesofpaeonycanotinhibitthetumorg owth，
angiogenesisaswella theVEGFexpressioninH22mice．
Keywords：sodiumferulate，totalglucosidesinpaeony；tumor；angiogenesis；VEGF
坟稿日期?2006—09—04
基金质目：国家自然科学基金资助项目(300070915)
作者简介：徐晓玉(195§：j，女，四川厶，教授，博士生导师，主要从事活血化瘀及补益药的中药药理学研究，主持国家自然科学基金等项
目8项，发表学术论文60余篇。Tel：(023)68251225Email；xxy0618@sina．corn
万方数据
中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月·571·
桃红四物汤是中医活血化瘀的经典方和代表
方，既往研究发现桃红四物汤[11和主要成分之一川
芎嗪[21有抗肿瘤及抑制肿瘤血管生成的作用。为了
进一步探寻该方发挥作用的药效物质及其作用机
制，本实验对桃红四物汤的另外两个主要成分阿魏
酸钠及白芍总苷进行了抗肿瘤的活性研究。阿魏酸
钠化学名称为3一甲氧基一4一羟基桂皮酸钠盐二水化
合物，为非肽类内皮素受体拮抗剂。阿魏酸钠主要用
于动脉粥样硬化、冠心病、脑血管病、肾小球疾病、肺
动脉高压、糖尿病性血管病变等心脑血管疾病。阿魏
酸钠在体外对肿瘤细胞有抑制作用[3]，但尚未有抑
制肿瘤生长的整体动物实验的报道。本实验研究阿
魏酸钠、自芍总苷对H。。荷瘤小鼠肿瘤生长及肿瘤
血管生成的抑制作用，并观察了两种药物对血管内
皮细胞生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原
(PCNA)表达的影响，旨在探讨其可能机制。
1材料与方法
1．1主要药品、试剂及仪器：自芍总苷片，每片0．3
g，其中含芍药苷104mg，购自三九集团(批号
20011201)；注射用阿魏酸钠，0．1g／支，购自成都第
一制药有限公司(批号031103)；新生牛血清，购自
杭州四季青公司。兔抗人CD34抗体、兔抗人PCNA
抗体、兔抗人VEGF抗体，均购自SantaCruz公
司。DAB显色试剂盒、SP染色试剂盒，均购自美国
ZYMED公司。
1．2实验动物及细胞株：清洁级昆明小鼠，18～22
g，雄性，由重庆医科大学实验动物中心提供，合格证
号：SCXK(渝)20020001，SPF条件饲养，实验动物
使用许可证号：SYXK(渝)20020007。H。。小鼠肝癌
细胞株，重庆医科大学检验系提供。
1．3肿瘤模型制备及分组：昆明小鼠每只右前肢腋
下皮下接种密度为2×106／mL的H。。细胞0．2mL。
随机分为7组，每组14只，从接种后第2天，每天定
时给药。模型组每天ip生理盐水0．5mL；阿魏酸钠
(200、100、50mg／kg)组，每天根据小鼠体重ip阿
魏酸钠注射液；白芍总苷片(按白芍总苷计，200、
100、50mg／kg)组，每天根据小鼠体重ig白芍总苷
溶液。连续给药14d。从给药后第3天起开始测量
肿瘤体积，每3天测量1次。肿瘤体积的计算方法参
照文献方法H1(肿瘤体积一0．5236×长×宽)。
1．4一般组织学处理：停药后第2天，处死小鼠，解
剖并完整剥离出小鼠肿瘤，称质量，计算抑瘤率[抑
瘤率=(对照组平均瘤质量一给药组平均瘤质量)／
对照组平均瘤质量×100％]。
1．5 免疫组织化学法检测微血管密度(MVD)和
VEGF、PCNA的表达：取新鲜肿瘤组织做石腊切
片，按免疫组化常规方法操作，SP染色。参照文献方
法[5]进行微血管计数。采用“热点”法计数，即在100
倍低倍镜下，选取5个微血管密度最高的区域，400
倍放大视野下，每一个着色的单个内皮细胞或细胞
串计为一个微血管。血细胞和大的血管腔不计。
VEGF计数方法：随机取10个400倍高倍镜视野，
计数VEGF阳性细胞数总数。PCNA阳性细胞的计
数方法：先用100倍镜观察全片，选取阳性率较高的
5个视野，再换成400高倍镜计数，计算阳性细胞的
平均数。
1．6 H。：细胞体外增殖实验：H：：细胞用含10％
NBSPRMI一1640配为1×104／mL，96孔板每孑L接
种200tzL，5％C02、37℃条件下培养24h后，
1000r／min离心2rain，弃原培养基，各组加人以
下质量浓度的含阿魏酸钠培养液：10、20、40、80、160
pg／mL，对照组不含阿魏酸钠，每组6孔。培养48h
后，1000r／min离心2rain，弃原培养液，每孔加入
200pL无血清培养液及20弘LMTT，继续培养4h
后。1000r／rain离心2min，弃原培养液，每孑L加入
二甲基亚砜(DMSO)200弘L，震荡5min，在全自
动酶标仪中选择590nm波长测各孔吸光度
(A)值。
1．7 统计学处理：各实验组与对照组各项指标中的
计量资料采用t检验分析组问差异，全部统计分析
采用SPSS10．0统计软件进行。
2 结果
2．1 阿魏酸钠、白芍总苷对肿瘤生长的影响：所有
小鼠接种后第15天处死，成瘤率100％。阿魏酸钠
各剂量组肿瘤生长较模型组慢，白芍总苷各组肿瘤体
积与模型组相比差异不明显。生长曲线见图1和2。
2．2 阿魏酸钠、白芍总苷对肿瘤质量的影响：阿魏
酸钠各剂量组肿瘤质量低于模型组，差异显著(P<
o．05)，阿魏酸钠200mg／kg组的抑瘤率最高
(55．61％)，平均瘤质量最低，并与阿魏酸钠其他剂
量组有显著差异(P模型组之间肿瘤质量没有显著性差异。见表1。
2．3 阿魏酸钠、白芍总苷对肿瘤血管生成的作用：
免疫组织化学法结果，肿瘤血管被标记特异性棕黄
色。计数被标记的血管，阿魏酸钠各剂量组的微血管
密度和模型组相比较均显著性降低(P芍总苷各剂量组之间及与模型组之间无显著性差
异，见表1。
万方数据
·572· 中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月
置
之
器
投
懊
垂
6 9 12
tid
图l 阿魏酸钠对H：：荷瘸小鼠肿瘸生长的影响
(i±s，席一14)
Fig．1Effectofsodiumferulateon umor
growthinH22mice(工±s，弹一14)
g
＼
鼷
蛙
馔
}
图2 白芍总苷对H：：荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
(；士s，n一14)
Fig．2Effectof otalg ucosideinpaeonyontumor
growthinH22mice@土j，稃一14)
表1阿魏酸钠和白芍总苷对H：：小鼠肿瘤质量
及微血管密度的抑制作用@±s，摊一14)
Table1 Inhibitionofs diumferulatendtotalg ucosides
inpaeonyontumorg owthandMVDinH22
mice(；±s，厅一14)
与模型维比较：△P<0．05
与阿魏酸钠200mg／kg组比较：。P△P。P2．4 免疫组织化学分析肿瘤细胞VEGF、PCNA
的表达：免疫组织化学法结果，在光镜下VEGF阳
性细胞可在细胞胞浆内见到棕黄色特异性染色。阿
魏酸钠各组VEGF阳性细胞数明显少于模型组
(P<0．05)，但白芍总苷各剂量组与模型组之间无
显著差异。肿瘤细胞PCNA阳性细胞胞核染色呈棕
黄色，在光镜下可见阿魏酸钠各剂量组PCNA阳性
细胞率明显降低(P模型组相比无显著性差异，见表2。
表2阿魏酸钠及自芍总苷对H：：小鼠肿瘤细胞VEGF
和PCNA表达的影响(j±s，n=14)
Table2 Effectofsodiumferulateandtotalg ucosides
inpaeonyo expressionofVEGFandPCNA
intumorcellsofH22mice(；土s，r／--14)
与模型组比较：6P与阿魏酸钠200mg／kg组比较：。P△P％0．0505modelgroup
。P2．5 阿魏酸钠对H：。肝癌细胞体外增殖的影响：
MTT法结果，阿魏酸钠对H。。肿瘤细胞增殖无直接
的抑制作用(P>0．05)。模型组A组A值为
0．377±0．05；阿魏酸钠(10、20、40、80、160弘g／
mL)组A值分别为0．478土0．07、0．392±0．05、
0．374±0．09、0．342±005、0．370±0．03，与模型组
均无差异(P>0．05)。
3讨论
实体瘤的生长依赖新生的血管提供营养和排泄
代谢产物，因此通过抑制肿瘤细胞诱导的血管生成
来抑制肿瘤的生长、浸润和转移的治疗策略，近年来
得到迅速发展[6]。目前，进入临床试验的肿瘤血管生
成抑制剂有40余种。2004年2月，美国FDA正式
批准第1个肿瘤血管抑制剂Avastin
(bevacizumab)作为一线抗肿瘤药上市，从而标志
抗血管生成剂的研究进入了一个新的时代。抗肿瘤
血管生长的中药研究与开发具有广泛的前景。既往
的研究发现川芎嗪对小鼠Lewis肺癌及肿瘤微血
管‘2|，人肝癌细胞r73及人脐静脉内皮细胞‘83增殖有
良好的抑制作用。到目前为止尚未见关于阿魏酸钠、
白芍总苷影响肿瘤血管生成的报道。
本实验结果发现，阿魏酸钠各剂量组肿瘤生长
被显著抑制，肿瘤质量与模型组相比显著降低，肿瘤
8
6
4
2
O
8
6
4
2
0
l
1
l
1
1
O
O
O
0
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月·573·
组织中的PCNA呈阳性的肿瘤细胞显著低于模型
组，表明肿瘤增殖受到了抑制。同时，阿魏酸钠组比
模型组微血管计数显著减少，说明阿魏酸钠抑制了
小鼠体内H：：肿瘤的生长和血管生成。但是，本实验
并不能证实白芍总苷具有抑制肿瘤生长及肿瘤血管
生成的作用，但也没有证据表明白芍总苷有促进肿
瘤生长的作用。
为了进一步分析阿魏酸钠抑制血管生成的作用
是否通过对H：。肿瘤细胞的直接细胞毒作用而实现
的，采用MTT法来验证阿魏酸钠是否对体外培养
的H。：肿瘤细胞具有直接的细胞毒作用。结果阿魏
酸钠组的质量浓度即使达到了160／*g／mL，其肿瘤
细胞的A值尚与模型组无显著性差异。说明阿魏酸
钠对肿瘤细胞不具有直接的细胞毒作用，阿魏酸钠
对整体动物肿瘤模型的肿瘤生长抑制作用是通过抑
制肿瘤血管生成实现的。
免疫组织化学发现，阿魏酸钠各剂量组均能有
效地抑制肿瘤组织的VEGF表达。VEGF是最重要
的促血管生成因子，能通过其受体KDR／Flk一1有
效激活胞外信号调节激酶(ERK)，从而刺激内皮细
胞DNA合成印]，也能够通过PI一3K通路激活抗凋
亡激酶Akt／PKB而发挥抗凋亡作用[10|。结合阿魏
酸钠组肿瘤组织微血管密度降低的结果，说明阿魏
酸钠可能是通过抑制肿瘤细胞VEGF的分泌来抑
制体内H。。肿瘤的生长及血管生成。
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槟榔碱对骨髓细胞内DNA的影响
季宇彬，李连闯，于 蕾
(哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，黑龙江哈尔滨 150076)
摘 要：目的通过体内骨髓细胞实验，探讨槟榔碱对DNA的损伤作用机制。方法采用AO探针标记，激光共聚
焦技术检测槟榔碱对骨髓细胞内DNA和RNA的影响；采用流式细胞仪测定槟榔碱对骨髓细胞周期的影响。结果
给予槟榔碱20、10、5mg／kg剂量的染毒组，骨髓细胞内RNA／DNA的荧光像素比值明显高于空白对照组，差异非
常显著(P率有非常显著降低(PDNA有一定的损伤作用，具有一定的遗传毒性。
关键词：槟榔碱；激光共聚焦；流式细胞仪；DNA；RNA；细胞周期
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)04—0573—03
收稿日期：2006—10—30
作者简介：季宇彬(1956一)，男，辽宁省人，教授，博士，多年来一直致力于中药药理、肿瘤药理、分子药理学研究。
万方数据
阿魏酸钠和白芍总苷对小鼠H22肿瘤生长与血管内皮细胞生长
因子及增殖细胞核抗原表达的影响
作者： 徐晓玉， 陈伟海， 叶兰， 陈刚， 王淑美， 胡益勇， XU Xiao-yu， CHEN Wei-hai，
YE Lan， CHEN Gang， WANG Shu-mei， HU Yi-yong
作者单位： 徐晓玉,XU Xiao-yu(西南大学药学与中医药学院,重庆,400715)， 陈伟海,CHEN Wei-hai(重
庆医药工业研究院有限公司,药理毒理评价中心,重庆,400061)， 叶兰,王淑美,胡益勇,YE
Lan,WANG Shu-mei,HU Yi-yong(重庆医科大学中医药学院,重庆,400051)， 陈刚,CHEN
Gang(重庆工商大学,药物化学与化学生物学研究中心,重庆,400067)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(4)
被引用次数： 9次

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